CN109517879B - 一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒，属于生化检测技术领域，肌酸激酶及其同工酶测定试剂含有离子液体1‑乙基‑3‑甲基咪唑四氟硼酸盐，用于CK或者CK同工酶测定的试剂盒由离子液体1‑乙基‑3‑甲基咪唑四氟硼酸盐、活化剂、螯合剂、防腐剂、缓冲液及CK或者CK同工酶活性测定试剂组成。本发明可用于全自动生化分析仪检测，操作简便，可在CK及其同工酶测定试剂长期保存后仍保证试剂测定的准确性，可显著延长试剂使用期限。

Description

一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒
技术领域
本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒。
背景技术
肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)是细胞能量代谢的关键酶，其活性测定是临床骨骼肌疾病、心肌疾病的诊断依据。CK由M、B亚基组成，有三种亚基(同工酶)组合CK-MM、CK-MB、CK-BB，它们分别主要分布于人体的骨骼肌、心肌、脑组织。CK、CK-MB是目前常规心肌梗死的重要标志物，血清中CK的正常参考值为18.0～198.0U/L，CK-MB的正常参考值<0.6ng/ml。
CK及其同工酶在血液中会钝化，并且其活性不稳定，在常温下仅可保存4h，4℃下仅可保存8-12h，该类酶的活性测定需提前加入含有巯基基团的活化剂。但巯基基团在试剂中极其活跃，在保存过程中易被氧气或金属离子氧化，失去活性，通常使用螯合剂EDTA螯合易使其变质的金属离子，但EDTA效果不理想，在长期保存中，活化剂仍不能充分活化CK，这是CK及其同工酶测定试剂盒在长期保存过程中准确性变差的最主要原因，是影响试剂在市场上应用的最重要因素。
发明内容
本发明的目的在于提供长期保存后仍能够正确测定CK及其同工酶活性的肌酸激酶及其同工酶测定试剂及其试剂盒。本发明提供CK及其同工酶测定试剂，该发明可用于全自动生化分析仪检测，操作简便，在CK及其同工酶测定试剂长期保存后仍保证试剂测定的准确性，可显著延长试剂使用期限。
本发明提供了如下的技术方案：
一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂，含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐。
优选的，所述离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的浓度为0.0001-0.005％(v/v)。
优选的，所述离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐为离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸钠或离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸钾中的一种。
优选的，还包括活化剂、螯合剂、CK活性测定试剂或者CK同工酶活性测定试剂中的一种、防腐剂和缓冲液。其中，所述活化剂有N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、二硫苏糖醇、巯基乙醇、二硫赤藓糖醇、巯基醋酸等，优选的活化剂为N-乙酰半胱氨酸，其浓度为5-25mmol/L。所述螯合剂有乙二胺四醋酸、二亚乙基三胺五醋酸、环已二胺四醋酸等，优选的螯合剂为乙二胺四醋酸(EDTA)，其浓度为1-7mmol/L。所述防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin系列、KroVin系列中的至少一种，浓度为1-15g/L。所述缓冲液有咪唑缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、硼酸缓冲液等，优选的缓冲液为咪唑缓冲液，其浓度为100mmol/L。
优选的，所述CK活性测定试剂含有五磷酸二腺苷(AP5A)、腺苷一磷酸(AMP)、乙酸镁、葡萄糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)、二磷酸腺苷(ADP)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、磷酸肌酸和葡萄糖激酶；所述CK同工酶活性测定试剂含有乙酸镁、CK-M抗体、二磷酸腺苷(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)、五磷酸二腺苷(AP5A)、葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、磷酸肌酸、葡萄糖激酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)。
优选的，所述离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐用于细胞质中的CK、CK-MB、CK-MM、CK-BB测定以及线粒体中的肌酸激酶的测定。
一种用于CK测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、缓冲液、活化剂、螯合剂、防腐剂、五磷酸二腺苷、腺苷一磷酸、乙酸镁、葡萄糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；所述第二试剂含有缓冲液、二磷酸腺苷、磷酸肌酸、防腐剂和葡萄糖激酶。
优选的，所述第一试剂和所述第二试剂的浓度如下：
所述第一试剂：离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐浓度为0.001％、缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100mmol/L、活化剂为N-乙酰半胱氨酸且浓度为20mmol/L、螯合剂为乙二胺四醋酸且浓度为2mmol/L、防腐剂为叠氮钠且浓度为10mmol/L、五磷酸二腺苷浓度为12umol/L、腺苷一磷酸浓度为5mmol/L、乙酸镁浓度为10mmol/L、葡萄糖的浓度为25mmol/L、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的浓度为3mmol/L以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶浓度为3KU/L；
所述第二试剂：缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100mmol/L、二磷酸腺苷浓度为2mmol/L、磷酸肌酸浓度为50mmol/L、叠氮钠浓度为10mmol/L以及葡萄糖激酶浓度为3KU/L。
本发明的一种CK检测试剂的使用方法为：
(1)将200uL第一试剂和10uL待测样品混合均匀，37℃孵育后得到反应液1；
(2)然后加入50uL第二试剂混合均匀，得到反应液2，测定反应液2的吸光度A1；
(3)120S后再次测定反应液2的吸光度A2，测定主波长为340nm、副波长为410nm；
(4)用步骤(1)-(3)的操作对CK标准液的吸光度进行测定，分别得到吸光度A3和A4；
(5)用吸光度差值进行计算，根据公式计算CK含量：CK浓度＝样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度(A4-A3)。
一种用于CK-MB测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、缓冲液、活化剂、螯合剂、乙酸镁、CK-M抗体、二磷酸腺苷、腺苷一磷酸、五磷酸二腺苷、葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和防腐剂；所述第二试剂含有缓冲液、磷酸肌酸、葡萄糖激酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和防腐剂。
优选的，所述第一试剂和所述第二试剂的浓度如下：
所述第一试剂：离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐浓度为0.001％、缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100mmol/L、活化剂为N-乙酰半胱氨酸且浓度为23mmol/L、螯合剂为乙二胺四醋酸且浓度为5mmol/L、乙酸镁浓度为12mmol/L、CK-M抗体浓度为2KU/L、二磷酸腺苷浓度为3mmol/L、腺苷一磷酸浓度为5.5mmol/L、五磷酸二腺苷浓度为0.01mmol/L、葡萄糖浓度为31mmol/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶浓度为1.5KU/L以及防腐剂为叠氮钠且浓度为10mmol/L；
所述第二试剂：缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100mmol/L、磷酸肌酸浓度为165mmol/L、葡萄糖激酶浓度为3mmol/L、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸浓度为2mmol/L以及防腐剂为叠氮钠且浓度为10mmol/L。
本发明的一种CK-MB检测试剂的使用方法为：
(1)将200uL第一试剂和10uL待测样品混合均匀，37℃孵育后得到反应液1；
(2)然后加入50uL第二试剂混合均匀，得到反应液2，测定反应液2的吸光度A1；
(3)120S后再次测定反应液2的吸光度A2，测定主波长为340nm、副波长为410nm；
(4)用步骤(1)-(3)的操作对CK-MB标准液的吸光度进行测定，分别得到吸光度A3和A4；
(5)用吸光度差值进行计算，根据公式计算CK-MB含量：CK-MB浓度＝样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度(A4-A3)。
本发明的有益效果是：
(1)本发明提供的CK及其同工酶测定试剂及其试剂盒引入了离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，该物质能够稳定巯基基团，防止其氧化失活，同时具有一定的激活CK的能力，可在CK及其同工酶测定试剂长期保存后仍保证试剂测定的准确性，可显著延长试剂使用期限。
(2)本发明中的离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐不仅适用于细胞质中的CK、CK-MB、CK-MM、CK-BB，同时适用于线粒体中的肌酸激酶。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为实施例1相关性检测结果；
图2为CK对照试剂盒相关性检测结果；
图3为实施例2相关性检测结果；
图4为CK-MB对照试剂盒相关性检测结果；
图5为本发明实施例1和对应对照试剂盒在4℃条件下的稳定性检测结果；
图6为本发明实施例2和对应对照试剂盒在4℃条件下的稳定性检测结果；
图7为本发明实施例1和对应对照试剂盒在37℃条件下的稳定性检测结果；
图8为本发明实施例2和对应对照试剂盒在37℃条件下的稳定性检测结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
以下实施例所用试剂原料均为市场分析纯。
一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂，含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐。所述离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐的浓度为0.0001-0.005％(v/v)，所述离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐为离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸钠或离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸钾中的一种。
还包括活化剂、螯合剂、CK活性测定试剂或者CK同工酶活性测定试剂中的一种、防腐剂和缓冲液。
其中，所述活化剂有N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽、硫代甘油、二硫苏糖醇、巯基乙醇、二硫赤藓糖醇、巯基醋酸等，优选的活化剂为N-乙酰半胱氨酸，其浓度为5-25mmol/L。所述螯合剂有乙二胺四醋酸、二亚乙基三胺五醋酸、环已二胺四醋酸等，优选的螯合剂为乙二胺四醋酸(EDTA)，其浓度为1-7mmol/L。所述防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin系列、KroVin系列中的至少一种，浓度为1-15g/L。所述缓冲液有咪唑缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、硼酸缓冲液等，优选的缓冲液为咪唑缓冲液，其浓度为100mmol/L，所述CK活性测定试剂含有五磷酸二腺苷(AP5A)、腺苷一磷酸(AMP)、乙酸镁、葡萄糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)、二磷酸腺苷(ADP)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、磷酸肌酸和葡萄糖激酶；所述CK同工酶活性测定试剂含有乙酸镁、CK-M抗体、二磷酸腺苷(ADP)、腺苷一磷酸(AMP)、五磷酸二腺苷(AP5A)、葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、磷酸肌酸、葡萄糖激酶和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)。
肌酸激酶及其同工酶测定试剂可以组装成相应的试剂盒，具体可见实施例1和实施例2。
实施例1
一种用于CK测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、咪唑缓冲液、NAC、EDTA、叠氮钠、AP5A(五磷酸二腺苷)、AMP(腺苷一磷酸)、乙酸镁、葡萄糖、NADP+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；所述第二试剂含有咪唑缓冲液、ADP(二磷酸腺苷)、磷酸肌酸、叠氮钠和葡萄糖激酶。
本试剂盒的具体原料及配比如下：
表1第一试剂的组成和浓度
咪唑缓冲液 100mmol/L
NAC 20mmol/L
1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐 0.001％
EDTA 2mmol/L
AP5A 12umol/L
AMP 5mmol/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 3KU/L
乙酸镁 10mmol/L
葡萄糖 25mmol/L
NADP+ 3mmol/L
叠氮钠 10mmol/L
表2第二试剂的组成和浓度
Figure BDA0001858023780000071
Figure BDA0001858023780000081
本实施例对样品中CK进行检测，具体步骤如下：
(1)将200uL第一试剂和10uL待测样品混合均匀，37℃孵育后得到反应液1；
(2)然后加入50uL第二试剂混合均匀，得到反应液2，测定反应液2的吸光度A1；
(3)120S后再次测定反应液2的吸光度A2，测定主波长为340nm、副波长为410nm；
(4)用步骤(1)-(3)的操作对CK标准液的吸光度进行测定，分别得到吸光度A3和A4；
(5)用吸光度差值进行计算，根据公式计算CK含量：CK浓度＝样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度(A4-A3)。
实施例2
一种用于CK-MB测定的试剂盒，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、咪唑缓冲液、NAC、EDTA、乙酸镁、CK-M抗体、ADP、AMP、AP5A、葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和叠氮钠；所述第二试剂含有咪唑缓冲液、磷酸肌酸、葡萄糖激酶、NADP+和叠氮钠。
本试剂盒的具体原料及配比如下：
表3第一试剂的组成和浓度
Figure BDA0001858023780000082
Figure BDA0001858023780000091
表4第二试剂的组成和浓度
咪唑缓冲液 100mmol/L
葡萄糖激酶 3mmol/L
磷酸肌酸 165mmol/L
NADP+ 2mmol/L
叠氮钠 10mmol/L
本实施例对样品中CK-MB进行检测，具体步骤如下：
(1)将200uL第一试剂和10uL待测样品混合均匀，37℃孵育后得到反应液1；
(2)然后加入50uL第二试剂混合均匀，得到反应液2，测定反应液2的吸光度A1；
(3)120S后再次测定反应液2的吸光度A2，测定主波长为340nm、副波长为410nm；
(4)用步骤(1)-(3)的操作对CK-MB标准液的吸光度进行测定，分别得到吸光度A3和A4；
(5)用吸光度差值进行计算，根据公式计算CK-MB含量：CK-MB浓度＝样本吸光度(A2-A1)×标准液浓度/标准液吸光度(A4-A3)。
将实施例1的用于CK测定的试剂盒和实施例2的用于CK-MB测定的试剂盒作如下性能检测：
测试1
相关性检测
选择CK、CK-MB的高值血清样本，样本浓度已经检验机构确定，CK、CK-MB的浓度分别为1148U/L、1151U/L，2样本用生理盐水稀释，稀释梯度见表5。
表5样本梯度稀释体积比
样本浓度(X) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0
生理盐水 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
浓度 X 0.8X 0.6X 0.4X 0.2X 0
分别利用实施例1、2制得的试剂对对应的各梯度样本进行测定，所有测定6次重复，取平均值。以国内市售的CK、CK-MB检测试剂盒为对照试剂盒，与本发明提供的CK、CK-MB测定试剂盒进行相同的测定。结果见图1-4。
由图1-4可知，实施1、2及对应的对照试剂盒随着样本稀释浓度的变化呈线性变化，相关系数均达0.99，说明所有试剂对于各浓度样本测定结果都比较准确。
测试2
重复性检测
利用罗氏标准品进行校准，以罗氏高值质控品(CK：286U/L；CK-MB：99.8U/L)为样本进行重复测试20次，所用试剂为本发明的实施例1、2及对应的对照试剂盒，检测结果见表6。
表6重复性检测结果
Figure BDA0001858023780000101
重复性实验结果显示对照试剂盒及本发明实施例1、2的变异系数均在5％以内，均满足国家标准和行业标准中的要求。
测试3
稳定性检测
将实施例1、2试剂及相应的对照试剂盒放于4℃冰箱保存，利用罗氏标准品进行校准，以罗氏高值质控品(CK：286U/L；CK-MB：99.8U/L)为样本进行重复测试6次，取平均值，跟踪试剂稳定性。每一季度定时检测一次，跟踪5个季度，检测结果见图5-6。将实施例1、2试剂及相应的对照试剂盒放于常温保存，利用罗氏标准品进行校准，以罗氏高值质控品(CK：286U/L；CK-MB：99.8U/L)为样本进行重复测试6次，取平均值，跟踪试剂稳定性。每隔2天定时检测一次，跟踪14天，检测结果见图7-8。
由图5-6可知，随着时间的推移，试剂的检测结果会衰减，但实施例1、2的试剂稳定性明显优于对照，说明本试剂盒加入离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐，试剂稳定性明显提高。由图7-8可知，实施例1、2试剂在常温下14天内测定结果几乎不变，而对照出现衰减现象，进一步说明离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐可提高试剂稳定性。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种用于CK测定的试剂盒，其特征在于，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、缓冲液、活化剂、螯合剂、防腐剂、五磷酸二腺苷、腺苷一磷酸、乙酸镁、葡萄糖、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；所述第二试剂含有缓冲液、二磷酸腺苷、磷酸肌酸、防腐剂和葡萄糖激酶；所述第一试剂和所述第二试剂的浓度如下：
所述第一试剂：离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐浓度为0.001%、缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100 mmol/L、活化剂为N-乙酰半胱氨酸且浓度为20 mmol/L、螯合剂为乙二胺四醋酸且浓度为2 mmol/L、防腐剂为叠氮钠且浓度为10 mmol/L、五磷酸二腺苷浓度为12umol/L、腺苷一磷酸浓度为5 mmol/L、乙酸镁浓度为10 mmol/L、葡萄糖的浓度为25 mmol/L、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的浓度为3 mmol/L以及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶浓度为3KU/L；
所述第二试剂：缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100 mmol/L、二磷酸腺苷浓度为2 mmol/L、磷酸肌酸浓度为50 mmol/L、叠氮钠浓度为10 mmol/L以及葡萄糖激酶浓度为3 KU/L。
2.一种用于CK-MB测定的试剂盒，其特征在于，包括第一试剂和第二试剂，所述第一试剂含有离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐、缓冲液、活化剂、螯合剂、乙酸镁、CK-M抗体、二磷酸腺苷、腺苷一磷酸、五磷酸二腺苷、葡萄糖、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和防腐剂；所述第二试剂含有缓冲液、磷酸肌酸、葡萄糖激酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和防腐剂；所述第一试剂和所述第二试剂的浓度如下：
所述第一试剂：离子液体1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐浓度为0.001%、缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100 mmol/L、活化剂为N-乙酰半胱氨酸且浓度为23 mmol/L、螯合剂为乙二胺四醋酸且浓度为5 mmol/L、乙酸镁浓度为12 mmol/L、CK-M抗体浓度为2 KU/L、二磷酸腺苷浓度为3 mmol/L、腺苷一磷酸浓度为5.5 mmol/L、五磷酸二腺苷浓度为0.01 mmol/L、葡萄糖浓度为31 mmol/L、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶浓度为1.5 KU/L以及防腐剂为叠氮钠且浓度为10 mmol/L；
所述第二试剂：缓冲液为咪唑缓冲液且浓度为100 mmol/L、磷酸肌酸浓度为165 mmol/L、葡萄糖激酶浓度为3 mmol/L、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸浓度为2 mmol/L以及防腐剂为叠氮钠且浓度为10 mmol/L。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111057746B (zh) * 2020-01-03 2023-10-27 浙江夸克生物科技有限公司 一种肌酸激酶同工酶测定试剂盒
CN113866410A (zh) * 2021-11-04 2021-12-31 广州达安基因股份有限公司 一种测定肌酸激酶同工酶活性的试剂盒及其测定方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101063111A (zh) * 2006-04-26 2007-10-31 上海复星医药（集团）股份有限公司 一种提高肌酸激酶液体双试剂稳定的方法
CN102154443A (zh) * 2011-03-25 2011-08-17 浙江东瓯诊断产品有限公司 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法
CN103173519A (zh) * 2011-12-20 2013-06-26 上海复星医药（集团）股份有限公司 酶法检测肌酸激酶试剂盒及其制备方法
CN104357544A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶检测试剂盒
CN104374905A (zh) * 2014-11-28 2015-02-25 山东博科生物产业有限公司 一种血清肌酸激酶检测试剂
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3766969B1 (en) * 2014-04-10 2023-10-04 Miyoshi Oil & Fat Co., Ltd. Biocatalyst solvent using ionic liquid, and biocatalyst solution containing biocatalyst and said solvent

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101063111A (zh) * 2006-04-26 2007-10-31 上海复星医药（集团）股份有限公司 一种提高肌酸激酶液体双试剂稳定的方法
CN102154443A (zh) * 2011-03-25 2011-08-17 浙江东瓯诊断产品有限公司 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法
CN103173519A (zh) * 2011-12-20 2013-06-26 上海复星医药（集团）股份有限公司 酶法检测肌酸激酶试剂盒及其制备方法
CN104374905A (zh) * 2014-11-28 2015-02-25 山东博科生物产业有限公司 一种血清肌酸激酶检测试剂
CN104357544A (zh) * 2014-12-05 2015-02-18 重庆中元生物技术有限公司 一种高稳定性的肌酸激酶检测试剂盒
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Effect of ionic liquid on activity, stability, and structure of enzymes: A review;Mu. Naushad等;《International Journal of Biological Macromolecules》;20120623;第51卷;第555– 560页 *
Enzyme-catalyzed reactions in ionic liquids;Yun Hee Moon等;《Korean J. Chem. Eng.》;20060331;第23卷(第2期);第247-263页 *
离子液体及其在生物催化中的应用;王明慧等;《有机化学》;20050430;第25卷(第4期);第364-374页 *

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