CN108034694B - 一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents

一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种1,5‑脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法。本发明的检测试剂盒能够使样本在反应循环过程中达到能量供应，消除样本中葡萄糖和试验副产物葡萄糖6‑磷酸、丙酮酸干扰，避免因产物的积累造成的逆反应。在消除葡萄糖及副产物积累后，使1,5‑AG转化成1,5‑脱水‑果糖与过氧化氢，过氧化氢与发光底物反应形成一种持续稳定的化学发光信号。与传统的酶比色法相比，本发明的检测试剂盒具有灵敏度高、准确性好、特异性高、抗干扰能力强、稳定性好等优点。

Description

一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法
技术领域
本发明涉及生化试剂技术领域，具体涉及一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
1,5-AG(1,5-脱水山梨醇)与现有的糖尿病指标均呈现出显著的负相关，血液中1,5-AG的减少程度与糖尿病的严重程度显著相关。1,5-AG与其他指标最显著的区别是反映糖尿病病情变化的周期不同，血糖(GLU)反映病人当时血糖状况，糖化白蛋白(GA)反应病人半个月内血糖的平均状况，糖化血红蛋白(HbAlc)反映病人最近2～3个月左右的血糖平均水平，而1,5-AG可以反映近几天至1周的平均血糖水平。
目前国内外市场主要采用酶法对1,5-AG进行检测，酶法测定由于其无污染，并可试用与生化仪，操作简单等特点，有利于大规模推广。目前国内外主要采用酶法测定1，5-脱水山梨醇(1,5-AG)，主要有氧化酶法与脱氢酶法两种方法。氧化酶法的原理为，通过吡喃糖氧化酶(PROD)催化1，5-脱水山梨醇(1,5-AG)生成1，5-脱水果糖和H2O2，H2O2在过氧化物酶的作用下使4-AAP和TOOS反应生成醌类有色物质。脱氢酶法的原理为：1,5-脱水山梨醇在ADP依赖性己糖激酶(ADP-HK)的作用下生成AG-6磷酸(AG-6-P)。AG-6-P再和NADP进行反应，生成NADPH。NADPH具有还原性，和显色剂作用生成显色物质。
在1,5-AG检测中，由于葡萄糖与1,5-AG结构极其相似，导致葡萄糖成为检测1,5-AG的最大干扰。目前葡萄糖的消除主要采用己糖激酶法将葡萄糖转化成6-磷酸葡萄糖，继而转化成葡萄糖酸。
研究表明，丙酮酸是一种抗氧化剂，作为一种α-酮酸，丙酮酸可直接通过非酶促的去碳酸基反应抑制过氧化氢，从而消除过氧化氢。内源性丙酮酸及采用消除葡萄糖后产生的丙酮酸会严重干扰已产生的过氧化氢的检测，现有技术中仅针对葡萄糖的消除，但试剂盒中消除葡萄糖后产生丙酮酸仍需进一步改进。
另一方面，1,5-脱水山梨醇的酶法试剂盒存在信号弱，反应强度低，空白信号高、检测限高、易受葡萄糖、胆红素、抗坏血酸、血脂等内源性干扰，稳定性、灵敏度、特异性等方面仍需要进一步改进。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供了一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，解决试剂盒中葡萄糖消除过程中供能不足问题、副产物葡萄糖6-磷酸、丙酮酸积累造成负干扰、检测信号弱以及低浓度样本检测不准确的问题。
本发明的另一个目的在于提供一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的检测方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：
一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，所述试剂盒包括用于消除葡萄糖、葡萄糖6-磷酸和丙酮酸的试剂R1、用于将1,5-脱水山梨醇转化成1,5-脱水果糖与过氧化氢的试剂R2和用于检测过氧化氢的发光底物；所述试剂R1包括为腺苷三磷酸、己糖激酶、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、葡萄糖6-磷酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶；所述试剂R2包括吡喃糖氧化酶。
本发明的检测试剂盒的检测原理如下：
a.葡萄糖及相关产物的干扰消除，在三磷酸腺苷(ATP)与二磷酸腺苷(ADP)、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)与还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的循环重生的过程中解决葡萄糖消除过程中供能不足问题以及副产物葡萄糖6-磷酸、丙酮酸积累造成负干扰问题。
b.1,5-AG在吡喃糖氧化酶的作用下生成过氧化氢；
c.过氧化氢在发光底物作用下生成发光信号。
本发明的试剂盒采用酶法化学发光法，通过使样本与三磷酸腺苷(ATP)在己糖激酶(HK)催化下生成6-磷酸葡萄糖(G-6-P)和二磷酸腺苷(ADP)，然后6-磷酸葡萄糖与β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)在葡萄糖6-磷酸脱氢酶(G6P-DH)催化下生成还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，二磷酸腺苷和磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)在丙酮酸激酶(PK)的作用下循环生成丙酮酸(PA)和三磷酸腺苷，丙酮酸和还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在乳酸脱氢酶的作用下生成乳酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸。在ATP与ADP、NAD与NADH的循环重生的过程中解决葡萄糖消除过程中供能不足问题以及副产物葡萄糖6-磷酸、丙酮酸积累造成负干扰问题，使得消除副产物的反应正向进行，避免因产物的积累造成的逆反应，试剂1与待测样本作用3分钟后即可清除血液中葡萄糖及消除葡萄糖后副产物的干扰，有效提高了本发明试剂检测的特异性和准确度。
在消除葡萄糖及副产物积累后，使1,5-AG转化成1,5-脱水-果糖(1,5-AF)与过氧化氢，过氧化氢与用于检测过氧化氢的指示试剂反应形成一种持续稳定的化学发光信号。本发明的检测试剂盒具有操作简单、安全，灵敏度高、准确性好、特异性高、稳定性好等优点。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述发光底物为双氧杂环烷类化合物。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述双氧杂环烷类化合物为1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
上述技术方案以1，2-二氧杂环丁烷硼酸作为发光底物，在消除葡萄糖及副产物积累后，使1,5-AG转化成1，5-脱水-果糖与过氧化氢，过氧化氢与发光底物1，2-二氧杂环丁烷硼酸反应形成一种持续稳定的化学发光信号，通过过氧化氢与底物产生的光信号计算待测物含量。本试剂盒可采用全自动化学发光仪检测，实现全自动化，试剂检测信号强、空白信号低。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂R1包括下述浓度的组分：腺苷三磷酸0.01～10mmol/L、己糖激酶0.1～100KU/L、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.01～10mmol/L，葡萄糖6-磷酸脱氢酶0.1～100KU/L、磷酸烯醇式丙酮酸0.01～20mmol/L、丙酮酸激酶1～100KU/L和乳酸脱氢酶1～100KU/L；所述试剂R2包括下述浓度的组分：吡喃糖氧化酶0.01～20KU/L。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂R1包括下述浓度的组分：腺苷三磷酸的浓度范围为0.3mmol/L、己糖激酶的浓度范围为30KU/L、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的浓度范围为0.6mmol/L、葡萄糖6-磷酸脱氢酶的浓度范围为6KU/L、磷酸烯醇式丙酮酸的浓度范围为3mmol/L、丙酮酸激酶的浓度范围为10KU/L和乳酸脱氢酶的浓度范围为10KU/L；所述试剂R2包括下述浓度的组分：吡喃糖氧化酶的浓度范围为6KU/L。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂盒还包含缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、酶促进剂和防腐剂；所述试剂R1包括下述浓度的组分：
所述试剂R2包括下述浓度的组分：
缓冲液 5～100mmol/L
吡喃糖氧化酶 0.01～20KU/L
防腐剂 0.01-0.2wt％
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
上述技术方案中缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、酶促进剂的加入能够有效提高试剂盒的稳定性、灵敏度。
本发明的试剂检测血清、血浆样本可以避免样本溶血、脂血、黄疸对测定的影响，提高了检测的特异性。本发明的试剂抗干扰能力强、检测信号强、空白信号低，信噪比高，对糖尿病，尤其是对诊断和判断I、II型糖尿病愈后提供可靠的诊断依据。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述缓冲液为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液或MES缓冲液；抗干扰试剂为抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的至少一种；酶保护剂为海藻糖、蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种；酶促进剂为钾离子、镁离子中的至少一种，防腐剂为叠氮钠、、苯甲酸钠、柠檬酸钠、生物防腐剂中的至少一种；所述抗干扰试剂为抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶和过氧化氢酶。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，，所述试剂R1包括下述浓度的组分：抗干扰剂2KU/L；酶保护剂：甘露醇0.5wt％、海藻糖2wt％、牛血清白蛋白0.5wt％；酶促进剂：硫酸镁4mmol/L。
通过不断筛选和调整试剂盒中抗干扰剂、酶保护剂和酶促进剂的组分和浓度，上述技术方案中的试剂盒具有良好的抗干扰性能和稳定性。
作为本发明所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液的pH值为7.0～9.0。
本发明还提供了上述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
(1)在5μL待测样本中加入50μL试剂R1，37℃孵育3min；加入100μL试剂R2，孵育3min；加入发光底物，孵育3min，获得最终反应物；
(2)测定最终反应物的光信号强度，计算待测样本中1,5-脱水山梨醇的含量。
本发明的试剂盒采用酶法化学发光法的检测方法，具有试剂检测信号强、空白信号低，信噪比高，具有操作简单、安全，具有特异性好、灵敏度高、抗干扰能力强、线性范围宽等特点。
作为本发明所述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的检测方法的优选实施方式，所述待测样本为血液。
本发明采用酶法将葡萄糖及干扰物质转化成非干扰物质，将待测物转化成1,5-脱水果糖及过氧化氢，过氧化氢在发光底物作用下产生持续光信号，通过过氧化氢与底物产生的光信号计算待测物含量。本试剂盒可采用全自动化学发光仪检测，实现全自动化。本发明的试剂盒采用酶法化学发光法的检测方法，试剂检测信号强、空白信号低，信噪比高，具有操作简单、安全，具有特异性好、灵敏度高、抗干扰能力强、线性范围宽等特点。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
使用本发明提供的检测试剂测定血液中1,5-脱水葡萄糖醇(1,5-AG)含量，具有操作简单、安全，具有特异性好、灵敏度高、抗干扰能力强、线性范围宽等特点，试剂1与待测样本作用3分钟后即可清除血液中葡萄糖及消除葡萄糖后副产物葡萄糖6-磷酸、丙酮酸的干扰，有效提高了本发明试剂检测的特异性和准确度。
使用本发明的试剂检测血清、血浆样本可以避免样本溶血、脂血、黄疸对测定的影响，提高了检测的特异性。本发明的试剂检测信号强、空白信号低，信噪比高，对低浓度样本检测更加准确、真实、可靠，对糖尿病，尤其是对诊断和判断I、II型糖尿病愈后提供可靠的诊断依据。
附图说明
图1为实施例2与国产对照试剂测定对比图。
图2为实施例2与进口对照试剂测定对比图。
具体实施方式
为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
为了更好地理解本发明，下面提供相关的解释和说明：
HEPES为羟乙基呱嗪乙硫磺酸，非离子两性缓冲液，能较长时间控制恒定的pH范围；
TAPS为三羟甲基甲胺基丙磺酸；
MES为2-(N-吗啡啉)乙磺酸。
实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明中的生物防腐剂KY100购自科跃中楷；
1,2-二氧杂环丁烷硼酸(HyPerBlu，Lumigen Inc)。
实施例1
本实施例的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
磷酸缓冲液(pH 7.4) 10mmol/L
吡喃糖氧化酶 6KU/L
试剂R3：
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
本实施例检测试剂盒的检测方法为：
在4个反应杯中分别加入(1)去离子水、(2)含有300μmol/L 1,5-AG的待检液、(3)含有40mmol/L葡萄糖的待检液、(4)含有300μmol/L 1,5-AG和40mmol/L葡萄糖的待检液各5μL，再分别注入50μL试剂R1，在37℃加热3分钟后，各反应杯分别加入100μL试剂R2，在37℃继续加热3分钟，各反应杯分别加入10μL试剂R3发光底物，在37℃继续加热3分钟后，采用化学发光仪检测反应终产物的光信号强度。
表1
样本 发光值
(1) 去离子水 682
(2) 300μmol/L 1,5-AG 55309
(3) 40mmol/L葡萄糖 413
(4) 300μmol/L 1,5-AG+40mmol/L葡萄糖溶液 39241
从表1可以看出，样本(3)与样本(1)发光值接近，表明本法完全可以在3分钟内消除待测样本中的40mmol/L葡萄糖；样本(1)与样本(3)、样本(2)和样本(4)的差异在于葡萄糖的存在，在本发明中葡萄糖消除后会产生丙酮酸，由于丙酮酸的抗氧化作用消耗掉产生的过氧化氢，导致(2)与(4)低于(1)和(3)。
实施例2
作为本发明所述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的一种实施例，本实施例的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的成分和用量为：
按以下成分和用量配置1,5-AG诊断试剂盒。
根据实施例1的试剂盒加入除丙酮酸系统，配置成为1,5-AG检测试剂盒。
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
磷酸缓冲液(pH 7.4) 10mmol/L
吡喃糖氧化酶 6KU/L
试剂R3：
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
运用实施例1的检测方法，对除糖系统进行检测。
表2
样本 发光值
(1) 去离子水 714
(2) 300μmol/L 1,5-AG 49316
(3) 40mmol/L葡萄糖 728
(4) 300μmol/L 1,5-AG+40mmol/L葡萄糖溶液 48971
从表2可以看出，(1)和(3)的光信号强度几乎完全相同，表明本发明所述试剂盒完全可以在3分钟内消除样本中40mmol/L葡萄糖；(2)和(4)的光信号强度也几乎完全相同，表明本发明对于葡萄糖消除后产生的丙酮酸能够完全消除，进一步确定了本发明的试剂盒对于消除葡萄糖及丙酮酸的有效性。丙酮酸和还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸在乳酸脱氢酶的作用下生成乳酸和β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，解决葡萄糖消除过程中供能不足问题以及副产物葡萄糖6-磷酸、丙酮酸积累造成负干扰问题，使得消除副产物的反应正向进行，避免因产物的积累造成的逆反应，有效提高了本发明试剂检测的特异性和准确度。
实施例3
作为本发明所述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的一种实施例，本实施例的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
Tris-HCl缓冲液(pH 7.4) 100mmol/L
吡喃糖氧化酶 20KU/L
叠氮钠 0.1wt％
试剂R3：
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
实施例4
作为本发明所述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的一种实施例，本实施例的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
磷酸缓冲液(pH 7.6) 5mmol/L
吡喃糖氧化酶 0.01KU/L
KY100 0.1wt％
试剂R3：
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
实施例5
作为本发明所述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的一种实施例，本实施例的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的成分和用量为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
磷酸缓冲液(pH 9.0) 50mmol/L
吡喃糖氧化酶 10KU/L
柠檬酸钠 0.5wt％
试剂R3：
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
实施例6
作为本发明所述1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的一种实施例，本实施例的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
MES缓冲液(pH 7.4) 60mmol/L
吡喃糖氧化酶 15KU/L
叠氮钠 0.1wt％
试剂R3：
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
实施例7
对实施例2～6所述的试剂盒的进行反应度和信噪比测定。
以实施例2的试剂盒为实验组，分别选用国产及进口的1,5-AG试剂盒作为对照试剂，分别同时测定校准品或质控品，检验试剂盒的反应度和信噪比，结果如表3所示。
国产试剂盒的成分和用量为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
校准品：1,5-脱水-D-山梨醇
质控品：1,5-脱水-D-山梨醇
进口试剂盒的成分和用量为：
试剂R1包括下述浓度的组分：
试剂R2包括下述浓度的组分：
甘氨酸-氢氧化钠缓冲液(pH 10) 200mM
2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四氮唑钠盐(WST-1)
0.5mM
AG-6-磷酸脱氢酶(AG6P-DH) 20U/mL
表3
从表3可以看出，国产试剂盒的信噪比最低，本发明采用酶法将葡萄糖及干扰物质转化成非干扰物质，将待测物转化成1,5-脱水果糖及过氧化氢，过氧化氢在发光底物作用下产生持续光信号，通过过氧化氢与底物产生的光信号计算待测物含量，将信号放大，灵敏度提高，信噪比均高于对照试剂。
分别测定实施例3～6的试剂盒的反应度和信噪比，结果基本与实施例2一致。缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、酶促进剂的加入不影响本发明试剂盒的信噪比和反应度。
实施例8
以实施例2的试剂盒(自配试剂)为实验组，分别选用实施例7中的国产及进口的1,5-AG试剂盒(国产对照试剂、进口对照试剂)作为对照试剂，测定1，5-脱水葡萄糖醇，试验结果相关性良好(图1、图2)，摘取12例病人样本数据如下表4所示。由实验结果可知，本发明的试剂盒与对照试剂盒具有良好的相关性。
表4
样本号 国产试剂 进口试剂 实施例2
1 157.1 162.4 160.5
2 150.8 144.8 147.1
3 30.9 30.3 30.5
4 49.6 36.9 36.3
5 78.2 76.8 75.6
6 302.8 289.7 288.4
7 223.9 221.6 218.7
8 16.5 17.1 16.3
9 107.2 99.8 100.6
10 152.3 152.3 151.4
11 60.4 64.6 62.3
12 122.7 125.4 121.8
实施例9：
以实施例2的试剂盒(自配试剂)为实验组，分别选用实施例7中的国产及进口的1,5-AG试剂盒(国产对照试剂、进口对照试剂)作为对照试剂，考察线性(表5)及检测限(表6)。
表5
对空白样本重复检测20次，测定检测限。
表6
由表5和表6可知，本发明的检测试剂盒的检测线性范围宽，灵敏度高。
实施例10：
以实施例2的试剂盒(本发明)为实验组，分别选用实施例7中的国产1,5-AG试剂盒(国产试剂)作为对照试剂，测定浓度为10-100μmol/L1,5-AG，考察试剂盒的低值检测的准确性，结果如表7所示。
表7
糖尿病患者的1,5-AG(<84μmol/L)比正常人低，所以对于1,5-AG检测试剂盒，低值(<80μmol/L)检测准确是非常重要的。由表7可知，本发明检测10-100μmol/L的1,5-AG偏差均在10％范围内，而对比试剂在低浓度6-80μmol/L范围内偏差远高于本发明。结果表明本发明的试剂盒的低值检测的准确性显著优于对比试剂。
与传统的酶比色法试剂盒相比，本发明的试剂盒的采用酶法化学发光法，检测不受试剂颜色的干扰，样本中存在的血红蛋白、色素均不会影响检测结果，本发明提供的试剂盒在不含抗坏血酸酶的情况下，待测样本中含有200μmol/L的抗坏血酸也不会影响检测结果，因而本发明的试剂盒具有较强的抗干扰性能，有效提高了本发明的试剂检测的特异性和准确度。
综上所述，使用本发明提供的检测试剂测定血液中1,5-AG含量，具有操作简单、安全，具有特异性好、灵敏度高、抗干扰能力强、线性范围宽等特点，试剂1与待测样本作用3分钟后即可清除血液中葡萄糖及消除葡萄糖后副产物的干扰，有效提高了本发明试剂检测的特异性和准确度。
使用本发明的试剂检测血清、血浆样本可以避免样本溶血、脂血、黄疸对测定的影响，提高了检测的特异性。本发明的试剂检测信号强、空白信号低，信噪比高，对糖尿病，尤其是对诊断和判断I、II型糖尿病愈后提供可靠的诊断依据。
本发明的发光底物可进一步将1，2-二氧杂环丁烷硼酸替换成其它的1，2-二氧杂环丁烷类化合物、1,2-二氧杂环丁烷-3-酮类化合物的发光底物，利用以上的发光底物，试剂检测信号强、空白信号低，信噪比高。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (9)

1.一种1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于消除葡萄糖、葡萄糖6-磷酸和丙酮酸的试剂R1、用于将1,5-脱水山梨醇转化成1,5-脱水果糖与过氧化氢的试剂R2和用于检测过氧化氢的发光底物；所述试剂R1包括腺苷三磷酸、己糖激酶、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、葡萄糖6-磷酸脱氢酶、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶；所述试剂R2包括吡喃糖氧化酶；所述发光底物为双氧杂环烷类化合物。
2.根据权利要求1所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述双氧杂环烷类化合物为1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
3.根据权利要求1所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：腺苷三磷酸0.01～10mmol/L、己糖激酶0.1～100KU/L、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.01～10mmol/L，葡萄糖6-磷酸脱氢酶0.1～100KU/L、磷酸烯醇式丙酮酸0.01～20mmol/L、丙酮酸激酶1～100KU/L和乳酸脱氢酶1～100KU/L；所述试剂R2包括下述浓度的组分：吡喃糖氧化酶0.01～20KU/L。
4.根据权利要求1所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：腺苷三磷酸0.3mmol/L、己糖激酶30KU/L、β-烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0.6mmol/L、葡萄糖6-磷酸脱氢酶6KU/L、磷酸烯醇式丙酮酸3mmol/L、丙酮酸激酶10KU/L和乳酸脱氢酶10KU/L；所述试剂R2包括下述浓度的组分：吡喃糖氧化酶6KU/L。
5.根据权利要求1～4任一项所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含缓冲液、抗干扰剂、酶保护剂、酶促进剂和防腐剂；所述试剂R1包括下述浓度的组分：
所述试剂R2包括下述浓度的组分：
缓冲液 5～100mmol/L
吡喃糖氧化酶 0.01～20KU/L
防腐剂 0.01-0.2wt％
发光底物：1，2-二氧杂环丁烷硼酸。
6.根据权利要求5所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、HEPES缓冲液、TAPS缓冲液或MES缓冲液；抗干扰试剂为抗坏血酸氧化酶、胆红素氧化酶、过氧化氢酶中的至少一种；酶保护剂为海藻糖、蔗糖、甘露醇、聚乙二醇、牛血清白蛋白中的至少一种；酶促进剂为钾离子、镁离子中的至少一种；防腐剂为叠氮钠、苯甲酸钠、柠檬酸钠、生物防腐剂中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1包括下述浓度的组分：抗干扰剂2KU/L；酶保护剂：甘露醇0.5wt％、海藻糖2wt％、牛血清白蛋白0.5wt％；酶促进剂：硫酸镁4mmol/L。
8.根据权利要求5所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2中的缓冲液的pH值为7.0～9.0。
9.根据权利要求1～8任一项所述的1,5-脱水山梨醇的检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：
(1)在5μL待测样本中加入50μL试剂R1，37℃孵育3min；加入100μL试剂R2，孵育3min；加入发光底物，孵育3min，获得最终反应物；
(2)测定最终反应物的光信号强度，计算待测样本中1,5-脱水山梨醇的含量。
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