CN106244672A - 一种用于尿酸检测试剂的稳定剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及体外诊断试剂技术领域,具体地说是一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于该稳定剂由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α‑酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺组成,各成分的重量份为:MgSO4 0.1~5g/L,甘油 1~5ml/L,海藻糖 0.1g/L~20 g/L,PEG 4000 0.1~10ml/L,二磷酸腺苷 0.1~5g/L,α‑酮戊二酸 1~4g/L,聚乙烯吡咯烷酮 0.5~2g/L,聚乙烯亚胺 0.5~2.0g/L,用于尿酸测定试剂的稳定剂,可以显著延长尿酸测定试剂的有效期至2年,开瓶稳定性达到3个月,且明显降低空白吸光度值,单试剂操作简单,结果准确,稳定性好。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域,具体地说是一种配置简单、试剂有效期增长、开瓶稳定性增大的用于尿酸检测试剂的稳定剂。
背景技术
众所周知,体外测定人血清或血浆中尿酸(UA)含量,是肾脏功能重要指标之一。尿酸是人体内嘌呤分解代谢的最终产物,由肾脏随尿液排出体外。当肾脏功能严重受损时,血中尿酸显著升高;当患有遗传性黄嘌呤尿症和剥脱性皮炎等时,尿酸减少。目前检测尿酸多采用酶法测定,利用尿酸酶的作用,采用紫外分光法、氧电极法、偶联过氧化物酶(POD)比色法、偶联过氧化物酶(CAT)和醛脱氢酶(FADH)紫外吸收法进行检测;由于其高灵敏度,高准确性、高精密性及适用性而在临床上广泛使用。但因为酶的活性会受到PH、温度、化学试剂的干扰,从而导致尿酸检测试剂存在稳定性差的问题,影响临床使用。
目前,有关尿酸试剂的稳定性的资料比较少,专利CN200510111883提供了一种酶复核稳定剂,对单独的酶溶液具有良好的稳定效果,但未提及对于某特定试剂是否也可起到类似的作用;专利CN201410398198.3中提到一种用于尿酸测定试剂盒的复核稳定剂,包含明胶、海藻糖、丙二醇、聚氧乙烯月桂醚、Proclin300等,在加入稳定剂后,开瓶稳定性仅增加到40天,并且在双试剂中加入同样含量的稳定剂对于试剂的稳定性的效果不易把握,双试剂操作比较复杂,也并未证明试剂加入稳定剂后的具体效期。
发明内容
本发明的目的是解决上述现有技术的不足,提供一种配置简单、试剂有效期增长、开瓶稳定性增大的用于尿酸检测试剂的稳定剂。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于该稳定剂由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺组成,各成分的重量份为:MgSO4 0.1~5g/L,甘油 1~5ml/L,海藻糖 0.1g/L~20 g/L,PEG 4000 0.1~10ml/L,二磷酸腺苷 0.1~5g/L,α-酮戊二酸 1~4g/L,聚乙烯吡咯烷酮 0.5~2g/L,聚乙烯亚胺 0.5~2.0g/L。
本发明中最优化的成分比为:MgSO4 0.5 g/L,甘油 5 ml/L ,海藻糖 15 g/L,PEG4000 2 ml/L ,二磷酸腺苷2 g/L,α-酮戊二酸 2.0 g/L,聚乙烯吡咯烷酮1.5g/L,聚乙烯亚胺 0.5g/L。
本发明中的稳定剂应用于尿酸测定试剂中,所述的尿酸检测试剂为单试剂,组分为尿酸酶 800U/L,过氧化物酶 500U/L,4-氨基安替比林 10mmol/L,DHBS 50mmol/L,亚铁氰化钾 10mmol/L,Good,s Buffer。
本发明中所述稳定剂的使用量在尿酸测定试剂中的体积为5 ml/L。
本发明中的所述的稳定剂的PH为5.5~8.0, 该PH为最适PH,PH对于酶的活性有很大的影响,影响机制很复杂,主要有下列几个方面:1.pH过小(过酸)、过大(过碱)都能使酶蛋白变性而失活.2.pH的改变能影响酶活性中心上必须基团的解离程度,同时也可以影响底物和辅酶的解离程度,从而影响酶分子对底物分子的结合和催化,只有在特定的pH下,酶、底物和辅酶的解离状态,最适宜它们相互结合,并发生催化作用,从而使酶反应速度达到最大值。这个pH称为酶的最适PH(optimun pH)酶的最适pH不是一个常数,它的大小与底物的种类和浓度、缓冲液的性质和浓度、介质的离子浓度、温度、反应时间有关,在测定某种酶的活力时,采用该酶的最适pH,并用适当的缓冲液维持最适pH。
本发明由于稳定剂由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺组成,该稳定剂置于组分为尿酸酶 800U/L,过氧化物酶 500U/L,4-氨基安替比林 10mmol/L,DHBS 50mmol/L,亚铁氰化钾 10mmol/L,Good,s Buffer的单试剂中,可以显著延长尿酸测定试剂的有效期至2年,开瓶稳定性达到3个月,且明显降低空白吸光度值,采用单试剂操作简单、结果准确、稳定性好。
具体实施方式
一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于该稳定剂由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺组成,各成分的重量份为:MgSO4 0.1~5g/L,甘油 1~5ml/L,海藻糖 0.1g/L~20 g/L,PEG 4000 0.1~10ml/L,二磷酸腺苷 0.1~5g/L,α-酮戊二酸 1~4g/L,聚乙烯吡咯烷酮 0.5~2g/L,聚乙烯亚胺 0.5~2.0g/L,最优化的成分比为:MgSO4 0.5 g/L,甘油 5 ml/L ,海藻糖 15 g/L, PEG4000 2ml/L ,二磷酸腺苷2 g/L,α-酮戊二酸 2.0 g/L,聚乙烯吡咯烷酮1.5g/L,聚乙烯亚胺0.5g/L,该稳定剂应用于尿酸测定试剂中,所述的尿酸检测试剂为单试剂,组分为尿酸酶800U/L,过氧化物酶 500U/L,4-氨基安替比林 10mmol/L,DHBS 50mmol/L,亚铁氰化钾10mmol/L,Good,s Buffer,所述稳定剂的使用量在尿酸测定试剂中的体积为5 ml/L,所述的稳定剂的PH为5.5~8.0。
本发明试剂检测尿酸的反应原理为:
1) 尿酸在尿酸酶作用下,生成尿囊素和过氧化氢(H2O2),
2) 再利用Trinder反应系统,过氧化氢在过氧化物酶(POD)催化下,与4-氨基安替比林(4-AAP)和3,5-二氯-2-羟基苯磺酸钠盐(DHBS),生成红紫色色素。
反应液的颜色与尿酸浓度成正比。
本发明尿酸检测试剂,适用于各类自动、半自动生化仪,以奥林巴斯AU400全自动生化仪为例,其操作如下:
分析方法:终点法,试剂的用量为300ul,样本量为6ul,将样本加入试剂后于37℃孵育5~10分钟后读取吸光度值A1,检测波长主波长为520nm,副波长为660nm。
实验采用奥林巴斯AU400全自动生化仪进行,但本发明的试剂不限于上述仪器,还适用于其他半自动或全自动生化分析仪。
本实验的目的是检测试剂的空白吸光度值、开瓶稳定性、长效稳定性。
操作步骤:使用定标液定标,取三个水平的质控各测定10次,取平均值,计算相对偏差。质控采用朗道质控(CAT.NO.HN1530 LOT.NO.949UN),三个水平的靶值范围分别为
结果分析:根据检测数据,计算测定值均值、相对偏差。
表一结果显示,本发明试剂空白本地明显低于对比试剂,表明试剂的准确度高,精密性好,测试误差小,干扰因素少。
表二结果显示,对比试剂仅在一个月内表现出良好的测试结果,后期偏离靶值幅度较大,而本发明试剂在开瓶后3个月,对同一质控测定10次,相对偏差均小于4%,表明试剂在开瓶后非常稳定,准确性良好,为测试人员提供了方便快捷的检测试剂。
表三结果显示,对比试剂仅在一年内内表现出良好的测试结果,后期偏离靶值幅度较大,而本发明试剂在规定的储存条件下放置两年后,试剂依然非常稳定,相对偏差均小于4%,准确性好。显著延长了试剂的使用期限。
表1
表2
表三
本发明试剂中一定比例的MgSO4及聚乙烯亚胺起到了降低空白本底(空白本底就是未添加样品时试剂中某些成份本身具有的吸光度值),其中聚乙烯亚胺通过保护4-氨基安替比林的氨基从而减少因4-氨基安替比林被氧化而产生的颜色反应,达到降低空白本底的效果,MgSO4的硫酸根离子可以降低4-氨基安替比林被氧化的速度而减少因4-氨基安替比林被氧化而产生的颜色反应,从而降低空白本底。
不含有MgSO4及聚乙烯亚胺与含有MgSO4及聚乙烯亚胺之间的对比试验数据对比:
本发明试剂中一定比例的聚乙二醇(PEG4000)和聚乙烯吡咯烷酮起到了稳定试剂的作用,聚乙二醇与尿酸酶结合,以分子氧为受体,催化尿酸酶氧化为尿囊素和过氧化氢,聚乙二醇化的尿酸酶在保留原有生物活性的同时,具有更长的半衰期,更好的溶解性和储存稳定性,酶作为生物催化剂,会受到各种因素的影响 ,将尿酸酶与聚乙二醇反应结合,可提高其稳定性,从而达到延长试剂有效期的效果。聚乙烯吡咯烷酮是一种非离子型高分子化合物,它的分子结构类似于简单的蛋白质结构,它具有很好的水溶性。通过延缓、缓释酶的活性来控制酶失活的时间,从而延长试剂的有效期。
不含有聚乙二醇(PEG4000)和聚乙烯吡咯烷酮与含有聚乙二醇(PEG4000)和聚乙烯吡咯烷酮之间的对比试验数据:
本发明由于稳定剂由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺组成,该稳定剂置于组分为尿酸酶 800U/L,过氧化物酶 500U/L,4-氨基安替比林 10mmol/L,DHBS 50mmol/L,亚铁氰化钾 10mmol/L,Good,s Buffer的单试剂中,可以显著延长尿酸测定试剂的有效期至2年,开瓶稳定性达到3个月,且明显降低空白吸光度值,采用单试剂操作简单、结果准确、稳定性好。
本发明的有益效果是:本发明的用于尿酸测定试剂的稳定剂,可以显著延长尿酸测定试剂的有效期至2年,开瓶稳定性达到3个月,且明显降低空白吸光度值,单试剂操作简单,结果准确,稳定性好。
现有单试剂中主要成分有过氧化物酶、4-氨基安替比林、尿酸酶、缓冲液等成份,空白本底偏高,稳定性差,开瓶后仅稳定一个月,试剂有效期仅为1年,本专利中的试剂除含有上述成份,还添加了MgSO4、PEG4000、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺等成份,对于试剂的稳定性及空白本底起到了很好的作用。
Claims (5)
1.一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于该稳定剂由MgSO4、甘油、海藻糖、PEG4000、二磷酸腺苷、α-酮戊二酸、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯亚胺组成,各成分的重量份为:MgSO4 0.1~5g/L,甘油 1~5ml/L,海藻糖 0.1g/L~20 g/L,PEG 4000 0.1~10ml/L,二磷酸腺苷 0.1~5g/L,α-酮戊二酸 1~4g/L,聚乙烯吡咯烷酮 0.5~2g/L,聚乙烯亚胺 0.5~2.0g/L。
2.根据权利要求1所述的一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于所述的最优化的成分比为:MgSO4 0.5 g/L,甘油 5 ml/L ,海藻糖 15 g/L, PEG4000 2 ml/L ,二磷酸腺苷2 g/L,α-酮戊二酸 2.0 g/L,聚乙烯吡咯烷酮1.5g/L,聚乙烯亚胺 0.5g/L。
3.根据权利要求1所述的一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于所述的稳定剂应用于尿酸测定试剂中,所述的尿酸检测试剂为单试剂,组分为尿酸酶 800U/L,过氧化物酶 500U/L,4-氨基安替比林 10mmol/L,DHBS 50mmol/L,亚铁氰化钾 10mmol/L,Good,sBuffer。
4.根据权利要求1所述的一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于所述稳定剂的使用量在尿酸测定试剂中的体积为5 ml/L。
5.根据权利要求1所述的一种用于尿酸检测试剂的稳定剂,其特征在于所述的稳定剂的PH为5.5~8.0。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110951823A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-03 | 扬中酵诚生物技术研究有限公司 | 尿酸检测试剂盒及其制作工艺 |
CN111707626A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-09-25 | 大连德泰克森生物医药有限公司 | 一种尿液中酪氨酸的稳定剂及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1446925A (zh) * | 2003-03-24 | 2003-10-08 | 肖洪武 | 稳定的单一液态酶比色试剂及其应用 |
CN1986785A (zh) * | 2005-12-23 | 2007-06-27 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 酶复合稳定剂 |
CN104198686A (zh) * | 2014-08-14 | 2014-12-10 | 苏州康铭诚业医用科技有限公司 | 一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂 |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1446925A (zh) * | 2003-03-24 | 2003-10-08 | 肖洪武 | 稳定的单一液态酶比色试剂及其应用 |
CN1986785A (zh) * | 2005-12-23 | 2007-06-27 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 酶复合稳定剂 |
CN104198686A (zh) * | 2014-08-14 | 2014-12-10 | 苏州康铭诚业医用科技有限公司 | 一种用于尿酸测定试剂盒的复合稳定剂 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
黄亚: "血清尿酸测定试剂盒新配方的建立和评价", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110951823A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-03 | 扬中酵诚生物技术研究有限公司 | 尿酸检测试剂盒及其制作工艺 |
CN111707626A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-09-25 | 大连德泰克森生物医药有限公司 | 一种尿液中酪氨酸的稳定剂及其应用 |
CN111707626B (zh) * | 2020-06-18 | 2023-09-01 | 大连德泰克森生物医药有限公司 | 一种尿液中酪氨酸的稳定剂及其应用 |
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