CN107267595A - 一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法,本发明有关CK‑MB的试剂制备方法如下：试剂1和试剂2先用蒸馏水作溶剂配制成一定浓度的磷酸盐缓冲溶液，调至合适的PH值之后将4‑氨基安替比林(4‑AAP)、色原、酶保护剂、酶、抗CK‑M单克隆抗体依次溶解于试剂1中；试剂2中依次加入底物和激活剂，最后试剂1和试剂2中均加入一定量的防腐剂，2‑8℃密封保存。本发明所提供的CK‑MB试剂制备方法具有准确度高、稳定性好的特点。

Description

一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法
技术领域
本发明属于生物试剂领域，具体是指肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法。
背景技术
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)广泛存在于各种组织中，与三磷酸腺苷(ATP)的再生有关。肌酸激酶是由M和B两种亚单位组成的二聚体，在细胞质内共有三种同工酶：即CK-MM、CK-MB和CK-BB。在细胞线粒体内还有另一种同工酶，称为CK-Mt。这几种同工酶虽然相对分子质量相同，但是免疫特性不同。肌酸激酶的同工酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3-4日内恢复正常。其中肌酸激酶的同工酶CK-MB诊断的特异性最高，临床上主要用于心肌梗死、病毒性心肌炎的辅助诊断。
肌酸激酶同工酶测定的方法有电泳法、离子交换柱层析法、免疫抑制法、金标记法、免疫酶标法和放射免疫法等。常规应用电泳法和免疫抑制法较多，但电泳法无法应用于全自动生化分析仪，所用仪器价格昂贵，所以无法普及；而采用免疫抑制法配制的试剂盒可配合全自动生化分析仪，可以同时大批量的测定样本，适合临床应用推广。
免疫抑制法的原理是利用抗M亚单位的抗体，选择性的抑制M亚单位活力后，再测B亚单位活力，测定结果乘以2代表CK-MB活力。其中应用到免疫抑制法的有CN 102154443 B(2013.02.13)、CN 104374925 B(2016.03.30)、CN 106093386 A(2016.11.09)，虽然以上专利采用的抑制法类似，但测定CK-B活力的方法均采用辅酶指示系统。但是这些方案均存在不能有效消除内源性肌酸干扰，影响检测精度。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，通过该法可稳定地制备一种重复性好、准确度高、稳定性好的肌酸激酶同工酶检测试剂。
为实现上述目的，本发明的技术方案是肌酸激酶同工酶检测试剂包括有试剂1和试剂2的液体双试剂，其特征在于包括以下步骤：
分别配制浓度为80mmol/L-160mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应(如果Na2HPO4溶液的浓度是80mmol/L，则KH2PO4溶液也用80mmol/L；如果Na2HPO4溶液的浓度是160mmol/L，则KH2PO4溶液也用160mmol/L)的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将相同浓度对应的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1的溶剂中先加入1mmol/L-8mmol/L的4-氨基安替比林和色原，充分混合直至完全溶解，再加入酶保护剂，之后加入15KU/L-30KU/L的肌酸酶、6KU/L-12KU/L的肌氨酸氧化酶、8KU/L-16KU/L的过氧化物酶，待充分混合均匀之后再加入2000U/L的抗CK-M单克隆抗体；在试剂2的溶剂中先加入150mmol/L-200mmol/L的磷酸肌酸、1.0mmol/L-2.0mmol/L的二磷酸腺苷，完全溶解后加入一定量的激活剂，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L-1.0g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封分别保存。
进一步设置是所述的色原1mmol/L-8mmol/L，所述色原为3,5-二氯-2-羟基苯磺酸、N-乙基-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基-4-氟苯胺、N-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺、2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸、4-氯酚、2,4二氯酚、或苯酚，优选2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸(HTIB)。
进一步设置是色原为2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸，其浓度为4.5mmol/L。
进一步设置是所述的酶保护剂，该酶保护剂为液体酶保护剂1％-3％，其含量为1mL-3mL/100mL；或者该酶保护剂为固体酶保护剂，其含量为1g-3g/100mL。如果是液体:脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、烷基酚聚氧乙烯(10)醚，单位为1mL-3mL/100mL；如果是固体：果糖、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、月桂酸聚氧乙烯(9)酯，单位为1g-3g/100mL)，所述酶保护剂可选自果糖与表面活性剂的组合物，其中表面活性剂可选自脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、月桂酸聚氧乙烯(9)酯、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、烷基酚聚氧乙烯(10)醚中的一种或多种。
进一步设置是酶保护剂为果糖和月桂酸聚氧乙烯(9)酯1:1质量比组合。
进一步设置是所述激活剂为醋酸镁与巯基试剂的组合物，其中巯基试剂可选自N-乙酰半胱氨酸、巯基甘油、二硫苏糖醇、二硫赤癣糖醇、巯基乙酸、巯基乙醇、半胱氨酸中一种或几种组合。
进一步设置是所述激活剂为醋酸镁与N-乙酰半胱氨酸组合物，其中，醋酸镁的浓度为6mmol/L-12mmol/L；N-乙酰半胱氨酸浓度10mmol/L-20mmol/L。
本发明所制备的检测试剂的检测原理为：先加入抗CK-M单克隆抗体，标本中全部CK-MM活性和50％CK-MB活性被抑制，而B亚基的活性则不受影响；之后肌酸激酶同工酶(CK-B)催化磷酸肌酸(CrP)转变成肌酸(Cr)，同时二磷酸腺苷(ADP)磷酸化成三磷酸腺苷(ATP)；在肌酸酶的催化下肌酸水解产生肌氨酸和尿素；肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下释放出H2O2；H2O2和4-氨基安替比林(4-AAP)在过氧化物酶(POD)参与下发生Trinder反应，反应式如下：
本发明所制备的检测试剂，采用液体双试剂，可以有效消除内源性肌酸干扰，无需样本前处理，可直接利用全自动生化分析仪进行大批量样本检测，操作简单、重复性好、准确度高、稳定性好，适合临床应用推广。
本发明所制备的检测试剂，采用上述具体组分配置的双试剂，从而在实际检测肌酸激酶同工酶时，采用两步法检测，血清样本与试剂1(R1)混合，37℃保温5min，使样品中所含内源性肌酸引起的副反应进行完毕，同时加入的抗CK-M单克隆抗体将M亚单位活力抑制，然后加入试剂2(R2)启动CK-B的催化反应，在主波长546nm/辅助波长660nm下读取吸光度值，最后于37℃反应计算出CK-MB活力。从而解决内源性肌酸对肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定的干扰，本试剂盒的成分分配和对应成分比例可先将血清样本中原有肌酸反应完全，从而可提高检测结果的准确性、重复性和稳定性。
有益效果：本发明所制备的采用Trinder指示系统制备的肌酸激酶同工酶(CK-MB)检测试剂为液体双试剂，采用两步法，有效消除内源性肌酸干扰，同时添加CK-B激活剂和相应酶保护剂，可以提高CK-MB测定的准确度和试剂的稳定性。
下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明做进一步介绍。
附图说明
图1是本发明实施例1于2-8℃和37℃水浴一周的稳定性检测结果；
图2是本发明实施例2于2-8℃和37℃水浴一周的稳定性检测结果；
图3是本发明实施例3于2-8℃和37℃水浴一周的稳定性检测结果。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。
实施例1
分别配制浓度为80mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将对应相同浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入1mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)和4.5mmol/L的HTIB，充分混合直至完全溶解，再加入5g/L的果糖和0.5％的月桂酸聚氧乙烯(9)酯，之后再加入15KU/L的肌酸酶、6KU/L的肌氨酸氧化酶、8KU/L的过氧化物酶(POD)，待充分混合均匀之后再加入2000U/L的抗CK-M单克隆抗体；在试剂2中先加入150mmol/L的磷酸肌酸(CrP)、1.0mmol/L的二磷酸腺苷(ADP)，完全溶解后加入8mmol/L的醋酸镁和15mmol/L的NAC，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封保存。
实施例2
分别配制浓度为120mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将对应相同浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入4mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)和4.5mmol/L的HTIB，充分混合直至完全溶解，再加入10g/L的果糖和1％的月桂酸聚氧乙烯(9)酯，之后再加入23KU/L的肌酸酶、9KU/L的肌氨酸氧化酶、12KU/L的过氧化物酶(POD)，待充分混合均匀之后再加入2000U/L的抗CK-M单克隆抗体；在试剂2中先加入175mmol/L的磷酸肌酸(CrP)、1.5mmol/L的二磷酸腺苷(ADP)，完全溶解后加入8mmol/L的醋酸镁和15mmol/L的NAC，最后于试剂1和试剂2中均加入0.8g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封保存。
实施例3
分别配制浓度为160mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将对应相同浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1中先加入8mmol/L的4-氨基安替比林(4-AAP)和4.5mmol/L的HTIB，充分混合直至完全溶解，再加入15g/L的果糖和1.5％的月桂酸聚氧乙烯(9)酯，之后再加入30KU/L的肌酸酶、12KU/L的肌氨酸氧化酶、16KU/L的过氧化物酶(POD)，待充分混合均匀之后再加入2000U/L的抗CK-M单克隆抗体；在试剂2中先加入200mmol/L的磷酸肌酸(CrP)、2.0mmol/L的二磷酸腺苷(ADP)，完全溶解后加入8mmol/L的醋酸镁和15mmol/L的NAC，最后于试剂1和试剂2中均加入1.0g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封保存。
实施例4
将采用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂进行性能评价
1.准确度验证：
选用朗道低、高值质控品(低值，批号：3846CK；高值，批号：3847CK)，采用BS-420全自动生化分析仪进行检测，具体操作方法如表一所述，采用单点定标法定标后，CK-MB测定值及空白吸光度值可从仪器上直接读取，为了减少偶然误差，重复测定三次取均值，计算测定值与靶值的相对偏差。
表2采用实施例1-3配制的试剂测定低值质控准确度比较
表3采用实施例1-3配制的试剂测定高值质控准确度比较
由以上结果可知，采用本发明的方法配制的液体双试剂测定质控品的均值位于靶值范围内，相对偏差明显<10％，说明采用本发明的方法配制的液体双试剂准确度较高。
2.精密度实验：
选用临床常规样本，用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂重复测定20次，计算变异系数，结果见表4。
表4采用实施例1-3配制的试剂重复性测定
由以上结果可知，采用本发明的方法配制的液体双试剂测定的变异系数(CV)分别为1.82％、1.72％、1.59％，均明显<8％，说明采用本发明的方法配制的液体双试剂具有良好的精密度。
3.稳定性试验：
将采用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂进行稳定性验证试验。将以上三种试剂每种平均分成两份，一份至于2-8℃保存，另一份至于37℃水浴中保存，每隔一天测定一次，连续监测一周，观察血清样本测定值(血清定值106.30U/L，允许误差范围(±10％)：95.67U/L-116.93U/L)，通过准确度的测定比较试剂稳定性。
表5采用实施例1的方法配制的试剂稳定性数据
表6采用实施例2的方法配制的试剂稳定性数据
表7采用实施例3的方法配制的试剂稳定性数据
由图1、图2及图3可以看出，采用实施例1-3的方法制得的试剂稳定性良好。采用实施例1-3的方法制得的试剂于37℃水浴一周，虽然测定CK-MB浓度有一定程度的上升，但是上升的幅度不大，在允许范围内，说明加入合适的酶保护剂和CK-B激活剂可以保护相应酶的活性，进而提高试剂的稳定性，可延长用此法制得的试剂盒的保存期。
综上性能评价可知，采用本发明实施例1-3的方法配制的液体双试剂具有准确度高、重复性好、稳定性好的优点，可以满足临床需求，在临床诊断心肌梗死、病毒性心肌炎病情方面有很好的应用价值。
应用实施例
本发明肌酸激酶同工酶(CK-MB)检测试剂盒适用于各类全自动生化分析仪，现于全自动生化分析仪BS-420上的应用，其具体使用方法如下：
表1样本检测操作程序
样品中的CK-MB含量(U/L)＝ΔAT/ΔAS×校准液浓度*2
式中：ΔAT：以空白管吸光度为对照的样品管吸光度；
ΔAS：以空白管吸光度为对照的校准管吸光度；
本发明所使用的质控品为朗道高、低值质控品；所测样品为不溶血血清。

Claims (8)

1.一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，肌酸激酶同工酶检测试剂包括有试剂1和试剂2的液体双试剂，其特征在于包括以下步骤：
分别配制浓度为80mmol/L-160mmol/L等浓度的Na2HPO4和KH2PO4溶液，将其相同浓度对应的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝7.6的缓冲溶液，作为试剂1的溶剂；将相同浓度对应的Na2HPO4和KH2PO4溶液调制成PH＝6.7的缓冲溶液，作为试剂2的溶剂；在试剂1的溶剂中先加入1mmol/L-8mmol/L的4-氨基安替比林和色原，充分混合直至完全溶解，再加入酶保护剂，之后加入15KU/L-30KU/L的肌酸酶、6KU/L-12KU/L的肌氨酸氧化酶、8KU/L-16KU/L的过氧化物酶，待充分混合均匀之后再加入2000U/L的抗CK-M单克隆抗体；在试剂2的溶剂中先加入150mmol/L-200mmol/L的磷酸肌酸、1.0mmol/L-2.0mmol/L的二磷酸腺苷，完全溶解后加入一定量的激活剂，最后于试剂1和试剂2中均加入0.6g/L-1.0g/L的防腐剂NaN3，2-8℃密封分别保存。
2.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：所述的色原1mmol/L-8mmol/L，所述色原为3,5-二氯-2-羟基苯磺酸、N-乙基-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基-4-氟苯胺、N-(2-羟-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺、2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸、4-氯酚、2,4二氯酚、或苯酚，优选2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸(HTIB)。
3.根据权利要求2所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：色原为2,4,6-三碘-3-羟基苯甲酸，其浓度为4.5mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：酶保护剂，该酶保护剂为液体酶保护剂1％-3％，其含量为1mL-3mL/100mL；或者该酶保护剂为固体酶保护剂，其含量为1g-3g/100mL。
5.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：所述酶保护剂可选自果糖与表面活性剂的组合物，其中表面活性剂可选自脂肪醇聚氧乙烯(7)醚、月桂酸聚氧乙烯(9)酯、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000、烷基酚聚氧乙烯(10)醚中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：酶保护剂为果糖和月桂酸聚氧乙烯(9)酯1:1质量比组合。
7.根据权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：所述激活剂为醋酸镁与巯基试剂的组合物，其中巯基试剂可选自N-乙酰半胱氨酸、巯基甘油、二硫苏糖醇、二硫赤癣糖醇、巯基乙酸、巯基乙醇、半胱氨酸中一种或几种组合。
8.根据权利要求7所述的一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法，其特征在于：所述激活剂为醋酸镁与N-乙酰半胱氨酸组合物，其中，醋酸镁的浓度为6mmol/L-12mmol/L；N-乙酰半胱氨酸浓度10mmol/L-20mmol/L。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63164900A (ja) * 1986-12-26 1988-07-08 Oriental Yeast Co Ltd クレアチンキナ−ゼの定量方法
CN1904062A (zh) * 2005-07-25 2007-01-31 希森美康株式会社 肌酸激酶活性测定用试剂
CN102154443A (zh) * 2011-03-25 2011-08-17 浙江东瓯诊断产品有限公司 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法
WO2012050536A1 (en) * 2010-10-15 2012-04-19 Biorealis, S.R.O. Method of the adenosine diphosphate quantitative determination
CN106198509A (zh) * 2016-06-15 2016-12-07 四川迈克生物科技股份有限公司 用于测定肌酐的试剂盒和方法
CN108420854A (zh) * 2017-02-13 2018-08-21 杏辉天力（杭州）药业有限公司 提高耐力表现的抗疲劳组合物

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS63164900A (ja) * 1986-12-26 1988-07-08 Oriental Yeast Co Ltd クレアチンキナ−ゼの定量方法
CN1904062A (zh) * 2005-07-25 2007-01-31 希森美康株式会社 肌酸激酶活性测定用试剂
WO2012050536A1 (en) * 2010-10-15 2012-04-19 Biorealis, S.R.O. Method of the adenosine diphosphate quantitative determination
CN102154443A (zh) * 2011-03-25 2011-08-17 浙江东瓯诊断产品有限公司 一种肌酸激酶mb同工酶活性测定试剂及其制备方法
CN106198509A (zh) * 2016-06-15 2016-12-07 四川迈克生物科技股份有限公司 用于测定肌酐的试剂盒和方法
CN108420854A (zh) * 2017-02-13 2018-08-21 杏辉天力（杭州）药业有限公司 提高耐力表现的抗疲劳组合物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
梁夯等: "血清肌酐二步酶法检测新技术研究", 《检验医学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107641642A (zh) * 2017-10-25 2018-01-30 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法
CN107641642B (zh) * 2017-10-25 2021-02-12 武汉生之源生物科技股份有限公司 一种肌酸激酶同工酶双试剂及其制备方法

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