JPS63164900A - クレアチンキナ−ゼの定量方法 - Google Patents
クレアチンキナ−ゼの定量方法Info
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- JPS63164900A JPS63164900A JP30857886A JP30857886A JPS63164900A JP S63164900 A JPS63164900 A JP S63164900A JP 30857886 A JP30857886 A JP 30857886A JP 30857886 A JP30857886 A JP 30857886A JP S63164900 A JPS63164900 A JP S63164900A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明はクレアチンキナーゼの定量方法に関するもので
ある。
ある。
更に詳細には、本発明は、血液などのクレアチンキナー
ゼ含量を定量する方法に関するものである。
ゼ含量を定量する方法に関するものである。
ヒト血清中のクレアチンキナーゼの存在やその量の分析
は、心筋梗塞の診断において非常に有用になってきてお
り1本発明のクレアチンキナーゼの定量方法は人の健康
診断にはたす役割はきわめて大なるものがある。
は、心筋梗塞の診断において非常に有用になってきてお
り1本発明のクレアチンキナーゼの定量方法は人の健康
診断にはたす役割はきわめて大なるものがある。
(従来技術)
従来のクレアチンキナーゼの測定法は、一般に。
クレアチンキナーゼ含有検体にアデノシンニリン酸(A
DP)とクレアチンリン酸(CP)を添加し、生成する
アデノシンニリン酸(ATP)を種々の方法で測定する
ことによって検体中のクレアチンキナーゼ活性を分析し
ていた。
DP)とクレアチンリン酸(CP)を添加し、生成する
アデノシンニリン酸(ATP)を種々の方法で測定する
ことによって検体中のクレアチンキナーゼ活性を分析し
ていた。
(発明が解決しようとする問題点)
しかし、この従来法はいずれもクレアチンキナーゼ反応
において生成するATPを測定しているために、2分子
のADPからATPとアゾニール酸(AMP)を生成し
、検体中に共存するアデニレートキナーゼ(AK)やA
TP分解酵素であるATPaseの影響を強く受け、ク
レアチンキナーゼの正確な測定を不可能にしている。
において生成するATPを測定しているために、2分子
のADPからATPとアゾニール酸(AMP)を生成し
、検体中に共存するアデニレートキナーゼ(AK)やA
TP分解酵素であるATPaseの影響を強く受け、ク
レアチンキナーゼの正確な測定を不可能にしている。
また、クレアチンキナーゼ反応によって生成するATP
を測定することによってクレアチンキナーゼ活性を定量
する従来の方法では、必ず検体ブランクを立てなければ
ならず操作が繁雑である。
を測定することによってクレアチンキナーゼ活性を定量
する従来の方法では、必ず検体ブランクを立てなければ
ならず操作が繁雑である。
(問題点を解決するための手段)
本発明では、クレアチンキナーゼ含有検体にクレアチン
リン酸、アデノシンニリン酸およびクレアチナーゼを作
用させて、生成する尿素またはザルコシンを測定して、
クレアチンキナーゼの含量を正確に測定するものである
。
リン酸、アデノシンニリン酸およびクレアチナーゼを作
用させて、生成する尿素またはザルコシンを測定して、
クレアチンキナーゼの含量を正確に測定するものである
。
即ち1本発明は、クレアチンキナーゼ活性を測定する際
、検体中に共存するアデニレートキナーゼやATPag
eの干渉を全く受けずに、正確にクレアチンキナーゼ活
性のみを測定できることである。
、検体中に共存するアデニレートキナーゼやATPag
eの干渉を全く受けずに、正確にクレアチンキナーゼ活
性のみを測定できることである。
本発明において、クレアチンリン酸とADPにクレアチ
ンキナーゼが作用してクレアチンとATPが生成する反
応を第1反応として次式(I)に示される。
ンキナーゼが作用してクレアチンとATPが生成する反
応を第1反応として次式(I)に示される。
クレアチンリン酸 クレアチンADP i
ATP (1)クレアチンキナーゼ 次に、第1反応で生成したクレアチンがクレアチナーゼ
の作用によって尿素とザルコシンになる反応を第2反応
として次式(n)に示される。
ATP (1)クレアチンキナーゼ 次に、第1反応で生成したクレアチンがクレアチナーゼ
の作用によって尿素とザルコシンになる反応を第2反応
として次式(n)に示される。
クレアチナーゼ
式(If)で生成した尿素又はザルコシンを定量すれば
クレアチンキナーゼの含量を定量できることになる。
クレアチンキナーゼの含量を定量できることになる。
尿素を測定する反応としては次式(m)が示される。
式(III)でNAD(p)H−+NAD(p)’″の
反応にともなう340nm吸光度の減少によって定量さ
れる。
反応にともなう340nm吸光度の減少によって定量さ
れる。
また、ザルコシンを測定する反応としては次の式(IV
−1)又は式(IV−2)が示される。
−1)又は式(IV−2)が示される。
(IV−1)
オキシダーゼ
(IV−2)
反応式(IV−2)はさらに次式(V)のギ酸脱水素酵
素反応で感度を2倍に上げることもできる。
素反応で感度を2倍に上げることもできる。
式(■−i)では酸化呈色体の発色によってザルコシン
を定量し1式(mV−2)と式(IV−2)及び式(V
)ではNAD”→NADHの反応にともなう340nm
吸光度の増加によって定量される。
を定量し1式(mV−2)と式(IV−2)及び式(V
)ではNAD”→NADHの反応にともなう340nm
吸光度の増加によって定量される。
なお、尿素を測定することによってクレアチンキナーゼ
活性を測定する場合、内因性のアンモニア、尿素、クレ
アチンなどが干渉するが、これらの物質はあらかじめ適
宜の方法によって消去可能である。またザルコシンを測
定することによってクレアチンキナーゼ活性を測定する
場合も、内因性のクレアチンが干渉するがクレアチンキ
ナーゼ反応前に適宜の方法で消去可能である。
活性を測定する場合、内因性のアンモニア、尿素、クレ
アチンなどが干渉するが、これらの物質はあらかじめ適
宜の方法によって消去可能である。またザルコシンを測
定することによってクレアチンキナーゼ活性を測定する
場合も、内因性のクレアチンが干渉するがクレアチンキ
ナーゼ反応前に適宜の方法で消去可能である。
しかしながら、本発明においては、クレアチンキナーゼ
の反応にともなう吸光度の変化によってクレアチンキナ
ーゼ活性を算出して定量するので。
の反応にともなう吸光度の変化によってクレアチンキナ
ーゼ活性を算出して定量するので。
内因性の干渉物質は反応には関与しても、格別クレアチ
ンキナーゼ活性の定量には障害とはならないものである
。
ンキナーゼ活性の定量には障害とはならないものである
。
(効 果)
本発明では、クレアチンキナーゼ含有検体にクレアチン
リン酸、アデノシンニリン酸のおよびクレアチナーゼを
作用させて、生成する尿素またはザルコシンを測定する
ことによって、検体中のタレアチンキナーゼ含量を正確
に測定することができるのである。
リン酸、アデノシンニリン酸のおよびクレアチナーゼを
作用させて、生成する尿素またはザルコシンを測定する
ことによって、検体中のタレアチンキナーゼ含量を正確
に測定することができるのである。
次に本発明の実施例を示す。
実施例1
クレアチンリン酸 25履N
ADP 1.5
+++MNADPHO,2+aM α−ケトゲルタール酸 5mM
クレアチナーゼ Su/m
Qウレアーゼ 8u/
−グルタミン酸脱水素酵素 15u
/mQN−7セチルシステイン 1
0mMイミダゾール−塩酸緩衝液、pH7,0100a
+MM g Cl x
2mMを含む反応液3.0−に精製したウサギ筋肉
クレアチンキナーゼ溶液(蛋白質濃度1i+g/d4)
10μΩ注入し、25℃で分光光度計を用いて1分間
当りの吸光度変化(ΔA/分)を測定した。ΔA/分は
0.081であった。酵素活性は下記の式から算出され
る。
ADP 1.5
+++MNADPHO,2+aM α−ケトゲルタール酸 5mM
クレアチナーゼ Su/m
Qウレアーゼ 8u/
−グルタミン酸脱水素酵素 15u
/mQN−7セチルシステイン 1
0mMイミダゾール−塩酸緩衝液、pH7,0100a
+MM g Cl x
2mMを含む反応液3.0−に精製したウサギ筋肉
クレアチンキナーゼ溶液(蛋白質濃度1i+g/d4)
10μΩ注入し、25℃で分光光度計を用いて1分間
当りの吸光度変化(ΔA/分)を測定した。ΔA/分は
0.081であった。酵素活性は下記の式から算出され
る。
ウサギ筋肉クレアチンキナーゼ溶液の活性は3.9u/
鳳gであった。
鳳gであった。
実施例2
クレアチンリン酸 25mM
ザルコシンオキシダーゼ lou/m
ff1ホルムアルデヒド脱水素酵素 2
u/++12クレアチナーゼ
5u/anNAD”
5saMグルタチオン
2mMN−7セチルシステイン
lo+aMA D P
2+wMMgC1,la+N イミダゾール−塩酸緩衝液、pH7,010軸Nを含む
反応液3.0■Qに患者血清50μΩ注入し、37℃で
分光光度計を用いて、1分間当りの吸光度変化(ΔA/
分)を測定した。ΔA/分は0.025であった。
ザルコシンオキシダーゼ lou/m
ff1ホルムアルデヒド脱水素酵素 2
u/++12クレアチナーゼ
5u/anNAD”
5saMグルタチオン
2mMN−7セチルシステイン
lo+aMA D P
2+wMMgC1,la+N イミダゾール−塩酸緩衝液、pH7,010軸Nを含む
反応液3.0■Qに患者血清50μΩ注入し、37℃で
分光光度計を用いて、1分間当りの吸光度変化(ΔA/
分)を測定した。ΔA/分は0.025であった。
実施例1の計算式により計算した結果、8者血清中のク
レアチンキナーゼ活性は0.25u/allであった。
レアチンキナーゼ活性は0.25u/allであった。
Claims (1)
- クレアチンキナーゼ含有検体にクレアチンリン酸、アデ
ノシンニリン酸およびクレアチナーゼを作用させて生成
する尿素またはザルコシンを測定することを特徴とする
クレアチンキナーゼの定量方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP30857886A JPH0773517B2 (ja) | 1986-12-26 | 1986-12-26 | クレアチンキナ−ゼの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP30857886A JPH0773517B2 (ja) | 1986-12-26 | 1986-12-26 | クレアチンキナ−ゼの定量方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS63164900A true JPS63164900A (ja) | 1988-07-08 |
JPH0773517B2 JPH0773517B2 (ja) | 1995-08-09 |
Family
ID=17982715
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP30857886A Expired - Fee Related JPH0773517B2 (ja) | 1986-12-26 | 1986-12-26 | クレアチンキナ−ゼの定量方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0773517B2 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107236786A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-10 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法 |
CN107236785A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-10 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶检测试剂盒 |
CN107267595A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-20 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法 |
CN107402305A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-11-28 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶同工酶的定量检测试剂盒 |
-
1986
- 1986-12-26 JP JP30857886A patent/JPH0773517B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107236786A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-10 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶检测试剂盒的制备方法 |
CN107236785A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-10 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶检测试剂盒 |
CN107267595A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-10-20 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶同工酶检测试剂的制备方法 |
CN107402305A (zh) * | 2017-07-19 | 2017-11-28 | 王贤俊 | 一种肌酸激酶同工酶的定量检测试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0773517B2 (ja) | 1995-08-09 |
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