CN102243227A - 非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法及测定试剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法：将待测样本在酶循环反应系统中，进行反应，测定酶循环反应生成的氨的生成速率并计算，即得待测样本中非对称二甲基精氨酸含量；所述的酶循环反应系统包括二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、以及氨基甲酰磷酸或其盐。本发明还公开了与该方法相应的测定试剂。本发明首次建立了非对称二甲基精氨酸的酶学测定方法及测定试剂。本发明方法无需特殊仪器、操作简便、灵敏度高且成本低廉，可实现临床快速、大流量的样本检测，使非对称二甲基精氨酸成为临床上常规检测项目成为可能，具有极高的科学和经济价值。

Description

非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法及测定试剂

技术领域

本发明属于医学检验测定技术领域，具体涉及一种非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法及测定试剂。

背景技术

非对称二甲基精氨酸(Asymmetric dimethylarginine，ADMA)是一种甲基化精氨酸，是内源性一氧化氮合酶(Nitric oxide sythase，NOS)抑制剂，其可竞争性抑制一氧化氮(Nitric oxide，NO)的合成。非对称二甲基精氨酸由细胞内蛋白质在精氨酸甲基转移酶作用下发生甲基化，再经水解反应所生成。许多细胞，如人的内皮细胞均可产生ADMA。正常人体内每天产生约300μmol(约60mg)，体内浓度远远高于其他同样可产生NOS抑制作用的内源性精氨酸，故被认为是最重要的NOS抑制剂。ADMA从细胞进入血液循环后，一部分被进一步分解代谢直接通过肾脏由尿液排出，但大部分(达250μmol)通过广泛分布于肾脏、肝脏和心血管系统的二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)降解。因此通过DDAH降解被认为是ADMD最为重要的代谢途径。

目前国内外多项研究证实在多种疾病，如动脉粥样硬化、冠心病、高脂血症、心衰和中风等患者的血浆中ADMA水平呈显著性升高。因此，ADMA被公认为是一种新的心血管疾病危险因子。ADMA不仅参与心脏结构重塑，还与心脏功能异常有关，且还是肾功能和糖尿病诊断的重要指示因子。鉴于此，建立适用于临床的非对称二甲基精氨酸的测定方法有重大意义。

但目前临床应用中，非对称二甲基精氨酸的测定方法主要包括高压液相色谱法和酶联免疫法等。上述方法的共同特点是需要特别的测定仪器，操作复杂，试验耗时较长，不能应用于临床大流量的自动化分析，且价格昂贵。由于上述缺陷的制约，目前非对称二甲基精氨酸尚未成为临床检测的常规项目。

由于非对称二甲基精氨酸在体液和组织样本中的含量很低，通常每升为几微摩尔到数十微摩尔，无法达到临床上常规酶学测定方法所需的测定灵敏限，从而限制了常规酶学方法的采用。虽然近年来酶学检测方法的信号增量技术不断发展，但至今尚未见有关采用酶学方法测定非对称二甲基精氨酸的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的非对称二甲基精氨酸测定方法需特殊仪器、操作复杂、耗时长、不能进行大流量的自动化分析，且价格昂贵的缺陷，而提供一种非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法，以及测定试剂。

本发明人巧妙的利用酶循环反应，首次建立了非对称二甲基精氨酸的酶学测定方法及测定试剂。该方法无需特殊仪器、操作简便、灵敏度高且成本低廉，可实现临床快速、大流量的样本测试，使非对称二甲基精氨酸成为临床上常规检测项目成为可能，具有极高的科学和经济价值。具体的，本发明通过下述技术方案解决上述技术问题：

本发明涉及一种非对称二甲基精氨酸的测定方法，其包括如下步骤：将待测样本在酶循环反应系统中，进行如式1～3所示的反应，测定酶循环反应生成的氨的生成速率并计算，即得待测样本中非对称二甲基精氨酸含量；所述的酶循环反应系统包括二甲基精氨酸二甲胺水解酶(Dimethylargininedimethylaminohydrolase EC 3.5.3.18，DDAH)、瓜氨酸水解酶(Citrullinase EC3.5.1.20)、鸟氨酸氨甲酰转移酶(Ornithine carbamoyltransferase EC 2.1.3.3)和氨基甲酰磷酸或其盐。

本发明的方法采用循环增量的构思，通过将待测样本中的非对称二甲基精氨酸经式1所示的反应生成L-瓜氨酸，之后再经式2和3所示反应的反复循环，不断生成氨，极大的提高了检测灵敏度。由于氨的生成速率与非对称二甲基精氨酸含量成正比，通过测定氨的生成速率，经计算即得非对称二甲基精氨酸含量。

本发明的方法中，所述的待测样本可为各种形式的需检测其所含非对称二甲基精氨酸含量的样本，如体液样品或组织样本，更具体的如血清样本或血浆样本。所述的待测样本与酶循环反应系统的用量比没有特殊要求，只要能满足进行式1～3所示的反应即可，但同一测定批次内应一致。

本发明的方法中，如式1～3所示，所述的二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶和鸟氨酸氨甲酰转移酶均为反应催化剂，用量均为催化有效量以上，一般可为0.1～500kU/L，较佳的为1～100kU/L(U为国际单位)。显然的，增加上述酶的用量并不影响本发明方法的应用，但会增加成本。所述的氨基甲酰磷酸或其盐(如氨基甲酰磷酸二钠、氨基甲酰磷酸锂)的用量以过量可促进循环反应向理想方向进行为宜，一般可为0.01～120mmol/L，较佳的为0.1～50mmol/L，更佳的为1～50mmol/L。

本发明的酶循环反应系统为可保证样本在其中能进行如式1～3所示的反应的系统，因此其应为能保证所用酶的活性的缓冲液体系，较佳的为pH6～9的缓冲液体系。所述的缓冲液可为本领域常用的各种缓冲液，如磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙基磺酸)(HEPES)缓冲液等。缓冲液的浓度(缓冲对的总浓度)无特殊要求，一般为20～300mmol/L。

根据需要，本发明的酶循环反应系统还可包括能稳定和/或促进酶活性的酶稳定剂。所述的酶稳定剂较佳的为甘露糖醇、甘油、聚乙二醇(优选聚乙二醇2000～8000)、EDTA、金属离子(如钾离子或钠离子)、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种。所述的酶稳定剂的用量按常规用量选择，一般为0.1～500mmol/L。

本发明的方法中，所述的反应和测定的温度以所用酶可发挥活性的温度下进行即可，一般为25～39℃，较佳的为37℃。较佳的，在进行所述的反应前，将所述的酶循环反应系统在上述温度下进行哺育，以使酶循环反应系统温度均一平衡。所述的哺育的时间较佳的为2～5分钟，更佳的为5分钟。

本发明的方法中，具体操作只要使待测样本能在所述的酶循环反应系统中进行如式1～3所示的反应，测定氨的生成速率即可。例如，可将待测样本直接置于所述的酶循环反应系统中，或者可将待测样本与所述的酶循环反应系统中部分成分混合，之后再与其他成分混合。

较佳的，在所述的反应开始之后，延迟一定时间再进行测定，以排除待测样本中干扰物的副反应，使检测结果更准确。所述的延迟的时间较佳的为0.5～3分钟，更佳的为1～3分钟。

本发明的方法中，所述的测定一般在所述的反应开始后1～15分钟内完成为宜。

本发明的方法中，所述的测定酶循环反应生成的氨的生成速率并计算的方法按本领域常规方法进行，如速率法或两点法(也称固定时间法)，通过参照标准品或绘制标准浓度曲线等，计算出非对称二甲基精氨酸含量，在此不再赘述。

具体测定氨的生成速率的方法可采用现有的各种检测氨的方法，本发明优选常用的谷氨酸脱氢酶反应检测法，反应式如式4所示。

本发明一较佳实例中：采用谷氨酸脱氢酶反应检测法和固定时间法进行测定和计算，具体为：所述的酶循环反应系统中还包括α-酮戊二酸或其盐(如钠盐)、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶，酶循环反应生成的氨在α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶的作用下，进行如式4所示的反应，检测反应体系在还原型辅酶吸收波长下所选的两个测定时间点的吸光度差值，参照标准品或标准浓度曲线，计算得待测样品中非对称二甲基精氨酸含量。

上述谷氨酸脱氢酶反应检测法中，所述的谷氨酸脱氢酶的用量为催化有效量以上，一般可为0.1～50kU/L(U为国际单位)。所述的α-酮戊二酸或其盐的用量以过量为宜，一般可为1～50mmol/L，较佳的为1～20mmol/L。所述的还原型辅酶的用量以过量为宜，一般可为0.1～1mmol/L，较佳的为0.2～0.3mmol/L。所述的还原型辅酶可为酶学领域可用于式4反应的各种还原型辅酶，如NADH、NADPH、硫代NADH或硫代NADPH等。相应的，检测在所选用的还原型辅酶的吸收波长下进行。例如，采用NADH或NADPH时，可在340nm下进行检测。采用硫代NADH或硫代NADPH时，特定吸收波长为398nm处，但实际应用时，可采用分析仪器上固定设置的波长，如自动生化分析仪上固定设置的405nm或410nm下进行检测。除上述谷氨酸脱氢酶反应检测法外，也可采用其他方法，如酶循环法测氨等，在此不再列举。

本发明的方法可采用常规仪器进行，如紫外/可见光分光光度计分析仪、半自动或全自动生化分析仪。

本发明还涉及一种非对称二甲基精氨酸的测定试剂，其包括下述成分：二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸或其盐。

本发明的测定试剂可配合现有市售的测定氨的试剂盒，进行测定。或者，本发明的测定试剂还可包含测定氨的试剂，如还包含α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶，以适用采用谷氨酸脱氢酶反应检测法测定氨。所述的α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶或谷氨酸脱氢酶同前述。显然，若采用其他方法测定氨，本发明的测定试剂可还含有相应的测定氨的试剂。

根据需要，所述的测定试剂还可包含酶稳定剂和/或缓冲成分。所述的酶稳定剂同前述。所述的缓冲成分为可形成前述缓冲液的成分。

所述的测定试剂可为固体干粉形式(如冻干粉)，待使用时再加水配制成溶液，也可还包括水，为水溶液形式。所述的水溶液形式可为能直接使用的水溶液形式，或需经稀释才使用的浓缩液形式。

所述的测定试剂中，各成分的量以能进行如式1～3所示的反应的量选择。若为能直接使用的水溶液形式时，各成分的量可同前述进行选择。若为固体干粉形式或需经稀释才使用的浓缩液形式，各成分的量可以能溶解和/或稀释为能直接使用的水溶液形式的量进行选择。

所述的测定试剂可为所有成分混合的单一试剂形式，也可为包含独立包装各成分的成套试剂盒形式，还可为将各成分分为若干独立包装组分的成套试剂盒形式(如双组份或三组分成套试剂盒)。

本发明一较佳实例中，所述的测定试剂为单一试剂，其为包含二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、氨基甲酰磷酸或其盐、α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶。较佳的，其还含有酶稳定剂。

本发明另一较佳实例中，所述的测定试剂为包含独立包装的试剂1和2的双组份成套试剂盒，试剂1包含还原型辅酶、α-酮戊二酸或其盐、谷氨酸脱氢酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、氨基甲酰磷酸或其盐，试剂2包含二甲基精氨酸二甲胺水解酶。较佳的，试剂1和2还含有酶稳定剂。显然的，其他任意组合形式的双组份成套试剂盒也可适用于本发明。

本发明另一较佳实例中，所述的测定试剂为包含独立包装的试剂1、2和3的三组份成套试剂盒，试剂1包含α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶，试剂2包含瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、氨基甲酰磷酸或其盐，试剂3包含二甲基精氨酸二甲胺水解酶。较佳的，试剂1、2和3还含有酶稳定剂。显然的，其他任意组合形式的三组份成套试剂盒也可适用于本发明。

在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均为现有的已知试剂和原料。

本发明的积极进步效果在于：本发明首次建立了非对称二甲基精氨酸的酶学测定方法及测定试剂。本发明方法无需特殊仪器、操作简便、灵敏度高且成本低廉，可实现临床快速、大流量的样本检测，使非对称二甲基精氨酸成为临床上常规检测项目成为可能，具有极高的科学和经济价值。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1测定试剂

该测定试剂为冻干粉形式，所含成分如下表所示：

成分	量
		二甲基精氨酸二甲胺水解酶	50ku
瓜氨酸水解酶	50ku
		鸟氨酸氨甲酰转移酶	50ku
氨基甲酰磷酸二钠	10mmol

使用时，用pH7、150mmol/L的磷酸钠缓冲液溶解该测定试剂，加入100mmol/L甘露糖醇和0.5g/L牛血清白蛋白，用该缓冲液定容至1升。配合市售测定氨的试剂，对待测样本进行非对称二甲基精氨酸浓度的测定。

实施例2非对称二甲基精氨酸浓度的测定

仪器：紫外恒温分光光度计

测定试剂：水溶液形式的单一试剂，所含成分如下表所示：

成分	浓度
		HEPES缓冲液(pH6.4)	20mmol/L
二甲基精氨酸二甲胺水解酶	2ku/L
		瓜氨酸水解酶	5ku/L
鸟氨酸氨甲酰转移酶	5ku/L
		氨基甲酰磷酸二钠	50mmol/L
谷氨酸脱氢酶	50ku/L
		硫代NADH	0.28mmol/L
α-酮戊二酸	50mmol/L
		甘露糖醇	100mmol/L
牛血清白蛋白	0.5g/L
		叠氮钠	1g/L

待测样本：4份血清样本，测定试剂与待测样本体积比为30∶1。

测定方法：将上述测定试剂在37℃下哺育5分钟，将待测样本置于测定试剂中，延迟2分钟后进行测定，测定10分钟内标准品和样品的每分钟吸光度变化速率，测定波长为405nm。

测定及计算结果：

4份样本测定结果：

被测物	每分钟吸光度变化率	浓度(μmol/L)
			标准液	0.0283	30
样本1	0.0111	11.8
			样本2	0.0131	13.9
样本3	0.0182	19.3
			样本4	0.0081	8.6

实施例3非对称二甲基精氨酸浓度的测定

仪器：全自动生化分析仪

测定试剂：水溶液形式的双组份成套试剂盒，所含成分如下表所示：

待测样本：6份血清样本，测定试剂与待测样本体积比为30∶1。

测定方法：将待测样本加入试剂1，37℃下哺育5分钟，再加入试剂2，延迟2分钟后进行测定，测定15分钟内反应体系的吸光度值，测定波长为340nm。

测定及计算结果：

6份样本测定结果：

被测物	120秒吸光度变化值	浓度(μmol/L)
			标准液	0.0561	30
样本5	0.0281	15
			样本6	0.0161	8.6
样本7	0.0200	10.7
			样本8	0.0293	15.7
样本9	0.0388	20.7
			样本10	0.0241	12.9

实施例4非对称二甲基精氨酸浓度的测定

仪器：全自动生化分析仪

测定试剂：水溶液形式的三组份成套试剂盒，所含成分如下表所示：

待测样本：5份血清样本，测定试剂与待测样本体积比为25∶1。

测定方法：将待测样本加入试剂1，再加入试剂2，37℃下哺育5分钟，再加入试剂3，延迟2分钟后进行测定，测定15分钟内反应体系的吸光度值，测定波长为340nm。

测定及计算结果：

5份样本测定结果：

被测物	90秒吸光度变化值	浓度(μmol/L)
			标准液	0.0515	30
样本11	0.0223	13
			样本12	0.0285	16.6
样本13	0.0203	11.8
			样本14	0.0270	15.7
样本15	0.0699	40.7

实施例5非对称二甲基精氨酸浓度的测定

仪器：全自动生化分析仪

测定试剂：干粉形式的单一试剂，所含成分如下表所示：

试剂组份	配置为1升溶液的浓度
		磷酸钾缓冲液(pH7.8)	150mmol/L
二甲基精氨酸二甲胺水解酶	100ku/L
		瓜氨酸水解酶	100ku/L
鸟氨酸氨甲酰转移酶	100ku/L
		氨基甲酰磷酸二钠	25mmol/L
谷氨酸脱氢酶	0.8ku/L
		NADPH	0.28mmol/L
α-酮戊二酸二钠盐	17mmol/L
		甘露糖醇	60mmol/L
聚乙二醇8000	10g/L

待测样本：血清，测定试剂与待测样本体积比为30∶1。

测定方法：将测定试剂用水复溶，装入试剂瓶。测定时，试剂37℃下孵育5分钟，将待测样本置于其中进行反应，延迟3分钟后进行测定，测定10分钟内反应体系的吸光度变化值，测定波长为340nm。

测定及计算结果：

4份样本测定结果：

被测物	120秒吸光度变化值	浓度(μmol/L)
			标准液	0.0567	30
样本16	0.0214	11.3
			样本17	0.0251	13.3
样本18	0.0361	19.1
			样本19	0.0168	8.9

实施例6非对称二甲基精氨酸浓度的测定

仪器：全自动生化分析仪

测定试剂：干粉形式的双组份成套试剂盒，所含成分如下表所示：

待测样本：血浆，测定试剂与待测样本体积比为40∶1。

测定方法：试剂复溶后，将待测样本加入试剂1，37℃下哺育5分钟，再加入试剂2，延迟2分钟后进行测定，测定15分钟内反应体系的吸光度变化速率，测定波长为340nm。

测定及计算结果：

5份样本测定结果：

被测物	90秒吸光度变化值	浓度(μmol/L)
			标准液	0.0321	30
样本20	0.0164	15.3
			样本21	0.0093	8.7
样本22	0.0114	10.7
			样本23	0.0167	15.6
样本24	0.0217	20.3

实施例7非对称二甲基精氨酸浓度的测定

仪器：全自动生化分析仪

测定试剂：试剂1为液体形式，试剂2和试剂3为干粉形式的三组份成套试剂盒，所含成分如下表所示：

待测样本：血清，测定试剂与待测样本体积比为90∶1。

测定方法：将待测样本加入试剂1，再加入试剂2，37℃下孵育5分钟，再加入试剂3，延迟2分钟后进行测定，测定10分钟内反应体系的吸光度变化值，测定波长为340nm。

测定及计算结果：

5份样本测定结果：

被测物	300秒吸光度变化值	浓度(μmol/L)
			标准液	0.0466	30
样本25	0.0231	14.9
			样本26	0.0126	8.1
样本27	0.0177	11.4
			样本28	0.0242	15.6
样本29	0.0318	20.5

Claims (13)

1.一种非对称二甲基精氨酸浓度的测定方法，其特征在于其包括如下步骤：将待测样本在酶循环反应系统中，进行如式1～3所示的反应，测定酶循环反应生成的氨的生成速率并计算，即得待测样本中非对称二甲基精氨酸含量；所述的酶循环反应系统包括二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、以及氨基甲酰磷酸或其盐；

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述的二甲基精氨酸二甲胺水解酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的瓜氨酸水解酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的鸟氨酸氨甲酰转移酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的氨基甲酰磷酸或其盐的用量为0.1～50mmol/L。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酶循环反应系统为pH6～9的缓冲液体系；

所述的缓冲液较佳的为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙基磺酸)缓冲液；

所述的缓冲液的浓度较佳的为20～300mmol/L。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酶循环反应系统还包括酶稳定剂；

所述的酶稳定剂较佳的为甘露糖醇、甘油、聚乙二醇、EDTA、钾离子、钠离子、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的酶循环反应系统中还包括α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶，所述的测定酶循环反应生成的氨的生成速率的方法为谷氨酸脱氢酶反应检测法，所述的谷氨酸脱氢酶反应的反应式如式4所示；

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：

所述的谷氨酸脱氢酶的用量为0.1～50kU/L；

和/或，所述的α-酮戊二酸或其盐的用量为1～50mmol/L，较佳的为1～20mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶的用量为0.1～1mmol/L，较佳的为0.2～0.3mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶为NADH、NADPH、硫代NADH或硫代NADPH。

7.一种非对称二甲基精氨酸的测定试剂，其特征在于其包括下述成分：二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、以及氨基甲酰磷酸或其盐。

8.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂还包含α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶；

所述的谷氨酸脱氢酶的用量较佳的为0.1～50kU/L；

和/或，所述的α-酮戊二酸或其盐的用量较佳的为1～50mmol/L，更佳的为1～20mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶较佳的为0.1～1mmol/L，更佳的为0.2～0.3mmol/L；

和/或，所述的还原型辅酶较佳的为NADH、NADPH、硫代NADH或硫代NADPH。

9.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂还包含酶稳定剂和/或缓冲成分；

所述的酶稳定剂较佳的为甘露糖醇、甘油、聚乙二醇、EDTA、钾离子、钠离子、牛血清白蛋白、表面活性剂和防腐剂中的一种或多种；

所述的缓冲成分较佳的为能形成pH6～9的缓冲液的成分；所述的缓冲液较佳的为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液或N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙基磺酸)缓冲液；所述的缓冲液的浓度较佳的为20～300mmol/L。

10.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂为固体干粉形式，或者还包括水，为水溶液形式；所述的水溶液形式为能直接使用的水溶液形式，或需经稀释才使用的浓缩液形式。

11.如权利要求10所述的测定试剂，其特征在于：

所述的测定试剂为能直接使用的水溶液形式时，

所述的二甲基精氨酸二甲胺水解酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的瓜氨酸水解酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的鸟氨酸氨甲酰转移酶的用量为1～100kU/L；

和/或，所述的氨基甲酰磷酸或其盐的用量为0.1～50mmol/L；

所述的测定试剂为固体干粉形式或需经稀释才使用的浓缩液形式，各所述成分的含量以能溶解和/或稀释为能直接使用的水溶液形式中各成分的含量进行选择。

12.如权利要求7所述的测定试剂，其特征在于：所述的测定试剂为所有成分混合的单一试剂形式，或者为包含独立包装各成分的成套试剂盒形式，或者为将各成分分为若干独立包装组分的成套试剂盒形式。

13.如权利要求7～12任一项所述的测定试剂，其特征在于：

所述的测定试剂为下述中的任一种：

(1)所述的测定试剂为单一试剂，其包含二甲基精氨酸二甲胺水解酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶、氨基甲酰磷酸或其盐、α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶；

(2)所述的测定试剂为包含独立包装的试剂1和2的双组份成套试剂盒，试剂1包含还原型辅酶、α-酮戊二酸或其盐、谷氨酸脱氢酶、瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸或其盐，试剂2包含二甲基精氨酸二甲胺水解酶；以及

(3)所述的测定试剂为包含独立包装的试剂1、2和3的三组份成套试剂盒，试剂1包含α-酮戊二酸或其盐、还原型辅酶和谷氨酸脱氢酶，试剂2包含瓜氨酸水解酶、鸟氨酸氨甲酰转移酶和氨基甲酰磷酸或其盐，试剂3包含二甲基精氨酸二甲胺水解酶。