CN111024965B - 甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，涉及体外诊断检测技术领域。所述甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的成分如下：缓冲液、N‑甘氨酰甘氨酸、稳定剂1、防腐剂1、催化剂；所述试剂R2的成分如下：缓冲液、甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺对甲苯磺酸、稳定剂、防腐剂2。本发明能够提高试剂盒的稳定性、抗干扰性和灵敏度。

Description

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒
技术领域
本发明涉及体外诊断检测技术领域，具体涉及一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒。
背景技术
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA，Glycylproline depeptidylaminopeptidase)是Hopsu-Havu等首先在大鼠的肝脏中发现的。健康成人血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶水平较为恒定，新生儿显著低于成人，从婴儿出生到20岁的迅速发育阶段，血清甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶含量逐渐升高。原发性肝癌病人血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活性显著高于正常人和慢性肝炎、肝硬化、胆石症、阻塞性黄疸的患者，但是重症肝炎、酒精性肝炎患者血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶活性的升高程度大于肝癌病人。肝血管瘤患者血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的活性正常。胃癌患者血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的活性降低，其它良性胃肠道疾病时，血清中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的活性也略有降低此。因此，对于影像学诊断为肝脏占位性病变的患者，检测其血清GDPA活性，具有良好的定性鉴别作用。
目前，用于GDPA的检测方法主要有连续监测法、非连续的直接比色法和间接比色法。上述方法均存在稳定性和抗干扰性不高以及灵敏度差的缺陷。
发明内容
本发明提供一种能够提高稳定性、抗干扰性和灵敏度的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明提供技术方案如下：
本发明提供一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
进一步的，所述缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸-NAOH缓冲液、Tris-HCL缓冲液、Goods缓冲液、TAPSO缓冲液中的一种或多种组合，所述试剂R1中缓冲液的PH值为8.6，所述试剂R2中缓冲液的PH值为7.5。
进一步的，所述稳定剂1为氯化钠、18-冠醚-6中的一种或多种，所述稳定剂2为甘露醇、无水乙醇、山梨醇中的一种或多种。
进一步的，所述防腐剂1和防腐剂2分别为叠氮钠、氯化锂中的一种或多种。
进一步的，所述催化剂为醋酸镁、硫酸镁、18-冠醚-6中的一种或多种。
进一步的，所述试剂R1和试剂R2的体积比为试剂R1：试剂R2＝3:1。
进一步的，所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
本发明的检测试剂盒在具有双试剂功能的全自动生化分析仪上采用速率法进行检测，其具体使用方法如图5所示。
本发明所使用的校准品为英国朗道公司生产的复合校准品。
本发明所使用的质控品为英国朗道公司生产的复合质控品
在全自动生化分析仪内分别加入15μl纯化水、15μl样本或校准品，之后再加入225μl的试剂R1预孵育5min后，之后记录吸光度值A1；后加入75μl的试剂R2，反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒通过在试剂R1中加入催化剂，提高了试剂盒的灵敏度；并且分别在试剂R1和试剂R2中添加合适浓度的稳定剂1和稳定剂2作为组合稳定剂，使甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒在2-8℃条件下存储15个月以后，稳定性仅下降5％，远高于现有市场上的试剂盒，同时不会对试剂盒的准确度和相关性产生影响，有利于在市场中进一步的推广。
附图说明
图1为本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒中实施例1的相关性试验曲线图；
图2为本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒中实施例2的相关性试验曲线图；
图3为本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒中实施例3的相关性试验曲线图；
图4为本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒的稳定性试验曲线图；
图5为本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒在全自动生化分析仪上的检测方法示意图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例及附图进行详细描述。
实施例1：
本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2，其中：
试剂R2的成分和含量如下：
实施例2：
所述试剂R2的成分和含量如下：
实施例3：
所述试剂R2的成分和含量如下：
对比例：
采用国家食品药品监督管理局认可的GPDA检测试剂盒。
上述实施例1-3和对比例的试剂盒在使用时，其检测方法均是在具有双试剂功能的日立7180全自动分析仪等仪器上，利用速率法进行检测，操作如下：
加入15ul的纯化水、15μl的样本或校准品和225μl的R1试剂预孵育5min后读取吸光度值A1，之后加入75μl的试剂R2反应5min后，读取吸光度A2，并计算ΔA/min。
甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶含量(U/L)＝(ΔA检测÷ΔA标准)×C标准。
准确度试验：
对实施例1-3试剂盒和对比例试剂盒进行检测，对20个临床血清样本进行检测，检测结果如表1-3所示。同时获得了上述试剂盒的相关性曲线，如图1-3所示。
表1实施例1试剂盒相关性试验
表2实施例2试剂盒相关性试验
表3实施例3试剂盒相关性试验
由表1-3以及图1-3可以看出，实施例1-3试剂盒与认可的某公司GPDA检测试剂盒的相关系数为0.995以上，说明实施例1-3试剂盒与认可的某公司GPDA检测试剂盒有极大的相关性。由此证明本发明试剂盒添加及更改的组分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
分析灵敏度试验：
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存试剂，使用实施例1-3试剂盒及对比例试剂盒检测1000U/L的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶引起的吸光度变化率和分析灵敏度，结果如表4所示。
表4试剂盒分析灵敏度试验检测结果
从表4可以看出，实施例1-3试剂盒与对比例试剂盒在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存，实施例1-3试剂盒的分析灵敏度最低为0.3633，最高为0.395；对比例试剂盒的分析灵敏度最高为0.2879。由此可以看出，实施例1-3试剂盒的分析灵敏度远高于对比例试剂盒的灵敏度。
稳定性试验：
将本发明实施例1-3试剂盒和对比例试剂盒分别分成等同的15份，同时放置在2-8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存，每月1号分别用上述试剂盒检测同一混合血清样本，每个试剂盒检测三次取平均值，检测数据如表5所示，同时获得稳定性曲线图，如图4所示。
表5试剂盒稳定性试验检测结果
由表5和图4所示，实施例1-3试剂盒在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存12个月时的稳定性下降3.2％，在15个月时稳定性仅下降4.1％；而对比例试剂在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存12个月后开始不稳定，稳定性下降了10.1％，在15个月时稳定性下降了12.3％。由此可以看出，实施例1-3试剂盒的稳定性远高于对比例试剂盒的稳定性。
综上所述，本发明的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒在不影响准确度和相关性的基础上，提高了试剂盒的稳定性和灵敏度。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1和试剂R2，其中：
所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
所述缓冲液为PBS缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、Tris-HCL缓冲液、Goods缓冲液、TAPSO缓冲液中的一种或多种组合，所述试剂R1中缓冲液的pH值为8.6，所述试剂R2中缓冲液的PH值为7.5；
所述稳定剂1为氯化钠、18-冠醚-6中的一种或多种，所述稳定剂2为甘露醇、无水乙醇、山梨醇中的一种或多种；
所述防腐剂1和防腐剂2分别为叠氮钠、氯化锂中的一种或多种；
所述催化剂为醋酸镁、硫酸镁、18-冠醚-6中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的体积比为试剂R1：试剂R2＝3:1。
3.根据权利要求1-2中任一所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的成分和含量如下：
所述试剂R2的成分和含量如下：
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