CN109580505B

CN109580505B - 一种稳定剂组合物

Info

Publication number: CN109580505B
Application number: CN201811317004.7A
Authority: CN
Inventors: 张静茹; 宋占科; 蔡华雅; 刘希
Original assignee: Beijing Strong Biotechnologies Inc
Current assignee: Beijing Strong Biotechnologies Inc
Priority date: 2018-11-07
Filing date: 2018-11-07
Publication date: 2021-05-18
Anticipated expiration: 2038-11-07
Also published as: CN109580505A

Abstract

本申请涉及一种稳定剂组合物。所述稳定剂组合物包含40g/L至200g/L葡萄糖、50g/L至350g/L甘油和2g/L至8g/L聚多卡醇Thesit。本申请的稳定剂组合物加入到甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂后，可显著提高底物的稳定性，有效延长甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒的保存时间。

Description

一种稳定剂组合物

技术领域

本申请涉及临床检验和生物化学领域。更具体地，涉及一种稳定剂组合物，其专用于甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的测定。

背景技术

甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶(GPDA)是一种二肽水解酶，能特异地水解N-末端为甘氨酰-脯氨酰的肽键。在人体中，GPDA主要分布于肝、肾、结缔组织、唾腺以及血清、唾液等体液中，细胞内GPDA大部分(55％)分布于微粒体中。

健康成人血清GPDA水平较为恒定。但在某些病理情况下，可出现升高或降低。肝胆系统疾病如原发性肝癌、急性肝炎、慢性活动性肝炎、肝硬化及阻塞性黄疸等血清GPDA活性显著高于正常人。胃癌及良性胃肠道病变患者血清GPDA可见下降，其中胃癌患者GPDA活性只占正常人的一半左右。另外，病程在15个月以上的类风湿性关节炎患者，血清GPDA活性亦显著低于健康对照，且酶活性水平与病程长短呈负相关。测定血清GPDA的变化，对疾病的诊断和监护具有重要价值。

目前GPDA的检测主要采用连续检测法，具体测定原理如下：

在碱性条件下，甘氨酰脯氨酸对硝基苯胺被GPDA催化水解，生成甘氨酰脯氨酸和黄色的对硝基苯胺，对硝基苯胺可引起405nm处吸光度的升高，吸光度的升高速率与GPDA活性呈正比。

GPDA测定试剂中的主要原料是底物甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐(GPN)，其溶解后极不稳定，且能自行分解。这引起试剂吸光度的升高，影响其测试准确性，给实际应用带来很大不便，在生产中为弥补其稳定性的缺点，用量一般也较大，提高了生产成本。

中国专利CN1197974C公开了一种消化系统肿瘤诊断试剂盒，由试剂1和试剂2组成，其中试剂1为0.5-3.7g％Tris、0-0.1g％NaN3、0.26-1.98g％双甘氨肽；试剂2为0-50mmol/L CAPSO或0-0.5mmol/L海藻糖、5-50％乙二醇或30-70％丙三醇、0-2g％牛血清白蛋白、5-40mmol/L GPN(甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸)和0-0.1g％NaN3。然而，CN1197974C中并没有提供试剂稳定性的证据，且试剂空白吸光度较高。

鉴于此，本领域仍然需要一种稳定性好的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂。

发明内容

根据本申请的一些实施方案，提供了一种稳定剂组合物在提高试剂稳定性中的用途。

在一些实施方案中，稳定剂组合物包含：

·40至200重量份的葡萄糖、

·50至350重量份的甘油、和

·2至8重量份的聚多卡醇Thesit。

根据本申请的一些实施方案，提供了一种稳定剂组合物在提高试剂稳定性中的用途，且所述的试剂是甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物提高了试剂的底物稳定性。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物提高了试剂的货架稳定性。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物提高了试剂的开瓶稳定性。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物包含40g/L至200g/L，优选80g/L至120g/L葡萄糖，例如但不限于40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200g/L。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物包含50g/L至350g/L，优选200g/L至350g/L，更优选100g/L至300g/L甘油，例如但不限于50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、350g/L甘油。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物包含2g/L至8g/L，优选4g/L至7g/L聚多卡醇Thesit，例如但不限于2、3、4、5、6、7、8g/L聚多卡醇Thesit。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物包含：80g/L葡萄糖、300g/L甘油、5g/LThesit。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物包含：120g/L葡萄糖、250g/L甘油、6g/L Thesit。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物在试剂中的浓度为按体积计20％至40％，优选30％。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物在第一试剂中的浓度为按体积计20％至40％，优选30％。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物在第二试剂中的浓度为按体积计20％至40％，优选30％。

在一些实施方案中，本申请的稳定剂组合物在含底物的试剂中的浓度为按体积计20％至40％，优选30％。

根据一些实施方案，提供了一种稳定剂组合物，其包含：

·40至200重量份的葡萄糖、

·50至350重量份的甘油、和

·2至8重量份的聚多卡醇Thesit。

根据一些实施方案，提供了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂，其包含本申请的稳定剂组合物。

根据一些实施方案，提供了一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，其包含第一试剂和第二试剂；

其中所述的第一试剂包含：

·6.6g/L至13.5g/L，优选10.57g/L双甘肽、

·2.92g/L至8.766g/L氯化钠、

·0.5g/L至1g/L叠氮钠；

所述第二试剂包含：

·0.96g/L至4.83g/L，优选2.90g/L甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐、

·0.5g/L至1g/L Proclin 300、以及

·根据本申请的稳定剂组合物。

其中所述的第一试剂包含：10.57g/L双甘肽、2.92g/L氯化钠、1g/L叠氮钠；

所述第二试剂包含：2.90g/L甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐、1g/LProclin 300和30％(v/v)本申请的稳定剂组合物。

具体实施方式

实施例1：稳定剂组合物的制备

1.将以下各组分充分溶解混合后，即可得一种稳定剂组合物1：

80g/L葡萄糖、

300g/L甘油、

5g/L Thesit。

2.将以下各组分充分溶解混合后，即可得一种稳定剂组合物2：

120g/L葡萄糖、

250g/L甘油、

6g/L Thesit。

实施例2：对比试剂盒的制备

1.第一试剂包含：

10.57g/L双甘肽、2.92g/L氯化钠和1g/L叠氮钠。

2.第二试剂包含：

2.90g/L甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐和1g/L Proclin 300。

3.将第一试剂和第二试剂组装成试剂盒。

实施例3.本申请试剂盒的制备

1.按照实施例2的方法制备试剂盒1，区别仅在于第二试剂中还包含30％(v/v)实施例1所得稳定剂组合物1。

2.按照实施例2的方法制备试剂盒2，区别仅在于第二试剂中还包含30％(v/v)实施例1所得稳定剂组合物2。

测试例1.试剂盒的测定方法

1.样本：第一试剂：第二试剂的比例为10μL：150μL：50μL。

2.设定的主波长为410nm，副波长为520nm。

3.步骤：样本与第一试剂混合，37℃孵育5分钟；之后加入试剂2，延迟30秒后连续监测90秒，计算ΔA/min，根据以下公式计算样本中甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶的含量(计算因子F＝2457)：

GPDA(U/L)＝(ΔA测定/min-ΔA空白/min)*F。

测试例2.底物稳定性和检测准确性的评价

将实施例3的试剂与实施例2的对比试剂同时置于37℃。每2天测试剂空白吸光度和血清样本，试剂空白平行测2次，样本平行测3次，并取其平均值。连续检测10天，得到试剂空白吸光度和样本测试的结果，并计算样本测定的标准偏差(标准偏差反应测定结果的稳定性)。血清样本值为108U/L，允许偏差范围为10％。测试结果见下表1和表2：

表1.试剂空白吸光度

表2.样本测定值

由以上表1数据可知，未添加稳定剂组合物的对比试剂比含有稳定剂组合物的试剂，其试剂空白吸光度均随时间的推移逐渐增大。测试结束时，实施例2的试剂空白吸光度约为实施例3试剂空白吸光度的3倍，说明没有加入稳定剂组合物的试剂其酶底物(甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐)在进行较快地分解。

相对地，第二试剂中添加稳定剂组合物后，空白吸光度尽管也有增加，但其增大幅度远低于未添加稳定剂组合物的情形。这说明加入的稳定剂组合物显著抑制了酶底物(甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐)的分解，提高了底物稳定性，也可有效延长试剂盒的保存期限(也作长期稳定性、货架稳定性、有效期)。

由表2样本测定数据可知，未添加稳定剂组合物的试剂，其检测结果标准偏差明显大于含有稳定剂组合物的试剂。结果表明，在试剂中加入稳定剂组合物较好地改善了底物稳定性、测试稳定性及准确性。

测试例3.开瓶稳定性的评价

将实施例3的试剂与实施例2的试剂暴露于空气中，置于2-8℃。每5天测血清样本，平行测定3次取其平均值，连续检测30天，计算样本测定的标准偏差(标准偏差反应测定结果的稳定性)。血清样本值为108U/L，允许偏差范围为10％。测试结果见下表：

表3.开瓶稳定性的评价结果

由上表可知，对于实施例2的试剂盒，其开瓶检测结果标准偏差明显较大，约为实施例3试剂测值的4倍。说明未添加稳定剂组合物的测定试剂开瓶很不稳定，有效天数仅能维持20天左右。然而，试剂中添加稳定剂组合物的测定在整个测试范围内，测定值均在允许误差范围内。这说明，实施例3的测定试剂开瓶30天后仍能保持优良的测试性能。

此外，发明人还制备了其它不同浓度组合的稳定剂组合物(例如，40g/L葡萄糖、350g/L甘油、和2g/L聚多卡醇Thesit；或者200g/L葡萄糖、50g/L甘油、和8g/L聚多卡醇Thesit)，当以30％比例加入第二试剂时，起到的稳定作用统计学上显著低于实施例3所制备的试剂盒(数据未显示)。

将组合物1或组合物2按照20％或40％分别引入试剂盒时，能够起到稳定作用，优于对照试剂盒，但弱于30％时的情况(数据未显示)。

Claims

1.稳定剂组合物在提高试剂中底物稳定性中的用途，其中：

所述的稳定剂组合物包含：

80g/L至120g/L葡萄糖、

100g/L至300g/L甘油、和

4g/L至7g/L聚多卡醇Thesit；

所述的试剂是甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂；

所述底物是甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐；

所述的稳定剂组合物在所述试剂中的浓度为按体积计为20％至40％。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的稳定剂组合物包含：

80g/L葡萄糖；

300g/L甘油、以及

5g/L聚多卡醇Thesit。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述的稳定剂组合物包含：

120g/L葡萄糖；

250g/L甘油、以及

6g/L聚多卡醇Thesit。

4.根据权利要求1所述的用途，其中所述的稳定剂组合物在所述试剂中的浓度为按体积计为30％。

5.一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂，其包含：

0.96g/L至4.83g/L甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐、

0.5g/L至1g/L Proclin 300、和

按体积计20％至40％稳定剂组合物；

其中，所述稳定剂组合物包含：

80g/L至120g/L葡萄糖、

100g/L至300g/L甘油、和

4g/L至7g/L聚多卡醇Thesit。

6.根据权利要求5所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂，其中所述的稳定剂组合物在所述试剂中的浓度为按体积计为30％。

7.根据权利要求5所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂，其中所述稳定剂组合物包含：

80g/L葡萄糖；

300g/L甘油、以及

5g/L聚多卡醇Thesit。

8.根据权利要求5所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂，其中所述稳定剂组合物包含：

120g/L葡萄糖；

250g/L甘油、以及

6g/L聚多卡醇Thesit。

9.一种甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，其包含：

第一试剂和第二试剂；

其中所述的第一试剂包含：

6.6g/L至13.5g/L双甘肽、

2.92g/L至8.766g/L氯化钠、

0.5g/L至1g/L叠氮钠；

所述第二试剂是权利要求5至8中任一项所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂。

10.根据权利要求9所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，其中所述的第一试剂包含10.57g/L双甘肽。

11.根据权利要求9所述的甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶测定试剂盒，其中所述第二试剂包含2.90g/L甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸盐。