SU639487A3 - Реактив дл определени триглицеридов - Google Patents

Description

(54) РЕАКТИВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРИГЛИЦЕРИДОВ

12 ОтЛ:Ичительны;М лриэнаком реактива  вл етс  то, что он дополнительно содержит карбоксилзстеразу, додецил-сз-льфат натри , фосфОренолкиназу -и- сульфат магаи  при жазанном содержании компонентов реактива . Предлагаемый ,реакт пв дозвол ет сократить врем  проведени  анализа в два раза, т. е. до 30 мин, и -количество потреблени  энз, .в 50 раз. В качестве буфера предпочтительно использовать 0,03-0,3 М .раствор триэтаноламина при рН 6-9 или боратный буфер. Пример 1. Приготавливают реактив, устойчивый при хранении, со.сто щий из п ти KOMinoHeHTOiB, которые леред употреблением смешивают, его 1мож:но хранить в виде смеси в течение 1-2 дней. Компо ненты: 0,1 моль триэтаноламиЕного буфера с рН 7,6, содержащего 3 ммоль сульфата магни , 1,5 мг1мл коровьевОго сывороточного альбумина и 0,1 А1г1мл додецилсульфата натри  (1); раствор 6 ммоль «икотина мидадениндинуклеотида в вобстановленной форме (ПАДИ), 33 ммоль АТФ и И ммоль фосфоенолпировиноградной кислоты в дистиллированной воде (2); кристаллическа  суспензи  2 мг1мл лактатдегидрогеназы и 1 мг1мл фосфоенодкиназы (3); . раствор 0,2 липазы из Rhyzopus arrihizus и 4,0 мг1мл карбоксилэстеразы (4); кристаллическа  суспензи  2 мг/мл глнц ,еринкиназы (5). При умножении величины количества компонентов s мг/мл на 0,1 получают количество компонентов в вес. %. Дл  компонентов, указанных в ммол х, учитываетс  еще молекул рный вес. 2,9 мл ко.мпонеита 1, 0,1 мл компонента 2 и 0,02 мл компонента 3 смешивают и устанавливают температуру смеси 25° С. Затем др:ибавл ют 0,1 мл сыворотки, .содержащей подлежащий определению триглиперид, и инкубируют 5 мин |прн .заданной температуре . Затем прибавл ют ОД мл компонента 4, смесь выдерж.ивают 15-20 мин при указанной температуре и затем замер ют величину ЭКСТИНКЦ.ИИ на индикаторной шкале фотометра (при 366 или 340 нм). Эту величину обоз.начают . Затем пр.ибавл ют к пробе 0,02 мл компонента 5 и через 10 мин снова замер ют экстинкцию. Замеренную величину обозначает 2- Еще через 10 1шн снова замер ют экстинкцию и замеренную Вбличину обозначают Е,. Расчет: АЕ(Е,-Е2)-(Е2-Е,). Общее кол.ичество .глицерина из триглицерида в лгг/ШО . 89,1. Описанное определение повтор ют де ть .раз, лр.ичем прибавл емое количество ыворотки может (быть уменьшено на 0,01 мл. Пр.и построении графика полученные таким образом значени  AjE по отношению к примен емому количеству сыворотки образуют .пр мую. Из определенных величин вычисл ют пропорциональность (г), .равную 0,9986, по сравнению с г (идеальный случай), .равной 1,000, что показывает очень высокую точность метода. Пример 2 (дл  предельно низких концентраций отдельных компонентов). Определ ют коэффициет изменени  (К). .., стандартное отклонение (С) Q, . .( /о j . среднее значение (X) .100 Провод т 10 .измерений в 1 день, точно тааоке провод т 10 измерений в течение 10 дней по одно,му измерению в день. . Приготавл.ивают устойчивый при хранении .реактив, состо щий из п ти компонентов , которые смещ.ивают перед употреблением , в виде омеси они могут хранитьс  в течение 1-2 дней. Компоненты: 0,03 моль триэтанола.минного буфера, рН 7,6, содержащего 3 ммоль сульфата магни , 0,1 мг/мл коровьего сывороточного альбумина и 0,01 мг/мл додецилсульфата натри  (1); pacTBiOp 1 лгмоль НАДН, 10 ммоль АТФ и 2 ммоль фосфоенолпировиноградной кислоты ;в дистиллированной воде (2); кристаллическа  суспензи  0,5 мг/мл лактатдегидрогеназы и 0,2 мг/мл фосфоенолкиназы (3); раствор 0,1 мг/мл лииазы на Rhyzopus arrihizus и 0,5 мг/мл карбоксилэстеразы (4); кристаллическа  суспензи  0,05 мг1мл глицеринкиназы (5). 2,9 мл ко мпонеита 1,01 мл компонента 2 и 0,02 мл компонента 3 смешивают и устанавливают температуру смеси 25° С. Затем прибавл ют 0,1 жл сыворотки, содержащей подлежащий определению триглицерид и 15 мин инкубируют при 37° С. Затем прибавл ют 0,1 мл К1ом.ионента 4, смесь выдерживают 35 мин при указанной температуре и затем при 316 или 340 нм считывают величину экст.пнкции по инди1каторной шкале фотометра. Эту величину обознают ,. Затем пр.ибавл ют к пробе 0,02 мл компонента 5 и через 20 мин снова считывают экстинкцию. Эту величину обозначают Е.