CN101852729A - 黑果枸杞果汁质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种黑果枸杞果汁质量控制方法,该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标,采用分光光度法测定黑果枸杞果汁中花色苷、原花青素及总多酚,具有所用试剂量少、操作简单方便、灵敏度高、精密度高稳定性好等特点,可以实现对黑果枸杞果汁进行保健功能的有效性评价。
Description
技术领域
本发明涉及一种果汁质量控制方法,尤其涉及黑果枸杞果汁质量控制方法
背景技术
黑果枸杞果汁是以茄科枸杞属植物黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的成熟果实去除籽皮后得到的果汁,有较强的抗氧化性,呈紫红色,无毒,应用于医药、食品及化妆品。
黑果枸杞果汁中主要含有花色苷类物质、原花青素和总多酚。其中花色苷类物质属酚类化合物中的类黄酮,具有清除体内自由基、抗氧化、降血脂及防治动脉粥样硬化等作用;原花青素(Proanthocyanidins或Procyanidins,简称PC,又译原花果汁、前花果汁等)是植物中广泛存在的一大类天然多酚化合物的总称,具有清除人体自由基、抗氧化、抗致突变、酶抑制等活性;总多酚具有清除自由基、抗氧化的功能。
但是,黑果枸杞果汁目前还没有完整的质量控制方法,不利于保证黑果枸杞果汁的品质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、准确的黑果枸杞果汁质量控制方法。
为解决上述问题,本发明所述的一种黑果枸杞果汁质量控制方法,其特征在于:该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标;其中
——总花色苷含量的测定方法是:(1)制备样品溶液:将0.1~2ml黑果枸杞果汁用水稀释1~1000倍后,取0.1~100mL,加入盐酸-乙醇溶液中,在15~80℃温度下保温1~36小时后即得;(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为450~600nm处测定样品溶液吸光度值;(3)计算样品溶液中总花色苷含量;
——原花青素含量的测定方法是:①制备对照品溶液:将甲醇加入到儿茶素对照品中,制成每1ml含儿茶素0.1mg的溶液后即得;②制备标准曲线:分别将0.0、0.5、1、1.5、2、2.5ml的对照品溶液用甲醇定容至25ml,即得浓度为0.01~1mg/mL的标准使用液;③制备样品溶液:在0.01~10ml黑果枸杞果汁中加入甲醇,并用甲醇定容至2~500ml,摇匀,即得;④测定样品溶液中原花青素含量:在0.1~2mL样品溶液中,依次加入1~5mL香草醛甲醇溶液、0.5~2.5mL浓盐酸,混合均匀,室温下显色10~20mim后,在波长为400~600nm处比色即得;
——总多酚含量的测定方法是:(a)制备对照品溶液:在1~10mg没食子酸对照品中加入水,经超声溶解后定容至2~25ml,即得每1ml含没食子酸0.25g的溶液;(b)制备标准曲线:分别将0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml的对照品溶液用水定容至50ml,摇匀,即得;(c)制备样品溶液:将0.1~2.0ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释1~200倍,即得样品溶液;(d)测定样品溶液吸光度值:在样品溶液中加福林-酚显色剂,摇匀后加入碳酸钠溶液,定容至10ml;以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为300~800nm处测定样品溶液吸光度值;(e)计算样品溶液中总多酚含量。
所述总花色苷含量的测定方法中的步骤(1)中盐酸的质量浓度为0.01~1%,乙醇的质量浓度为50~90%。
所述原花青素含量的测定方法中的步骤④中香草醛甲醇溶液的质量浓度为4%。
所述总多酚含量的测定方法中的步骤(d)中碳酸钠溶液的质量浓度为20%。
本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、由于本发明采用分光光度法测定黑果枸杞果汁中花色苷、原花青素及总多酚,而该法具有所用试剂量少、操作简单方便、灵敏度高、精密度高稳定性好等特点,因此,适宜测定黑果枸杞果汁的花色苷、原花青素及总多酚,从而实现对黑果枸杞果汁进行保健功能的有效性评价。
2、经对本发明进行精密度实验、稳定性实验、回收率实验后,可以看出本发明具有较高的精密度、在8小时内稳定性良好、准确可靠,可以实现对黑果枸杞果汁有效地质量控制(参见表1、表2、表3)。
表1:精密度实验(次数n=5)
测定项目 | 平均含量(mg/ml) | RSD(%) |
花色苷 | 0.382 | 1.05 |
原花青素 | 3.0 | 1.23 |
总多酚 | 3.190 | 1.16 |
表2:稳定性实验(t=8h)
测定项目 | 平均含量(mg/ml) | RSD(%) |
花色苷 | 0.378 | 1.21 |
原花青素 | 2.9 | 1.09 |
总多酚 | 3.2 | 1.26 |
表3:回收率实验
测定项目 | 平均回收率(%) | RSD(%) |
花色苷 | 99.34 | 1.32 |
原花青素 | 104.94 | 1.12 |
测定项目 | 平均回收率(%) | RSD(%) |
总多酚 | 97.85 | 1.20 |
3、本发明简单、快速,易于推广。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明,下述实施例仅用于说明本发明,而并非对本发明的限制。
实施例1一种黑果枸杞果汁质量控制方法,该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中
——总花色苷含量的测定方法是:
(1)制备样品溶液:取1ml黑果枸杞果汁用水稀释100倍后,取1mL至试管中,加入10mL0.1%盐酸-80%乙醇溶液,在25℃温度下保温24小时后即得。
(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为540nm处测定样品溶液吸光度值为0.23。
(3)计算样品溶液中总花色苷含量。
总花色苷含量(mg/g)=(A×MW×DF)/b,式中A为吸光度;MW为相对分子量(取449.2);DF为稀释倍数;b为摩尔吸光度(取26900),得到黑果枸杞果汁的总花色苷的含量为0.43mg/ml。
——原花青素含量的测定原理:原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,在酸性介质中与香草醛反应,可以生产深红色的花青素离子。
测定方法是:
①制备对照品溶液:将甲醇加入到儿茶素对照品中,制成每1ml含儿茶素0.1mg的溶液后即得。
②制备标准曲线:分别将0.0、0.5、1、1.5、2、2.5ml的对照品溶液置25ml量瓶中,甲醇定容至25ml,摇匀,即得浓度为0.01~1mg/mL的标准使用液。以甲醇为空白,在500nm波长测定吸光度A,以浓度C对吸光度A进行回归,得回归方程为A=5.4012C+0.0014,Γ=0.9997。
③制备样品溶液:取黑果枸杞果汁1ml,置100ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,静止30分钟,用时稀释10倍,即得。
④测定样品溶液中原花青素含量:用锡箔纸将试管包裹严,仅留管口用于加样。取样品1ml加入试管中,再加3ml的4%香草甲醛溶液混合,然后加入1.5ml的浓盐酸,彻底混匀,室温显色15分钟,最后在500nm比色。
含量测定结果:经计算,黑果枸杞果汁原花青素含量为3mg/ml。
——总多酚含量的测定方法是:
(a)制备对照品溶液:在1~10mg没食子酸对照品中加入水,经超声(功率150W,频率53KHz)溶解后定容至2~25ml,即得每1ml含没食子酸0.25g的溶液。
(b)制备标准曲线:分别将0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml的对照品溶液置于50ml量瓶中,用水定容至50ml,摇匀,即得。在760nm波长测定吸光度A,以浓度C对吸光度A进行回归,得回归方程为A=3.0940C+0.0178,Γ=0.9994。
(c)制备样品溶液:将0.5ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释100倍,即得样品溶液;
(d)测定样品溶液吸光度值:取样品溶液1ml,置10ml量瓶中,加水6ml,加福林-酚显色剂0.5ml,摇匀,10分钟内加入20%碳酸钠溶液1.5ml,定容至刻度10ml,摇匀。以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为760nm处测定样品溶液吸光度值。
福林-酚显色剂:称取10g钨酸钠和2.5g钼酸钠,用70ml蒸馏水溶于250ml回流瓶中,加入5ml磷酸和10ml浓盐酸,混匀,微沸回流2小时,加入15g硫酸锂、5ml蒸馏水和3滴溴水,开口沸腾15分钟(至溴水挥尽为止),冷却至室温,定容至100ml,滤过,置棕色瓶中保存备用。使用时加入1倍蒸馏水稀释即可。
20%碳酸钠溶液的配制:称取20g无水碳酸钠,置100ml容量瓶中,加80ml水超声(功率150W,频率53KHz)溶解,冷却至室温后定容至100ml,摇匀、滤过,即得。
(e)计算样品溶液中总多酚含量。
总多酚含量(g/ml)=稀释后的含量×稀释倍数×样品溶液体积-1,得到黑果枸杞果汁总多酚含量为3.186mg/ml。
实施例2一种黑果枸杞果汁质量控制方法,该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中
——总花色苷含量的测定方法是:
(1)制备样品溶液:取0.1ml黑果枸杞果汁用水稀释1倍后,取0.1ml至试管中,加入1mL0.01%盐酸-70%乙醇溶液,在15℃温度下保温36小时后即得。
(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为480nm处测定样品溶液吸光度值为0.21。
(3)计算样品溶液中总花色苷含量。总花色苷含量(mg/g)=(A×MW×DF)/b,式中A为吸光度;MW为相对分子量(取449.2);DF为稀释倍数;b为摩尔吸光度(取26900),得到黑果枸杞色素的总花色苷的含量为0.35mg/ml。
——原花青素含量的测定方法是:
①制备对照品溶液、②制备标准曲线同实施例1。
③制备样品溶液:取黑果枸杞果汁0.01ml,置2ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,静止30分钟,用时稀释10倍,即得。
④测定样品溶液中原花青素含量:用锡箔纸将试管包裹严,仅留管口用于加样。取样品0.1ml加入试管中,再加1ml的4%香草甲醛溶液混合,然后加入0.5ml的浓盐酸,彻底混匀,室温显色15分钟,最后在450nm比色。
含量测定结果:经计算,黑果枸杞果汁原花青素含量为2.88mg/ml。
——总多酚含量的测定方法是:
(a)制备对照品溶液、(b)制备标准曲线同实施例1。
(c)制备样品溶液:将0.1ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释20倍,即得样品溶液;
d)测定样品溶液吸光度值:取样品溶液1ml,置10ml量瓶中,加水6ml,加福林-酚显色剂0.5ml,摇匀,10分钟内加入20%碳酸钠溶液1.5ml,定容至刻度10ml,摇匀。以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为400nm处测定样品溶液吸光度值。
福林-酚显色剂和20%碳酸钠溶液的制备同实施例1。
(e)计算样品溶液中总多酚含量。
总多酚含量(g/ml)=稀释后的含量×稀释倍数×样品溶液体积-1,得到黑果枸杞色素总多酚含量为3.096mg/ml。
实施例3一种黑果枸杞果汁质量控制方法,该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中
——总花色苷含量的测定方法是:
(1)制备样品溶液:取1ml黑果枸杞果汁用水稀释1000倍后,取1ml至试管中,加入10mL1%盐酸-90%乙醇溶液,在80℃温度下保温1小时后即得。
(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为600nm处测定样品溶液吸光度值为0.021。
(3)计算样品溶液中总花色苷含量。
总花色苷含量(mg/g)=(A×MW×DF)/b,式中A为吸光度;MW为相对分子量(取449.2);DF为稀释倍数;b为摩尔吸光度(取26900),得到黑果枸杞色素的总花色苷的含量为0.36mg/ml。
——原花青素含量的测定方法是:
①制备对照品溶液、②制备标准曲线同实施例1。
③制备样品溶液:取黑果枸杞果汁10ml,置500ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,静止30分钟,用时稀释20倍,即得。
④测定样品溶液中原花青素含量:用锡箔纸将试管包裹严,仅留管口用于加样。取样品2ml加入试管中,再加5ml的4%香草甲醛溶液混合,然后加入2.5ml的浓盐酸,彻底混匀,室温显色20分钟,最后在600nm比色。
含量测定结果:经计算,黑果枸杞果汁原花青素含量为2.94mg/ml。
——总多酚含量的测定方法是:
(a)制备对照品溶液、(b)制备标准曲线同实施例1。
(c)制备样品溶液:将2ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释200倍,即得样品溶液;
d)测定样品溶液吸光度值:取样品溶液1ml,置10ml量瓶中,加水6ml,加福林-酚显色剂0.5ml,摇匀,10分钟内加入20%碳酸钠溶液1.5ml,定容至刻度10ml,摇匀。以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为800nm处测定样品溶液吸光度值。
福林-酚显色剂和20%碳酸钠溶液的制备同实施例1。
(e)计算样品溶液中总多酚含量。
总多酚含量(g/ml)=稀释后的含量×稀释倍数×样品溶液体积-1,得到黑果枸杞色素总多酚含量为3.008mg/ml。
实施例4一种黑果枸杞果汁质量控制方法,该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中
——总花色苷含量的测定方法是:
(1)制备样品溶液:取2ml黑果枸杞果汁用水稀释500倍后,取100ml至试管中,加入100mL0.05%盐酸-50%乙醇溶液,在50℃温度下保温12小时后即得。
(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为450nm处测定样品溶液吸光度值为0.115。
(3)计算样品溶液中总花色苷含量。
总花色苷含量(mg/g)=(A×MW×DF)/b,式中A为吸光度;MW为相对分子量(取449.2);DF为稀释倍数;b为摩尔吸光度(取26900),得到黑果枸杞色素的总花色苷的含量为0.43mg/ml。
——原花青素含量的测定方法是:
①制备对照品溶液、②制备标准曲线同实施例1。
③制备样品溶液:取黑果枸杞果汁0.1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,静止30分钟,用时稀释10倍,即得。
④测定样品溶液中原花青素含量:用锡箔纸将试管包裹严,仅留管口用于加样。取样品1.5ml加入试管中,再加4.5ml的4%香草甲醛溶液混合,然后加入2ml的浓盐酸,彻底混匀,室温显色10分钟,最后在400nm比色。
含量测定结果:经计算,黑果枸杞果汁原花青素含量为2.96mg/ml。
——总多酚含量的测定方法是:
(a)制备对照品溶液、(b)制备标准曲线同实施例1。
(c)制备样品溶液:将0.1ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释1倍,即得样品溶液;
d)测定样品溶液吸光度值:取样品溶液1ml,置10ml量瓶中,加水6ml,加福林-酚显色剂0.5ml,摇匀,10分钟内加入20%碳酸钠溶液1.5ml,定容至刻度10ml,摇匀。以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为300nm处测定样品溶液吸光度值。
福林-酚显色剂和20%碳酸钠溶液的制备同实施例1。
(e)计算样品溶液中总多酚含量。
总多酚含量(g/ml)=稀释后的含量×稀释倍数×样品溶液体积-1,得到黑果枸杞色素总多酚含量为3.01mg/ml。
实施例5一种黑果枸杞果汁质量控制方法,该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标。其中
——总花色苷含量的测定方法是:
(1)制备样品溶液:取1.5ml黑果枸杞果汁用水稀释100倍后,取50ml至试管中,加入50mL0.5%盐酸-60%乙醇溶液,在70℃温度下保温30小时后即得。
(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为500nm处测定样品溶液吸光度值为0.24。
(3)计算样品溶液中总花色苷含量。
总花色苷含量(mg/g)=(A×MW×DF)/b,式中A为吸光度;MW为相对分子量(取449.2);DF为稀释倍数;b为摩尔吸光度(取26900),得到黑果枸杞色素的总花色苷的含量为0.41mg/ml。
——原花青素含量的测定方法是:
①制备对照品溶液、②制备标准曲线同实施例1。
③制备样品溶液:取黑果枸杞果汁5ml,置250ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,静止30分钟,用时稀释10倍,即得。
④测定样品溶液中原花青素含量:用锡箔纸将试管包裹严,仅留管口用于加样。取样品2ml加入试管中,再加5ml的4%香草甲醛溶液混合,然后加入2.5ml的浓盐酸,彻底混匀,室温显色10分钟,最后在550nm比色。
含量测定结果:经计算,黑果枸杞果汁原花青素含量为3.1mg/ml。
——总多酚含量的测定方法是:
(a)制备对照品溶液、(b)制备标准曲线同实施例1。
(c)制备样品溶液:将1.5ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释150倍,即得样品溶液;
d)测定样品溶液吸光度值:取样品溶液1ml,置10ml量瓶中,加水6ml,加福林-酚显色剂0.5ml,摇匀,10分钟内加入20%碳酸钠溶液1.5ml,定容至刻度10ml,摇匀。以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为550nm处测定样品溶液吸光度值。
福林-酚显色剂和20%碳酸钠溶液的制备同实施例1。
(e)计算样品溶液中总多酚含量。
总多酚含量(g/ml)=稀释后的含量×稀释倍数×样品溶液体积-1,得到黑果枸杞色素总多酚含量为3.13mg/ml。
Claims (4)
1.一种黑果枸杞果汁质量控制方法,其特征在于:该方法以总花色苷含量、原花青素含量和总多酚含量的测定作为质量控制指标;其中
——总花色苷含量的测定方法是:(1)制备样品溶液:将0.1~2ml黑果枸杞果汁用水稀释1~1000倍后,取0.1~100mL,加入盐酸-乙醇溶液中,在15~80℃温度下保温1~36小时后即得;(2)测定样品溶液吸光度值:用紫外-可见光分光光度计在波长为450~600nm处测定样品溶液吸光度值;(3)计算样品溶液中总花色苷含量;
——原花青素含量的测定方法是:①制备对照品溶液:将甲醇加入到儿茶素对照品中,制成每1ml含儿茶素0.1mg的溶液后即得;②制备标准曲线:分别将0.0、0.5、1、1.5、2、2.5ml的对照品溶液用甲醇定容至25ml,即得浓度为0.01~1mg/mL的标准使用液;③制备样品溶液:在0.01~10ml黑果枸杞果汁中加入甲醇,并用甲醇定容至2~500ml,摇匀,即得;④测定样品溶液中原花青素含量:在0.1~2mL样品溶液中,依次加入1~5mL香草醛甲醇溶液、0.5~2.5mL浓盐酸,混合均匀,室温下显色10~20mim后,在波长为400~600nm处比色即得;
——总多酚含量的测定方法是:(a)制备对照品溶液:在1~10mg没食子酸对照品中加入水,经超声溶解后定容至2~25ml,即得每1ml含没食子酸0.25g的溶液;(b)制备标准曲线:分别将0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml的对照品溶液用水定容至50ml,摇匀,即得;(c)制备样品溶液:将0.1~2.0ml黑果枸杞果汁用水溶解,并用水逐级稀释1~200倍,即得样品溶液;(d)测定样品溶液吸光度值:在样品溶液中加福林-酚显色剂,摇匀后加入碳酸钠溶液,定容至10ml;以加入福林-酚显色剂和碳酸钠的溶液为空白,用紫外-可见光分光光度计在波长为300~800nm处测定样品溶液吸光度值;(e)计算样品溶液中总多酚含量。
2.如权利要求1所述的黑果枸杞果汁质量控制方法,其特征在于:所述总花色苷含量的测定方法中的步骤(1)中盐酸的质量浓度为0.01~1%,乙醇的质量浓度为50~90%。
3.如权利要求1所述的黑果枸杞果汁质量控制方法,其特征在于:所述原花青素含量的测定方法中的步骤④中香草醛甲醇溶液的质量浓度为4%。
4.如权利要求1所述的黑果枸杞果汁质量控制方法,其特征在于:所述总多酚含量的测定方法中的步骤(d)中碳酸钠溶液的质量浓度为20%。
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- 2010-05-20 CN CN201010179454A patent/CN101852729A/zh active Pending
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