CN104198653A - 一种黑枸杞的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种黑枸杞的检测方法，通过简单的薄层色谱法和/或显色法，即能准确的对黑枸杞进行检测，该方法简单快捷且结果准确，专属性强，操作简单快捷，且对其有效成分的检测更加全面，进一步满足实际检测需求。
Description
技术领域
本发明涉及一种黑枸杞的检测方法，属于医药技术领域。
背景技术
黑枸杞(学名：LyciumruthenicumMurr)，又称黑果枸杞，是枸杞的一种，藏药名“旁玛”，属于茄科枸杞属，分布于中国西北、西北几省及西藏和欧洲中亚。黑枸杞是我国特种经济植物资源之一，具有药食同源型滋补功能。黑枸杞味甘、性平，富含蛋白质、枸杞多糖、氨基酸、维生素、矿物质、微量元素等多种营养成分，还含有丰富的黑果色素—天然原花青素(红果枸杞不含)，其OPC含量超过蓝莓(黑枸杞含OPC3690mg/100g；蓝莓含OPC330～3380mg/100g)，是迄今为止，发现OPC含量最高的天然野生植物。原花青素OPC是最有效的天然水溶性自由基清除剂，其功效是Vc的20倍、VE的50倍。因此，黑枸杞被誉为野生的“蓝色妖姬”，比一般红色枸杞更珍贵更有药用价值。现代科学认为,黑枸杞可以降低胆固醇，兴奋大脑神经，增强免疫功能，防治癌症，抗衰老和具有美容的作用。黑枸杞提取物可促进细胞免疫功能，增强淋巴细胞增殖及肿瘤坏死因子的生成，对白细胞介素有双向调解作用，能缓解糖尿病患者"三多一少"的症状。
现有技术中对黑枸杞的检测方法很少，主要以经验、感官和简单的水泡进行检测，专属性不强，无法对其药效成分做出较为全面的评价，而使用HPLC-MS进行鉴别检测虽然结果准确，但费时、费力、费用偏高。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种黑枸杞的检测方法，该方法简单快捷且结果准确，专属性强。
本发明的技术方案如下：
一种黑枸杞的检测方法，包括如下鉴别方法和/或显色方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比4～6：9～12：1～2：0.1～1的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点；
显色方法：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加酸性溶液使pH＜6，溶液由紫色变为红色，再继续加入碱性溶液使pH＞8后，溶液由红色变为蓝色；继续加入酸性溶液使pH＜6，溶液颜色不变仍为蓝色。
本发明优选的，鉴别方法中展开剂二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的体积比为5：10：1.2：0.5。
本发明优选的，显色方法中的酸性溶液为盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸中的一种或几种；碱性溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、氨水中的一种或几种。
本发明进一步优选的，显色方法中的酸性溶液为1mol/L的盐酸溶液；碱性溶液为1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的氢氧化钾溶液。
本发明优选的，一种黑枸杞的检测方法，显色方法如下：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/L的盐酸溶液使pH为2-5，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾使pH为9-11后，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/L的盐酸溶液使pH为2-5，溶液颜色不变仍为蓝色。
本发明进一步优选的，一种黑枸杞的检测方法，显色方法如下：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/L的盐酸溶液使pH为4，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钠使pH为9后，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/L的盐酸溶液使pH为4，溶液颜色不变仍为蓝色。
本发明的有益效果
本发明通过简单的薄层色谱法和/或显色法，即能准确的对黑枸杞进行检测。本发明通过大量试验并付出了创造性的劳动，优选出了展开剂的最佳比例，对其有效成分的检测更加全面，进一步满足实际检测需求；本发明的方法专属性较强，结果准确，操作简单快捷。
附图说明
图1为黑枸杞的薄层色谱图谱；
其中，图1中，1为儿茶素对照；2为黑枸杞对照；3为黑枸杞样品。
具体实施方式
下述实验例和实施例用于进一步说明但不对本发明限制。
实验例和实施例所用的黑枸杞均为金诃藏药股份有限公司提供，批号20131201、20131202和20131203。
实验例1：黑枸杞鉴别实验
试验样品：黑果枸杞(金诃藏药股份有限公司)。
黑果枸杞对照品：金诃藏药股份有限公司提供，批号：20130701.
儿茶素对照品：中国药品生物制品鉴定研究所，批号：877-200001
1.供试品制备：取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解；
2.对照品的选择：选择黑果枸杞作为对照药材，同时选择原花青素中结构最简单的儿茶素作为对照品，增强鉴别的准确性、针对性。
3.展开系统的选择：黑枸杞未发现有关TLC的鉴别实验文献，使用乙酸乙酯-甲醇进行条件的摸索，结果不理想。加入甲苯后，斑点能明显分开，但考虑甲苯毒性较大，使用二甲苯，并使用甲酸扫尾后，斑点分离清楚，Rf值适中。使用直接(254nm，365nm)观察，10％硫酸乙醇溶液、5％磷钼酸乙醇、香草醛、茚三酮等显色，结果发现使用5％磷钼酸乙醇斑点清晰，且数量较多，故选用5％磷钼酸乙醇进行显色后观察。总结如下：以体积比4～6：9～12：1～2：0.1～1的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点。其中，以体积比5：10：1.2：0.5的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开效果最好。
实验例2：黑枸杞显色实验
原花青素为黑枸杞中主要的药效成分，很多不良商贩使用其他品种，通过染色的方法冒充黑枸杞，根本不含原花青素。考虑植物色素类有可能含有生物指示剂类的特异性变色反应可用来简便的鉴别黑枸杞。通过研究发现：黑枸杞水提取物在酸性(pH＜6)条件下显红色，再加入过量的碱液，在碱性条件(pH＞8)下则变为蓝色，可用于鉴别黑枸杞。试验中分别使用了不同浓度的盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸作为酸性调节剂；使用了氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、氨水作为碱性调节剂，发现上述调节剂均能较好的实现变色效果，尤其使用1mol/L的盐酸溶液、1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的氢氧化钾溶液进行酸碱调节，显色更明显；试验还发现，酸性pH为2-5、碱性pH为9-11显色明显，尤其是酸性pH为4、碱性pH为9时，显色尤为清晰明确。
故显色试验描述为：取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加酸性溶液使pH＜6，溶液由紫色变为红色，再继续加入碱性溶液使pH＞8后，溶液由红色变为蓝色；继续加入酸性溶液使pH＜6，溶液颜色不变仍为蓝色，显色反应的酸性pH以2-5为佳，碱性pH以9-11为佳，尤其是酸性pH为4、碱性pH为9时，显色尤为清晰明确。
以下实施例均能实现实验例的效果。
实施例1、一种黑枸杞的检测方法，包括如下鉴别方法和显色方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比5：10：1.2：0.5的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点；
显色方法：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/L的盐酸溶液使pH为4，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钠使pH为9后，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/L的盐酸溶液使pH为4，溶液颜色不变仍为蓝色。
实施例2、一种黑枸杞的检测方法，包括如下鉴别方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比5：10：1.2：0.5的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点。
实施例3、一种黑枸杞的检测方法，包括如下鉴别方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比4：9：1：0.1的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点。
实施例4、一种黑枸杞的检测方法，包括如下鉴别方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比612：2：1的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点。
实施例5、一种黑枸杞的检测方法，包括如下显色方法：
显色方法：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/L的硫酸溶液使pH为2，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钾溶液使pH为11，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/L的硫酸溶液使pH为2，溶液颜色不变仍为蓝色。
实施例6、一种黑枸杞的检测方法，包括如下鉴别方法和显色方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比4：12：2：1的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点；
显色方法：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/l的盐酸溶液使pH为5，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钠溶液使pH为10，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/l的盐酸溶液使pH为5，溶液颜色不变仍为蓝色。
Claims (6)
1.一种黑枸杞的检测方法，特征在于，包括如下鉴别方法和/或显色方法：
鉴别方法：
取黑枸杞粗粉1g，加水50ml振摇提取，过滤，滤液用乙酸乙酯萃取3次，每次20ml，萃取液合并后挥干，残渣加5ml甲醇溶解，同法制备黑枸杞对照品溶液；另取儿茶素对照适量，加甲醇制成每1ml含0.2mg的对照品溶液；照薄层色谱法操作，取上述三种溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比4～6：9～12：1～2：0.1～1的二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，晾干，喷以体积百分比5％磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰，供试品色谱中，在与对照品相应的位置，显相同的斑点；
显色方法：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加酸性溶液使pH＜6，溶液由紫色变为红色，再继续加入碱性溶液使pH＞8后，溶液由红色变为蓝色；继续加入酸性溶液使pH＜6，溶液颜色不变仍为蓝色。
2.权利要求1所述的检测方法，特征在于，鉴别方法中展开剂二甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸的体积比为5：10：1.2：0.5。
3.权利要求1所述的检测方法，特征在于，显色方法中的酸性溶液为盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、醋酸中的一种或几种；碱性溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、氨水中的一种或几种。
4.权利要求3所述的检测方法，特征在于，显色方法中的酸性溶液为1mol/L的盐酸溶液；碱性溶液为1mol/L的氢氧化钠或1mol/L的氢氧化钾溶液。
5.权利要求1所述的检测方法，特征在于，显色方法如下：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/L的盐酸溶液使pH为2-5，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钠或氢氧化钾使pH为9-11后，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/L的盐酸溶液使pH为2-5，溶液颜色不变仍为蓝色。
6.权利要求5所述的检测方法，特征在于，显色方法如下：
取黑枸杞粗粉0.5g，加水50ml振摇提取，提取液过滤，滤液加1mol/L的盐酸溶液使pH为4，溶液由紫色变为红色，再继续加入1mol/L的氢氧化钠使pH为9后，溶液由红色变为蓝色；继续加入1mol/L的盐酸溶液使pH为4，溶液颜色不变仍为蓝色。
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: The 250101 Ji'nan Road, Shandong province hi tech Development Zone, No. 322 room 501-506 Applicant after: SHANDONG JINHE DRUG RESEARCH DEVELOPMENT CO.,LTD. Address before: The 250101 Ji'nan Road, Shandong province hi tech Development Zone, No. 322 room 501-506 Applicant before: SHANDONG ARURA PHARMACEUTICAL RESEARCH & DEVELOPMENT Co.,Ltd. |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 501-506 room 322, Shun Feng Road, hi tech Zone, Shandong, Ji'nan, 250101 Patentee after: Jinhe Tibetan Medicine (Shandong) Health Industry Co.,Ltd. Address before: 501-506 room 322, Shun Feng Road, hi tech Zone, Shandong, Ji'nan, 250101 Patentee before: SHANDONG JINHE DRUG RESEARCH DEVELOPMENT Co.,Ltd. |
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| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200424 Address after: 250000 Panwang Road, Longshan Street, Zhangqiu District, Jinan City, Shandong Province, 24167 Patentee after: SHANDONG TENGGUI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 501-506 room 322, Shun Feng Road, hi tech Zone, Shandong, Ji'nan, 250101 Patentee before: Jinhe Tibetan Medicine (Shandong) Health Industry Co.,Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right |