CN106932499B - 一种藏药材酸藤果的检测方法 - Google Patents
一种藏药材酸藤果的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种酸藤果的检测方法，包括TLC检测法和/或HPLC检测法。其中TLC法使用小极性的展开剂配合显色剂，所得展开图谱中仅有1个明显斑点，特征明显，几无干扰，便于观察；HPLC检测法通过优选特定色谱条件，所得色谱图0‑15min内仅在12min处有一明显独峰，几无其它杂峰，特征明显，这在成分复杂的天然药材的HPLC图谱中极为罕见。本发明通过上述TLC检测法、HPLC检测法对酸藤果进行定性检测，有利于质量监控，一定程度上补充了现有技术的不足。
Description
技术领域
本发明涉及一种藏药材的检测方法，特别是涉及酸藤果的检测方法，属于医药技术领域。
背景技术
酸藤果，属于藏族习用药材，为紫金牛科植物叶酸藤果Embelia oblongifoliaHemsl.的干燥成熟果实。秋季果实成熟时采摘，晒干，常用于杀虫，提升胃温等。藏药制剂中有多种以酸藤果为主药的藏药制剂，如复方酸藤消痔胶囊等。
酸藤果，现在执行藏药部颁标准WS3-BC-0118-95，该标准仅仅采用理化鉴别酸藤果的方法；文献《酸藤果的营养和色素的研究》介绍了酸藤果的色素类成分，文献《白花酸藤果中苯酚类化学成分的研究》介绍了从白花酸藤果提出的多种成分，上述文献对于酸藤果的检测方法较为粗略单一，专属性差。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种酸藤果检测方法。
发明概述
本发明对现有的酸藤果质量标准进行了提高，使用专属性较强的TLC法和HPLC法对酸藤果进行了检测评价，保证产品的安全、有效、质量可控。
本发明的技术方案如下：
一种酸藤果检测方法，包括如下TLC法和/或HPLC法：
(1)TLC检测法：
取酸藤果样品粉末0.2-0.8g，通过如下方式1或方式2处理样品和对照药材，得供试品溶液和对照药材溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，展开剂的组成为体积比为8-12：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点；
其中，所述的
方式1为：样品粉末加体积浓度95％的乙醇10-50mL，超声处理10-50分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；
方式2为：样品粉末加水煎煮2次，每次加水20-50mL，所得煎煮液合并过滤后，冷却至30℃以下，加入乙醚或沸程30-60℃的石油醚萃取3次，每次加乙醚或石油醚20mL，水相浓缩至10-30mL，即供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；
(2)HPLC检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为80-95：5-20；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.1-1g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
优选的，一种酸藤果的检测方法，包括如下TLC法和/或HPLC法：
(1)TLC检测法：
取酸藤果样品粉末0.5g，加体积浓度95％的乙醇25mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂的组成为体积比为10：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点；
(2)HPLC检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为90：10；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.2g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
本说明书中所述的重量份与体积份的单位对应关系为g/mL或kg/L。
有益效果
(1)酸藤果的基础研究工作，几乎为空白，本发明尝试建立了酸藤果的定性测定方法，一定程度上补充了该技术空白。
(2)本发明的TLC法使用小极性的展开剂配合显色剂，所得色谱图中仅有1个明显斑点，特征明显，几无干扰，便于观察。
(3)天然药材化学成分非常复杂，通常所得HPLC图谱主峰、杂峰较多；本发明选择合适色谱条件，使主峰明显，几无杂峰，特征明显，有利于质量控制和定性检测。
下述实验例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1：TLC法的建立
供试品：酸藤果样品(金诃藏药股份有限公司提供，批号：20151101、20151102、20151103)
酸藤果对照药材(藏医药专家鉴定，批号：D20150101)
实验过程：中药成分较为复杂，容易形成干扰，实验过程中偶然发现，将酸藤果使用水提取后，使用乙醚或低沸程的石油醚萃取能达到去除杂质干扰的效果，点于硅胶G板，可见一淡黄色斑点。
经过实验，优化了提取方式，使用体积份数比95％乙醇进行超声提取，同时使用展开剂石油醚(30-60℃)-环己烷-丙酮，体积比8-12：3：1，可达到检测效果，尤其体积比10：3：1的展开剂可达到更优的效果。喷以体积份数比10％的硫酸乙醇显色后，为单一斑点，为酸藤果的特有斑点，能用于鉴别酸藤果，见图1。
实验例2：HPLC法的建立
试验仪器：高效液相色谱仪：Agilent 1260
电子天平：岛津AUW-220D型
供试品：酸藤果样品(金诃藏药股份有限公司提供，批号：20151101、20151102、20151103)
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸(90：10)为流动相；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min。理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.2g，加入95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。
结果：在该实验条件下，色谱在12.00min左右有一主峰，与相邻峰分离良好，结果见图2。
1、流动相的选择
尝试甲醇-水(50：50)、乙腈-水(35：65)等常规流动相体系进行摸索，结果各峰影响较大，不能达到相应的分离效果，如图3和图4，流动相为乙腈-水(35：65)，所得图谱主峰显现(15.3min)，但杂峰干扰较多；当使用甲醇-甲酸混合溶液后，峰形得到改善。经过大量实验，最终确定流动相为甲醇90％：浓度5％甲酸溶液为10％时，所得色谱图仅有一主峰，无其它明显杂峰干扰，其峰形较好，为酸藤果的特征峰，这种类似高纯度单一组分的HPLC色谱峰在天然药材中极为罕见，可用于定性检测。
2、检测波长的确定
使用DAD检测器，选择288nm作为检测波长时，该主峰达到最大分离效果，同时主峰最高最大，作为检测波长。
附图说明
图1为酸藤果的TLC展开示意图；
图2为流动相为甲醇-体积份数比5％甲酸(体积比90：10)的酸藤果HPLC检测色谱图；
图3为流动相为甲醇-水(体积比50：50)的酸藤果HPLC检测色谱图；
图4为流动相为乙腈-水(体积比35：65)的酸藤果HPLC检测色谱图。
其中，图1中，1为酸藤果对照药材；2为酸藤果样品；图2-图4中，横坐标为时间(min)，纵坐标为电信号强度(mAU)。
具体实施方式
下述实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实施例1、一种酸藤果的检测方法，包括如下TLC法和HPLC法：
(1)TLC定性检测法：
取酸藤果样品粉末0.5g，加体积浓度95％的乙醇25mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂的组成为体积比为10：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点；
(2)HPLC定性检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为90：10；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.2g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
实施例2、一种酸藤果的检测方法，包括如下TLC检测法：
取酸藤果样品粉末0.5g，加体积浓度95％的乙醇25mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂的组成为体积比为10：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点。
实施例3、一种酸藤果的检测方法，包括如下HPLC检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为90：10；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.1g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
实施例4、一种酸藤果的检测方法，包括如下TLC检测法：
取酸藤果样品粉末0.8g，样品粉末加水煎煮2次，每次加水20mL，所得煎煮液合并过滤后，冷却至30℃以下，加入沸程30-60℃的石油醚萃取3次，每次加石油醚20mL，水相浓缩至10-30mL，即供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，展开剂的组成为体积比为12：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点。
实施例5、一种酸藤果的检测方法，包括如下TLC检测法：
取酸藤果样品粉末0.2g，样品粉末加体积浓度95％的乙醇50mL，超声处理10分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，展开剂的组成为体积比为8：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点。
实施例6、一种酸藤果的检测方法，包括如下TLC检测法和HPLC检测法：
(1)TLC检测法：取酸藤果样品粉末0.2g，样品粉末加水煎煮2次，每次加水50mL，所得煎煮液合并过滤后，冷却至30℃以下，加入乙醚萃取3次，每次加乙醚20mL，水相浓缩至10-30mL，即供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，展开剂的组成为体积比为12：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点；
(2)HPLC检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为90：10；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末1g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得。
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
Claims (3)
1.一种酸藤果检测方法，其特征在于，包括如下TLC检测法和HPLC检测法：
(1)TLC检测法：
取酸藤果样品粉末0.2-0.8g，通过如下方式1或方式2处理样品和对照药材，得供试品溶液和对照药材溶液，照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上展开，展开剂的组成为体积比为8-12：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点；
其中，所述的
方式1为：样品粉末加体积浓度95％的乙醇10-50mL，超声处理10-50分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；
方式2为：样品粉末加水煎煮2次，每次加水20-50mL，所得煎煮液合并过滤后，冷却至30℃以下，加入乙醚或沸程30-60℃的石油醚萃取3次，每次加乙醚或石油醚20mL，水相浓缩至10-30mL，即供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；
(2)HPLC检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为80-95：5-20；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.1-1g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
2.根据权利要求1的酸藤果的检测方法，其特征在于，其中TLC检测法为：
取酸藤果样品粉末0.5g，加体积浓度95％的乙醇25mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂的组成为体积比为10：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1的酸藤果的检测方法，其特征在于，包括如下TLC检测法和HPLC检测法：
(1)TLC检测法为：
取酸藤果样品粉末0.5g，加体积浓度95％的乙醇25mL，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酸藤果对照药材0.5g，同法制备对照药材溶液；照薄层色谱法实验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，展开剂的组成为体积比为10：3：1的沸程30-60℃的石油醚-环己烷-丙酮混合液，展开后取出，晾干，喷以体积份数比10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰；在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的斑点；
(2)HPLC检测法：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶柱为色谱柱；以甲醇-体积份数比5％甲酸为流动相，二者体积比例为90：10；检测波长为288nm；流速：1.0ml/min；理论板数按主峰计算应不低于2000；
供试品溶液的制备：取酸藤果粉末0.2g，加入体积份数比95％乙醇50mL，超声处理30分钟，放冷，滤过，取续滤液，即得；
测定：精密吸取供试品溶液5～10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，在所得色谱图0-15min内仅在12±0.5min处有一明显独峰。
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Legal Events
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Address after: 250100 Shandong Province Jinan Hi-tech Zone Comprehensive Bonded Zone No. 1 North Section of Gangxing No. 3 Road Jinan Yaogu R&D Platform Area No. 3 Floor 8001 Applicant after: Jinhe Tibetan medicine (Shandong) Health Industry Co., Ltd. Address before: 250101 room 501-506, Shun Feng Road, high tech (Lixia) District, Ji'nan, Shandong, China (322) Applicant before: Shandong Jin He drug development research company limited |
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| CB02 | Change of applicant information | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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