CN106198837A - 老年咳喘片的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及老年咳喘片的质量检测方法，该检测方法采用薄层色谱法对老年咳喘片制剂中活性成分黄芪、白术、防风、甘草、淫羊藿、补骨脂药材分别进行定性鉴别，采用UPLC法对制剂中淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定。本发明提供的检测方法简化了提样步骤，操作简便，专属性强；缩短了含量测定时间，且同时进行多指标成分的检测，检测基线平稳、分离度好，检测准确度高、稳定性好，提高了效率，更加经济环保。
Description
技术领域
本发明中成药的质量检测，更具体地，涉及老年咳喘片的质量检测方法。
背景技术
老年咳喘片由防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术、黄精等多味中药材经提取加工制成，具有滋阴壮阳，扶正固本的功效，可以提高免疫力，促进病体康复，用于老年慢性支气管炎及各种体虚症。其中，淫羊藿和补骨脂是方中用量较大的重要药物。淫羊藿属植物的化学成分目前报道有70多种，主要是黄酮类，如淫羊藿苷，淫羊藿苷除具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效外，还有镇咳、祛痰与平喘作用；研究发现，补骨脂中的香豆素类可明显提高过敏性哮喘，对哮喘有明显的拮抗作用，补骨脂素和异补骨脂素即属呋喃香豆素类成分。但是老年咳喘片中这些重要的活性成分并没有通过科学的检测实现进行质控。
老年咳喘片的原标准收载于部颁标准《中药成方制剂》第九册，无定量检测方法。现有文献中报道有老年咳喘片中活性成分的鉴别及含量测定方法，但涉及的鉴别和测定方法，操作繁杂，专属性不强，方法不稳定，不能全面地对老年咳喘片产品进行定性鉴别，且不能实现同时多成分指标检测，从而不能科学控制老年咳喘片产品的质量。
为了更好地控制老年咳喘片的质量，研究提供一种操作简便、专属性强、分离度好，稳定性好、高效环保，且能同时进行多指标成分控制的老年咳喘片质量检测方法，已势在必行。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种老年咳喘片的质量检测方法，简化了提样步骤，操作简便，专属性强；缩短了含量测定时间，且同时进行多指标成分的检测，检测基线平稳、分离度好，检测准确度高、稳定性好，提高了效率，更加经济环保，可作为该制剂的重要质量检测方法。
具体而言，本发明提供一种老年咳喘片的质量检测方法，所述方法包括对活性成分防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术的鉴别以及对淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素含量的测定。
优选地，所述防风的鉴别是采用薄层色谱法，所述薄层色谱法中，采用的薄层板是硅胶G板，并以硫酸乙醇溶液为显色剂。
优选地，所述甘草的鉴别是采用薄层色谱法，所述薄层色谱法中，采用的对照品为甘草苷，采用的展开剂为体积比为13～18：1～3：1：0.5～1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水。
优选地，所述淫羊藿的鉴别是采用薄层色谱法，所述薄层色谱法中，以体积比为8～12:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，采用的显色剂为硫酸乙醇，薄层板采用硅胶G板。
优选地，所述补骨脂的鉴定采用薄层色谱法，供试品溶液的制备是取除去薄膜衣的老年咳喘片加乙酸乙酯后超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；所述薄层色谱法中，采用的薄层板是硅胶G板，以体积比为2～6:0.5～1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，不使用显色剂。
优选地，所述淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素含量的测定采用超高效液相色谱方法，所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相：体积比为20～40:80～60的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL。
优选地，所述活性成分防风的鉴别，包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末1～6g，加丙酮10～40mL，超声处理10～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材1～3g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品1～6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～5：1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
更优选地，所述活性成分防风的鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，研细，加丙酮15～30mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～2mL使溶解，作为供试品溶液。
进一步优选地，所述供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，研细，加丙酮20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。
为了实现优异的分离效果，发明人在步骤S5中选用硅胶G薄层板进行分离，与展开剂三氯甲烷-甲醇进行有效的结合，使得斑点之间的分离效果更好，同时，在本步骤中，发明人选择喷以10％硫酸乙醇溶液进行显色，使得斑点更加圆润清晰，不拖尾。
更优选地，所述鉴别方法步骤S5中，展开剂三氯甲烷-甲醇的体积比为4:1。
优选地，所述活性成分甘草的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片3～8g，研细，加乙醚20～60mL，加热回流0.5～3小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇20～40mL，加热回流0.5～3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20～60mL使溶解，用正丁醇提取2～4次，每次10～40mL，合并正丁醇液，用水洗涤2～4次，弃去水液，正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1～4mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材1～3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样品3～8g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5～10μL，对照药材与对照品1～3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13～18：1～3：1：0.5～1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在100～110℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
更优选地，所述活性成分甘草的鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片4～6g，研细，加乙醚30～50mL，加热回流0.5～2小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇25～35mL，加热回流0.5～2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30～50mL使溶解，用正丁醇提取2～3次，每次15～30mL，合并正丁醇液，用水洗涤2～3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1～3mL使溶解，作为供试品溶液。
进一步优选地，所述供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。
为了实现更加优异的分离效果，发明人在步骤S3中，通过分析甘草中的化学成分，结合步骤S1供试品溶液的提取方法，发现甘草苷在此条件下最易分离出来，最终选用甘草苷作为对照品，从而能更准确的鉴别甘草药材，同时，在步骤S5中，发明人选用展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水，并选用一定的比例进行分离，使得斑点之间分开的更加清晰，斑点更圆整。
更优选地，所述鉴别方法步骤S5中，展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水的体积比为15:2:1:0.5。
优选地，所述活性成分淫羊藿的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2～5g，研细，加乙醇5～20mL，温浸20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品片2～5g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～12:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100～110℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点。
更优选地，所述活性成分淫羊藿的鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙醇10mL，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。
为了实现更加优异的分离效果，发明人在步骤S4中，选用硅胶G薄层板进行分离，与展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水进行有效的结合，使得斑点之间的分离效果更好，同时，在本步骤中，发明人选择喷以10％硫酸乙醇溶液进行显色，使得斑点更加圆润清晰，不拖尾，且在日光下能直接显色。
更优选地，所述鉴别方法步骤S4中，所述展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水的体积比为10:1:1:1。
优选地，所述活性成分补骨脂的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片3～6g，研细，加乙酸乙酯10～30mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品3～6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～6:0.5～1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。
更优选地，所述活性成分补骨脂的鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙酸乙酯20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液。
更优选地，所述鉴别方法步骤S4中，所述展开剂正己烷-乙酸乙酯的体积比为4:1。
本发明在补骨脂的鉴别方法步骤S4中，未使用显色剂，简化了步骤，且能达到药典中使用显色剂的最佳效果，使得操作步骤更简便，更节能环保。
优选地，所述活性成分黄芪的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末5～10g，加水饱和正丁醇30～60mL，回流0.5～3小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤1～3次，每次15～35mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤1～3次，每次15～35mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1～5mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材2～4g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品5～10g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各1～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10～15:5～8:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度100℃～110℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点。
更优选地，所述黄芪的鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末8g，加水饱和正丁醇40mL，回流1小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1mL溶解，作为供试品溶液。
更优选地，所述黄芪的鉴别方法步骤S4中，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水的体积比为13:7:2。
所述黄芪的鉴别方法步骤S4中，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水可以按照常规的溶剂配置方法，配置后置于常温条件下保存，按照常规步骤操作。
优选地，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水在使用前按照如下方法操作：展开剂在配置之后置于10℃以下的温度，静置过夜后，取下层溶液使用。
优选地，所述活性成分白术的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片1～4g，加正己烷1～5mL，超声处理20～50分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.2～1g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品1～4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40～60:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点；
更优选地，所述活性成分白术的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，加正己烷2mL，超声处理30分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
优选地，所述活性成分淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素含量的测定包括以下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，加入甲醇10～30mL，称定重量，超声处理后放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品10～13mg、补骨脂素对照品16～19mg、异补骨脂素对照品12～16mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
所述测定的色谱条件为：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相：体积比为20～40:80～60的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL。
更优选地，所述活性成分淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的含量测定步骤S1中，所述甲醇的加入量为25mL；所述超声处理的时间为20～40min，超声处理的功率为200W，频率为40KHz。
进一步优选地，所述超声处理的时间为30min。
更优选地，所述活性成分淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的含量测定步骤S2中，所述对照品溶液的制备方法为：精密称取淫羊藿苷对照品10.76mg、补骨脂素对照品17.67mg、异补骨脂素对照品14.18mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液。
更优选地，所述活性成分淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的含量测定步骤S4中，所述流动相乙腈-水的体积比为30～40:70～60。
进一步优选地，所述流动相乙腈-水的体积比为30:70。
在本发明所提供的检测条件下，能同时控制三种成分的含量，提高了质量标准，在检测过程中，缩短了有效成分的出峰时间，节约了时间，提高了效率。
本发明实现了如下有益效果：
1、在鉴别方法中，本发明首次将老年咳喘片中的六味药材同时进行鉴别，有效提高了老年咳喘片的质量标准，本发明的鉴别方法简化了提样步骤，操作简便，斑点之间分离度好，斑点圆润不拖尾，专属性强，更加有利的保障了产品的质量。
本发明在防风的鉴别过程中，发明人通过分析防风的化学成分，优先采用硅胶G薄层板分离样品，与展开剂三氯甲烷-甲醇进行有效的结合，使得样品在特定的薄层板上分离效果更好，同时，喷以10％的硫酸乙醇溶液进行显色，显色更清晰，在紫外灯下检视，斑点之间分离度好，斑点圆润清晰不拖尾，能很好的与防风对照品进行对照；
本发明在甘草的鉴别过程中，发明人通过分析甘草中的化学成分，选用甘草苷对照品，结合供试品溶液的提取方法，并选用特定比例的展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水，使得斑点之间分离度更好，斑点圆润清晰不拖尾，选用甘草苷，更容易对比出样品中的甘草成分；
本发明在淫羊藿的鉴别过程中，发明人通过分析淫羊藿的化学成分，优选选用硅胶G薄层板分离样品，并选用特定的展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水，使得薄层板与展开剂结合，更加适合老年咳喘片中淫羊藿样品的分离，同时，发明人选择喷以10％的硫酸乙醇溶液进行显色，使得斑点显色更加清晰，不拖尾，且在日光下能直接显色；
本发明在补骨脂的鉴别过程中，样品用展开剂展开后，直接晾干即可显色，本步骤不使用显色剂，简化了步骤，且能达到《中国药典》中补骨脂药材鉴别项下使用了显色剂后的最佳效果。同时，本发明在供试品溶液的制备过程中，选用加乙酸乙酯后，进行超声处理，在此条件下，样品中的补骨脂有效成分，更容易提取出来，因此，在后续的样品分离过程中，目标斑点之间的Rf值差异显著，能更加准确的判断供试品与补骨脂对照的斑点是否在同一位置。
2、在含量测定方法中，本发明首次采用UPLC含量测定方法，同时测定了老年咳喘片中三种成分的含量，在检测过程中，大大缩短了有效成分的出峰时间，且检测基线平稳、分离度好，检测准确度高、稳定性好，提高了效率，更加经济环保。
附图说明
图1为实施例1中防风的鉴别结果图：其中序号1～14依次代表：1～4：老年咳喘片样品，5～6：防风对照药材，7～10：阴性对照，11～12：5-O-甲基维斯阿米醇苷，13～14：升麻素苷；
图2为实施例1中甘草的鉴别结果图：其中序号1～8依次代表：1～2：老年咳喘片样品，3～5：甘草对照药材，6～7：阴性对照，8：甘草苷；
图3为实施例1中淫羊藿的鉴别结果图：其中，图3A为10％的硫酸乙醇溶液显色图，图3B为365nm下的荧光显色图；图3A、图3B中，序号1～6依次代表：1～2：老年咳喘片样品，3～4：淫羊藿苷，5～6：阴性对照；
图4为实施例1中补骨脂的鉴别结果图：其中序号1～6依次代表：1～2：老年咳喘片样品，3～4：补骨脂混合对照品，5～6：阴性对照；
图5为实施例1中黄芪的鉴别结果图：其中，图5A为10％的硫酸乙醇溶液显色图，图5B为365nm下的荧光显色图；图5A、图5B中，序号1～6依次代表：1～2：老年咳喘片样品，3～4：黄芪对照药材，5～6：阴性对照；
图6为实施例1中白术的鉴别结果图：其中序号1～6依次代表：1～2：老年咳喘片样品，3～4：白术对照药材，5～6：阴性对照；
图7为实施例12中混合对照品溶液的UPLC色谱图；
图8为实施例12中供试品溶液的UPLC色谱图；
图9为实施例12中缺淫羊藿的阴性对照UPLC色谱图；
图10为实施例12中缺补骨脂的阴性对照UPLC色谱图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本实施例所用的原料和设备均为本技术领域常规市购的原料和设备。
以下各实施例中涉及的仪器以及试剂包括：超高效液相色谱仪(Waters公司，ACQUITYUPLC H CLASS)；电子分析天平(METTLER TOLEDO公司，AB204-S)、KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司，功率200W，频率40KHz)。淫羊藿苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号110737-200415)；补骨脂素对照品(中国食品药品检定研究院，批号110739-201416，纯度：99.9％)；异补骨脂素对照品(中国食品药品检定研究院，批号110738-201313)；黄芪对照药材(中国食品药品检定研究院，批号120974-201311)；白术对照药材(中国食品药品检定研究院，批号120925-201310)；防风对照药材(中国食品药品检定研究院，批号120947-200907)；升麻素苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号111522-201511)；5-O-甲基阿斯维米醇苷(中国食品药品检定研究院，批号111710-200602)；甘草对照药材(中国食品药品检定研究院，批号120904-201318)；甘草苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号111610-201106)；老年咳喘片(批号：20160204～20160206)；水为超纯水，乙腈(色谱纯)，其他试剂均为分析纯。
实施例1按照以下方法对老年咳喘片中活性成分进行鉴别
A、活性成分防风的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，研细，加丙酮20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材1g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品3g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B、活性成分甘草的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样5g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5μL，对照药材与对照品各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:2:1:0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
C、活性成分淫羊藿的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙醇10mL，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
D、活性成分补骨脂的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙酸乙酯20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
E、活性成分黄芪的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末8g，加水饱和正丁醇40mL，回流1小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材3g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品8g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水(10℃以下，静置过夜的下层溶液)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
F、活性成分白术的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，加正己烷2mL，超声处理30分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
本实施例中，防风成分的鉴别结果如图1所示；甘草成分的鉴别结果如图2所示；淫羊藿成分的鉴别结果如图3所示；补骨脂成分的鉴别结果如图4所示；黄芪成分的鉴别结果如图5所示；白术成分的鉴别结果如图6所示。
由图1～图6可知，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。且活性成分补骨脂的鉴别过程中，不使用显色剂直接就能显色，而且显色特别清晰，斑点圆润。
实施例2按照以下方法对老年咳喘片中活性成分进行鉴别
A、活性成分防风的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末1g，研细，加丙酮10mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材2g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品1g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B、活性成分甘草的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘3g，研细，加乙醚20mL，加热回流0.5小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇20mL，加热回流0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用正丁醇提取2次，每次40mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材2g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样3g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各10μL，对照药材与对照品3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
C、活性成分淫羊藿的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，研细，加乙醇5mL，温浸20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
D、活性成分补骨脂的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片3g，研细，加乙酸乙酯10mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品3g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
E、活性成分黄芪的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末5g，加水饱和正丁醇30mL，回流0.5小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤1次，每次35mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤1次，每次35mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇5mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材2g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品5g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10:5:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度100℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
F、活性成分白术的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片1g，加正己烷1mL，超声处理20分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.2g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品1g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
本实施例中，依据对防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术成分的鉴别可知，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰，斑点清晰程度略差于实施例1。
实施例3按照以下方法对老年咳喘片中活性成分进行鉴别
A、活性成分防风的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末6g，研细，加丙酮40mL，超声处理50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材3g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为5:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B、活性成分甘草的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘8g，研细，加乙醚60mL，加热回流3小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇40mL，加热回流3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水60mL使溶解，用正丁醇提取4次，每次10mL，合并正丁醇液，用水洗涤4次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇4mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样8g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5μL，对照药材与对照品1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为18:3:1:0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在110℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
C、活性成分淫羊藿的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片5g，研细，加乙醇20mL，温浸40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品5g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
D、活性成分补骨脂的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片6g，研细，加乙酸乙酯30mL，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为6:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
E、活性成分黄芪的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末10g，加水饱和正丁醇60mL，回流3小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤3次，每次15mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤3次，每次15mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇3mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材4g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品10g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:8:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度110℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
F、活性成分白术的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，加正己烷5mL，超声处理50分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材1g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为60:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
本实施例中，依据对防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术成分的鉴别可知，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。斑点清晰程度略差于实施例1。
实施例4按照以下方法对老年咳喘片中活性成分进行鉴别
A、活性成分防风的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，研细，加丙酮15mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材3g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品3g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B、活性成分甘草的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘4g，研细，加乙醚30mL，加热回流0.5小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇25mL，加热回流0.5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30mL使溶解，用正丁醇提取2次，每次30mL，合并正丁醇液，用水洗涤2次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5μL，对照药材与对照品1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:2:1:0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
C、活性成分淫羊藿的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙醇20mL，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为9:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
D、活性成分补骨脂的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙酸乙酯15mL，超声处理25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为12:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
E、活性成分黄芪的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末8g，加水饱和正丁醇50mL，回流2小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤2次，每次30mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤2次，每次30mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇2mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材3g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品8g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
F、活性成分白术的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，加正己烷4mL，超声处理40分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材1g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为55:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
本实施例中，依据对防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术成分的鉴别可知，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。斑点清晰程度略差于实施例1.
本实施例中，依据对防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术成分的鉴别可知，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。斑点清晰程度略差于实施例1，略优于实施例2、实施例3。
实施例5按照以下方法对老年咳喘片中活性成分进行鉴别
A、活性成分防风的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，研细，加丙酮30mL，超声处理40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材3g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品3g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B、活性成分甘草的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘6g，研细，加乙醚50mL，加热回流2小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇35mL，加热回流2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水50mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5μL，对照药材与对照品1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:2:1:0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
C、活性成分淫羊藿的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙醇15mL，温浸25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
D、活性成分补骨脂的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙酸乙酯25mL，超声处理35分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
E、活性成分黄芪的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末8g，加水饱和正丁醇35mL，回流2.5小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤3次，每次20mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤3次，每次20mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材3g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品8g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为7:4:1的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
F、活性成分白术的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，加正己烷3mL，超声处理35分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材1g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为45:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
本实施例中，依据对防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术成分的鉴别可知，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。斑点清晰程度略差于实施例1，略优于实施例2、实施例3。
实施例6按照以下方法对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声30min，超声功率200W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品10.76mg、补骨脂素对照品17.67mg、异补骨脂素对照品14.18mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm)；流动相：体积比为30:70的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL；
检测结果显示，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。
实施例7按照以下方法对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，超声20min，超声功率200W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品10mg、补骨脂素对照品16mg、异补骨脂素对照品12mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm)；流动相：体积比为20:80的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL；
检测结果显示，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。
实施例8按照以下方法对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇30mL，称定重量，超声40min，超声功率200W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品13mg、补骨脂素对照品19mg、异补骨脂素对照品16mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm)；流动相：体积比为40:60的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL；
检测结果显示，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。
实施例9按照以下方法对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，称定重量，超声25min，超声功率200W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品12mg、补骨脂素对照品18mg、异补骨脂素对照品15mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm)；流动相：体积比为35:65的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL；
检测结果显示，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。
实施例10按照以下方法对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15mL，称定重量，超声35min，超声功率200W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品11mg、补骨脂素对照品17mg、异补骨脂素对照品13mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm)；流动相：体积比为30:70的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL；
检测结果显示，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。
实施例11按照以下方法对老年咳喘片进行质量检测：
老年咳喘片中活性成分防风、甘草、淫羊藿、补骨脂的鉴别：
A、活性成分防风的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，研细，加丙酮20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材1g，同供试品溶液的方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品3g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
B、活性成分甘草的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样5g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5μL，对照药材与对照品各1μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15:2:1:0.5的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
C、活性成分淫羊藿的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙醇10mL，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
D、活性成分补骨脂的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙酸乙酯20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品4g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、补骨脂素与异补骨脂素对照品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
E、活性成分黄芪的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末8g，加水饱和正丁醇40mL，回流1小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材3g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品8g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水(10℃以下，静置过夜的下层溶液)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度105℃下加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
F、活性成分白术的鉴别：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，加正己烷2mL，超声处理30分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声30min，超声功率200W，频率40KHz，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品10.76mg、补骨脂素对照品17.67mg、异补骨脂素对照品14.18mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm)；流动相：体积比为30:70的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL；
检测结果显示，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。
对比例1
与实施例1相比，区别仅在于，所述活性成分防风的鉴别步骤S5中，吸取上述4种溶液各10μL，分别点于同一薄层板GF254板上，以体积比为4:1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干后置365nm紫外灯下检视。其余操作与实施例1相同。
由防风成分的鉴别结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，难以准确判断供试品与防风对照的斑点是否在相同位置，在紫外灯下显示，斑点呈现长条形，连在一起，严重拖尾。
对比例2
与实施例1相比，区别仅在于，所述活性成分甘草的鉴别步骤S3中，选用甘草酸单铵盐作为对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；步骤S5中，照薄层色谱法鉴别中，展开剂选用《中国药典》中甘草鉴别项中的展开剂。其余操作与实施例1相同。
由甘草成分的鉴别结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，在对照品相应的位置上，无斑点显色，且在紫外灯下显示，其余斑点都呈现长条形，有拖尾现象。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于，所述活性成分淫羊藿的鉴别步骤S4中，照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各10μL，分别点于同一H板上，以体积比为10:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝溶液，在105℃加热至斑点显色，后置365nm紫外灯下检视。其余操作与实施例1相同。
由淫羊藿成分的鉴别结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，在紫外灯下显示暗红色斑点，显色不清晰。
对比例4
采用《中国药典》补骨脂药材项下鉴别方法鉴别老年咳喘片中的补骨脂药材，与实施例1相比，不同之处在于增加了显色步骤：喷10％氢氧化钾甲醇溶液，置365nm紫外光灯下检视。其余操作与实施例1相同。
由补骨脂成分的鉴别结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，检视的结果同实施例1。结果表明：本发明实施例1在简化了显色步骤的条件下，能达到与《中国药典》单味药材补骨脂鉴别相同的技术效果。
对比例5
与实施例1相比，区别仅在于，所述活性成分补骨脂的鉴别步骤S1中，所述供试品溶液的制备方法为：取老年咳喘片20片,除去薄膜衣,研细,加乙醚40ml,振摇1h,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯2ml使溶解,作为供试品溶液。其余操作与实施例1相同。
由补骨脂成分的鉴别结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，斑点不圆润，有拖尾现象，目标斑点之间的Rf值有差异，难以准确判断供试品与补骨脂对照的斑点是否在相同位置，且斑点清晰程度差于实施例1～实施例5中显示的补骨脂的鉴别结果。
对比例6
按照以下方法对老年咳喘片中活性成分淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素进行含量测定
S1.供试品溶液的制备：取本品40片，除去薄膜衣，研细。取约5g，精密称定，置锥形瓶中，加入甲醇25mL，称定重量，置水浴上加热回流40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂对照品适量，制成含量分别为0.1328，0.0366，0.0378g/L的混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.色谱条件：HypersIL C18柱(4.6mm×200mm，5um)，柱温40℃，流动相为体积比为30:70的乙腈-1g/L磷酸，流量1.0mL/min，检测波长260nm，进样量10μL；
S5.检测方法：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
结果显示，采用本对比例方法进行检测，谱图基线不平稳，出峰时间在20分钟之后，检测时间需要25～30分钟，不能同时检测出淫羊藿甘、补骨脂素、异补骨脂素三种成分，且目标成分与杂质之间不能完全分离，含量测定不稳定。
实施例12专属性试验、线性关系考察、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验及样品含量测定
按照实施例6的方法处理供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液，色谱条件同实施例6，进行如下试验：
(1)专属性试验：取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各2g，按实施例6项下的色谱条件测定。结果，阴性对照溶液色谱在淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素色谱峰保留时间一致的位置上无色谱峰。色谱图如图7～图10。
(2)线性关系考察：分取实施例6项下混合对照品溶液各2g，加入甲醇稀释制成每1mL含淫羊藿苷5.38、10.76、26.90、53.80、107.60、215.20、430.40μg的系列溶液，含补骨脂素7.06、14.12、35.31、70.61、141.22、282.44、564.88μg的系列溶液，含异补骨脂素5.67、11.34、28.36、56.72、113.44、226.88、453.76μg的系列溶液，按实施例6项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度(x，μg/mL)为横坐标、峰面积(y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程分别为y淫羊藿苷＝3294.8x+260.62(r＝0.9995)；y补骨脂素＝11188x-30642(r＝0.9996)；y异补骨脂素＝10356x+29067(r＝0.9993)。结果表明，三者进样量依次在5.38～430.40μg、7.06～564.88μg、5.67～453.76μg范围内与各自峰面积呈良好的线性关系。
(3)精密度试验：取实施例6项下混合对照品溶液，按实施例6项下色谱条件重复进样6次，记录峰面积。结果，淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的峰面积RSD分别为1.31％、1.10％、0.60％，表明仪器精密度良好。
(4)稳定性试验：取实施例6项下供试品溶液2g，分别于提取后0、2、4、6、8、12h时按实施例6项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，三者峰面积RSD依次为0.91％、1.24％、0.49％，表明供试品溶液在12h内稳定性良好。
(5)重复性试验：取同一样品(批号：20160204，株洲千金药业股份有限公司生产)各2g，按实施例6项下方法制备供试品溶液6份，按实施例6项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果淫羊藿苷的平均含量为0.453mg/g，RSD＝1.55％；补骨脂素的平均含量为0.291mg/g，RSD＝1.14％；异补骨脂素的平均含量为0.203，RSD＝1.42％，表明方法重复性良好。
(6)加样回收率试验：取同一批号(批号20160204，株洲千金药业股份有限公司生产)已知含量样品各2g，除去包衣，取约4g，精密称定，共6份，分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液2mL、补骨脂素对照品溶液1mL、异补骨脂素对照品1mL，及甲醇21mL，按实施例6项下供试品溶液制备方法操作及实施例6项下色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1～3。
表1加样回收率试验结果(淫羊藿苷)(n＝6)
表2加样回收率试验结果(补骨脂素)(n＝6)
表3加样回收率试验结果(异补骨脂素)(n＝6)
(7)样品含量测定：取3批样品(批号为20160204、20160205、20160206，株洲千金药业股份有限公司生产)各2g，按实施例6项下方法制备供试品溶液，再按实施例6项下色谱条件下进样测定并计算样品含量，结果见表4。
表4样品含量测定结果(mg/g)(n＝3)
由以上实验结果可知，本发明采用UPLC法代替传统的HPLC法进行含量测定，大大节省了时间与溶剂，且取得了较好的峰型与理论塔板数，目标成分与杂质完全分离，阴性无干扰。
本实验建立的定性、定量方法，通过多批次样品的测定，结果显示方法简易、专属性好且回收率高，可行性强，是作为老年咳喘片的最佳质量检测方法。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优势。本领域的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (12)
1.老年咳喘片的质量检测方法，其特征在于，包括：对活性成分防风、甘草、淫羊藿、补骨脂、黄芪、白术的鉴别以及对淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素含量的测定。
2.根据权利要求1所述老年咳喘片的质量检测方法，其特征在于，所述防风的鉴别是采用薄层色谱法，所述薄层色谱法中，采用的薄层板是硅胶G板，并以硫酸乙醇溶液为显色剂；
所述甘草的鉴别是采用薄层色谱法，所述薄层色谱法中，采用的对照品为甘草苷，采用的展开剂为体积比为13～18：1～3：1：0.5～1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水；
所述淫羊藿的鉴别是采用薄层色谱法，所述薄层色谱法中，以体积比为8～12:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，采用的显色剂为硫酸乙醇，薄层板采用硅胶G板；
所述补骨脂的鉴定采用薄层色谱法，供试品溶液的制备是取除去薄膜衣的老年咳喘片加乙酸乙酯后超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液；所述薄层色谱法中，采用的薄层板是硅胶G板，以体积比为2～6:0.5～1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，不使用显色剂。
3.根据权利要求1所述老年咳喘片的质量检测方法，其特征在于，所述淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素含量的测定采用超高效液相色谱方法，所述超高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相：体积比为20～40:80～60的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL。
4.根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于，所述活性成分防风的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末1～6g，加丙酮10～40mL，超声处理10～50分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取防风对照药材1～3g，同供试品溶液的方法制 成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1mL各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺防风阴性样品1～6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述4种溶液各5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～5：1的三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，晾干后置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
优选地，所述鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，加丙酮15～30mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～2mL使溶解，作为供试品溶液；
进一步优选供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末3g，加丙酮20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
优选地，所述鉴别方法步骤S5中，所述展开剂三氯甲烷-甲醇的体积比为4：1。
5.根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于，所述活性成分甘草的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片3～8g，研细，加乙醚20～60mL，加热回流0.5～3小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇20～40mL，加热回流0.5～3小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20～60mL使溶解，用正丁醇提取2～4次，每次10～40mL，合并正丁醇液，用水洗涤2～4次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1～4mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取甘草对照药材1～3g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.对照品溶液的制备：取甘草苷对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
S4.阴性对照溶液的制备：取缺甘草阴性样品3～8g，按供试品溶液制备方 法，制得阴性对照溶液；
S5.照薄层色谱法鉴别：吸取上述2种溶液各5～10μL，对照药材与对照品1～3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为13～18：1～3：1：0.5～1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在100～110℃的温度下加热至斑点显色清晰，后置365nm紫外灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
优选地，所述鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片4～6g，研细，加乙醚30～50mL，加热回流0.5～2小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇25～35mL，加热回流0.5～2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水30～50mL使溶解，用正丁醇提取2～3次，每次15～30mL，合并正丁醇液，用水洗涤2～3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
进一步优选供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片5g，研细，加乙醚40mL，加热回流1小时，滤过，弃去醚液，药渣加甲醇30mL，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水40mL使溶解，用正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用水洗涤3次，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
优选地，所述鉴别方法步骤S5中，展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水的体积比为15:2:1:0.5。
6.根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于，所述活性成分淫羊藿的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2～5g，研细，加乙醇5～20mL，温浸20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为0.5mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：另取缺淫羊藿阴性样品2～5g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述溶液和淫羊藿苷对照品溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8～12:1:1:1的乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100～110℃加热至斑点显色清晰，在供试品与对照品相应的位置上，显相同黄色斑点；后置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同暗红色斑点；
优选地，所述鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙醇10mL，温浸30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液；
优选地，所述鉴别方法步骤S4中，所述展开剂乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水的体积比为10:1:1:1。
7.根据权利要求1或2所述的质量检测方法，其特征在于，所述活性成分补骨脂的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片3～6g，研细，加乙酸乙酯10～30mL，超声处理20～40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1～3mL使溶解，作为供试品溶液；
S2.对照品溶液的制备；照《中国药典》含量测定项下方法制备，浓度为1mg/ml；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺补骨脂阴性样品3～6g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述供试品溶液、阴性对照溶液、对照品溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～6:0.5～1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；
优选地，所述鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片4g，研细，加乙酸乙酯20mL，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
优选地，所述鉴别方法步骤S4中，所述展开剂正己烷-乙酸乙酯的体积比为4:1。
8.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述活性成分黄芪的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末5～10g，加水饱和正丁醇30～60mL，回流0.5～3小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤1～3次，每次15～35mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤1～3次，每次15～35mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1～5mL溶解，作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取黄芪对照药材2～4g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺黄芪的阴性样品5～10g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各1～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为10～15:5～8:2的三氯甲烷-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在温度100℃～110℃下加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点；365nm紫外灯下显相同的橙黄色荧光斑点；
优选地，所述鉴别方法步骤S1中，供试品溶液的制备方法为：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末8g，加水饱和正丁醇40mL，回流1小时，过滤，用氨试液将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，合并正丁醇液，后用水将正丁醇液洗涤2次，每次20mL，将水液弃去，蒸干正丁醇液，取甲醇1mL溶解，作为供试品溶液；
优选地，所述鉴别方法步骤S4中，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水的体积比为13:7:2；
优选地，所述展开剂三氯甲烷-甲醇-水在配置之后置于10℃以下的温度下静置过夜，使用时取下层溶液；
所述活性成分白术的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片1～4g，加正己烷1～5mL，超声处理20～50分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.2～1g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品1～4g，按供试品溶液制备 方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各5～15μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为40～60:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点；
优选地，所述活性成分白术的鉴别方法包括如下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片2g，加正己烷2mL，超声处理30分钟，取上清液作为供试品溶液；
S2.对照药材溶液的制备：取白术对照药材0.5g，同S1供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：取缺白术的阴性样品2g，按供试品溶液制备方法，制得阴性对照溶液；
S4.照薄层色谱法鉴别：吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50:1的石油醚-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的桃红色主斑点，其中石油醚为60～90℃的石油醚。
9.根据权利要求1或3所述的质量检测方法，其特征在于，所述活性成分淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素含量的测定包括以下步骤：
S1.供试品溶液的制备：取除去薄膜衣的老年咳喘片粉末2g，加入甲醇10～30mL，称定重量，超声处理后放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
S2.对照品溶液的制备：精密称取淫羊藿苷对照品10～13mg、补骨脂素对照品16～19mg、异补骨脂素对照品12～16mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液；
S3.阴性对照溶液的制备：分别称取老年咳喘片中除淫羊藿、补骨脂之外的其他药味，按常规制剂工艺及上述供试品溶液制备项下方法制备阴性对照溶液；
S4.检测：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，即得；
所述测定的色谱条件为：色谱柱：ACQUITYUPLC HSS T3，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.8μm；流动相：体积比为20～40:80～60的乙腈-水，等度洗脱；流速：0.45mL·min-1；双波长检测：270nm、246nm；柱温：35℃；进样量：1μL。
10.根据权利要求9所述的质量检测方法，其特征在于，步骤S1中，所述甲醇的加入量为25mL；所述超声处理的时间为20～40min，超声处理的功率为200W，频率为40KHz；优选地，所述超声处理的时间为30min。
11.根据权利要求9所述的质量检测方法，其特征在于，步骤S2中，所述对照品溶液的制备方法为：精密称取淫羊藿苷对照品10.76mg、补骨脂素对照品17.67mg、异补骨脂素对照品14.18mg，分别置于20mL、25mL、25mL量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，即得对照品溶液，分别量取1mL对照品溶液稀释至10mL量瓶中，制成混合对照品溶液。
12.根据权利要求9所述的质量检测方法，其特征在于，步骤S4中，所述流动相乙腈-水的体积比为30～40:70～60；优选流动相乙腈-水的体积比为30:70。
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