CN107843657A - 通窍鼻炎片的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及通窍鼻炎片的质量检测方法，该检测方法采用薄层色谱法对通窍鼻炎片制剂中有效成分白芷、黄芪、苍耳子药材分别进行定性鉴别，采用UPLC法同时对制剂中升麻素苷、5‑O‑甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素进行含量测定。本发明提供的检测方法检测基线平稳、分离度好、检测准确度高、稳定性好；极大的缩短了含量测定时间，稳步提升了检测效率，有毒化学试剂用量大幅减少，更加经济环保；且同时进行多指标成分检测，为该品种液相指纹图谱库的建立提供一种快速高效可行的检测方法，易可为该品种的稳定性考察，提供一种较全面的有效成分稳定性的定量比对考察方法。

Description

通窍鼻炎片的质量检测方法

技术领域

本发明涉及中成药的质量检测，更具体地，涉及通窍鼻炎片的质量检测方法。

背景技术

通窍鼻炎片是由炒苍耳子、防风、黄芪、白芷、辛夷、炒白术、薄荷等六味中药材，经提取制成的纯中药复方制剂，具有散风固表，宣肺通窍的功效。用于风热蕴肺、表虚不固所致的鼻塞时轻重、鼻流清涕或浊涕、前额头疼；慢性鼻炎、过敏性鼻炎、鼻窦炎等疾患。通窍鼻炎片中主要有效成分有：升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素和木兰脂素等。

但是通窍鼻炎中这些重要的有效成分并没有通过科学的检测实现较为全面地质量检测。

通窍鼻炎片的原标准收载于《中华人民共和国药典》2015版一部，标准中的定量方法只对欧前胡素进行了含量检测。现有文献中报道有通窍鼻炎片中有效成分的鉴别及含量测定方法，但涉及的鉴别和测定方法，大多操作繁杂，耗时长，只针对通窍鼻炎片中一味药材或一个成分进行定量控制，不能全面地对通窍鼻炎片产品进行定性和定量控制，且不能实现同时多成分指标检测，从而不能科学控制通窍鼻炎片产品的质量。

现有文献《HPLC-MS法同时测定防芷鼻咽颗粒中6个成分的含量》，《药物分析杂志》Chin J Pharm Anal2014.34(5)，刘灵改；支旭然等，公开了一种用HPLC-MS法同时测定防芷鼻咽颗粒中6个成分含量的方法，该方法同时测定了一种中药制剂中6种成分的含量，但是该方法为液质联用的方法，在实际操作中，即需要启动采用流动相洗脱的液相，又需要启动采用高醇氮作为雾化气的质谱，检测时间需30分钟才能完成，效率低，有机溶剂及高纯氮气消耗量大，检测成本高，而且液质联用容易产生基质效应影响检测的重现性和准确度。

现有文献《HPLC法同时测定四季感冒片中5种有效成分的含量》，《中国药师》，2015年第18卷第3期China Pharmacist 2015,Vol.18 No.3,郑兆显；赵丹彤等，公开了一种用HPLC法同时测定四季感冒片中5种有效成分含量的方法，该方法同时测定了一种中药制剂中5种成分的含量，但是该方法在实际操作过程中，出峰时间长，检测时间长达50分钟，效率低，有机溶剂消耗量大。且只有两种成分与本发明相同。

现有文献《RP-HPLC法同时测定通窍鼻炎片中5种成分》，《西北大学学报(自然科学版)》，2015年4月，第45卷第2期，Apr.,2015,Vo1.45,No.2，张倩，王世祥等，公开了一种用RP-HPLC法同时测定通窍鼻炎片中5种成分含量的方法，该方法检测时间长达80分钟，效率太低，且五种成分都来源于白芷一味药材，而对通窍鼻炎片中的其他药材的有效成分无定量控制，故非通窍鼻炎片含量检测的最佳检测方法。

《中华人民共和国药典》2015版一部中公开了通窍鼻炎片中白芷中欧前胡素的含量测定方法，如下：“色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(54:46)为流动相；检测波长为248nm。理论板数按欧前胡素峰计算应不低于5000.对照品溶液制备：取欧前胡素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含15μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品20片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理(功率250w，频率50Hz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。”该方法的色谱条件与本发明方法区别明显，所测成分仅限于白芷中的欧前胡素。

《中华人民共和国药典》2015版一部中公开了通窍鼻炎胶囊含量检测方法，检测指标成分为白芷中的欧前胡素(方法同通窍鼻炎片)和黄芪中黄芪甲苷。黄芪甲苷的含量测定方法，如下：“色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32：68)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷计算应不低于3000.对照品溶液制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品30粒，倾出内容物，精密称定，研细，取约4g，精密称定，置索式提取器中，加入甲醇50mL，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40mL,弃去氨液，正丁醇液回收溶剂至干，残渣加水5mL使溶解，放冷，过D101型大孔树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm),以水50mL洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30mL洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，用甲醇溶解并转移至5mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。测定法：精密吸取对照品溶液5μL、15μL与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。”该方法供试品制备方法复杂，耗时长。虽然它对两个含量检测指标进行了控制，但是采用两种不同的检测方法，成本高，耗时长，效率低。

以上方法都不能同时检测出通窍鼻炎片中的6种有效成分。且这些方法检测时间长，效率低，有机溶剂消耗量大，也不能快速准确的同时对通窍鼻炎片多味药的成分进行定量分析。

为了更好地检测通窍鼻炎片中的有效成分，提升通窍鼻炎片的质量，研究提供一种操作简便、专属性强、分离度好，稳定性好、高效环保，且能同时进行多指标成分控制的通窍鼻炎片的质量检测方法，已势在必行。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种通窍鼻炎片的质量检测方法，本发明提供的检测方法检测基线平稳、分离度好、检测准确度高、稳定性好；极大的缩短了含量测定时间，稳步提升了检测效率，有毒化学试剂用量大幅减少，更加经济环保；且同时进行多指标成分的检测，为该品种的液相指纹图谱库的建立提供一种快速高效可行的检测方法，易可为该品种的稳定性考察，提供一种较全面的有效成分稳定性的定量比对考察方法。

具体而言，本发明提供一种通窍鼻炎片的质量检测方法，所述方法包括对有效成分白芷、黄芪、苍耳子药材的鉴别以及对制剂中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定，

所述含量测定包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备；

(2)对照品溶液的制备；

(3)UPLC法测定；

UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱方法：0～2.6min，10％～20％→60％～80％A；2.6～3.5min，60％～80％→80％～100％A；3.5～4.0min，80％～100％A；4.0～4.5min，80％～100％→10％～20％A；4.5～7min，10％～20％A；流速0.2～0.5mL/min；检测波长254nm；柱温35℃。

优选地，所述含量测定方法步骤(1)中，所述供试品溶液的制备方法为：取通窍鼻炎片粉末1～3g，精密称取，置100～200mL的具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数60～80％的甲醇30～60mL，称重，100W，25kHz超声提取30～60min,放冷，再称重，用体积分数60～80％的甲醇补充失重，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

更优选地，所述含量测定方法步骤(1)中，所述供试品溶液的制备方法为：取通窍鼻炎片粉末1.0g，精密称取，置100mL具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数80％甲醇50mL，称重，100W，25kHz超声提取45min，放冷，再称重，用体积分数80％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

优选地，所述含量测定方法步骤(2)中，所述对照品溶液包括升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液。

更优选地，所述含量测定方法步骤(2)中，所述对照品溶液的制备方法为：取升麻素苷对照品，加甲醇溶解至浓度为45～55μg/mL，备用；取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇溶解至浓度为75～85μg/mL，备用；取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解至浓度为45～55μg/mL，备用；取欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为55～65μg/mL，备用；取异欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为180～220μg/mL，备用；取木兰脂素对照品，加甲醇溶解至浓度为45～55μg/mL，备用；将制备的对照品溶液升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素和木兰脂素，按2～6:5～9:2～8:2～8:15～25:2～8比例调配成6种成分的混合对照品溶液。

进一步优选地，所述含量测定步骤(2)中，所述对照品溶液的制备方法为：取升麻素苷对照品，加甲醇溶解至浓度为50μg/mL，备用；取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇溶解至浓度为80μg/mL，备用；取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解至浓度为：50μg/mL，备用；取欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为：60μg/mL，备用；取异欧前胡素对照品，加甲醇溶解至200μg/mL，备用；取木兰脂素对照品，加甲醇溶解至50μg/mL，备用；将制备的对照品溶液升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素和木兰脂素，按5:8:5:6:20:5的比例调配成6种成分的混合对照品溶液。

为了实现更优异的分离效果，优选地，所述含量测定方法步骤(3)中，所述WatersBEH C18柱的内径大小为50mm×2.1mm，1.7μm。

为了提高分离度，实现同时检测出6种不同有效成分的含量，优选地，所述含量测定方法步骤(3)中，所述梯度洗脱方法为：0～2.6min，18％→70％A；2.6～3.5min，70％→95％A；3.5～4.0min，95％A；4.0～4.5min，95％→18％A；4.5～7min，18％A。

作为本发明的一种优选方案，所述通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1～3g，精密称取，置100～200mL的具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数60～80％的甲醇30～60mL，称重，100W，25kHz超声提取30～60min,放冷，再称重，用体积分数60～80％的甲醇补充失重，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为45～55μg/mL的升麻素苷对照品溶液、75～85μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、45～55μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、55～65μg/mL的欧前胡素对照品溶液、180～220μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和45～55μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按2～6:5～9:2～8:2～8:15～25:2～8比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1～5μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，10％～20％→60％～80％A；2.6～3.5min，60％～80％→80％～100％A；3.5～4.0min，80％～100％A；4.0～4.5min，80％～100％→10％～20％A；4.5～7min，10％～20％A；流速0.2～0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

进一步优选地，所述通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1.0g，精密称取，置100mL具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数80％甲醇50mL，称重，100W，25kHz超声提取45min，放冷，再称重，用体积分数80％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为50μg/mL的升麻素苷对照品溶液、80μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、50μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、60μg/mL的欧前胡素对照品溶液、200μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和50μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按5:8:5:6:20:5比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，18％→70％A；2.6～3.5min，70％→95％A；3.5～4.0min，95％A；4.0～4.5min，95％→18％A；4.5～7min，18％A；流速0.2～0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

经实际检测，所述通窍鼻炎片中升麻素苷的含量为300～500μg/g，5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量为700～900μg/g，毛蕊异黄酮苷含量为150～300μg/g，木兰脂素含量为300～500μg/g，欧前胡素含量为800～1000μg/g，异欧前胡素含量为700～900μg/g。

优选地，所述通窍鼻炎片中升麻素苷的含量为413μg/g，5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量为830μg/g，毛蕊异黄酮苷含量为254μg/g，木兰脂素含量为485μg/g，欧前胡素含量为955μg/g，异欧前胡素含量为873μg/g。

优选地，所述通窍鼻炎片的质量检测方法中，所述有效成分白芷的鉴别包括以下步骤：

(1)取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10～20mL，超声处理10～30分钟，滤过，药渣备用，滤液挥散至1mL，作为供试品溶液；

(2)取白芷对照药材0.1g，加60～90℃石油醚10～20mL，超声处理10～30分钟，放置，取上清液作为对照药材溶液；

(3)照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1～2:1的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光等下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

所述有效成分黄芪的鉴别包括以下步骤：

(1)取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10～20mL，超声处理10～30分钟，滤过，药渣挥干，加正丁醇10～20mL，加热回流1.5～3小时，滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液洗涤2～3次，每次10～20mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；

(2)取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；

(3)照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50～70:20～40:5～20的三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

所述有效成分苍耳子的鉴别包括以下步骤：

(1)取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚30mL，超声处理5～10分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣加甲醇20～40mL，超声处理10～20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，加在D101型内径为10～15mm，柱高为10～20cm的大孔吸附树脂柱上，分别用水、10～20％甲醇、30～50％的甲醇各30～50mL依次洗脱，收集30～50％的甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

(2)取苍耳子对照药材1g，通法制成对照药材溶液；

(3)照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～4:5～15:1～3:1～3:1～3的三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

所述有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1～3g，精密称取，置100～200mL的具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数60～80％的甲醇30～60mL，称重，100W，25kHz超声提取30～60min，放冷，再称重，用体积分数60～80％的甲醇补充失重，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为45～55μg/mL的升麻素苷对照品溶液、75～85μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、45～55μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、55～65μg/mL的欧前胡素对照品溶液、180～220μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和45～55μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按2～6:5～9:2～8:2～8:15～25:2～8比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1～5μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，10％～20％→60％～80％A；2.6～3.5min，60％～80％→80％～100％A；3.5～4.0min，80％～100％A；4.0～4.5min，80％～100％→10％～20％A；4.5～7min，10％～20％A；流速0.2～0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

本发明实现了如下有益效果：

1、首次建立了超高效的方法，同时检测通窍鼻炎片中的6种有效成分，实现了多指标成分的检测，为通窍鼻炎片的液相指纹图谱库的建立提供一种快速高效可行的检测方法，易可为通窍鼻炎片的稳定性考察，提供一种较全面的有效成分稳定性的定量比对考察方法。

2、精确总结了适合通窍鼻炎片有效成分检测的梯度洗脱方法，检测时间由普通液相的50～80min缩短到7min，极大的缩短了含量测定时间，稳步提升了检测效率，同时，极大的减少了流动相的使用量(由50～80mL缩减到3.5mL)，流动相多含甲醇或乙腈等有毒溶剂，降低用量，极大减小了对环境的污染，更加环保，也降低了检测成本。

3、同时检测了通窍鼻炎片中的四个主要药材的六种最具代表性的有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂、欧前胡素和异欧前胡素。

4、本发明所述方法，检测基线平稳、分离度高、检测准确度高、稳定性好。

附图说明

图1为实施例1中混合对照品溶液的UPLC色谱图；

图2为实施例1中供试品溶液的UPLC色谱图。

具体实施方式

以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本实施例所用的原料和设备均为本技术领域常规市购的原料和设备。

以下各实施例中涉及的仪器以及试剂包括但不限于：超高效液相色谱：WatersACQuity UPLC(美国Water公司)，KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；电子天平(北京塞多利斯天平有限公司)；超纯水机(ABW-1001-U型艾科浦)。对照品(购于中国食品药品检定研究院)：升麻素苷(批号：111710-200501)；5-O-甲基维斯阿米醇苷(批号：111523-201509)；毛蕊异黄酮葡萄糖苷(批号：111920-201505)；木兰脂素(批号：110882-201206)；欧前胡素(批号：110826-201415)；异欧前胡素(批号：110827-201410)。

实施例1按照以下方法检测通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1.0g，精密称取，置100mL具塞三角瓶中，精密加入体积分数80％甲醇50mL，称重，100W，25kHz超声提取45min，放冷，再称重，用体积分数80％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为50μg/mL的升麻素苷对照品溶液、80μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、50μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、60μg/mL的欧前胡素对照品溶液、200μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和50μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按5:8:5:6:20:5比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.6‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，18％→70％A；2.6～3.5min，70％→95％A；3.5～4.0min，95％A；4.0～4.5min，95％→18％A；4.5～7min，18％A；流速0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

检测结果显示，检测基线平稳，样品中各目标成分分离度良好，样品出峰时间均在4～8分钟，检测时间8分钟之内可完成。

实施例2按照以下方法检测通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末3.0g，精密称取，置200mL容量瓶中，精密加入体积分数60％甲醇30mL，称重，100W，25kHz超声提取30min，放冷，再称重，用体积分数60％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为45μg/mL的升麻素苷对照品溶液、75μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、45μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、55μg/mL的欧前胡素对照品溶液、180μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和45μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按2:5:2:2:15:2比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各5μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.4‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，10％→60％A；2.6～3.5min，60％→80％A；3.5～4.0min，80％A；4.0～4.5min，80％→10％A；4.5～7min，10％A；流速0.2mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

检测结果显示，检测基线平稳，样品中各目标成分分离度良好，效果略差于实施例1，样品出峰时间均在4～8分钟，检测时间8分钟之内可完成。

实施例3按照以下方法检测通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末2.0g，精密称取，置150mL具塞三角瓶中，精密加入体积分数70％甲醇60mL，称重，100W，25kHz超声提取60min，放冷，再称重，用体积分数70％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为55μg/mL的升麻素苷对照品溶液、85μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、55μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、65μg/mL的欧前胡素对照品溶液、220μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和55μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按6:9:8:8:25:8比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各2μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，20％→80％A；2.6～3.5min，80％→100％A；3.5～4.0min，100％A；4.0～4.5min，100％→20％A；4.5～7min，20％A；流速0.3mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

检测结果显示，检测基线平稳，样品中各目标成分分离度良好，效果略差于实施例1，样品出峰时间均在4～8分钟，检测时间8分钟之内可完成。

实施例4按照以下方法检测通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末2.0g，精密称取，置200mL容量瓶中，精密加入体积分数75％甲醇50mL，称重，100W，25kHz超声提取40min，放冷，再称重，用体积分数75％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：同实施例1；

(3)UPLC法测定：同实施例1；

所述UPLC法测定的色谱条件：同实施例1；

检测结果显示，检测基线平稳，样品中各目标成分分离度良好，效果与实施例1差不多，样品出峰时间均在4～8分钟，检测时间8分钟之内可完成。

实施例5按照以下方法检测通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量：

(1)供试品溶液的制备：同实施例1；

(2)对照品溶液的制备：同实施例1；

(3)UPLC法测定：同实施例1；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.2‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，25％～→55％A；2.6～3.5min，55％→75％A；3.5～4.0min，75％A；4.0～4.5min，75％→25％A；4.5～7min，25％A；流速0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

检测结果显示，检测基线平稳，样品中各目标成分分离度较好，效果略差于实施例1～实施例4，样品出峰时间均在4～10分钟，检测时间10分钟之内可完成。

实施例6按照以下方法对通窍鼻炎中有效成分进行鉴别

白芷的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10mL，超声处理20分钟，滤过，药渣备用，滤液挥散至1mL，作为供试品溶液；另取白芷对照药材0.1g，加60～90℃石油醚10mL，超声处理20分钟，放置，取上清液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:2的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光等下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

黄芪的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10mL，超声处理20分钟，滤过，药渣挥干，加正丁醇15mL，加热回流2小时，滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次15mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为63:35:10的三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

苍耳子的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚30mL，超声处理5分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣加甲醇30mL，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，加在D101型内径为10mm，柱高为12cm的大孔吸附树脂柱上，分别用水、20％甲醇、30％的甲醇各40mL依次洗脱，收集30％的甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取苍耳子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:10:2:2:2的三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

试验结果，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。

实施例7按照以下方法对通窍鼻炎片中活性成分进行鉴别

白芷的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚20mL，超声处理10分钟，滤过，药渣备用，滤液挥散至1mL，作为供试品溶液；另取白芷对照药材0.1g，加60～90℃石油醚20mL，超声处理10分钟，放置，取上清液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光等下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

黄芪的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚20mL，超声处理10分钟，滤过，药渣挥干，加正丁醇10mL，加热回流1.5小时，滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次10mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50:40:10的三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

苍耳子的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚30mL，超声处理10分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣加甲醇20mL，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，加在D101型内径为15mm，柱高为10cm的大孔吸附树脂柱上，分别用水、10％甲醇、30％的甲醇各30mL依次洗脱，收集50％的甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取苍耳子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2:5:1:1:1的三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

试验结果，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰,斑点清晰程度略差于实施例6。

实施例8按照以下方法对通窍鼻炎片中活性成分进行鉴别

白芷的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚15mL，超声处理30分钟，滤过，药渣备用，滤液挥散至1mL，作为供试品溶液；另取白芷对照药材0.1g，加60～90℃石油醚15mL，超声处理30分钟，放置，取上清液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2:1的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光等下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

黄芪的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚15mL，超声处理30分钟，滤过，药渣挥干，加正丁醇20mL，加热回流3小时，滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次15mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为70:20:10的三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

苍耳子的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚30mL，超声处理8分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣加甲醇40mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，加在D101型内径为10mm，柱高为20cm的大孔吸附树脂柱上，分别用水、20％甲醇、50％的甲醇各50mL依次洗脱，收集20％的甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取苍耳子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4:15:3:3:3的三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

试验结果，各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰,斑点清晰程度略差于实施例6。

实施例9按照以下方法对通窍鼻炎片进行质量检测：

白芷、黄芪、苍耳子的鉴别：

白芷的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10mL，超声处理20分钟，滤过，药渣备用，滤液挥散至1mL，作为供试品溶液；另取白芷对照药材0.1g，加60～90℃石油醚10mL，超声处理20分钟，放置，取上清液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:2的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光等下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

黄芪的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10mL，超声处理20分钟，滤过，药渣挥干，加正丁醇15mL，加热回流2小时，滤过，滤液用1％氢氧化钠溶液洗涤3次，每次15mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为63:35:10的三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

苍耳子的鉴别：取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚30mL，超声处理5分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣加甲醇30mL，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，加在D101型内径为10mm，柱高为12cm的大孔吸附树脂柱上，分别用水、20％甲醇、30％的甲醇各40mL依次洗脱，收集30％的甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取苍耳子对照药材1g，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3:10:2:2:2的三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

对通窍鼻炎片中有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素、异欧前胡素的含量：

(1)供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1.0g，精密称取，置100mL具塞三角瓶中，精密加入体积分数80％甲醇50mL，称重，100W，25kHz超声提取45min，放冷，再称重，用体积分数80％甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(2)对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为50μg/mL的升麻素苷对照品溶液、80μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、50μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、60μg/mL的欧前胡素对照品溶液、200μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和50μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按5:8:5:6:20:5比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

(3)UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.6‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，18％→70％A；2.6～3.5min，70％→95％A；3.5～4.0min，95％A；4.0～4.5min，95％→18％A；4.5～7min，18％A；流速0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

试验结果：

1、鉴别部分：各组样品均与相应的对照品和(或)对照药材在相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰；

2、含量测定部分：检测结果显示，检测基线平稳，样品中各目标成分分离度良好，样品出峰时间均在4～8分钟，检测时间8分钟之内可完成。

对比例1按照以下方法对通窍鼻炎片中的有效成分进行含量测定：

(1)供试品溶液的制备：同实施例1供试品溶液制备方法；

(2)对照品溶液的制备：同实施例1对照品溶液制备方法；

(3)测定方法：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述测定方法的色谱条件为：Dikma Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×150mm，5m)，流动相A为色谱纯甲醇，流动相B为含0.05％甲酸的水，梯度洗脱(0～6min，25％A→75％A；6～10min，75％A→95％A；10～15min，95％A)，进样前用流动相初始条件平衡6min，流速为0.8mL/min.柱温为室温，进样量为20μL。

结果显示，采用本对比例方法进行检测，谱图基线不平稳，出峰时间在10分钟之后，检测时间需要15～30分钟，不能检测出5-O-甲基维斯阿米醇苷，且目标成分与杂质之间不能完全分离，含量测定不稳定。

对比例2按照以下方法对通窍鼻炎片中的有效成分进行含量测定：

(1)供试品溶液的制备：同实施例1供试品溶液制备方法；

(2)对照品溶液的制备：同实施例1对照品溶液制备方法；

(3)测定方法：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

所述测定方法的色谱条件为：Aglient ZORBAX SB-Cl8色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相A为乙腈，B为0.1％的甲酸水溶液，梯度洗脱(0～35min，10％A→35％A；35～40min，35％A→90％A；40～45min，90％A→l0％A；45～50min，10％A；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：283nm；进样量：10μL。

结果显示，采用本对比例方法进行检测，谱图基线不平稳，出峰时间在20分钟之后，检测时间需要40～50分钟，不能检测出毛蕊异黄酮苷，木兰脂素，欧前胡素，异欧前胡素，不能准确的测定6种目标成分，达不到质量保证的要求。

对比例3按照以下方法对通窍鼻炎片中的有效成分进行含量测定：

(1)供试品溶液的制备：同实施例1供试品溶液制备方法；

(2)对照品溶液的制备：同实施例1对照品溶液制备方法；

(3)测定方法：分别精密吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各50μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

所述测定方法的色谱条件为：Agilent TC-C18色谱柱(4.6mm×250mm，55μm)，流动相A为0.2％甲酸水，B为乙腈，梯度洗脱(0-42min，22％B；43-73min，50％B)；检测波长为254nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；进样量50μL。

结果显示，采用本对比例方法进行检测，谱图基线不平稳，出峰时间在20分钟之后，检测时间需要70～80分钟，不能检测出升麻素苷，5-O-甲基维斯阿米醇苷，毛蕊异黄酮苷，木兰脂素，不能准确的测定6种目标成分，达不到质量保证的要求。

对比例4

与实施例1相比，区别在于，色谱条件中，采用《中国药典2015版》第一部1458页，公开的通窍鼻炎片含量测定方法中的色谱条件进行通窍鼻炎片的含量测定。

结果显示，采用本对比例方法进行检测，出峰时间在22分钟之后，检测时间需要35分钟，该检测方法，仅能检测出欧前胡素，不能同时检测出多指标成分，达不到多味药材的多指标成分定量控制要求。

对比例5

与实施例1相比，区别在于，色谱条件中，采用《中国药典2015版》第一部1459页，公开的通窍鼻炎胶囊含量测定方法中的色谱条件进行通窍鼻炎胶囊的含量测定。

结果显示，采用本对比例方法进行检测，欧前胡素和黄芪甲苷出峰时间分别在22分钟和20分钟之后，检测时间分别需要30分钟和35分钟，而且是分别通过两种不同的供试品制备方法和色谱检测条件实现。通过两种检测方法，仅能分别检测出欧前胡素和黄芪甲苷，不能同时检测出多指标成分，难以达到多成分的定量控制要求。

实施例10线性关系考察、精密度试验、重复性试验、稳定性试验、回收率试验及样品含量测定：

按照实施例1的方法处理供试品溶液、对照品溶液，色谱条件、检测方法同实施例1，进行如下试验：

(1)线性关系考察：分别精密吸取实施例1项下混合对照品溶液0.5，1，2，4，8，12，16μL进样测定。以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X，μg)为横坐标，绘制标准曲线，得升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的回归方程分别为：Y＝3763.02X-304.96γ＝0.9999(n＝6)；Y＝2018.12X+22575.6γ＝0.9999(n＝6)；Y＝603.33X-8962.55γ＝0.999(n＝6)；Y＝2329.46X+68544.21γ＝0.9998(n＝6)；Y＝2023.62X+41224.11γ＝0.9999(n＝6)；Y＝700.55X-1007.56γ＝0.9999(n＝6)；线性范围分别为：0.025～0.8μg；0.04～1.28μg；0.025～0.8μg；0.03～0.96μg；0.03～0.96μg；0.10～3.20μg。

(2)精密度试验：分别精密吸取实施例1项下制备的供试品溶液，连续进样6次，测得升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的峰面积积分值的RSD分别为0.5％，0.4％，0.9％，0.8％，0.3％，0.3％，表明仪器精密度良好。

(3)重复性试验：取同一批次样品，按实施例1项下供试品制备方法平行制备供试品6份，按实施例1项下色谱条件测定，计算含量。6份供试品中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的平均含量分别为0.37mg/g，0.72mg/g，0.31mg/g，0.37mg/g，0.79mg/g，0.42mg/g，其RSD分别为：1.0％，1.2％，1.8％，1.6％，0.8％，0.6％，表明重复性良好。

(4)稳定性试验：取同一批次样品，按实施例1项下供试品制备方法制备供试品溶液，在制备后0，2，4，6，8，10，12，24h进样，测得供试品中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的峰面积积分值的RSD分别为：1.0％，1.2％，1.7％，1.5％，0.7％，0.6％，表明供试品溶液在24h内稳定。

(5)回收率试验：取供试品0.5g，6份，精密称定，分别精密加入升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素对照品适量，按实施例1项下供试品制备方法制备成供试品溶液，按实施例1项下色谱条件进行测定，计算回收率，结果升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的回收率(n＝9)分别为97.5％，99.3％，98.0％，98.3％，99.2，99.5％，其RSD分别为：1.1％，1.0％，1.6％，1.3％，1.0％，0.8％。

(6)样品含量测定：取三批通窍鼻炎片，按实施例1项下方法制备供试品溶液，测定6种成分含量，结果见下表所示：

由以上实验结果可知，本发明采用UPLC法代替传统的HPLC法进行含量测定，大大节省了时间与溶剂，且取得了较好的峰型与理论塔板数，目标成分与杂质完全分离，专属性好，且能同时进行多种有效成分检测。

本实验建立的定量方法，通过多批次样品的测定，结果显示方法简易、专属性好且回收率高，可行性强，是作为通窍鼻炎片的最佳含量检测方法。

以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优势。本领域的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.通窍鼻炎片的质量检测方法，其特征在于，包括：对有效成分白芷、黄芪、苍耳子药材的鉴别以及对制剂中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定；

所述含量测定包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备；

（2）对照品溶液的制备；

（3）UPLC法测定；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0. 4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱方法：0～2.6 min，10%～20%→60%～80%A；2.6～3.5min，60%～80%→80%～100%A；3.5～4.0 min，80%～100%A；4.0～4.5 min，80%～100%→10%～20%A；4.5～7min，10%～20%A；流速0.2～0.5ml/min；检测波长254nm；柱温35℃。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法步骤（1）中，所述供试品溶液的制备方法为：取通窍鼻炎片粉末1～3g，精密称取，置100～200mL的具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数60～80%的甲醇30～60mL，称重，100W，25kHz超声提取30～60min,放冷，再称重，用体积分数60～80%的甲醇补充失重，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

优选地，所述供试品溶液的制备方法为：取通窍鼻炎片粉末1.0 g，精密称取，置100mL具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数80% 甲醇50mL，称重，100W，25kHz超声提取45min，放冷，再称重，用体积分数80%甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法步骤（2）中，所述对照品溶液包括升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法步骤（2）中，所述对照品溶液的制备方法为：取升麻素苷对照品，加甲醇溶解至浓度为45～55μg/mL，备用；取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇溶解至浓度为75～85 μg/mL，备用；取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解至浓度为45～55μg/mL，备用；取欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为55～65μg/mL，备用；取异欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为180～220μg/mL，备用；取木兰脂素对照品，加甲醇溶解至浓度为45～55μg/mL，备用；将制备的对照品溶液升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素和木兰脂素，按2～6:5～9:2～8:2～8:15～25:2～8比例调配成6种成分的混合对照品溶液；

优选地，所述含量测定方法步骤（2）中，所述对照品溶液的制备方法为：取升麻素苷对照品，加甲醇溶解至浓度为50μg/mL，备用；取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇溶解至浓度为80μg/mL，备用；取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，加甲醇溶解至浓度为50μg/mL，备用；取欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为60μg/mL，备用；取异欧前胡素对照品，加甲醇溶解至浓度为200μg/mL，备用；取木兰脂素对照品，加甲醇溶解至浓度为50μg/mL，备用；将制备的对照品溶液升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素和木兰脂素，按5:8:5:6:20:5的比例调配成6种成分的混合对照品溶液。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法步骤（3）中，所述WatersBEH C18柱的内径大小为50mm×2.1mm，1.7μm。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法步骤（3）中，所述梯度洗脱方法为：0～2.6min，18%→70% A；2.6～3.5min，70%→95% A；3.5～4.0min，95% A；4.0～4.5min，95%→18% A；4.5～7min，18% A。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1～3g，精密称取，置100～200mL的具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数60～80%的甲醇30～60mL，称重，100W，25kHz超声提取30～60min,放冷，再称重，用体积分数60～80%的甲醇补充失重，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为45～55μg/mL的升麻素苷对照品溶液、75～85μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、45～55μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、55～65μg/mL的欧前胡素对照品溶液、180～220μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和45～55μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按2～6:5～9:2～8:2～8:15～25:2～8比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

（3）UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1～5μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0. 4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6 min，10%～20%→60%～80%A；2.6～3.5 min，60%～80%→80%～100% A；3.5～4.0 min，80%～100% A；4.0～4.5 min，80%～100%→10%～20% A；4.5～7min，10%～20% A；流速0.2～0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于：所述含量测定方法包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1.0 g，精密称取，置100 mL具塞三角瓶或容量瓶中，精密加入体积分数80%甲醇50mL，称重，100W，25 kHz超声提取45min，放冷，再称重，用体积分数80%甲醇补足失重，用0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为50μg/mL的升麻素苷对照品溶液、80 μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、50μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、60μg/mL的欧前胡素对照品溶液、200μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和50μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按5:8:5:6:20:5比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

（3）UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0. 4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，18%→70%A；2.6～3.5min，70%→95% A；3.5～4.0min，95% A；4.0～4.5min，95%→18% A；4.5～7min，18% A；流速0.2～0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。

9.根据权利要求1-8任一项所述的方法，其特征在于：所述通窍鼻炎片中升麻素苷的含量为300～500μg/g，5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量为700～900μg/g，毛蕊异黄酮苷含量为150～300μg/g，木兰脂素含量为300～500μg/g，欧前胡素含量为800～1000μg/g，异欧前胡素含量为700～900μg/g；

优选地，所述通窍鼻炎片中升麻素苷的含量为413μg/g，5-O-甲基维斯阿米醇苷的含量为830μg/g，毛蕊异黄酮苷含量为254μg/g，木兰脂素含量为485μg/g，欧前胡素含量为955μg/g，异欧前胡素含量为873μg/g。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述有效成分白芷的鉴别包括以下步骤：

（1）取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10～20mL，超声处理10～30分钟，滤过，药渣备用，滤液挥散至1mL，作为供试品溶液；

（2）取白芷对照药材0.1g，加60～90℃石油醚10～20mL，超声处理10～30分钟，放置，取上清液作为对照药材溶液；

（3）照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为1:1～2:1的30～60℃石油醚-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光等下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

所述有效成分黄芪的鉴别包括以下步骤：

（1）取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚10～20mL，超声处理10～30分钟，滤过，药渣挥干，加正丁醇10～20mL，加热回流1.5～3小时，滤过，滤液用1%氢氧化钠溶液洗涤2～3次，每次10～20mL，取正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗至中性，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；

（2）取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液；

（3）照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为50～70:20～40:5～20的三氯甲烷-甲醇-水在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点，紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点；

所述有效成分苍耳子的鉴别包括以下步骤：

（1）取通窍鼻炎片粉末3g，加60～90℃石油醚30mL，超声处理5～10分钟，滤过，弃去石油醚液，残渣加甲醇20～40mL，超声处理10～20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，放冷，加在D101型内径为10～15mm，柱高为10～20cm的大孔吸附树脂柱上，分别用水、10～20%甲醇、30～50%的甲醇各30～50mL依次洗脱，收集30～50%的甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；

（2）取苍耳子对照药材1g，通法制成对照药材溶液；

（3）照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为2～4:5～15:1～3:1～3:1～3的三氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇：甲酸：水为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；

所述有效成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮苷、木兰脂素、欧前胡素和异欧前胡素的含量测定包括以下步骤：

（1）供试品溶液的制备：取通窍鼻炎片粉末1～3g，精密称取，置100～200mL的具塞三角瓶中，精密加入体积分数60～80%的甲醇30～60mL，称重，100W，25kHz超声提取30～60min,放冷，再称重，用体积分数60～80%的甲醇补充失重，用微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

（2）对照品溶液的制备：取升麻素苷对照品、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品、欧前胡素对照品、异欧前胡素对照品和木兰脂素对照品，加甲醇溶解，分别制成浓度为45～55μg/mL的升麻素苷对照品溶液、75～85μg/mL的5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、45～55μg/mL的毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、55～65μg/mL的欧前胡素对照品溶液、180～220μg/mL的异欧前胡素对照品溶液和45～55μg/mL的木兰脂素对照品溶液，备用；

将制备的升麻素苷对照品溶液、5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品溶液、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品溶液、欧前胡素对照品溶液、异欧前胡素对照品溶液和木兰脂素对照品溶液，按2～6:5～9:2～8:2～8:15～25:2～8比例调配成6种成分的混合对照品溶液，备用；

（3）UPLC法测定：分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液各1～5μL，注入超高效液相色谱仪，测定，计算，即得；

所述UPLC法测定的色谱条件为：Waters BEH C18柱，内径为50mm×2.1mm，1.7μm；流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.4‰～0.8‰的乙酸；梯度洗脱：0～2.6min，10%～20%→60%～80%A；2.6～3.5min，60%～80%→80%～100% A；3.5～4.0min，80%～100%A；4.0～4.5min，80%～100%→10%～20% A；4.5～7min，10%～20% A；流速0.2～0.5mL/min，检测波长254nm，柱温35℃。