CN110988156A - 鼻渊通窍颗粒hplc指纹图谱的建立方法及其标准图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药制剂分析领域，具体涉及一种复方中药鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱的建立方法及其HPLC标准指纹图谱，该方法包括制备供试品溶液、确立HPLC色谱条件及制作HPLC标准指纹图谱。本发明同时公开了用该方法得到的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱，该指纹图谱有20个共有峰。本发明质量检测方法操作简单、稳定性好、重现性高，所得指纹图谱特征峰多，通过标准指纹图谱共有峰的比较，可对鼻渊通窍颗粒的质量进行全面评价，有利于稳定产品质量，确保临床用药的安全性、有效性。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂分析领域，具体涉及一种复方中药鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱的建立方法及其HPLC标准指纹图谱。
技术背景
鼻渊通窍颗粒产品处方由辛夷、苍耳子(炒)、麻黄、白芷、薄荷、藁本、黄芩、连翘、野菊花、天花粉、地黄、丹参、茯苓、甘草等十四味中药精致而成，具有疏风清热，宣肺通窍的功效。用于急鼻渊(急性鼻窦炎)属外邪犯肺证，症见前额或颧骨部压痛，鼻塞时作，流涕粘白或粘黄，或头痛，或发热，苔薄黄或白，脉浮。
鼻渊通窍颗粒产品处方在中医治疗鼻病的古方-苍耳子散的基础上加味而成，本方中麻黄、白芷、苍耳子、辛夷、藁本辛温解表，宣肺通窍，其中白芷、苍耳子、辛夷、藁本为治鼻炎的要药，具有较好的改善鼻塞的作用；薄荷、野菊花疏散风热，抗菌抗病毒；天花粉、黄芩、连翘清热解毒、消肿排脓，减轻炎症；生地黄凉血解热毒；丹参活血化瘀，改善炎症部位的微循环；茯苓利水消肿，减少炎症渗出物(鼻涕)的生成，诸药配伍，共奏疏风清热、宣肺通窍、清热解毒、止痛排脓之功。
鼻渊通窍颗粒于2003年获得新药证书(中药三类新药)和药品注册批件，为国内独家生产，具有处方、工艺、用途等核心技术的自主知识产权。目前在国内市场普遍用于急性鼻窦炎的长期治疗，临床应用表明其疗效确切，对治疗慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎、中耳炎发挥了重要作用。
在2015版《中华人民共和国药典》一部中新增鼻渊通窍颗粒质量控制方法主要包括鉴别和含量测定，鉴别项采用薄层层析法分别鉴别制剂中的辛夷、麻黄、白芷、黄芩、连翘和丹参药材，含量测定项以HPLC测定麻黄中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量。从处方组成可以发现，鼻渊通窍颗粒由辛夷、苍耳子(炒)、麻黄、白芷、薄荷、藁本、黄芩、连翘、野菊花、天花粉、地黄、丹参、茯苓、甘草14味中药制成，但其质量标准仅用薄层层析法鉴定其中6味原料药材，和以HPLC检测麻黄中的两个指标性成分的含量，以此来控制鼻渊通窍颗粒的质量不够全面、准确。
中药指纹图谱作为一项质量控制技术，能够较为全面的控制药品的质量，具有系统性，整体性特点。目前，以指纹图谱控制鼻渊通窍颗粒的质量，国内外尚未见专利公开及文献报道。本发明公开了一种鼻渊通窍颗粒指纹图谱的建立方法，以及用该方法制作的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱，在用相似度进行评价的情况下，可用其标准指纹图谱对鼻渊通窍颗粒的质量进行全面地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及临床用药的有效性和安全性。
发明内容
本发明的目的是针对现有鼻渊通窍颗粒质量控制方法的不足，提供一种鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱的建立方法及用该方法所得的HPLC标准指纹图谱。其特点是将鼻渊通窍颗粒制备成供试品溶液，经过HPLC分离检测，获得鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱，从而为鼻渊通窍颗粒的内在质量和真伪鉴别提供可靠依据。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：
1)供试品溶液制备
取鼻渊通窍颗粒，加入纯化水，超声处理，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2)HPLC色谱分析
对步骤1)中得到的供试品溶液进行HPLC色谱分析，记录色谱图。
3)标准指纹图谱制作
优选地，步骤1)中超声处理时间为10-50min；步骤2)中HPLC色谱分析条件为：Agilent Edipse XDB-C18柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.05％-0.2％磷酸溶液，采用梯度洗脱，检测波长310nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。
更优选地，步骤1)中超声处理时间为30min；步骤2)中流动相B为0.1％磷酸溶液。
优选地，步骤2)所述梯度洗脱方法为：
上述述鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》软件进行相似度评价。
上述指纹图谱的获得为取10个或10个以上批次鼻渊通窍颗粒按步骤1)制备供试品，步骤2)进行HPLC色谱分析，步骤3)制作标准指纹图谱。
上述标准指纹图谱有20个共有峰，所述峰的相对保留时间tR依次分别为：0.145，0.266，0.294，0.371，0.389，0.408，0.441，0.534，0.594，0.657，0.683，0.812，0.932，1.000，1.060，1.097，1.113，1.155，1.203，1.232。
一种鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)供试品溶液制备
取鼻渊通窍颗粒，加入纯化水，超声处理30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2)HPLC色谱分析，
对步骤1)中得到的供试品溶液进行HPLC色谱分析，HPLC色谱分析条件为：AgilentEdipse XDB-C18柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，采用梯度洗脱，检测波长310nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。记录色谱图。
3)标准指纹图谱制作
按步骤2)中色谱条件对鼻渊通窍颗粒供试品溶液进行分析比较，得到由样品共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱。
其中，步骤1)精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
所述样品的数量为6批次。
与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下优势：
(1)本发明提供的鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱建立方法精密度高，重现性好，通过对比所得指纹图谱中共有峰的有无，可对鼻渊通窍颗粒的质量进行全过程评价，有效得保证了成品的质量，可克服现有技术检测指标的单一，不能反映内在质量的缺点。
(2)本发明提供的色谱条件下的各特征色谱峰均实现了良好的基线分离，稳定性好、特征峰多，能全面、准确地评价鼻渊通窍颗粒的质量，适用于对鼻渊通窍颗粒真伪鉴别和产品质量的控制。
附图说明
图1为鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(1-20为20个共有峰)；
图2为12批鼻渊通窍颗粒的HPLC指纹图谱叠加图；
具体实施例
实施例1鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国)：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，ChromeleonTM色谱工作站。
1.2试药
鼻渊通窍颗粒由山东新时代药业有限公司提供，见表1；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
表1鼻渊通窍颗粒测试样品批号
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Edipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.05％磷酸水，按照下表进行梯度洗脱：
检测波长：310nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
2.2供试品溶液的制备：精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到有其共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(参见附图1、2)，其中以14号绿原酸峰为对照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的20个共有峰的相对保留时间tR分别：0.145，0.266，0.294，0.371，0.389，0.408，0.441，0.534，0.594，0.657，0.683，0.812，0.932，1.000，1.060，1.097，1.113，1.155，1.203，1.232。其中，14号峰为绿原酸。
将12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱导入国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》软件分析，进行色谱峰匹配，以14号绿原酸为参照确定20个共有峰为构成鼻渊通窍颗粒指纹图谱的特征峰，样品共有峰的相对保留时间见表2，12批鼻渊通窍颗粒共有峰的相对峰面积见表3。12批鼻渊通窍颗粒与标准指纹图谱相似度计算结果依次为：0.998，0.999，0.997，0.998，0.999，0.995，0.994，0.999，0.998，0.997，0.998，0.995。
表2 12批鼻渊通窍颗粒共有峰的相对保留时间(tR)
表3 12批鼻渊通窍颗粒共有峰的相对峰面积(S)
2.4方法学考察
2.4.1精密度实验
取8001811001批样品，按照2.2项下方法制备供试品溶液，连续进样6次，以14号峰为参照峰，计算出1～20号共有峰的相对保留时间和保留峰的RSD均小于3％，同时用相似度软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明仪器精密度良好。
2.4.2重现性实验
取8001811001批样品，分别准确称取6份，按照2.2项下方法制备供试品溶液，分别进样，以14号峰为参照峰，计算出1～20号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％，同时用相似度软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明方法重现性良好。
2.4.3稳定性实验
取8001811001批样品，按照2.2项下方法制备供试品溶液，分别在0,2,4,8,12,18,24h进样，以14号峰为参照峰，计算出1～20号共有峰的相对保留时间和保留峰的RSD均小于3％，同时用相似度软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明供试品溶液在24小时内稳定性良好。
实施例2鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国)：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，ChromeleonTM色谱工作站。
1.2试药
鼻渊通窍颗粒有山东新时代药业有限公司提供，见表1；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
表1鼻渊通窍颗粒测试样品批号
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Edipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸水，按照下表进行梯度洗脱：
检测波长：310nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
2.2供试品溶液的制备：精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到有其共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(参见附图1、2)，其中以14号绿原酸峰为对照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的20个共有峰的相对保留时间tR分别：0.144，0.265，0.294，0.372，0.389，0.407，0.441，0.534，0.593，0.658，0.683，0.812，0.932，1.000，1.061，1.096，1.114，1.156，1.202，1.233。其中，14号峰为绿原酸。
实施例3鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国)：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，ChromeleonTM色谱工作站。
1.2试药
鼻渊通窍颗粒有山东新时代药业有限公司提供，见表1；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
表1鼻渊通窍颗粒测试样品批号
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Edipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.15％磷酸水，按照下表进行梯度洗脱：
检测波长：310nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
2.2供试品溶液的制备：精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到有其共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(参见附图1、2)，其中以14号绿原酸峰为对照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的20个共有峰的相对保留时间tR分别：0.145，0.265，0.295，0.371，0.389，0.409，0.440，0.534，0.593，0.656，0.684，0.812，0.931，1.000，1.061，1.095，1.113，1.154，1.202，1.231。其中，14号峰为绿原酸。
实施例4鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国)：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，ChromeleonTM色谱工作站。
1.2试药
鼻渊通窍颗粒有山东新时代药业有限公司提供，见表1；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
表1鼻渊通窍颗粒测试样品批号
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Edipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.2％磷酸水，按照下表进行梯度洗脱：
检测波长：310nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
2.2供试品溶液的制备：精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到有其共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(参见附图1、2)，其中以14号绿原酸峰为对照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的20个共有峰的相对保留时间tR分别：0.145，0.265，0.293，0.370，0.389，0.400，0.442，0.533，0.595，0.656，0.684，0.813，0.934，1.000，1.061，1.098，1.114，1.156，1.203，1.233。其中，14号峰为绿原酸。
实施例5鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国)：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，ChromeleonTM色谱工作站。
1.2试药
鼻渊通窍颗粒有山东新时代药业有限公司提供，见表1；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
表1鼻渊通窍颗粒测试样品批号
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Edipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.2％磷酸水，按照下表进行梯度洗脱：
检测波长：310nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
2.2供试品溶液的制备：精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声10min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到有其共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(参见附图1、2)，其中以14号绿原酸峰为对照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的20个共有峰的相对保留时间tR分别：0.144，0.264，0.293，0.369，0.388，0.400，0.442，0.532，0.595，0.656，0.683，0.813，0.934，1.000，1.059，1.097，1.113，1.155，1.202，1.232。其中，14号峰为绿原酸。
实施例6鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Thermo Ultimate 3000高效液相色谱仪(美国)：二极管阵列检测器，四元低压梯度泵，ChromeleonTM色谱工作站。
1.2试药
鼻渊通窍颗粒有山东新时代药业有限公司提供，见表1；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。
表1鼻渊通窍颗粒测试样品批号
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：Agilent Edipse XDB-C18(4.6×250mm，5μm)柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为0.2％磷酸水，按照下表进行梯度洗脱：
检测波长：310nm；流速：1ml/min；柱温：30℃；进样量：10μL。
2.2供试品溶液的制备：精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声50min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定12个批号鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到有其共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱(参见附图1、2)，其中以14号绿原酸峰为对照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的20个共有峰的相对保留时间tR分别：0.145，0.264，0.292，0.371，0.389，0.400，0.441，0.532，0.595，0.655，0.684，0.813，0.934，1.000，1.061，1.097，1.113，1.156，1.203，1.233。其中，14号峰为绿原酸。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理及构思的前提下，还可以做出若干修饰和改进，这些也应都属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱建立的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)供试品溶液制备
取鼻渊通窍颗粒，加入纯化水，超声处理，冷却，过滤，即得供试品溶液；
2)HPLC色谱分析
对步骤1)中得到的供试品溶液进行HPLC色谱分析，记录色谱图；
3)标准指纹图谱制作。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中超声处理时间为10-50min；步骤2)中HPLC色谱分析条件为：Agilent Edipse XDB-C18柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.05％-0.2％磷酸溶液，采用梯度洗脱，检测波长310nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中超声处理时间为30min；步骤2)中流动相B为0.1％磷酸溶液。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述梯度洗脱方法为：
5.采用权利要求1-4中任一项所述方法建立的标准指纹图谱，其特征在于，所述标准指纹图谱有20个共有峰。
6.如权利要求5所述的标准指纹图谱，其特征在于，所述峰的相对保留时间tR依次分别为：0.145，0.266，0.294，0.371，0.389，0.408，0.441，0.534，0.594，0.657，0.683，0.812，0.932，1.000，1.060，1.097，1.113，1.155，1.203，1.232。
7.一种鼻渊通窍颗粒HPLC指纹图谱建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)供试品溶液制备
取鼻渊通窍颗粒，加入纯化水，超声处理30min，冷却，过滤，即得供试品溶液；
2)HPLC色谱分析
对步骤1)中得到的供试品溶液进行HPLC色谱分析，HPLC色谱分析条件为：AgilentEdipse XDB-C18柱，流动相A为甲醇，流动相B为0.1％磷酸溶液，采用梯度洗脱，检测波长310nm，流速1.0ml/min，柱温30℃。记录色谱图；
3)标准指纹图谱制作
按步骤2)中色谱条件对鼻渊通窍颗粒供试品溶液进行分析比较，得到由样品共有特征峰构成的鼻渊通窍颗粒HPLC标准指纹图谱。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)精密称取鼻渊通窍颗粒1.0g，置具塞锥形瓶中，准确加入25mL纯化水，超声30min，冷却，过滤，即得供试品溶液。
9.如权利要求7中任一项所述的方法，其特征在于，所述样品的数量为6批次。
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114544833A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-05-27 | 辽宁中医药大学 | 鼻渊通窍颗粒多息药效预测特征图谱构建方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1762465A (zh) * | 2005-10-01 | 2006-04-26 | 合肥立方制药有限公司 | 滴通鼻炎凝胶及其制备方法、质量控制技术 |
| CN103344737A (zh) * | 2013-06-26 | 2013-10-09 | 陕西香菊药业集团有限公司 | 一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法 |
| CN106442828A (zh) * | 2016-11-28 | 2017-02-22 | 重庆大易科技投资有限公司 | 鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法及其指纹图谱 |
| CN107843657A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-03-27 | 株洲千金药业股份有限公司 | 通窍鼻炎片的质量检测方法 |
-
2019
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1762465A (zh) * | 2005-10-01 | 2006-04-26 | 合肥立方制药有限公司 | 滴通鼻炎凝胶及其制备方法、质量控制技术 |
| CN103344737A (zh) * | 2013-06-26 | 2013-10-09 | 陕西香菊药业集团有限公司 | 一种治疗鼻窦炎的中药片剂的质量控制方法 |
| CN106442828A (zh) * | 2016-11-28 | 2017-02-22 | 重庆大易科技投资有限公司 | 鼻窦炎口服液指纹图谱的测定方法及其指纹图谱 |
| CN107843657A (zh) * | 2017-09-28 | 2018-03-27 | 株洲千金药业股份有限公司 | 通窍鼻炎片的质量检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 刘文英等: "《药物分析》", vol. 6, 人民卫生出版社, pages: 435 - 437 * |
| 孙亮等: "鼻炎灵胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量测定及指纹图谱研究", 《药学服务与研究》, vol. 16, no. 3, pages 1 * |
| 董赛文等: "高效液相色谱法测定鼻渊通窍颗粒中连翘苷含量", 《中国药业》, vol. 18, no. 16, pages 35 - 36 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114544833A (zh) * | 2022-02-28 | 2022-05-27 | 辽宁中医药大学 | 鼻渊通窍颗粒多息药效预测特征图谱构建方法 |
| CN114544833B (zh) * | 2022-02-28 | 2024-04-05 | 辽宁中医药大学 | 鼻渊通窍颗粒多息药效预测特征图谱构建方法 |
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