CN101216465A - 甘草药材指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种甘草药材HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱。首先,取甘草药材粉末,加入70%的乙醇水溶液,超声提取,并将上清液用微孔滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。然后,进行高效液相色谱分析,色谱柱为Kromasil-C18(5μm,250×4.6mm),流动相为0.8%的乙酸水溶液-乙腈;采用梯度洗脱方式;检测波长254nm;柱温30℃。吸取供试品溶液进样,得到甘草药材的HPLC指纹图谱。通过对16批次甘草药材HPLC指纹图谱的比对,确定其共有指纹特征,得到标准指纹图谱。利用标准指纹图谱可以有效监控甘草药材的质量。
Description
技术领域
本发明涉及中药材指纹图谱的建立方法,尤其是甘草药材高效液相色谱(HPLC)指纹图谱的建立方法,以及由此方法所得到的甘草药材标准指纹图谱。属于药物分析技术领域。
背景技术
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特征的图谱或图象。目前指纹图谱已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有效手段之一。美国食品药品管理局在1996年制定的《FDA关于植物制品的指南》中,要求对植物原料、植物药中间品和植物药产品提供相应的指纹图谱。英国草药典、印度草药典以及加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会也接受色谱指纹图谱。中国国家药品监督管理部门于2000年发布了《中药注射剂的指纹图谱研究的技术要求(暂行)》,明确要求对新申报的中药注射剂和已上市的中药注射剂实行指纹图谱标准。
中药指纹图谱经过了数十年的研究,使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同功酶分析法、分子生物学技术、聚类分析技术等许多现代分析测试手段,为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的数据。但从中药全面质量控制的角度看,还远未达到有效地反映和控制中药的整体质量的目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可,包括美国、英国、法国、加拿大、德国、日本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。因此,为中药材建立相应的HPLC指纹图谱,是现阶段控制中药内在质量的有效手段。
甘草为豆科植物甘草、胀果甘草或光果甘草的干燥根及根茎,具有补脾益气、止咳祛痰、清热解毒、缓急定痛和调和药性之功效,临床主要用于慢性肝炎硬变、溃疡病、初发劳力性心绞痛、妊娠恶阻重症、腰椎间盘突出等疾病的治疗及慢性肝病肝组织学改善、慢性肝病肝癌变的抑制等。甘草所含成分十分复杂,含有甘草酸等三萜类、黄酮类化合物以及香豆素类和生物碱类化合物等。由于受产地、气候和生态环境等的影响,不同甘草药材所含的成分也存在着一定差异。 《中国药典》对甘草药材的质量控制仅限于甘草酸和甘草苷含量的测定,不能系统、完整地反映甘草的内在质量。
发明内容
本发明的目的是提供一种甘草药材指纹图谱的建立方法,以及由此方法所得到的甘草药材标准指纹图谱。为实现此目的,本发明通过对甘草药材高效液相色谱指纹图谱的研究,提出了一种更好的甘草药材质量控制方法,弥补了现有质量控制技术的不足,使甘草药材的质量控制更加完善和科学。
本发明的甘草药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法,包括如下步骤:
(1)供试品溶液的制备:精密称取药材粉末10g,置于具塞容器中,加入50~85%的乙醇100~800mL,超声震荡45min,冷却后取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
(2)高效液相色谱分析:色谱分离柱填料为5μm Kromasil-C18,250×4.6mm;流动相为0.5~2.0%乙酸水溶液-乙腈;采用梯度洗脱方式:0min→25min→50min→70min→95min,乙腈11%→28%→45%→60%→78%;流速0.8~1.2mL/min;检测波长254nm;柱温25~40℃。在此条件下分析供试品溶液,得到甘草药材的指纹图谱。
按照本发明提供的方法,对16批甘草药材建立了HPLC指纹图谱,通过分析比较,确定了20个共有特征峰。
特征峰的保留时间分别为:3.8min、8.6min、19.8min、22.0min、26.8min、32.8min、35.0min、38.4min、40.4min、42.6min、43.8min、46.2min、59.9min、57.4min、60.4min、62.2min、68.8min、75.2min、80.8min、87.6min,这些共有特征峰构成了甘草药材的指纹特征,可作为甘草药材的标准指纹图谱。
本发明具有如下显著的优点和用途:
(1)将甘草药材作为一个整体对待,通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的细微差异;
(2)供试品制作简便,色谱条件容易实现;
(3)方法的稳定性和重现性都比较好;
(4)适于对甘草药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。
附图说明
图1是本发明提供的甘草药材的标准指纹图谱。图中从左到右分别标出了其共有特征峰1至20号。
具体实施方式
本发明的优选实施例如下:
(1)仪器和药品:使用岛津LC10A高效液相色谱仪;甘草药材共16批,均购于中草药商店;其它试剂为色谱纯或分析纯。
(2)供试品溶液的制备:精密称取药材粉末10g,置于容量瓶中,加入70%的乙醇600mL,超声震荡45min,冷却。取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
(3)高效液相色谱分析:色谱分离柱填料为5μm Kromasil-C18,250×4.6mm;流动相为0.8%乙酸水溶液-乙腈;采用梯度洗脱方式:0min→25min→50min→70min→95min,乙腈11%→28%→45%→60%→78%;流速1.0mL/min;检测波长254nm;柱温30℃。在此条件下分析供试品溶液,得到甘草药材的指纹图谱。
(4)按照本发明提供的方法,对16批甘草药材建立了HPLC指纹图谱,通过分析比较,确定了20个共有特征峰,其保留时间分别为:3.8min、8.6min、19.8min、22.0min、26.8min、32.8min、35.0min、38.4min、40.4min、42.6min、43.8min、46.2min、59.9min、57.4min、60.4min、62.2min、68.8min、75.2min、80.8min、87.6min,这些共有特征峰构成了甘草药材的指纹特征,可作为甘草药材的标准指纹图谱。
Claims (4)
1.一种甘草药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法,其特征包括供试品溶液的制备、指纹图谱的制作和标准指纹图谱的确定。
2.根据权利要求1所述的甘草药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法,其特征是所述的供试品溶液的制备方法是:精密称取药材粉末10g,置于具塞容器中,加入50~85%的乙醇100~800mL,超声震荡45min,冷却后取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。
3.根据权利要求1、2所述的甘草药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法,其特征是所述的指纹图谱的制作过程为:色谱分离柱填料5μm Kromasil-C18,250×4.6mm;流动相0.5~2.0%乙酸水溶液-乙腈;采用梯度洗脱方式0min→25min→50min→70min→95min,乙腈11%→28%→45%→60%→78%;流速0.8~1.2mL/min;检测波长254nm;柱温25~40℃。在此条件下分析供试品溶液,得到甘草药材的指纹图谱。
4.根据权利要求1、2、3所述的甘草药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法,其特征是所述的标准指纹图谱的确定方法是:按照本发明提供的方法,对16批甘草药材建立了HPLC指纹图谱,通过分析比较,确定了20个共有特征峰,保留时间分别为:3.8min、8.6min、19.8min、22.0min、26.8min、32.8min、35.0min、38.4min、40.4min、42.6min、43.8min、46.2min、59.9min、57.4min、60.4min、62.2min、68.8min、75.2min、80.8min、87.6min,这些共有特征峰构成了甘草药材的指纹特征,可作为甘草药材的标准指纹图谱。
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