CN102297917A - 一种测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法 - Google Patents
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Abstract
一种测定甘草及炮制品中7种成分含量的方法,是取炮制品甘草粉末过60目筛,约0.3-1g,加乙醇50-100ml,超声处理20-50min,放冷后同70%乙醇补失量后,上C18色普柱,并进行七次梯度洗脱,洗脱液为乙腈与磷酸水混合液,7次洗脱液乙腈与磷酸水配比分别为15%:85%、25%:75%、32%:68%、34%:66%、36%:64%、42%:56%、51%:49%,对应7次洗脱的波长选择为276nm、360nm、276nm、248nm、370nm、254nm和370nm,流速为0.5-2.0ml/mis,柱温20-30℃。能测得芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和异甘草素含量,塔板数以甘草酸计不低于3000,分离度>1.5。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药成分含量的测定方法,特别是涉及一种应用高效液相色谱法同时测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法。
甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch.)、胀果甘草(Glycyrrhiza inflate Bat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)的干燥根及根茎。收载于中国药典2010年版(一部),味甘,平;归心、肺、脾、胃经。具有补脾益气,清热解毒,祛痰止咳,缓急止痛,调和诸药的功效。主要产于内蒙古、甘肃、新疆、陕西、东北、山西等地区。主要有效成分为皂苷类和黄酮类化合物。甘草黄酮类的代表成分主要有甘草苷、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素等;皂苷类的主要代表成分为甘草酸。现代研究表明,甘草酸可用于皮质激素的替代治疗并能防治肝炎,对慢性肝炎的肝细胞亦有良好的保护作用;甘草苷、芹糖甘草苷、芹糖异甘草苷等为代表的甘草总黄酮类,具有抗心肌缺血以及抑制艾滋病病毒增殖的作用;异甘草苷具有抗溃疡作用;甘草素、异甘草素具有显著的抗溃疡和解痉作用;异甘草素还具有雌性激素样作用, 可以抑制乳腺癌细胞的增殖。2010版药典仅同时测定了甘草酸、甘草苷两种成分的含量,采用HPLC法固定波长进行了含量测定。评价指标较少,对药材质量的评价不够全面;且使用同一波长检测,系统检测灵敏度有一定局限性。因此,需要建立一种选取每种待测指标最大吸收波长,同时测定多指标的含量测定方法。采用本方法---波长切换高效液相色谱法建立了同时测定甘草药材中7种成分含量的分析方法,以更好地控制甘草质量。该方法利用C18色谱柱,选取合适的流动相系统,利用波长切换技术,用梯度洗脱的方式使7种成分达到了很好的分离。经过线性关系、精密度、准确度、稳定性、重复性、加样回收率等方法学考察,结果表明,该方法简便、快速、准确、重复性好,为更好地控制甘草药材及其炮制品的质量提供依据。
发明内容
本发明的目的是提供一种全面、准确、简便的甘草成分含量测定方法。该测定方法选择了甘草及其炮制品中7种成分作为含量测定指标,评价信息更加全面。利用HPLC法进行梯度洗脱,特别加入了波长切换技术,该技术选用每种待测指标的最大吸收波长进行检测,保证仪器在测定每种物质时的检测灵敏度达到最大,使得测定结果更加准确、简便、快速。
采用的技术方案是:
一种测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法,其特征在于采用波长切换和梯度洗脱同时测定7种成分含量,包括下述工艺步骤:
1、供试品溶液的制备 取不同来源及不同炮制品甘草药材粉末,过60目筛,约0.3~1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入一定浓度的乙醇50~100ml,密塞,称定重量,超声处理20~50min,放冷,再称定重量,用相同浓度的乙醇补足损失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
2、混合对照品溶液的配制 精密称取芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素对照品适量,分别加甲醇溶解,制成浓度分别为0.3~2.0mg·mL-1的对照品储备液,备用。分别精密量取一定体积上述对照品储备液溶液,加甲醇稀释,制成每1ml含芹糖甘草苷20~30μg、甘草苷30~50μg、芹糖异甘草苷20~30μg、异甘草苷1~10μg、甘草素1~10μg、甘草酸100~200μg、异甘草素1~10μg的混合溶液,即得。
3、甘草及其炮制品中7种成分含量的测定 取步骤1制备的供试品溶液和混合对照品溶液各一份,上色谱柱,进样测定并计算样品中7种成分的含量。色谱柱采用C18柱,流动相为乙腈与一定浓度磷酸水混合液;梯度洗脱采用七次洗脱,第一梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为15%:85%的洗脱液;第二次梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为25%:75%的洗脱液;第三梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为32%:68%的洗脱液;第四梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为34%:66%的洗脱液;第五梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为36%:64%的洗脱液;第六梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为42%:58%的洗脱液;第七梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为51%:49%的洗脱液;检测波长选择:第一梯度洗脱阶段检测波长为276nm,第二梯度洗脱阶段检测波长为360 nm,第三梯度洗脱阶段检测波长为276 nm,第四梯度洗脱阶段检测波长为248 nm,第五梯度洗脱阶段检测波长为370 nm,第六梯度洗脱阶段检测波长为254 nm,第七梯度洗脱阶段检测波长为370 nm,流速为0.5—2.0mL/min;柱温20—30℃;在上述色谱和梯度洗脱条件下能精确测得芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和异甘草素含量,理论塔板数以甘草酸计不低于3000,分离度>1.5;上述百分比为体积百分比。
线性关系的考察 分别精密量取上述混合对照品溶液2、5、10、15、20μL注入高效液相色谱仪,测定。以进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。
精密度考察 取甘草药材样品粉末0.5~1.0g,精密称定。按供试品溶液制备的方法操作,在上述色谱条件下连续进样6次,测得芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素的RSD值均应小于2%。
重复性考察 取甘草药材样品6份,每份粉末0.5~1.0g,精密称定。按供试品溶液制备的方法操作,在上述色谱条件下进样,测得芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素的RSD值均应小于2%。
稳定性考察 取同一供试品溶液,在室温下放置,在24h内,分别取不同时间点进样分析,测定峰面积。芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素峰面积的RSD均应小于2%。
加样回收率考察 称取已知含量的甘草药材6份,每份约0.3~0.5g,精密称定。分别准确加入芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素对照品储备液2.0~3.0ml、3.0~4.0ml、0.4~0.5ml、1.7~2.0ml、0.4~0.8ml、5.0~6.0ml、0.2~0.3ml。按供试品溶液制备的方法操作,在上述色谱条件下进行测定,计算回收率均应大于95%,RSD均应小于3.0%。
在流动相系统的选择方面,本方法分别考查了乙腈-水、乙腈-不同浓度的磷酸水、甲醇-水等不同流动相系统,从中筛选出色谱基线平稳,7种成分的分离效果好的流动相系统。
在检测波长的选择方面,由于7种成分结构不同,本方法利用可变波长紫外检测器波长切换的功能,选择各成分最大吸收波长为检测波长。结合7种成分的出峰顺序,依次为芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸、异甘草素,他们的最大吸收波长分别为276nm、276nm、360nm、360nm、276nm、254nm、370nm。最终达到了检测灵敏度高,干扰小的目的。
本发明测定结果准确、简便、快速,甘草及其炮制品有效成分含量评价信息更加全面,完善了质量标准。
Claims (1)
1.一种测定甘草及其炮制品中7种成分含量的方法,其特征在于采用波长切换和梯度洗脱技术,同时测定7种成分含量,包括下述工艺步骤:
(1)、供试品溶液的制备 取不同来源及不同炮制品甘草药材粉末,过60目筛,0.3~1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入一定浓度的乙醇50~100ml,密塞,称定重量,超声处理20~50min,放冷,再称定重量,用相同浓度的乙醇补足损失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
(2)、甘草及其泡制品中7种成分含量的测定: 取步骤1制备的供试品溶液,上色谱柱,进样测定样品中7种成分的含量;色谱柱采用C18柱,流动相为乙腈与一定浓度磷酸水混合液;梯度洗脱采用七次洗脱,第一梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为15%:85%的洗脱液;第二次梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为25%:75%的洗脱液;第三梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为32%:68%的洗脱液;第四梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为34%:66%的洗脱液;第五梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为36%:64%的洗脱液;第六梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为42%:58%的洗脱液;第七梯度洗脱采用乙腈:磷酸水为51%:49%的洗脱液;检测波长选择:第一梯度洗脱阶段检测波长为276nm,第二梯度洗脱阶段检测波长为360 nm,第三梯度洗脱阶段检测波长为276 nm,第四梯度洗脱阶段检测波长为248 nm,第五梯度洗脱阶段检测波长为370 nm,第六梯度洗脱阶段检测波长为254 nm,第七梯度洗脱阶段检测波长为370 nm,流速为0.5—2.0mL/min;柱温20—30℃;在上述色谱和梯度洗脱条件下能精确测得芹糖甘草苷、甘草苷、芹糖异甘草苷、异甘草苷、甘草素、甘草酸和异甘草素含量,理论塔板数以甘草酸计不低于3000,分离度>1.5;上述百分比为体积百分比。
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