CN114813985A - 一种寒热痹胶囊hplc指纹图谱的构建方法 - Google Patents

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Abstract

一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，包括如下步骤：取对照品和寒热痹胶囊样品，分别制备对照品溶液和供试品溶液；采用高效液相色谱法对对照品溶液和供试品溶液进行检测，获得相应检测图谱和对照图谱；将检测图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行分析，获得具有标识性的热痹胶囊的指纹图谱。本发明的指纹图谱，色谱峰丰富，且包含归属于桂枝、白芍、防风、知母、白术、麻黄、干姜、炙附子、甘草、地龙多味药材的有效成分，能够更全面地反应寒热痹胶囊的整体化学成分，为寒热痹胶囊的整体质量控制及评价提供了有效手段，克服了原质量控制方法的单一性和片面性，更好的监控和评价本品质量，指导规范化生产，具有较高的应用价值。

Description

一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及采用高效液相色谱法建立寒热痹胶囊的高效液相指纹图谱用于控制寒热痹胶囊的质量。
背景技术
痹证的主要症状为关节肿胀、疼痛。痹证的疼痛多属于慢性疼痛，表现为痛觉过敏。现代中医将痹证分为风寒湿痹证、风湿热痹证、痰瘀痹阻证、肝肾两虚证等。风寒热痹证患病因素有多种，一是由于机体直接受到湿、热等邪气侵袭，或是风寒湿搏证久治不愈；二是体质阳气旺盛，脏腑内伤，阴阳失调。患者关节痛且热，易出汗口渴，苔黄、质红。各型痹证主要以关节红肿、屈伸不利、疼痛难忍为主，对应于现代医学的风湿性关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、强直性脊髓炎、痛风等疾病。
临床中寒热错杂证的临床特点为寒热并存，寒、热两种矛盾对立的症状同时出现，主要临床表现有肢体关节作痛，或肿胀，局部畏寒，触之灼热，关节活动不灵活，可以涉及一个或多个关节，畏风恶寒，舌苔黄白相兼，脉弦或紧或数；关节冷痛，沉重，局部喜暖，但伴有身热不扬，口渴不喜饮；肢体关节疼痛剧烈，遇寒加重，局部喜暖、变形，屈伸不便，伴见午后潮热，夜卧盗汗，舌质红，苔薄白等。
本证因人体营卫气血失调，寒湿热外邪杂至而成。寒为阴邪，其性凝滞，主收引。血气受寒，则凝而留聚，经脉不通，故见肢体关节冷痛。遇寒或天气转冷，则凝滞加重,故遇寒痛剧；遇热则寒凝渐散，气血得以运行，故得热痛减。湿亦属阴，其性重浊粘滞，易阻碍气机，故肢体重着。风寒湿邪，蕴于肌肤筋骨关节，均可渐进郁而化热，或可伤阴化热，而现热痹症状。寒湿风热之邪，留于关节，故关节肿胀。本病临证当辨清寒热，孰轻孰重，孰缓孰急。治疗宜散寒清热，和营定痛。
寒热痹胶囊是由桂枝、白芍、防风、知母、白术、麻黄、干姜、附子(炙)、甘草、地龙等药味制备而成，重用桂枝、麻黄、附子以温经通阳，散寒祛湿，芍药、知母清热和营，白术健脾除湿等为主要配伍。是长春英平药业有限公司多年来重点培育的中药大品种，具有散寒清热、和营定痛的功效，用于肌肉关节疼痛，局部触之发热，但自觉怕冷畏寒，或触之不热，但自觉发热，全身热象不显。风湿和类风湿性关节炎，见上述症状者可应用。由于其组方清楚合理，临床疗效良好，市场需求量大。
正由于寒热痹胶囊组方明确，配伍合理等特点，更需要建立指纹图谱技术进行内控质量把关。有关学者也做了一些研究，如刘天竹等高效液相色谱法同时测定寒热痹颗粒中芒果苷、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、肉桂酸和芍药苷等5种成分含量(刘天竹，高效液相色谱法同时测定寒热痹颗粒中5种成分含量，中国药业，2021年，第15期，78-81页)；郑燕青利用高效液相色谱法测定了寒热痹胶囊中芍药苷的含量(郑燕青，高效液相色谱法测定寒热痹胶囊中芍药苷的含量，海峡药学，2008年，第8期，37-39页)；杨桂芳等利用等导数值光谱法测定寒热痹胶囊中麻黄碱的含量(杨桂芳，等导数值光谱法测定寒热痹胶囊中麻黄碱的含量，沈阳药学院学报，1993年，第3期，199-201页)；金凤环等对寒热痹胶囊中知母、干姜、甘草进行了薄层鉴别，对芍药苷进行了含量测定(金凤环，寒热痹胶囊质量标准研究，中国医药导报，2009年，第29期，48-50页)；国家药品标准WS3-B-3697-98-1对处方中干姜、麻黄进行了薄层鉴别研究，对芍药苷进行了含量测定。还未有利用指纹图谱的方法对寒热痹胶囊进行质量控制。
目前寒热痹胶囊含量测定方法都是用一味两味成分来说明寒热痹胶囊的内在质量，具有一定的片面性。要控制寒热痹胶囊的质量，只针对其中一两个化学成分进行表征和控制是不够的，必须对它的物质群整体予以控制。所以，建立寒热痹胶囊指纹图谱的检测方法及其应用就显得尤为重要，需要对其物质群体进行控制，有效表征质量标准。在本发明完成前，以寒热痹胶囊的含有的化成分为指标建立指纹图谱的方法未见报道。
发明内容
本发明的目的之一在于，提供一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱构建方法，采用该方法构建的指纹图谱能够全面地反映寒热痹胶囊整体化学成分，为寒热痹胶囊的整体质量控制及评价提供了有效手段，从而更好地保证寒热痹胶囊的质量稳定性、一致性和可控性，从而确保寒热痹胶囊的安全性和有效性。
本发明目的之二在于，经过系统的成分指认和药品不同批次共有峰的单味药材归属，较全面的反应寒热痹胶囊中各成分的现状，能够为寒热痹胶囊质量提供参考依据。
本发明中所述的寒热痹胶囊是由桂枝151.5g、白芍227.3g、防风151.5g、知母227.3g、白术151.5g、麻黄227.3g、干姜90.9g、附子(炙)151.5g、甘草90.9g、地龙151.5g制备而成。具体的制备方法为：以上十味，除白芍、干姜粉碎成细粉外，其余白术等八味，加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，静置，滤过，滤液浓缩至1.25～1.30(50℃)清膏。加入白芍、干姜细粉，混匀，干燥，粉碎，过筛，分装，即得。
本发明采用如下的技术方案：一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。具体的，所述的寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取约1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50ml，称取重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
b.对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成质量浓度分别为0.01、0.15、0.02、0.005、0.01、0.02、0.04、0.01mg/mL的混合对照品溶液，过微孔滤膜，取续滤液作为对照品溶液；
c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得寒热痹胶囊的指纹图谱。
上述方法中，所述高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01-0.3％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5ml/min，柱温25-45℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
优选的，所述的寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称取重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
b.对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，置25mL量瓶中，以甲醇为溶剂，分别配制成质量浓度分别为0.3547、0.3113、0.3602、0.1919、0.3319、0.1982、0.3827、0.3970mg/mL的对照品储备液溶液；再分别精密吸取对照品储备液0.3、5、0.5、0.3、0.5、1、1、0.3mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.01064、0.15565、0.01801、0.00576、0.01660、0.01982、0.03827、0.01191mg/mL的混合对照品溶液，过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为混合对照品溶液；
c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得寒热痹胶囊的指纹图谱。
所述高效液相色谱测定的色谱条件优选为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为：Shimadzu C18 250×4.60mm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
前述的寒热痹胶囊的指纹图谱构建方法中，梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0-10min，99％A；10-25min，1-12％A；25-45min，12-15％A；45-55min，15％A；55-70min，15-20％A；70-85min，20-30％A；85-115min，30-60％A；115-125min，60-70％A。
所述指纹图谱具有22个共有峰，将对照品所测得的色谱图与样品指纹图谱进行对比，在与各对照品相同保留时间处的色谱峰即得到了指认，对照品色谱图见图1。结果显示，共有峰中5、8、9、10、13、18、19、20号色谱峰分别被指认为芒果苷、芍药苷﹑升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ。
本发明的有益效果是：
1、本发明建立了11批寒热痹胶囊的HPLC指纹图谱，相似度均大于0.90，可以更加全面的反应寒热痹胶囊所含有的化学信息，更好的表征其质量。
2、标定了22个共有峰，共有峰中5、8、9、10、13、18、19、20号色谱峰分别被指认为芒果苷、芍药苷﹑升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ。
3、由于指纹图谱不是为了测定某个成分的精确含量，而是要充分反映化学成分的信息，因此，本发明选择在230nm波长处进行测定，其出峰较多，反映的信息较完全；各个峰吸收值良好，基线平稳，也避免了近紫外杂质峰较大吸收情况。
4、本发明建立的高效液相指纹图谱方法首次实现了对寒热痹胶囊全方的质量控制，不是对单一化合物或药材进行鉴别，能更有效地指导投料、严格规范生产操作，确保临床用药安全、有效。
5、按照标准指纹图谱条件进行色谱峰归属，22个共有峰分别归属于桂枝、白芍、防风、知母、白术、麻黄、干姜、炙附子、甘草、地龙等十味药材；其中1号峰归属于防风，2号峰归属于干姜、白术，3号峰归属于白芍，4号峰归属于麻黄、桂枝，5号峰归属于知母，6号峰归属于白芍、麻黄，7号峰归属于白芍、麻黄，8号峰归属于白芍，9号峰归属于防风，10号峰归属于甘草，11号峰归属于麻黄、桂枝、地龙、白芍，12号峰归属于白芍、麻黄，13号峰归属于防风，14号峰归属于白芍，15号峰归属于白芍，16号峰归属于白芍、桂枝，17号峰归属于白芍，18号峰归属于甘草，19号峰归属于干姜，20号峰归属于白术、地龙，21号峰归属于干姜，22号峰归属于干姜。
附图说明
图1混合对照品HPLC色谱图；
图2本发明测得的寒热痹胶囊共有模式图谱；
图3 10个批次寒热痹胶囊指纹图谱叠加图；
图4样品指纹图谱与各药材色谱图对比归属图；
图5-图11不同波长检测条件的考察。
具体实施方式
为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明寒热痹胶囊的HPLC指纹图谱建立及其指纹图谱作进一步的说明。
实施例1：检测不同批次的寒热痹胶囊的指纹图谱
1、仪器与试药
1.1 Agilent 1220型高效液相色谱仪(美国安捷伦)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；BSA 124S电子天平(赛多利斯)；QUINTIX35-1CN(赛多利斯)。
1.2纯净水(娃哈哈)，乙腈(色谱纯)，其他试剂均为分析纯。芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品(批号分别为111607-201704、110736-202044、111522-201913、111610-201908、111523-201811、110731-202021、111833-202001、111978-201501，纯度分别为98.1％、96.8％、94.6％、95.0％、97.4％、96.2％、99.3％、99.9％，均购自中国食品药品检定研究院)。寒热痹胶囊(批号：20200701、20200702、20201101、20201102、20201103、20210201、20210401、20210501、20210801、20210804、20210901，长春英平药业有限公司)。
2、指纹图谱测定
2.1色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长230nm，流动相梯度洗脱程序如下：0-10min，99％A；10-25min，1-12％A；25-45min，12-15％A；45-55min，15％A；55-70min，15-20％A；70-85min，20-30％A；85-115min，30-60％A；115-125min，60-70％A。
2.2供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称取重量，超声处理(功率80W，频率250kHz)30分钟，放冷再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3对照药材及对照提取物的制备：按照处方比例及制备方法，称取对照提取物或对照药材，按照供试品制备方法进行制备。
2.4对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，置25mL量瓶中，以甲醇为溶剂，分别配制成质量浓度分别为0.3547、0.3113、0.3602、0.1919、0.3319、0.1982、0.3827、0.3970mg/mL的对照品储备液溶液；再分别精密吸取对照品储备液0.3、5、0.5、0.3、0.5、1、1、0.3mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.01064、0.15565、0.01801、0.00576、0.01660、0.01982、0.03827、0.01191mg/mL的混合对照品溶液，过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为混合对照品溶液；
2.4测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，分别见图1、图2。
实施例2：11批次寒热痹胶囊指纹图谱分析
1、指纹图谱相似度分析
取11批次寒热痹胶囊，按供试品制备方法制备，色谱条件进样分析，记录寒热痹胶囊指纹图谱，采用国家药典委员会发行的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012A版》对11批次寒热痹胶囊指纹图谱进行相似度分析，设定S11为参照图谱，利用中位数法，时间窗宽度设置0.1min，共标定24个共有峰，11批次寒热痹胶囊的相似度均大于0.90，标准指纹图谱数据见表1。24个共有峰相对保留时间基本一致，而相对峰面积存在较大差别，见表2。11批次寒热痹胶囊指纹图谱见图3(图3中S1-S11分别对应批号20200701、20200702、20201101、20201102、20201103、20210201、20210401、20210501、20210804、20210901、20210801)。
表1 11批寒热痹胶囊样品相似度评价结果
Figure BDA0003478050350000091
表2标准指纹图谱数据
Figure BDA0003478050350000092
Figure BDA0003478050350000101
2、共有峰指认：将对照品所测得的色谱图与样品指纹图谱进行对比，在与各对照品相同保留时间处的色谱峰即得到了指认，对照品色谱图见图1。结果显示，共有峰中5、8、9、10、13、18、19、20号色谱峰分别被指认为芒果苷、芍药苷﹑升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ。
3、药材归属：按照标准指纹图谱条件进行色谱峰归属，见图4。22个共有峰分别归属于桂枝、白芍、防风、知母、白术、麻黄、干姜、炙附子、甘草、地龙等十味药材；其中1号峰归属于防风，2号峰归属于干姜、白术，3号峰归属于白芍，4号峰归属于麻黄、桂枝，5号峰归属于知母，6号峰归属于白芍、麻黄，7号峰归属于白芍、麻黄，8号峰归属于白芍，9号峰归属于防风，10号峰归属于甘草，11号峰归属于麻黄、桂枝、地龙、白芍，12号峰归属于白芍、麻黄，13号峰归属于防风，14号峰归属于白芍，15号峰归属于白芍，16号峰归属于白芍、桂枝，17号峰归属于白芍，18号峰归属于甘草，19号峰归属于干姜，20号峰归属于白术、地龙，21号峰归属于干姜，22号峰归属于干姜。
实施例3、波长的选择
取20210501批样品进行试验，分别考察了360、320、280、254、230、210、203等不同波长下的色谱图的整体效果，其它色谱条件与实施例1相同，见图5、6、7、8、9、10、11。由所测色谱图知，波长为360nm时，峰值很小，响应值低且峰的数量很少(图5)；波长为320nm时，峰值很小，响应值低且峰的数量很少(图6)；波长为280nm时，峰值很小，响应值低且峰的数量很少(图7)；波长为254nm时，色谱图基线较平，峰形较佳，但是响应值稍低(图8)。波长为230nm时，色谱图基线较平，峰形较佳，峰数量较多、响应值为最高，为最佳条件(图9)。波长为210时，色谱图基线不平，色谱峰的波动巨大(图10)；波长为203nm时，色谱图基线没有处于标准位置(图11)。综合选择，以230nm为检测波长的指纹图谱最能全面反映制剂的成分，而且峰形最好，所以优选230nm为最佳检测波长。
实施例4、方法学考察
取20210501批样品进行试验，色谱条件及供试品的制备方法与实施例1相同。
(1)精密度试验
取寒热痹胶囊内容物，制备供试品溶液，连续进样6次，记录22个主要色谱峰保留时间和各峰面积。以芍药苷为参照峰，相对峰面积RSD＜3.0％(n＝6)，相对保留时间RSD＜1.0％(n＝6)，证明仪器精密度良好。实验结果见表3。
(2)稳定性试验
取寒热痹胶囊内容物，制备供试品溶液，分别于0、2.5、5、10、15、20h进行测试，记录22个主要色谱峰保留时间和各峰面积。以芍药苷为参照峰，相对峰面积RSD＜3.0％(n＝6)，相对保留时间RSD＜1.0％(n＝6)，证明样品在20h内稳定性良好。实验结果见表3。
(3)重复性试验
取寒热痹胶囊内容物，制备供试品溶液6份，进行测试，记录22个主要色谱峰保留时间和各峰面积。以芍药苷为参照峰，相对峰面积RSD＜3.0％(n＝6)，相对保留时间RSD＜1.0％(n＝6)，证明稳定性良好。实验结果见表3。
表3方法学考察实验结果
Figure BDA0003478050350000121
Figure BDA0003478050350000131

Claims (7)

1.一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取约1～3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20～50mL，称取重量，超声处理20～40分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
b.对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，以甲醇为溶剂，配制成质量浓度分别为0.01、0.15、0.02、0.005、0.01、0.02、0.04、0.01mg/mL的混合对照品溶液，作为对照品溶液；
c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μL，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得寒热痹胶囊的指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.01-0.3％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速0.5～1.5mL/min，柱温25-45℃，检测波长210～360nm；理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
3.根据权利要求1所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于包括以下步骤：
a.供试品溶液的制备：取寒热痹胶囊内容物，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称取重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
b.对照品溶液的制备：分别精密称取芒果苷、芍药苷、升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，分别置25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液；再分别精密吸取对照品储备液0.3、5、0.5、0.3、0.5、1、1、0.3mL置于同一10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为0.01064、0.15565、0.01801、0.00576、0.01660、0.01982、0.03827、0.01191mg/mL的混合对照品溶液，作为混合对照品溶液；
c.测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录125分钟内的色谱图，用指纹图谱软件对图谱进行处理，即得寒热痹胶囊的指纹图谱。
4.根据权利要求3所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述高效液相色谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱为：ShimadzuC18 250×4.60mm；以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱，流速1.0ml/min，柱温30℃，检测波长230nm，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于4000。
5.根据权利要求2或4所述的一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：梯度洗脱过程中，流动相A、B的比例变化为：0-10min，1％A；10-25min，1-12％A；25-45min，12-15％A；45-55min，15％A；55-70min，15-20％A；70-85min，20-30％A；85-115min，30-60％A；115-125min，60-70％A。
6.如权利要求1-4任一项所述一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述指纹图谱共有22个共有峰，共有峰中5、8、9、10、13、18、19、20号色谱峰分别被指认为芒果苷、芍药苷﹑升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ；按照标准指纹图谱条件进行色谱峰归属，22个共有峰分别归属于桂枝、白芍、防风、知母、白术、麻黄、干姜、炙附子、甘草、地龙等十味药材；其中1号峰归属于防风，2号峰归属于干姜、白术，3号峰归属于白芍，4号峰归属于麻黄、桂枝，5号峰归属于知母，6号峰归属于白芍、麻黄，7号峰归属于白芍、麻黄，8号峰归属于白芍，9号峰归属于防风，10号峰归属于甘草，11号峰归属于麻黄、桂枝、地龙、白芍，12号峰归属于白芍、麻黄，13号峰归属于防风，14号峰归属于白芍，15号峰归属于白芍，16号峰归属于白芍、桂枝，17号峰归属于白芍，18号峰归属于甘草，19号峰归属于干姜，20号峰归属于白术、地龙，21号峰归属于干姜，22号峰归属于干姜。
7.如权利要求5所述一种寒热痹胶囊HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述指纹图谱共有22个共有峰，共有峰中5、8、9、10、13、18、19、20号色谱峰分别被指认为芒果苷、芍药苷﹑升麻素苷、甘草苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、甘草酸铵、辣姜素、白术内酯Ⅲ；按照标准指纹图谱条件进行色谱峰归属，22个共有峰分别归属于桂枝、白芍、防风、知母、白术、麻黄、干姜、炙附子、甘草、地龙等十味药材；其中1号峰归属于防风，2号峰归属于干姜、白术，3号峰归属于白芍，4号峰归属于麻黄、桂枝，5号峰归属于知母，6号峰归属于白芍、麻黄，7号峰归属于白芍、麻黄，8号峰归属于白芍，9号峰归属于防风，10号峰归属于甘草，11号峰归属于麻黄、桂枝、地龙、白芍，12号峰归属于白芍、麻黄，13号峰归属于防风，14号峰归属于白芍，15号峰归属于白芍，16号峰归属于白芍、桂枝，17号峰归属于白芍，18号峰归属于甘草，19号峰归属于干姜，20号峰归属于白术、地龙，21号峰归属于干姜，22号峰归属于干姜。
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