CN109521122B - 一种治疗功能性消化不良的中药制剂的指纹图谱的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及药物分析领域,特别涉及一种治疗功能性消化不良的中药制剂的指纹图谱的制备方法。该方法包括:制备供试品溶液,以及含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚的标准品溶液;采用高效液相色谱法检测,获得指纹图谱;其中,色谱条件为:以乙腈为流动相A,以磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱。该方法确立了枳实消痞丸中13个特征峰,10批产品的相似度在0.98以上,同时具有良好的精密度、稳定性和重复性。以上结果表明,该方法能够全面、特征性地反应枳实消痞丸的组成成分,适于枳实消痞丸的质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析领域,尤其涉及一种治疗功能性消化不良的中药制剂的指纹图谱的制备方法。
背景技术
本发明涉及的治疗功能性消化不良中药制剂,由枳实、厚朴、黄连、法半夏、干姜、麦芽、白术、茯苓、党参、甘草十味药材组成,具有消痞除满,健脾和胃之功效。主治脾虚气滞,寒热互结证;心下痞满,不欲饮食,倦怠乏力,大便不畅,苔腻而微黄,脉弦。临床常用于治疗慢性胃炎、慢性支气管炎、胃肠神经症等。
该方剂涉及十位药材中的多种活性成分,组成复杂,传统的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法无法全面控制产品质量。近年来,指纹图谱技术已经成为中药复方质量控制与评价的重要手段,目前尚无利用指纹图对该组方制剂进行质量控制的报道,因此,建立该组方制剂的指纹图谱对其产品质量进行全面控制具有重要意义。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种治疗功能性消化不良的中药制剂的指纹图谱的制备方法及获得的指纹图谱。本发明指纹图谱的建立方法可全面、有效地评价所述中药制剂的质量。
为了实现本发明的目的,本发明采用如下技术方案:
本发明提供了一种治疗功能性消化不良中药制剂的指纹图谱的制备方法,包括:
制备供试品溶液,以及含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚的标准品溶液;采用高效液相色谱法检测,获得指纹图谱;
其中,色谱条件为:
以乙腈为流动相A,以磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,所述梯度洗脱程序为:
所述中药制剂由枳实、厚朴、黄连、法半夏、干姜、麦芽、白术、茯苓、党参、甘草组成。
在一些实施方案中,高效液相色谱的检测波长为250nm~258nm。
在一些具体实施例中,高效液相色谱的检测波长为254nm。
在一些实施方案中,磷酸溶液中磷酸的体积分数为0.05%~0.15%。
在一些具体实施例中,磷酸溶液中磷酸的体积分数为0.1%。
在一些实施方案中,流动相的流速为0.9~1.1mL/min。
在一些具体实施例中,流动相的流速为1mL/min。
在一些实施方案中,供试品溶液的进样量为5~20μl。在一些具体实施例中,供试品溶液的进样量为10μl。
在一些实施方案中,色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)。
在一些实施方案中,色谱柱的柱温为30℃~35℃。在一些具体实施例中,色谱柱的柱温为35℃。
在一些实施方案中,所述治疗功能性消化不良的中药制剂以重量份计,由以下重量份的原料制成:枳实10份、白术6份、法半夏6份、黄连10份、党参5份、甘草4份、茯苓4份、厚朴8份、麦芽4份、干姜4份。
在一些实施方案中,所述治疗功能性消化不良的中药制剂的制备方法为:取枳实10份、白术6份、法半夏6份、黄连10份、党参5份、甘草4份、茯苓4份、厚朴8份、麦芽4份、干姜4份,以上十味,粉碎成细,过筛,混匀,用水泛丸,干燥,即得。所述中药制剂的制备方法还可以采用本领域常见的其他提取工艺,不仅限于此。
目前,市场上根据该组方采用本领域常规工艺制成了不同剂型,主要有丸剂、胶囊剂、颗粒剂、汤剂等,包括并不仅限于此。
在一些实施方案中,所述供试品溶液的制备方法为:
取所述中药制剂用20%~50%甲醇溶解,超声处理,冷却,过滤,获得供试品溶液。
在一些实施方案中,所述标准品溶液的制备方法为取橙皮苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚用20%~50%甲醇溶解,获得标准品溶液。
在一些具体实施例中,所述标准品溶液中,橙皮苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚的浓度均为70μg/mL,甘草苷的浓度为80μg/mL。
采用本发明指纹图谱的制备方法建立了枳实消痞丸中13个特征峰,其中,7号峰为橙皮苷、4号峰为甘草苷、5号峰为柚皮苷、11号峰为厚朴酚、12号峰为和厚朴酚。以橙皮苷峰为参照峰S峰,其相对保留时间为1.00,各共有峰的相对保留时间在第一规定值的±3%之内依次为:0.18(峰1)、0.40(峰2)、0.57(峰3)、0.67(峰4)、0.83(峰5)、0.91(峰6)、1.00(峰S)、1.25(峰8)、1.55(峰9)、1.76(峰10)、1.93(峰11)、2.03(峰12)、2.10(峰13)。以橙皮苷峰为参照峰S峰,其相对峰面积为1.00,各共有峰的相对峰面积在第二规定值的±5%之内依次为:0.14(峰1)、0.08(峰2)、0.16(峰3)、0.10(峰4)、0.30(峰5)、0.12(峰6)、1.00(峰S)、1.32(峰8)、0.08(峰9)、0.09(峰10)、0.28(峰11)、0.43(峰12)、0.07(峰13)。
本发明提供了一种治疗功能性消化不良的中药制剂的指纹图谱的制备方法,所述中药制剂由枳实、厚朴、黄连、法半夏、干姜、麦芽、白术、茯苓、党参、甘草制成。该方法确立了该组方制剂中13个特征峰,10批产品的相似度在0.98以上,同时具有良好的精密度、稳定性和重复性。以上结果表明,该方法能够全面、特征性地反应该组方制剂的组成成分,适于该组方制剂的质量控制。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示枳实消痞丸指纹图谱;
图2示10批次枳实消痞丸指纹图谱,其中,R为共有模式;S1~S10为10批枳实消痞丸的指纹图谱;
图3示枳实消痞丸标准图谱。
具体实施方式
本发明公开了一种治疗功能性消化不良的中药制剂的指纹图谱的制备方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
对所公开的实施例的说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现。因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
本发明采用的试材皆为普通市售品,皆可于市场购得。
试剂:甲醇等为分析纯,磷酸、乙腈为色谱纯,水为超纯水。
试药:橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚(均来自中国食品药品鉴定研究院)。
治疗功能性消化不良的丸剂(枳实消痞丸,通药制药集团股份有限公司,批号:180402、180403、180405、180411、181201、181202、181203、181204、181205、181206),由枳实10份、白术6份、法半夏6份、黄连10份、党参5份、甘草4份、茯苓4份、厚朴8份、麦芽4份、干姜4份制成。
治疗功能性消化不良的丸剂(实验室自制)。
本发明自制丸剂由如下重量份的原料制成:枳实10份、白术6份、法半夏6份、黄连10份、党参5份、甘草4份、茯苓4份、厚朴8份、麦芽4份、干姜4份。制备方法为:以上十味,粉碎成细粉,过筛,混匀,用水泛丸,干燥,即得。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1
(1)供试品溶液的制备:精密称取样品约2~5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入20~50%甲醇水溶液25~100mL,称定重量,超声处理10~60min,放冷,再称定重量,用20~50%甲醇水溶液补足减失的重量,过滤,即得。
(2)标准品溶液的制备:分别取橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚对照品适量,用20~50%甲醇水溶解,制成每1mL含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚70μg、80μg、70μg、70μg、70μg的溶液,作为标准品溶液。
(3)色谱条件:采用AgilentZORBAXSB-C18 4.6mm×250mm,5μm色谱柱,流动相A为乙腈,流动相B为0.05%~0.15%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速0.9~1.1mL/min,波长为250nm~258nmnm;柱温30℃~40℃梯度洗脱过程中,流动相A、B的比例变化为:0~14min,A相5%~10%,B相95%~90%;14~20min,A相10%~12%,B相90%~88%;20~30min,A相12%~15%,B相88%~85%;30~35min,A相15%~20%,B相85%~80%;35~50min,A相20%,B相80%;50~70min,A相20%~40%,B80%~60%;70~80min,A相40%~55%,B相60%~45%;80~90min,A相55%~60%,B相45%~40%;90~100min,A相60%~78%,B相40%~22%;100~120min,A相78%~5%,B相22%~95%。
(4)测定:精密吸取标准品溶液、供试品溶液5~20μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,通过相似度软件控制共有峰,得到指纹图谱。
实施例2
(1)UltiMate 3000高效液相色谱仪,紫外DAD检测器;Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
(2)供试药品:治疗功能性消化不良的丸剂(实验室自制)。
(3)供试品溶液的制备:精密称取供试品2g,置具塞锥形瓶中,精密加入20%甲醇水溶液25mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHZ)10min,放冷,再称定重量,用20%甲醇水溶液补足减失的重量,过滤,即得;
(4)标准品溶液的制备:分别取橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚5个对照品适量,用50%甲醇水溶解,制成每1mL含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚70μg、80μg、70μg、70μg、70μg的溶液,作为标准品溶液。
(5)色谱条件:采用AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1mL/min,波长为254nm;柱温35℃;梯度洗脱过程中,流动相A、B的比例变化为:0~14min,A相5%~10%,B相95%~90%;14~20min,A相10%~12%,B相90%~88%;20~30min,A相12%~15%,B相88%~85%;30~35min,A相15%~20%,B相85%~80%;35~50min,A相20%,B相80%;50~70min,A相20%~40%,B80%~60%;70~80min,A相40%~55%,B相60%~45%;80~90min,A相55%~60%,B相45%~40%;90~100min,A相60%~78%,B相40%~22%;100~120min,A相78%~5%,B相22%~95%。
(5)测定:精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到指纹图谱。
供试品指纹图谱与标准指纹图谱相似度不低于0.90,参照峰为7号橙皮苷(S),其中4号为甘草苷、5号为柚皮苷、11号为厚朴酚、12号为和厚朴酚。
实施例3
(1)仪器:L3000-Rigol高效液相色谱仪,紫外检测器;MS205DU型分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。
(2)供试药品:枳实消痞丸,通药制药集团股份有限公司,批号:180402。
(3)供试品溶液的制备:精密称取供试品约3.5g,置具塞锥形瓶中,精密加入35%甲醇水溶液50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHZ)35min,放冷,再称定重量,用20%甲醇水溶液补足减失的重量,过滤,即得。
(4)对照品溶液的制备:分别取橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚5个对照品适量,用50%甲醇水溶解,制成每1mL含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚70μg、80μg、70μg、70μg、70μg的溶液,作为对照品溶液。
(5)色谱条件:采用AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为乙腈,流动相B为0.15%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1.1mL/min,波长为258nm;柱温40℃。
梯度洗脱过程中,流动相A、B的比例变化为0~14min,A相5%~10%,B相95%~90%;14~20min,A相10%~12%,B相90%~88%;20~30min,A相12%~15%,B相88%~85%;30~35min,A相15%~20%,B相85%~80%;35~50min,A相20%,B相80%;50~70min,A相20%~40%,B80%~60%;70~80min,A相40%~55%,B相60%~45%;80~90min,A相55%~60%,B相45%~40%;90~100min,A相60%~78%,B相40%~22%;100~120min,A相78%~5%,B相22%~95%。
(6)测定:精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到供试品的指纹图谱。供试品指纹图谱与标准指纹图谱相似度不低于0.90,参照峰为7号橙皮苷(S),其中4号为甘草苷、5号为柚皮苷、11号为厚朴酚、12号为和厚朴酚。
实施例4
(1)仪器:Agilent 1200高效液相色谱仪,紫外检测器;MS205DU型分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。
(2)供试药品:枳实消痞丸,通药制药集团股份有限公司,批号:180411。
(3)供试品溶液的制备:取供试品约2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇水溶液50mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHZ)30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇水溶液补足减失的重量,过滤,即得。
(4)标准品溶液的制备:分别取橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚5个对照品适量,用50%甲醇水溶解,制成每1mL含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚70μg、80μg、70μg、70μg、70μg的溶液,作为标准品溶液。
(5)色谱条件:采用AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为乙腈,流动相B为0.05%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速0.9mL/min,波长为250nm;柱温30℃。梯度洗脱程序的体积比浓度配置如下:
0~14min,A相5%~10%,B相95%~90%;14~20min,A相10%~12%,B相90%~88%;20~30min,A相12%~15%,B相88%~85%;30~35min,A相15%~20%,B相85%~80%;35~50min,A相20%,B相80%;50~70min,A相20%~40%,B80%~60%;70~80min,A相40%~55%,B相60%~45%;80~90min,A相55%~60%,B相45%~40%;90~100min,A相60%~78%,B相40%~22%;100~120min,A相78%~5%,B相22%~95%。
(6)测定:精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到供试品的指纹图谱。
供试品指纹图谱与标准指纹图谱相似度不低于0.90,参照峰为5号峰儿茶素、6号为表儿茶素、7号分别苦参碱、10号为盐酸小檗碱。
实施例5
(1)仪器:Agilent 1200高效液相色谱仪,紫外检测器;MS205DU型分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)。
(2)供试药品:枳实消痞丸,通药制药集团股份有限公司,批号:181206。
(3)供试品溶液的制备:取供试品约5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇水溶液100mL,称定重量,超声处理(功率250W,频率50kHZ)60min,放冷,再称定重量,用50%甲醇水溶液补足减失的重量,过滤,即得。
(4)标准品溶液的制备:分别取橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚5个对照品适量,用50%甲醇水溶解,制成每1mL含橙皮苷、甘草苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚70μg、80μg、70μg、70μg、70μg的溶液,作为标准品溶液。
(5)色谱条件:采用AgilentZORBAXSB-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速1mL/min,波长为254nm;柱温35℃。梯度洗脱程序的体积比浓度配置如下:0~14min,A相5%~10%,B相95%~90%;14~20min,A相10%~12%,B相90%~88%;20~30min,A相12%~15%,B相88%~85%;30~35min,A相15%~20%,B相85%~80%;35~50min,A相20%,B相80%;50~70min,A相20%~40%,B80%~60%;70~80min,A相40%~55%,B相60%~45%;80~90min,A相55%~60%,B相45%~40%;90~100min,A相60%~78%,B相40%~22%;100~120min,A相78%~5%,B相22%~95%。
(6)测定:精密吸取供试品溶液10μl注入液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到供试品溶液的指纹图谱,如图1所示。
供试品指纹图谱与准指纹图谱相似度不低于0.90,参照峰为7号橙皮苷(S),其中4号为甘草苷、5号为柚皮苷、11号为厚朴酚、12号为和厚朴酚
实施例6标准指纹图谱的建立及相似度评价
采用实施例5所述的方法测定10个批次枳实消痞丸,批号分别为:180402、180403、180405、180411、181201、181202、181203、181204、181205、181206;由通药制药集团股份有限公司提供),得到10批枳实消痞丸指纹图谱,并依据10批次枳实消痞丸指纹图谱生成共有模式R,如图2所示。依据10批次枳实消痞丸指纹图谱得到共有模式指纹图谱,即标准指纹图谱,如图3所示。
采用国家药典委员会“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004年A版)”对10批次枳实消痞丸指纹图谱进行相似度计算,结果见表1,10批次枳实消痞丸指纹图谱与标准指纹图谱相似度均大于0.98。
表1相似度比较结果
实施例7方法学考察试验
(1)精密度试验
取批号为180402的枳实消痞丸,按实施例5的方法测定,连续进样6次进行测定。比较各主要共有峰的相对保留时间及相对峰面积,结果见表2。
表2精密度试验
结果显示,各共有峰相对保留时间RSD≤0.247%,相对峰面积RSD≤1.087%,表明仪器精密度良好。
(2)稳定性试验
取批号为180402的枳实消痞丸,按照实施例5(3)的方法制备供试品溶液,按实施例5(5)的色谱条件于0、2、4、8、10、16、20、24小时分别进行测定,获得的特征图谱中各共有峰的相对保留时间见表3,相对峰面积结果见表4。
表3稳定性试验相对保留时间
表4稳定性试验相对峰面积
结果显示,13个特征峰的相对保留时间的RSD≤0.372%,相对保留时间的RSD1.528%,表明供试品溶液在24小时内稳定。
(3)重复性试验
取批号为180402的枳实消痞丸,按照实施例5(3)的方法制备6份供试品溶液,并按实施例5(5)的色谱条件进行测定,结果见表5。
表5重复性试验结果
结果显示,6次测定的特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值≤0.372%,相对峰面积RSD≤0.003%,表明该方法重复性好。
按照实施例2提供的色谱条件、标准品和供试品溶液的方法对实试验自制的丸剂进行上述实验,按照实施例3~4提供的色谱条件、标准品和供试品溶液的方法对批号为180405的枳实消痞丸进行上述实验,结果显示,实施例2~4的精密度、稳定性和重复性结果与实施5的结果相近,无显著差异(p>0.05)。
以上结果表明,本发明建立的指纹图谱的制备方法具有精密度高、稳定性好、重现性好的特点,适用于枳实消痞丸的质量控制。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
2.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述高效液相色谱的检测波长为250nm~258nm。
3.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述磷酸溶液中磷酸的体积分数为0.05%~0.15%。
4.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述流动相的流速为0.9~1.1mL/min。
5.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述高效液相色谱的色谱柱的柱温为35℃。
6.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,以重量份计,所述中药制剂由以下重量份的原料制成:枳实10份、白术6份、法半夏6份、黄连10份、党参5份、甘草4份、茯苓4份、厚朴8份、麦芽4份、干姜4份。
7.根据权利要求1所述制备方法,其特征在于,所述标准品溶液的制备方法为取橙皮苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚用20%~50%甲醇溶解,获得标准品溶液。
8.根据权利要求7所述制备方法,其特征在于,所述标准品溶液中,橙皮苷、和厚朴酚、柚皮苷和厚朴酚的浓度均为70μg/mL,甘草苷的浓度为80μg/mL。
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