CN109406651A - 一种治疗心神不宁药物组合的质量检测方法 - Google Patents

一种治疗心神不宁药物组合的质量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种治疗心神不宁药物组合的质量检测方法，所述药物组合由酸枣仁、柴胡、白芍、合欢花、合欢皮、僵蚕、蝉蜕、灯心草组成，所述质量检测方法包括：对活性成分柴胡、合欢花、合欢皮、僵蚕、灯心草的鉴别，以及对白芍中芍药苷、酸枣仁中酸枣仁皂苷A和斯皮诺素含量的测定。酸枣仁中酸枣仁皂苷和黄酮类成分斯皮诺素具有重要的镇静催眠作用，可以作为评价酸枣仁质量提供依据。本发明全面有效地控制药物的质量，制定更高效、更严格可靠的质量检测方法来保证药品质量，准确度高，稳定性好，节约样品处理时间，可以有效用于治疗心神不宁药物组合的质量检测。

Description

一种治疗心神不宁药物组合的质量检测方法
技术领域
本发明涉及医药发明领域，具体涉及一种治疗心神不宁药物组合物的质量检测方法。
背景技术
治疗心神不宁药物组合物制剂为舒眠胶囊，由酸枣仁、柴胡、白芍、合欢花、合欢皮、僵蚕、蝉蜕、灯心草组成，其中：酸枣仁为鼠李科植物酸枣仁的干燥成熟种子，具有补肝、宁心、生津等功效，主要用于虚烦不眠、惊悸多梦、体虚多汗、津伤口渴,酸枣仁含有黄酮苷、三萜、皂苷及有机酸等多种成分，酸枣仁皂苷A和斯皮诺素是重要的活性成分，能够有效镇静安神，对失眠者疗效显著；柴胡：为伞形科植物柴胡、狭叶柴胡干燥根,具有解热、镇痛、镇静、抗惊厥、保肝抗炎、提高免疫力的功能,柴胡总皂苷是柴胡的主要有效成分，为整个药物的疗效起着举足轻重的作用。白芍为毛茛芍药的干燥根，具有平肝止痛、养血调经等功效，白芍总苷为白芍中的主要有效成分；合欢花为豆科植物合欢的干燥花序，具有解郁安神的功效，常治疗心神不安、忧郁失眠，僵蚕具有抗惊厥，催眠的作用；治心烦不眠，小儿惊痫等作用。
国家药品监督管理局国家药品标准WS3-773(Z-137)-2001Z舒眠胶囊的质量标准中公开了舒眠胶囊的检测方法，本发明人经过研究发现，现有的舒眠胶囊的质量标准中，对制剂中主要药用成分酸枣仁的检验仅进行酸枣仁皂苷A薄层色谱鉴别，对控制舒眠胶囊的质量有所欠缺；对制剂中柴胡、合欢花进行薄层色谱鉴别时，供试品溶液的制备不甚理想，导致显色不够清晰，辨别不够准确；缺少对有效成分僵蚕和灯心草的质量控制，难以起到全面控制舒眠胶囊的质量。
随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，而且对于寻找快捷方便可控的检测方法的需求也越来越迫切，因此，为了有效地控制药物的质量，确保用药的安全，制定更高效、更严格可靠的质量检测方法来保证药品质量，全面有效控制制剂的质量，保证疗效，本发明提出一种治疗心神不宁药物组合物的质量检测方法，在现有标准的基础上，增加对酸枣仁中酸枣仁皂苷A和斯皮诺素的含量测定，采用高效液相色谱法测定其含量，其方法专属、可行，重现性好，保证了质量检测标准的准确性和先进性；另外优化了供试品溶液的配制方法以及展开剂的选择，增加了僵蚕和灯心草薄层色谱鉴别，酸枣仁皂苷A和芍药苷的高效液相色谱法鉴别。该检测方法精密度、灵敏度、稳定性均好，能够有效地控制舒眠胶囊的质量。使舒眠胶囊的质量检测方法更科学完善，药品质量得到更好的控制。
发明内容
本发明的目的是克服现有质量标准对舒眠胶囊成分检测不全面，薄层鉴别供试品处理过程繁杂，提供一种治疗心神不宁药物组合的质量检测方法，该方法专属性强、耐用性、灵敏度高，可作为该药物的重要质量检测标准。具体而言，所述质量检测方法为性状、检查，以及鉴别、含量测定项目；其中鉴别分为定性鉴别，以柴胡对照药材、合欢花对照药材、僵蚕药材、灯心草对照药材为对照的薄层色谱鉴别，以及以酸枣仁皂苷A对照品、芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别；含量测定是对药物组合物制剂中所含酸枣仁皂苷A、斯皮诺素、芍药苷的含量测定。
所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物4.5g～5.5g，加体积比为0.8～1:0.8～1：1～1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液20～30ml，60℃超声处理30～35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5～10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2～3次，每次10～15ml，合并正丁醇溶液，以5～10％的碳酸氢钠洗涤2～3次，每次10～20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材1.8g～2.2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材1.5～2.5g，加乙醇15～25ml，超声处理15～20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1～1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材4.5～5.5g,加乙醇适量,加热回流30～50min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取2～3次,每次10～20ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
(3)照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液5～10μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各2～5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以0.8～1.2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与8～12％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液5～10μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液2～5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为4～7:4～5:0.8～1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
优选的，薄层色谱鉴别方法为：(1)供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物4.8～5.2g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5～10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并正丁醇溶液，以5～10％的碳酸氢钠洗涤3次，每次10ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2g，加乙醇20ml，超声处理15～20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1～1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材4.5～5.5g,加乙醇适量,加热回流30～50min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取2～3次,每次10～20ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
(3)照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液10μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各4μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以0.8～1.2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与8～12％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液10μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为4～7:4～5:0.8～1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
进一步优选的，薄层色谱鉴别方法为：(1)供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并正丁醇溶液，以5％的碳酸氢钠洗涤3次，每次10ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2g，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30分钟,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材5g,加乙醇适量,加热回流40min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取3次,每次10ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
(3)照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液10μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各4μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与10％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；取所述供试品溶液8μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为6:5:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
检查：水分的检查方法为：取胶囊剂的内容物，照通则水分测定法测定，不得过9.0％；对装量差异的检查具体为：照通则，每粒装量与标示装量相比较，装量差异限度应在标示装量的10％以内，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍；对崩解时限的检查方法为：采用通则崩解时限检查法检查，应符合规定；对微生物限度的检查方法为：采用通则细菌、霉菌及酵母菌检查法和控制菌检查法检查，应符合规定。
酸枣仁皂苷A的高效液相色谱鉴别：在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；
芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别：在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致。
酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A含量的测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下列规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％，；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；
(1)供试品溶液的制备：取所述药物0.9～1.1g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入68％～72％甲醇48～52ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理25～40分钟，放冷，再称定重量，用65％～75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；
(2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含22～27ug的混合对照品溶液；
(4)测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
白芍中芍药苷含量测定方法为：
(1)色谱条件与系统适用性实验：Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm,5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；
(2)供试品溶液的制备：取所述药物0.45～0.55g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇45～55ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理20～40分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加45％～50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得；
(3)对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.05～0.15mg的溶液，作为对照品溶液；
(4)测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各8～12ul，注入液相色谱仪，测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算芍药苷的含量。
注：本发明所述的通则指2015年版中国药典第四部通则。
本发明具有以下优点：
1.本发明在舒眠胶囊原有质量标准的基础上，对鉴别方法进行优化，增加僵蚕和灯心草的薄层鉴别，酸枣仁皂苷A和芍药苷的高效液相色谱鉴别，同时增加酸枣仁中酸枣仁皂苷A和斯皮诺素含量的测定，准确全面地控制舒眠胶囊的质量。
2、本发明在薄层色谱鉴别中，做了大量的实验，优化了供试品溶液的制备方法以及展开剂的选择，采用只提取一次供试品溶液，供四种药材鉴别，实现柴胡和灯心草同时鉴别，合欢花和僵蚕同时鉴别，简化供试品制备过程，节省展开时间。
3、经方法学验证试验，结果表明本方法在不同薄层板、温度、湿度条件下，色谱图斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，不同条件下均能得到较好的鉴别色谱,验证试验表明重现性好、耐用性好。
4、按本发明检测方法学验证:斯皮诺素进样量在40.48～1613ng范围内呈良好的线性关系回归方程为：Y＝2.364X-0.5978，相关系数R2＝1；仪器精密度好；重复性良好；斯皮诺素在10h内相对稳定；本检测方法测本品斯皮诺素(C28H32OI5)平均值为0.165(mg/粒)；表明此斯皮诺素的测定方法具有良好的重复性；所以该方法符合药品质量标准分析方法验证要求。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物4.5g，加体积比为0.8:0.8：1的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液20ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇溶液，以5的碳酸氢钠洗涤2次，每次10ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材1.8g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材1.5g，加乙醇15ml，超声处理15分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材4.5g,加乙醇适量,加热回流30min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取2次,每次10ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液5μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各2μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以0.8％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与8％硫酸溶液1：1的混合液，90℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液5μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液2μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为7:5:0.8的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
高效液相色谱鉴别
酸枣仁皂苷A的高效液相色谱鉴别：在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；
芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别：在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致。
【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。
装量差异不得过10.0％(通则0942)
崩解时限不得过30min(通则0921)
微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A含量的测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下列规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％，；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；
供试品溶液的制备：取所述药物0.9g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入68％甲醇48ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理25分钟，放冷，再称定重量，用65％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；
对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含22ug的混合对照品溶液；
测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
白芍中芍药苷含量测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm,5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；
供试品溶液的制备：取所述药物0.45～0.55g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇45～55ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理20～40分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加45％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.05～0.15mg的溶液，作为对照品溶液；
测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算芍药苷的含量。
【功能与主治】疏肝解郁、宁心安神。用于肝郁伤神所致的失眠症，症见：失眠多梦，精神抑郁或急躁易怒，胸胁苦满或胸膈
【用法与用量】口服；一次3粒，一日2次，晚饭后临睡前服用。
【规格】每粒装0.4g
【贮藏】密封
【有效期】2年
实施例2
【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物5.5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以10％的碳酸氢钠洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2.2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2.5g，加乙醇25ml，超声处理20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材5.5g,加乙醇适量,加热回流50min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取2次,每次20ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液10μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以1.2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与12％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液10μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为7:5:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
高效液相色谱鉴别
酸枣仁皂苷A的高效液相色谱鉴别：在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；
芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别：在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致。
【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。
装量差异不得过10.0％(通则0942)
崩解时限不得过30min(通则0921)
微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A含量的测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下列规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％，；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；
供试品溶液的制备：取所述药物1.1g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入72％甲醇52ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；
对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含27ug的混合对照品溶液；
测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
白芍中芍药苷含量测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm,5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；
供试品溶液的制备：取所述药物0.55g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇55ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理40分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品溶液；
测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算芍药苷的含量。
【功能与主治】疏肝解郁、宁心安神。用于肝郁伤神所致的失眠症，症见：失眠多梦，精神抑郁或急躁易怒，胸胁苦满或胸膈
【用法与用量】口服；一次3粒，一日2次，晚饭后临睡前服用。
【规格】每粒装0.4g
【贮藏】密封
【有效期】2年
实施例3
【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以5％的碳酸氢钠洗涤3次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2g，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材5g,加乙醇适量,加热回流30～50min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取3次,每次20ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液6μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各4μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与10％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液6μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液4μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为5:4.5:0.8的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
高效液相色谱鉴别
酸枣仁皂苷A的高效液相色谱鉴别：在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；
芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别：在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致。
【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。
装量差异不得过10.0％(通则0942)
崩解时限不得过30min(通则0921)
微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A含量的测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下列规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％，；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；
供试品溶液的制备：取所述药物1g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理35分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；
对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含25ug的混合对照品溶液；
测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
白芍中芍药苷含量测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm,5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；
供试品溶液的制备：取所述药物0.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理30分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算芍药苷的含量。
【功能与主治】疏肝解郁、宁心安神。用于肝郁伤神所致的失眠症，症见：失眠多梦，精神抑郁或急躁易怒，胸胁苦满或胸膈
【用法与用量】口服；一次3粒，一日2次，晚饭后临睡前服用。
【规格】每粒装0.4g
【贮藏】密封
【有效期】2年
实施例4
【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
【鉴别】
薄层色谱鉴别
供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以10％的碳酸氢钠洗涤3次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2g，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材5g,加乙醇适量,加热回流40min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取3次,每次15ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液8μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各3μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与10％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液8μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液3μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为5:4:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
高效液相色谱鉴别
酸枣仁皂苷A的高效液相色谱鉴别：在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；
芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别：在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致。
【检查】水分不得过13.0％(通则0832第二法)。
装量差异不得过10.0％(通则0942)
崩解时限不得过30min(通则0921)
微生物限度应符规定(通则1105)(通则1106)(通则1107)
【含量测定】照高效液相色谱法(通则0512)测定。
酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A含量的测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下列规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％，；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；
供试品溶液的制备：取所述药物1g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理35分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；
对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含26ug的混合对照品溶液；
测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
白芍中芍药苷含量测定方法为：
色谱条件与系统适用性实验：Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm,5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；
供试品溶液的制备：取所述药物5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理40分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得；
对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
测定法：分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算芍药苷的含量。
【功能与主治】疏肝解郁、宁心安神。用于肝郁伤神所致的失眠症，症见：失眠多梦，精神抑郁或急躁易怒，胸胁苦满或胸膈
【用法与用量】口服；一次3粒，一日2次，晚饭后临睡前服用。
【规格】每粒装0.4g
【贮藏】密封
【有效期】2年
实验例：为证明本发明的科学性与合现性，进行了以下方法学实验研究：
1、【性状】本品为胶囊剂，内容物为黄色至棕色粉末；气微，味苦。
2、【成分】酸枣仁、柴胡、白芍、合欢花、合欢皮、僵蚕、蝉蜕、灯心草。
3、【鉴别】
3.1薄层色谱鉴别
3.1.1供试品溶液的制备
方法一取本品内容物5g，加乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
方法二取所述药物5g，加乙醇30ml，超声处理5分钟，加热回流30min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.0ml使溶解，作为供试品溶液；
方法三取本品内容物5g，加甲醇30ml，置80℃水浴回流1小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇3ml使溶解，作为供试品溶液。
方法四取所述药物5g，加甲醇20ml，超声处理5分钟，置80℃水浴回流30min，超声处理，放冷，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并正丁醇溶液，以氨试液洗涤3次，每次10ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
方法五取本品内容物5g，加水20ml使溶解，水溶液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯溶液，蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
方法六取所述药物5g，加体积比为1:1的乙醇：甲醇溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.0ml使溶解，作为供试品溶液；
方法七取所述药物5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1.0ml使溶解，作为供试品溶液；
方法八(优选方法)取所述药物5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以氨试液洗涤3次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1.0ml使溶解，作为供试品溶液；
方法九(更优选方法)供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物5g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次15ml，合并正丁醇溶液，以10％的碳酸氢钠洗涤3次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
3.1.2对照品溶液的制备
取柴胡对照药材2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2g，加乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材5g,加乙醇适量,加热回流40min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取3次,每次15ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
3.1.3展开方法
方法一(优选方法)
取所述供试品溶液10μl、柴胡对照药材溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为30:10:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1.0％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与10％硫酸溶液1：1的混合液，70℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视。供试品色谱中,在与柴胡对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
取供试品溶液3μl、合欢花对照药材溶液3μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为5:5:1)的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以香草醛-硫酸-乙醇(0.2:1.0:9.0)混合液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
取供试品溶液10μl、僵蚕对照药材溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇(12∶1)为展开剂,展开,取出晾干,在365nm紫外灯下检视，供试品色谱中,在与僵蚕对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
取供试品溶液10μl、灯心草对照药材溶液5μl，分别点于同一高效硅胶G薄层板上,以甲苯-醋酸乙酯-甲酸(7∶5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与灯心草对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
方法二(更优选方法)
取所述供试品溶液8μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各3μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与10％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液8μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液3μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为5:4:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3.2高效液相色谱鉴别
3.2.1酸枣仁皂苷A的高效液相色谱鉴别：在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致；
3.2.2芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别：在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中主峰保留时间一致。
3.3试验方法、条件及重现性
3.3.1方法来源：参考国家药品监督管理局国家药品标准WS3-773(Z-137)-2001Z舒眠胶囊的质量标准，该方法采用薄层色谱法进行鉴别，结合我公司治疗失眠药物研究的实际情况而制定了本方法。
样品批号：180301、180302、180303、180304、180305、180401、180402、180403、180404、180405
对照药材：柴胡对照药材，合欢花对照药材僵蚕药材灯心草对照药材
对照药材来源：中国食品药品检定研究院
薄层板：硅胶G板HSG/5×20cm高效薄层层析硅胶板黄海牌硅胶预制板(规格：200×100mm)。
用上述九种供试品处理方法处理2批不同批次的样品，按对照品处理方法一处理四种对照药材溶液，并按照规定的方法展开，结果见表1。
表1不同供试品处理方法试验结果对比
结论：在九种供试品的处理方法中，第九种处理方法也就是本发明的处理方法，经过两批样品实验结果显示，为最佳处理方法，供试品图谱中各药材对应斑点均有显示，且斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，与相应对照显相同颜色斑点，重复性良好，且该种供试品的处理方法可以满足四种药材鉴别。
3、3、2不同展开方法的比较
照供试品处理项下方法九的处理方法处理10批次的样品，比较两种不同的展开方法，结果见表2。
表2不同展开方法的比较
结论：10批供试品实验结果显示，在两种展开方法中，供试品图谱中，在与对照品相应位置显相同颜色斑点，斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，说明两种展开方法均适用于舒眠胶囊的薄层色谱鉴别。展开方法一中，柴胡、合欢花、僵蚕、灯心草均分别展开，四种药材共展开四次，工作量大，消耗时间多，方法二中，柴胡和灯心草同时展开，合欢花和僵蚕同时展开，方法简便，节约时间，且能达到鉴别需求，为本发明最优选方法。
耐用性
3、3、3不同薄层板的比较
照供试品处理项下方法九的处理方法处理10批次的样品，按方法二展开，比较了青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板和高效硅胶G商品板，结果见表3。
表3：不同薄层板耐用性结果表
结果高效硅胶板商品板斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中；青岛海洋化工厂分厂硅胶G商品板斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，本发明耐用性好。
3.4.3不同湿度条件的比较
相同处理方法与展开方法，比较了湿度为35％和95％环境条件下高效板展开效果，结果见表4。
表4：湿度35％和95％环境条件下高效板展开效果表
结论：斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，两个不同湿度条件下本发明均能得到较好的鉴别色谱。
结果：经过实验结果显示，本发明的供试品处理方法：供试品图谱中各药材对应斑点均有显示，且斑点清晰，分离度符合要求，Rf值适中，与相应对照显相同颜色斑点，重复性良好，且该种供试品的处理方法可以满足四种药材鉴别。本发明的展开方法：柴胡和灯心草同时展开，合欢花和僵蚕同时展开，方法简便，节约时间，且能达到鉴别需求，为本发明最优方法。
经上述方法学验证试验，结果表明不同薄层板，不同湿度条件下，各斑点清晰，分离符合要求，Rf值适中，能得到较好的鉴别色谱。验证试验表明本发明重现性好、耐用性好。
4.【检查】
依据《中国药典》相关内容，结合本品特性，研究制定了相应的检查项目。
4.1水分
照水分测定法(《中国药典》2015版四部通则0832第二法)测定。实测十个不同批次品各1批，平均值6.86％(见表5)，最低测定值为6.47％，最高测定值为7.43％，以平均测定值的130％设限，为8.88％，故暂定本品水分不得过9.0％。
表5水分测定结果表
4.2崩解时限
照崩解时限测定法《中国药典》2015版四部通则2302测定。实测十个不同批次样品各1批，平均值18min(见表6)，最低测定值为16min，最高测定值为20min，以平均测定值的130％设限，为23.4min。故暂定本品崩解时限不得过25min。
表6崩解时限结果表
4.3【装量差异】
4.3.1装量差异取供试10粒分别精密称定重量，倾出内物(不得损囊壳),囊壳用小刷或其他适宜的用具拭净；再分别精密称定囊壳重量,求出每粒内物的装量与平均装量。每粒装量与平均装量相比较，超出装量差限度的不得多于2粒,并不得有1粒超出限度1倍。平均装量或标示装量装量差异限度士10％；结果见表7。
表7装量差异测定结果表
5.【含量测定】
5.1白芍中芍药苷含量测定
为了有效地控制舒眠胶囊的质量，参照国家药品监督管理局国家药品标准WS3-773(Z-137)-2001Z舒眠胶囊的质量标准进行白芍中芍药苷含量测定方法的研究.
5.1.1方法一:
仪器与试药
高效液相色谱仪：赛默飞U3000；色谱柱：WondaSil C18Superb5μm 250×4.6mm
电子天平：FA2004；芍药苷对照品(供含量测定)：中国食品药品检定研究院，批号：110736-201620，含量96.4％。甲醇为色谱纯和分析纯；水为现制超纯水；其它试剂为分析纯。
色谱条件与系统适用性试验Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm×5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；
对照品制备精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得，作为对照品溶液；
供试品制备取所述药物0.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理30分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加45％～50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；
5.1.2线性试验
称取芍药苷对照品10.61mg(纯度96.4％)，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得芍药苷储备液(204.56μg/mL)。精密吸取芍药苷储备液2mL置于20mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得芍药苷浓度为20.46μg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液，注入液相色谱仪，测定峰面积，以各浓度对照品的进样量(ng)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程结果见表8。
表8芍药苷线性试验结果
5.1.3仪器精密度试验
取对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，测定芍药苷峰面积，计算RSD％(芍药苷)值为0.14％，表明仪器精密度好，测定结果见表9。
表9仪器精密度试验结果
编号 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD
面积 213.221 212.386 212.612 212.968 212.939 212.689 212.8025 0％.14％
5.1.4重复性试验
精密称取同一批样品(批号180401)6份，研细，置具塞锥形瓶中，按供试品溶液的制备方法，制得6份供试品溶液，各精密吸取10μL，注入液相色谱仪，按色谱条件进行分析，测定峰面积，计算含量，平均含量3.311(mg/粒)，RSD值0.86％，表明此芍药苷的测定方法具有良好的重复性；结果见表10。
表10重复性试验结果
5.1.5稳定性试验
取供试品溶液一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算RSD％为1.412％，表明芍药苷在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表11。
表11稳定性试验结果
编号 0h 2h 4h 6h 8h 10h 平均值 RSD％
峰面积 1542.84 1545.3 1508.88 1509.06 1535.16 1493.34 1522.43 1.412
结论：从上表数据可以得出：使用本方法，芍药苷进样量在40.9ng-2045.6ng范围内线性关系良好；仪器精密度好；重复性良好；芍药苷在10h内相对稳定；本检测方法测本品含芍药苷(C23H28O11)平均值为3.0408(mg/粒)。
5.2方法二(对比例)
方法来源：照国家药品监督管理局国家药品WS3-773(Z-137)-2001Z，及高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱，以比例为20:80甲醇比水为流动相，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。
对照品制备精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得，作为对照品溶液；
供试品制备取所述药物0.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理30分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加45％～50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，计算，即得；每粒含白芍以芍药苷C23H28O11计，不得少于2.4mg
5.2.1目标峰保留时间和峰面积对比实验
按照方法一供试品处理方法处理5个批次舒眠胶囊样品，平行3次，分别采用方法一和方法二两种色谱条件进样，将保留时间和峰面积进行比较，结果见表12
表12保留时间和峰面积比较结果
结论：从上表数据可以得出：本发明即方法一的平均保留时间为8.484分钟，方法二的平均保留时间21.52分钟，方法一是方法二(对比例)经过优化，改变色谱条件而得，方法一和方法二峰面积RSD％较小，重复性良好，方法一能有效节约进样时间，提高检测效率。
6.1酸枣仁中酸枣仁皂苷A和斯皮诺素含量测定
为了有效地控制舒眠胶囊的质量，参考高效液相色谱法《中国药典》2015年版四部通则0512)，结合本公司的仪器设备而拟定的.
6.1.1方法一
仪器与试药
高效液相色谱仪：安捷伦1260；色谱柱：WondaSil C18Superb5μm 250×4.6mm
电子天平：(FA1104)；HS-10260D型超声波清洗机(功率250W，频率30KHZ)；
斯皮诺素(批号111869-201122)含量以94.9％计。
甲醇和乙腈为色谱纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
色谱条件与系统适用性试验色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；
对照品制备精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含22～27ug的混合对照品溶液；
供试品制备供试品溶液的制备：取所述药物0.5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入70％甲醇50ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；
测定法精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
6.1.2线性试验
精密吸取混合对照品溶液，斯皮诺素浓度为(0.02024mg/ml)2μl、5μl、10μl以及斯皮诺素浓度为(0.1613mg/ml)2μl、5μl、10μl注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归,线性方程为:
Y＝2.364X-0.5978,R2＝1.00；表明斯皮诺素进样量在40.48～1613ng范围内呈良好的线性关系。结果见表13。
表13斯皮诺素线性试验结果
6.1.3仪器精密度试验
取对照品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，测定斯皮诺素和酸枣仁皂苷A峰面积，计算RSD％值分别为0.757％和，表明仪器精密度好，测定结果见表13。
表13仪器精密度试验结果
6.1.4重复性试验
精密称取同一批样品(批号180401)6份，按上述方法测定样品中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量，斯皮诺素平均含量为0.224(mg/g)，RSD值0.248％，酸枣仁皂苷A平均含量为0.644(mg/g)，表明此斯皮诺素和酸枣仁皂苷的测定方法具有良好的重复性；结果见表14。
表14重复性试验结果
6.1.5稳定性试验
按8.2.2项下方法制备供试品溶液一份，室温放置，按拟定色谱条件下于0，2，4，6，8，10h分别进样，测定峰面积。计算RSD％为0.654％，表明斯皮诺素在10h内相对稳定。稳定性试验结果见表15。
表15稳定性试验结果
结论：斯皮诺素的线性范围为40.48～1613ng,R2＝1.00,线性关系良好。仪器精密度好；重复性良好；斯皮诺素和酸枣仁皂苷A在10h内相对稳定；本检测方法测本品斯皮诺素和酸枣仁皂苷A平均值为0.165(mg/粒)和0.187(mg/粒)。
结论:该方法简便、准确、重复性好、稳定性好,可有效地控制舒眠胶囊的质量标准。
6.2方法二
仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；FA2004电子天平(德国Sartorius公司)；KQ-300型超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)斯皮诺素(批号111869-201122)含量以94.9％计，对照品均购自中国食品药品检验研究院,乙腈为色谱纯,水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
方法来源：采用对比例枣仁安神颗粒质量标准的研究，罗镭，浙江省食品药品检验研究院
色谱条件:Welch Material XB-C18柱(4.6×250mm,5μm),以甲醇-0.1％磷酸溶液(36:64)为流动相；流速:1.0ml/min；柱温:30℃；检测波长为335nm；进样量:10μl。
对照品溶液的制备:取斯皮诺素和酸枣仁皂苷A对照品适量,精密称定,加70％甲醇制成每1ml含20μg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品内容物,研细,取约0.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70％甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250W,频率50k Hz)30min,放冷,再称定重量,用70％甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
结论：用此方法测舒眠胶囊中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量，其目标峰分离差，分离度不符合要求，且峰形差，不再进行此方法的研究，故不载入正文。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种治疗心神不宁药物组合物的质量检测方法，所述药物组合由酸枣仁、柴胡、白芍、合欢花、合欢皮、僵蚕、蝉蜕、灯心草组成，其特征在于，所述质量检测方法为性状、检查，以及鉴别、含量测定项目；其中鉴别分为定性鉴别，以柴胡对照药材、合欢花对照药材、僵蚕药材、灯心草对照药材为对照的薄层色谱鉴别，以及以酸枣仁皂苷A对照品、芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别；含量测定是对药物组合物制剂中所含酸枣仁皂苷A、斯皮诺素、芍药苷的含量测定。
2.根据权利要求1所述的质量检测的方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物4.5g～5.5g，加体积比为0.8～1:0.8～1：1～1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液20～30ml，60℃超声处理30～35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5～10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2～3次，每次10～15ml，合并正丁醇溶液，以5～10％的碳酸氢钠洗涤2～3次，每次10～20ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1～3ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材1.8g～2.2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材1.5～2.5g，加乙醇15～25ml，超声处理15～20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1～1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材4.5～5.5g,加乙醇适量,加热回流30～50min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取2～3次,每次10～20ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
(3)薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液5～10μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各2～5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以0.8～1.2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与8～12％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液5～10μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液2～5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为4～7:4～5:0.8～1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求1或2所述的质量检测的方法，其特征在于，所述薄层色谱鉴别方法为：
(1)供试品溶液的制备：取所述药物制剂内容物4.8～5.2g，加体积比为1:1：1.5的乙醇：甲醇：乙酸乙酯溶液30ml，60℃超声处理35分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加水5～10ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次10ml，合并正丁醇溶液，以5～10％的碳酸氢钠洗涤3次，每次10ml，弃去洗液，正丁醇溶液置水浴上蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取柴胡对照药材2g，采用与制备供试品溶液相同的方法制备；取合欢花对照药材2g，加乙醇20ml，超声处理15～20分钟，滤过，溶液浓缩至约2ml作为合欢花对照药材溶液；取僵蚕药材粗粉1～1.5g,置50ml具塞三角烧瓶中,加甲醇20ml,超声提取30min,滤过,滤液浓缩至1ml,作为僵蚕对照药材溶液；取灯心草对照药材4.5～5.5g,加乙醇适量,加热回流30～50min,滤过,合并滤液,滤液浓缩至约20ml,滤液用乙酸乙酯提取2～3次,每次10～20ml，合并乙酸乙酯液,将醋酸乙酯液置水浴蒸干,残渣用2ml甲醇溶解作为对照药材溶液。
(3)照薄层色谱法鉴别：取所述供试品溶液10μl、柴胡对照药材溶液和灯心草对照药材溶液各4μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为40:5:1的氯仿-甲醇-水溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以0.8～1.2％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液与8～12％硫酸溶液1：1的混合液，90～100℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
取所述供试品溶液10μl、合欢花对照药材溶液和僵蚕药材溶液5μl，将三种溶液分别点于同一高效硅胶G薄层板上，以比例为4～7:4～5:0.8～1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液为展开剂，展开，取出晾干，喷以三氯化铝试液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的质量检测的方法，其特征在于，所述以酸枣仁皂苷A对照品为对照的高效液相色谱鉴别，其特征在于，在酸枣仁皂苷A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中酸枣仁皂苷A峰的保留时间应与对照品溶液中酸枣仁皂苷A保留时间一致。
5.根据权利要求1所述的质量检测的方法，其特征在于，所述以芍药苷对照品为对照的高效液相色谱鉴别，其特征在于，在芍药苷含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液中芍药苷峰的保留时间应与对照品溶液中芍药苷峰保留时间一致。
6.根据权利要求1所述的质量检测的方法，其特征在于，所述酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A含量的测定方法为：(1)色谱条件与系统适用性实验：色谱柱：C18,柱温：25℃；以乙腈为流动相A，以1％冰醋酸为流动相B，按下列规定进行梯度洗脱；梯度洗脱的程序为0-8min流动相B的体积分数增加至20％，8-23min流动相B的体积分数由20％增加至25％，23min以后流动相B的体积分数维持在30％，；流速1.0ml/min，以蒸发光散射检测器检测，温度40℃，气压350KP，理论塔板数按斯皮诺素峰计算应不低于4000；(2)供试品溶液的制备：取所述药物0.9～1.1g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入68％～72％甲醇48～52ml，密塞，称定重量，冷浸过夜后，超声处理25～40分钟，放冷，再称定重量，用65％～75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤，即得；(3)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品和酸枣仁皂苷A对照品，加甲醇制成每1ml含22～27ug的混合对照品溶液；(4)测定法精密吸取混合对照品溶液与供试品液各10ul，注入液相色谱仪测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
7.根据权利要求1所述的质量检测的方法，其特征在于，所述白芍中芍药苷含量测定方法为：(1)色谱条件与系统适用性实验：Phenomenex C18色谱柱，规格4.6mm×250mm,5μm；以体积分数为0.02％的磷酸为流动相A，甲醇和乙腈的体积比为5:1的混合液为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为0-4min流动相B的体积分数增加至20％，4-6min流动相B的体积分数由20％增加至30％，6-12min流动相B的体积分数维持在30％，12-15min，流动相B的体积分数下降至10％；检测波长230nm；体积流量1.0mL/min；柱温30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为230nm理论板数按芍药苷峰计算应不低于2500；(2)供试品溶液的制备：取所述药物0.45～0.55g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加入甲醇45～55ml，称定重量，冷浸过夜后，在超声处理20～40分钟，滤过，精密吸取续滤液10ml，移至氧化铝柱上，加45％～50％甲醇洗脱，用50ml量瓶接收至刻度，摇匀，即得；(3)对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.05～0.15mg的溶液，作为对照品溶液；(4)测定法分别精密吸取供试品溶液及对照品溶液各8～12ul，注入液相色谱仪，测定，记录各目标成分峰面积，按外标法计算芍药苷的含量。
8.根据权利要求1所述的质量检测的方法，其特征在于，所述药物组合物制剂为舒眠胶囊，符合胶囊剂的质量标准。
9.根据权利要求1或8所述的质量检测的方法，其特征在于，所述检查为：照水分测定法测定，不得过9.0％；照装量检查法每粒装量与标示装量相比较，装量差异限度应在标示装量的10％以内，超出装量差异限度的不得多于2粒，并不得有1粒超出限度1倍；照崩解时限检查法检查，应符合规定；照细菌、霉菌及酵母菌检查法和控制菌检查法检查，应符合规定。
10.根据权利要求1或8所述的质量检测的方法，其特征在于，所述舒眠胶囊每粒药物中芍药苷的含量为2.4～5.5mg，斯皮诺素的含量为0.15～4.3mg，酸枣仁皂苷A的含量为0.32～4.8mg。
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Denomination of invention: A quality testing method for a drug combination for treating restlessness

Granted publication date: 20210625

Pledgee: Agricultural Bank of China Limited Guiyang Jiaxiu sub branch

Pledgor: GUIZHOU DALONG PHARMACEUTICAL CO.,LTD.

Registration number: Y2024520000033