CN108445139A - 一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,该中药制剂是由黄芪、秦艽、当归、续断、牡丹皮、柴胡、姜黄、桑寄生、绵萆薢、川牛膝、甘草11味中药制成的颗粒剂。本发明对现有鉴别方法进行了提高,改良了柴胡、续断、当归的鉴别方法,增加了黄芪、秦艽、川牛膝的鉴别方法,删除了姜黄的鉴别,操作方法简单,色谱斑点清晰,阴性无干扰,专属性强,重现性好,可更好地控制产品质量,有良好的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药制剂的鉴别方法,特别是涉及一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,属于中药制剂质量控制技术领域。
背景技术
好的药品质量是发挥药品疗效的基础和前提,定性鉴别是鉴定药品真伪、保证药品质量的重要一环。中药制剂一般药味众多,成份复杂,自古就有“丸散膏丹,神仙莫辨”之说,说明中药制剂的辨识很难。且现代中药制剂大多经过了提取及纯化,多数药材失去了性状及显微特征,因此给药品的质量控制带来了一定难度,这就要运用现代技术手段去解决。
中药制剂常用的鉴定方法主要有性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别、紫外-可见分光光度法、纸色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法及指纹图谱鉴别等。这些鉴别方法各有特点,对一个中药制剂究竟应该选择什么样的鉴别方法,需要反复试验研究和方法学验证来选择,应尽量选用方法简单、容易操作、专属性强、重现性好、经济实用的方法。如果专属性不强,容易发生假阳性。
薄层色谱法(TLC法),系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层,待点样、展开后,根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法具有设备简单、操作方便、快速、显色方式多、灵敏度高(较纸层析)等优点,特别适合于中药制剂的鉴别。
本发明所述的治疗滑膜炎的中药制剂是由黄芪、秦艽、当归、续断、牡丹皮、柴胡、姜黄、桑寄生、绵萆薢、川牛膝、甘草等11味中药制成的颗粒剂,具有益气活血、通利关节、化湿消肿的作用,用于慢性膝关节滑膜炎所致的膝关节肿胀、疼痛、功能受限等症,效果良好。为了控制产品质量,杜志谦等采用薄层色谱法对其中的姜黄、当归、柴胡、续断进行了薄层鉴别,用高效液相色谱法对黄芪甲苷进行了含量测定,有关研究公开于《中国实验方剂学杂志》2010年第8期上,论文题目为:“膝悦颗粒的定性定量方法”。此质量标准作为新药临床前研究的质量标准,对申请新药注册及控制产品质量有积极作用。但后来经过对其多批产品的深入研究,发现其薄层鉴别方法有不足之处,表现在:①姜黄的鉴别中,因姜黄素不溶于水,采用水提法姜黄素很难溶出,因此成品中含量少,很难检出,重现性差,易造成假阴性;②柴胡的鉴别中,样品背景干扰大,展开剂对主斑点的分离能力差,用药材对照对应性差,展开次数多,费时;③续断的鉴别中,样品背景干扰大,展开次数多,费时;④当归的鉴别中,展开剂的极性偏大,色谱主斑点的Rf值偏大,主斑点不集中;⑤没有对所含黄芪、秦艽、川牛膝等进行鉴别。
现有技术的以上不足,严重影响到产品的质量控制及结果判断。因此,为了更好的控制产品质量,有必要对其标准中的薄层鉴别项目进行改进提高。
发明内容
针对现有技术的不足,本发明的目的是提供一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,该方法对于该中药制剂中柴胡、续断、当归、黄芪、秦艽和川牛膝具有较好的鉴别效果,方法简单,专属性强,重现性好,可更好地控制产品质量。
为了解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案如下:一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,所述的中药制剂是由黄芪、秦艽、当归、续断、牡丹皮、柴胡、姜黄、桑寄生、绵萆薢、川牛膝和甘草制备而成的颗粒剂,所述鉴别是对该中药制剂中的黄芪、续断、柴胡、秦艽、当归和川牛膝中的至少一种所做的薄层色谱鉴别;
(1)所述黄芪的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取本品5g,研细,加水50ml使溶解,离心,取上清液,用乙醚洗涤2次,每次30ml,取水层,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次30ml,合并正丁醇液,用1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
b对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
c鉴别方法:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取供试品溶液2μl、对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)所述续断的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:按照(1)黄芪鉴别方法中,步骤a的操作制备供试品溶液。
b对照品溶液的制备:取川续断皂苷VI对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
c鉴别方法:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述供试品溶液2μl、对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)所述柴胡的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:按照(1)黄芪鉴别方法中,步骤a的操作制备供试品溶液。
b对照品溶液的制备:取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷b2对照品,分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。
c鉴别方法:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述供试品溶液与对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60 ℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(4)所述秦艽的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:
取所述中药制剂1g,研细,加甲醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约5ml,作为供试品溶液。
b对照药材溶液的制备:取小秦艽对照药材0.5g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约2ml,作为对照药材溶液。
c对照品溶液的制备:取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
d鉴别方法:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述三种溶液各2μl ,分别点于同一硅胶 GF254 薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(5)所述当归的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取所述中药制剂10g,研细,加水50ml,微热使溶解,用乙醚振摇提取2次,每次50ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
b对照药材溶液的制备:取当归对照药材0.2g,加乙醚20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。
c鉴别方法:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述两种溶液各10μl ,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(6)所述川牛膝的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取所述中药制剂5g,研细,加水50ml,超声处理30分钟,离心,取上清液,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
b对照药材溶液的制备:取川牛膝对照药材1g,加乙酸乙酯30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液。
c鉴别方法:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-丙酮(8∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
进一步的,在所述(6)川牛膝鉴别方法的步骤a和步骤b中,所述超声处理时的超声功率为300W,频率为50kHz。
有益效果
本发明提供的一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,相对于现有技术来说,改良了柴胡、续断、当归的鉴别方法,增加了黄芪、秦艽、川牛膝的鉴别方法,删除了姜黄的鉴别。方法本身操作简单,色谱斑点清晰,阴性无干扰,最大限度的减少了样品背景的干扰,专属性强,展开次数少,重现性好,可更好地控制产品质量,有良好的应用价值。
附图说明
图1为本发明对于黄芪的鉴别检视结果图片;
图2为本发明对于续断的鉴别检视结果图片;
图3为本发明对于柴胡的日光下鉴别检视结果图片;
图4为本发明对于柴胡的紫外光灯下鉴别检视结果图片;
图5为本发明对于秦艽的鉴别检视结果图片;
图6为本发明对于当归的鉴别检视结果图片;
图7为本发明对于川牛膝的鉴别检视结果图片。
具体实施方式
以下结合实施例,对本发明进行具体描述。
首先,进行本申请中所述的一种治疗滑膜炎的中药制剂(以下称膝悦颗粒)的制备:
【处方】 黄芪 1875 g ,秦艽 937.5 g ,当归 625 g ,续断625 g ,牡丹皮 625 g,柴胡 625 g ,姜黄 750 g,桑寄生 750 g ,绵萆薢 937.5 g ,川牛膝 375 g ,甘草 187.5 g。
【制法】 以上十一味,分别加10倍重量的水煎煮三次,每次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.18~1.22(80 ℃),放冷至40 ℃,加乙醇使含醇量达50%(体积浓度),充分搅拌,静置24小时,取上清液,备用。药渣加50%乙醇(体积浓度)适量,搅匀,静置12小时,滤过,滤液与上清液合并,回收乙醇,并浓缩至相对密度为1.08~1.14(65 ℃)的清膏,加糊精125g和阿司巴坦2.1g,混匀,喷雾干燥,干法制粒,制成 1000 g ,即得中药制剂。
其次,采用上述步骤制备的中药制剂进行其中黄芪、续断、柴胡、秦艽、当归、川牛膝的鉴别。
(1)黄芪的鉴别方法:
取本品5g,研细,加水50ml使溶解,离心,取上清液,用乙醚洗涤2次,每次30ml,取水层,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次30ml,合并正丁醇液,用1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取供试品溶液2μl、对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)续断的鉴别方法:
取上述(1)黄芪鉴别方法项下的供试品溶液作为供试品溶液。
另取川续断皂苷VI对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取供试品溶液2μl、对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(3)柴胡的鉴别方法:
取上述(1)黄芪鉴别方法项下的供试品溶液作为供试品溶液。
另取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷b2对照品,分别加甲醇制成每1ml各含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取供试品溶液与上述对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60 ℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点。
(4)秦艽的鉴别方法:
取本品1g,研细,加甲醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约5ml,作为供试品溶液。
另取小秦艽对照药材0.5g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约2ml,作为对照药材溶液。
再取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述三种溶液各2μl ,分别点于同一硅胶 GF254 薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(5)当归的鉴别方法:
取本品10g,研细,加水50ml,微热使溶解,用乙醚振摇提取2次,每次50ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
另取当归对照药材0.2g,加乙醚20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述两种溶液各10μl ,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(6)川牛膝的鉴别方法:
取本品5g,研细,加水50ml,超声处理30分钟,离心,取上清液,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
取川牛膝对照药材1g,加乙酸乙酯30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液。
照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-丙酮(8∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明,而本发明的范围不受所举实施例的局限。
实验论证:以下通过具体的实验来进一步说明本发明的有益效果。
一、试验材料
膝悦颗粒,河南省洛正药业有限责任公司生产,批号:150601、150602、150603;所用对照药材及对照品,均购自中国食品药品检定研究院;硅胶G及硅胶 GF254 薄层板,烟台化学工业研究所;所用试剂均为分析纯。
二、本发明方法对膝悦颗粒中黄芪、续断、柴胡、秦艽、当归、川牛膝的鉴别实验例
(1)黄芪的鉴别:
a供试品溶液的制备:分别取三个不同批次的中药制剂各5g,研细,分别加水50ml使溶解,离心,取上清液,用乙醚洗涤2次,每次30ml,取水层,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次30ml,合并正丁醇液,用1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
b阴性对照溶液的制备:取处方中除去黄芪的其他药味,按处方比例及工艺制成缺黄芪的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
c对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
d鉴别过程:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取三份供试品溶液各2μl、对照品溶液5μl及阴性对照溶液2μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
实验结果:检视结果图见附图1。图1中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液。
图中显示:三个供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性对照样品无干扰。
(2)续断的鉴别:
a供试品溶液的制备:取上述(1)黄芪鉴别方法项下的三份供试品溶液作为供试品溶液。
b阴性对照溶液的制备:取处方中除去续断的其他药味,按处方比例及工艺制成缺续断的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
c对照品溶液的制备:取川续断皂苷VI对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
d鉴别过程:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取三份供试品溶液各2μl、对照品溶液5μl及阴性对照溶液2μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。
实验结果:检视结果图见附图2。图2中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液。
图中显示:三个供试品色谱中,色谱背景清晰,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,且阴性对照样品无干扰。
(3)柴胡的鉴别:
a供试品溶液的制备:取上述(1)黄芪鉴别方法项下的三份供试品溶液作为供试品溶液。
b阴性对照溶液的制备:取处方中除去柴胡的其他药味,按处方比例及工艺制成缺柴胡的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
c对照品溶液的制备:取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷b2对照品,分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为两份对照品溶液。
d鉴别过程:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取三份供试品溶液、对照品溶液及阴性对照溶液各5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60 ℃加热至斑点显色清晰,分别置日光和紫外光灯(365nm)下检视。
实验结果:检视结果图见附图3和4。附图3为日光下的检视结果图;附图4为紫外光灯(365nm)下的检视结果图。
图3中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、柴胡皂苷a对照品溶液、柴胡皂苷b2对照品溶液和阴性对照溶液。
图4中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、柴胡皂苷a对照品溶液、柴胡皂苷b2对照品溶液和阴性对照溶液。
图中显示:三个供试品色谱中,色谱背景清晰,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点,且阴性对照样品无干扰。
(4)秦艽的鉴别:
a供试品溶液的制备:分别取三个不同批次的中药制剂各1g,研细,分别加甲醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约5ml,作为三份供试品溶液。
b阴性对照溶液的制备:取处方中除去秦艽的其他药味,按处方比例及工艺制成缺秦艽的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
c对照药材溶液的制备:取小秦艽对照药材0.5g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约2ml,作为对照药材溶液。
d对照品溶液的制备:取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。
e鉴别过程:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取三份供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液和阴性对照溶液各2μl,分别点于同一硅胶 GF254 薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(10∶2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视。
实验结果:检视结果图见附图5。图5中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液和阴性对照溶液。
图中显示:三个供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性对照样品无干扰。
(5)当归的鉴别:
a供试品溶液的制备:分别取三个不同批次的中药制剂各10g,研细,分别加水50ml,微热使溶解,用乙醚振摇提取2次,每次50ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为三份供试品溶液。
b阴性对照溶液的制备:取处方中除去当归的其他药味,按处方比例及工艺制成缺当归的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
c对照药材溶液的制备:取当归对照药材0.2g,加乙醚20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液。
d鉴别过程:照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验,吸取三份供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各10μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
实验结果:检视结果图见附图6。图6中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液。
图中显示:三个供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性对照样品无干扰。色谱主斑点的Rf值适宜,主斑点集中。
(6)川牛膝的鉴别:
a供试品溶液的制备:分别取三个不同批次的中药制剂各5g,研细,分别加水50ml,超声处理30分钟,离心,取上清液,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为三份供试品溶液。
b阴性对照溶液的制备:取处方中除去川牛膝的其他药味,按处方比例及工艺制成缺川牛膝的阴性样品,同供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
c取川牛膝对照药材1g,加乙酸乙酯30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液。
d鉴别过程:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,吸取三份供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液各5μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-丙酮(8∶4∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
实验结果:检视结果图见附图7。图7中从左至右依次为膝悦颗粒150601供试品溶液、膝悦颗粒150602供试品溶液、膝悦颗粒150603供试品溶液、对照药材溶液和阴性对照溶液。
图中显示:三个供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,且阴性对照样品无干扰。
本发明的鉴定方法是在经过大量摸索、比较及实验基础上形成的,包括样品的处理方法(提取及纯化)、对照品的选择(对照品及对照药材)、展开系统的选择及优化、薄层板的比较、显色剂的选择及显色方法等等,方法简单,专属性强,重现性好。本发明方法的另一个优点在于制备一份样品供试液即可用于黄芪、续断及柴胡的鉴别,黄芪、续断的鉴别更可于同一块薄层板上同时进行,减少了操作步骤。本发明克服了现有技术的缺点,是一个巨大的进步,具有创造性。本说明书中选择的实施例及实验例仅仅是所有实验中的一部分,是最优方案,并不影响对本发明的保护。
Claims (2)
1.一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,所述的中药制剂是由黄芪、秦艽、当归、续断、牡丹皮、柴胡、姜黄、桑寄生、绵萆薢、川牛膝和甘草制备而成的颗粒剂,其特征在于:所述鉴别是对该中药制剂中的黄芪、续断、柴胡、秦艽和川牛膝中的至少一种所做的薄层色谱鉴别;
(1)所述黄芪的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取所述中药制剂5g,研细,加水50ml使溶解,离心,取上清液,用乙醚洗涤2次,每次30ml,取水层,用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次30ml,合并正丁醇液,用1%氢氧化钠溶液洗涤3次,每次30ml,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;
b对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
c鉴别方法:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,吸取步骤a制得的供试品溶液2μl、步骤b制得的对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水=13∶7∶2,且10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(2)所述续断的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:按照(1)黄芪鉴别方法中步骤a的操作制备供试品溶液;
b对照品溶液的制备:取川续断皂苷VI对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
c鉴别方法:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,吸取步骤a制得的供试品溶液2μl、步骤b制得的对照品溶液5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水=13∶7∶2,且10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)所述柴胡的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:按照(1)黄芪鉴别方法中步骤a的操作制备供试品溶液;
b对照品溶液的制备:取柴胡皂苷a对照品、柴胡皂苷b2对照品,分别加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;
c鉴别方法:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,吸取步骤a制得的供试品溶液、步骤b制得的两份对照品溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-甲醇-水=13∶7∶2,且10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以2%的对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸乙醇溶液,在60℃加热至斑点显色清晰,分别置于日光和365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点或荧光斑点;
(4)所述秦艽的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取所述中药制剂1g,研细,加甲醇20ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约5ml,作为供试品溶液;
b对照药材溶液的制备:取小秦艽对照药材0.5g,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,滤液浓缩至约2ml,作为对照药材溶液;
c对照品溶液的制备:取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
d鉴别方法:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,分别吸取步骤a制得的供试品溶液、步骤b制得的对照药材溶液、以及步骤c制得的对照品溶液各2μl,分别点于同一硅胶GF254 薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水=10∶2∶1为展开剂,展开,取出,晾干,置于254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点;
(5)所述川牛膝的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取所述中药制剂5g,研细,加水50ml,超声处理30分钟,离心,取上清液,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;
b对照药材溶液的制备:取川牛膝对照药材1g,加乙酸乙酯30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,制成对照药材溶液;
c鉴别方法:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,吸取步骤a制得的供试品溶液、以及步骤b制得的对照药材溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-三氯甲烷-丙酮=8∶4∶1为展开剂,展开,取出,晾干,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
2.根据权利要求1所述的一种治疗滑膜炎的中药制剂的鉴别方法,其特征在于,所述当归的鉴别方法,包括以下步骤:
a供试品溶液的制备:取所述中药制剂10g,研细,加水50ml,微热使溶解,用乙醚振摇提取2次,每次50ml,合并乙醚液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;
b对照药材溶液的制备:取当归对照药材0.2g,加乙醚20ml,超声处理15分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为对照药材溶液;
c鉴别方法:照中国药典2015年版通则0502 薄层色谱法试验,吸取步骤a制得的供试品溶液、以及步骤b制得的对照药材溶液各10μl,分别点于同一硅胶 G 薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯=9∶1为展开剂,展开,取出,晾干,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
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