CN107576749A - 一种风湿寒痛片的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及由中药材青风藤、桂枝、独活、羌活、牛膝、桑寄生、茯苓、附片、秦艽、鹿茸、威灵仙、薏苡仁、党参、黄芪、枸杞子、白术、当归、赤芍、木香、醋延胡索、黄芩制成的中药复方制剂一种风湿寒痛片的检测方法，其特征是利用高效液相色谱法、薄层色谱法对该中药复方制剂中药材青风藤进行含量测定以及对黄芩苷、当归、芍药苷、龙胆苦苷及黄芪甲苷做薄层鉴别。该方法能够有效控制风湿寒痛片的质量，可作为该药质量控制和考察工艺可靠性的方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗肝肾不足，风寒湿痹，关节肿痛，四肢麻木，腰膝酸痛，筋骨萎软等症药物的检测方法，属于制药领域。
背景技术
风湿寒痛片执行药品部颁标准，具有祛风散寒，除湿活络，滋补肝肾作用，用于肝肾不足，风寒湿痹，关节肿痛，四肢麻木，腰膝酸痛，筋骨萎软等症。该药由中药材青风藤、桂枝、独活、羌活、牛膝、桑寄生、茯苓、附片、秦艽、鹿茸、威灵仙、薏苡仁、党参、黄芪、枸杞子、白术、当归、赤芍、木香、醋延胡索、黄芩组成；其中黄芪、青风藤及当归均是起主要治疗作用的药材。现有风湿寒痛片执行标准质量控制方法中，缺少对这些起主要治疗作用药材的质量控制方法，青风藤虽然有薄层鉴别方法，但缺少定量检测方法；因此，现有技术在全面评价风湿寒痛片质量优劣方面存在局限性。本发明克服现有技术的不足，完善风湿寒痛片的质量控制标准，增加了青风藤含量测定的质量控制方法以及当归、黄芩(黄芩苷)、赤芍(芍药苷)、黄芪(黄芪甲苷)薄层色谱定性鉴别方法，使本复方制剂质量控制标准进一步完善。
发明内容
本发明目的是克服现有技术不足，完善并制定风湿寒痛片的质量控制方法，增加了青风藤含量测定的质量控制方法以及当归、黄芩(黄芩苷)、赤芍(芍药苷)、黄芪(黄芪甲苷)薄层色谱定性鉴别方法，使本复方制剂质量控制标准进一步完善；能够有效控制风湿寒痛片的产品质量。
本发明通过下述技术方案得以实现:
1.风湿寒痛片中药材青风藤所含青藤碱用高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液（20：80）为流动相；检测波长为262nm，理论板数按青藤碱峰计算应不低于10000；
b.对照品溶液的制备: 取青藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg-70µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备: 取本品10片，除去包衣，研细，取0.8-1.2g，精密称定，精密加入70％乙醇20-30ml，称定重量，超声处理40-50分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5-15ml，蒸干，残渣加4%冰醋酸溶液15-25ml分次使溶解，转移至分液漏斗中，加浓氨溶液适量（调节pH值至10～11，约5ml），摇匀，用三氯甲烷振摇提取四次，每次15-25ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；风湿寒痛片每片含青风藤以青藤碱计，不得少于0.13mg；
2.风湿寒痛片中黄芩苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备: 取风湿寒痛片5片，除去包衣，研细，加甲醇25-35ml，超声处理40-50分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-30ml使溶解，用盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15-25ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3.风湿寒痛片中药材当归用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备: 取红花对照药材0.5g，加乙醚10ml，超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片20片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.风湿寒痛片中芍药苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片5片，除去包衣，研细，加乙醇25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1.0-2.0ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
5.风湿寒痛片中龙胆苦苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片20片，除去包衣，研细，加正己烷25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，弃去滤液，残渣加丙酮25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇3-6ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶ＧF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（20:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
6.风湿寒痛片中黄芪甲苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片35片，除去包衣，研细，加乙醚40-60ml，超声处理10-20分钟，滤过，弃去滤液，残渣加丙酮25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇40-60ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
本发明提供了青风藤含量测定的质量控制方法以及以及当归、黄芩(黄芩苷)、赤芍(芍药苷)、黄芪(黄芪甲苷)薄层色谱定性鉴别方法，方法简便易行，可作为风湿寒痛片质量控制指标。
具体实施方式
实施例:
取组方中鹿茸6g、薏苡仁43g、附片29g、醋延胡索29g、党参29g、赤芍29g粉碎成细粉，过筛，备用；茯苓29g、黄芪29g、枸杞子57g、牛膝43g、桑寄生29g、威灵仙43g水煮两次浓缩成膏，白术29g、当归29g、独活29g、羌活29g、秦艽29g、桂枝29g、木香23g、黄芩86g、青风藤86g九味以70%乙醇提取两次，浓缩成膏，将以上水、醇浸膏合并，与鹿茸、薏苡仁、附片、醋延胡索、党参、赤芍细粉及辅料适量混合，制成颗粒，干燥，压制成1000片。该药物的质量控制方法包括下列步骤:
1.风湿寒痛片中药材青风藤所含青藤碱用高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液（20：80）为流动相；检测波长为262nm，理论板数按青藤碱峰计算应不低于10000；
b.对照品溶液的制备: 取青藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg-70µg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备: 取本品10片，除去包衣，研细，取约1.0g，精密称定，精密加入70％乙醇25ml，称定重量，超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣加4%冰醋酸溶液20ml分次使溶解，转移至分液漏斗中，加浓氨溶液适量（调节pH值至10～11，约5ml），摇匀，用三氯甲烷振摇提取四次，每次20ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；风湿寒痛片每片含青风藤以青藤碱计，不得少于0.13mg；
2.风湿寒痛片中黄芩苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备: 取风湿寒痛片5片，除去包衣，研细，加甲醇30ml，超声处理45分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水25ml使溶解，用盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5%三氯化铁乙醇溶液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
3.风湿寒痛片中药材当归用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备: 取红花对照药材0.5g，加乙醚10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片20片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
4.风湿寒痛片中芍药苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片5片，除去包衣，研细，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2.0ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40:5:10:0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
5.风湿寒痛片中龙胆苦苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片20片，除去包衣，研细，加正己烷30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去滤液，残渣加丙酮30ml，超声处理30分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶ＧF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（20:2:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
6.风湿寒痛片中黄芪甲苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备: 取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片35片，除去包衣，研细，加乙醚50ml，超声处理15分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
Claims (1)
1.一种风湿寒痛片的检测方法，其中所述药物由中药材青风藤86g、桂枝29g、独活29g、羌活29g、牛膝43g、桑寄生29g、茯苓29g、附片29g、秦艽29g、鹿茸6g、威灵仙43g、薏苡仁43g、党参29g、黄芪29g、枸杞子57g、白术29g、当归29g、赤芍29g、木香23g、醋延胡索29g、黄芩86g制成，上述中药材共制成1000片，其特征在于该方法包括下列步骤:
(1)风湿寒痛片中药材青风藤所含青藤碱用高效液相色谱法进行含量测定:
a.色谱条件与系统适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸溶液(20：80)为流动相；检测波长为262nm，理论板数按青藤碱峰计算应不低于10000；
b.对照品溶液的制备:取青藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg-70μg的溶液，作为对照品溶液；
c.供试品溶液的制备:取本品10片，除去包衣，研细，取0.8-1.2g，精密称定，精密加入70％乙醇20-30ml，称定重量，超声处理40-50分钟，放冷，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液5-15ml，蒸干，残渣加4％冰醋酸溶液15-25ml分次使溶解，转移至分液漏斗中，加浓氨溶液适量(调节pH值至10～11，约5ml)，摇匀，用三氯甲烷振摇提取四次，每次15-25ml，合并三氯甲烷液，回收溶剂至干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；
d.测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5-15μl，注入液相色谱仪，测定；风湿寒痛片每片含青风藤以青藤碱计，不得少于0.13mg；
(2)风湿寒痛片中黄芩苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备:取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片5片，除去包衣，研细，加甲醇25-35ml，超声处理40-50分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20-30ml使溶解，用盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次15-25ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性5％三氯化铁乙醇溶液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)风湿寒痛片中药材当归用薄层色谱法鉴别:
a.对照药材溶液的制备:取红花对照药材0.5g，加乙醚10ml，超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为对照药材溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片20片，除去包衣，研细，加乙醚40ml，超声处理10-20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照药材溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)风湿寒痛片中芍药苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备:取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片5片，除去包衣，研细，加乙醇25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1.0-2.0ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)风湿寒痛片中龙胆苦苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备:取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片20片，除去包衣，研细，加正己烷25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，弃去滤液，残渣加丙酮25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇3-6ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各2-5μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(20:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(6)风湿寒痛片中黄芪甲苷用薄层色谱法鉴别:
a.对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
b.供试品溶液的制备:取风湿寒痛片35片，除去包衣，研细，加乙醚40-60ml，超声处理10-20分钟，滤过，弃去滤液，残渣加丙酮25-35ml，超声处理20-40分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇40-60ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1-3ml使溶解，作为供试品溶液；
c.薄层色谱法试验:吸取上述对照品溶液和供试品溶液各5-10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
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