CN103018394A - 一种龙胆泻肝颗粒的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种龙胆泻肝颗粒的检测方法,属于中药现代化领域。本发明规范了龙胆泻肝颗粒的检测方法,在原有对栀子鉴别的基础上,通过建立对君药龙胆的鉴别,及对臣药黄芩、使药甘草的鉴别,以及对臣药黄芩的含量测定,能更全面的检测药物的成分和其配伍,了解其含量和稳定性,也有助于说明药物的药用物质基础;同时增加对马兜铃酸的检查,更有利于降低其毒副作用。
Description
技术领域
本发明属于中药现代化领域,具体涉及一种龙胆泻肝颗粒的检测方法。
背景技术
中药成分复杂,特别是中药复方往往含多类、多种成分,构成了一个非常复杂的系统。目前,新的有效部位中药制剂和现代复方中药制剂的研发不断增多,新的工艺及多种不同提取方式并用于药品的研究及生产。
随着现代分析测试技术、设备仪器的迅猛发展,中药的含量测定、色谱鉴别成为检测的重要手段。 但目前一般只建立某一指标化学成分的含量测定或鉴别,针对上述多种新工艺同时应用的情况,仅建立某单一成分的含量测定或鉴别在很大程度上带有较大的片面性。
龙胆泻肝颗粒具有清肝胆,利湿热的功能。用于肝胆湿热,头晕目赤,耳鸣耳聋,耳肿疼痛,胁痛口苦,尿赤涩痛,湿热带下。
龙胆泻肝颗粒为黄色至棕褐色的颗粒;气微香、味甜,微苦。
其处方是:龙胆66g、柴胡66g、黄芩33g、栀子(炒) 33g、泽泻66g、木通33g、车前子(盐炒) 33g、当归(酒炒) 33g、地黄66g、甘草(蜜炙) 33g。
制法:以上十味,取柴胡、当归提取挥发油,蒸馏后的水溶液另器收集;药渣与其余龙胆等八味,加水煎煮二次,第一次加8倍量水,煎煮1.5小时,第二次加6倍量水,煎煮1.5小时,合并煎液,滤过,滤液与上述水溶液合并,浓缩至相对密度为1.25~1.30(50~55℃)的清膏。取清膏1份,蔗糖2.5份,糊精2份及乙醇适量,制成颗粒,干燥,加入上述柴胡、当归的挥发油,混匀,制成1000g,即得。每袋装6g;开水冲服,一次6g,一日2次。
方中龙胆泻厥阴之热,是君药,黄芩、栀子清肺与三焦之热以佐之,泽泻泻肾经之湿,木通、车前子泻小肠膀胱之湿以佐之,是为臣药,然皆苦寒下泻之药。故用当归、生地以养血而补肝,共为佐药,用甘草以缓中而不使伤胃,为使药也。
龙胆泻肝颗粒原来检测方法中只有对臣药栀子的鉴别,但众所周知方中君药所起的作用也是十分重要的,还有其它臣药如黄芩,以及唯一的使药甘草也有重要作用,如没有相应的检测手段容易造成检测方法带有较大的片面性,所以仅有的对栀子的鉴别也不能全面的反映龙胆泻肝颗粒重要成份的含量。同时作为臣药的木通其中含有的马兜铃酸需要制备过程中去除,所以目前没有对此的含量测定也是不完善的。
发明内容
本发明提供一种龙胆泻肝颗粒的检测方法,以解决目前检测方法中存在的检测不全面的问题。
本发明采取的技术方案是,包括如下的鉴别方法和含量测定方法和检查方法:
(一)鉴别方法
(1)取本品龙胆泻肝颗粒12g,加水30ml,加热使溶解,放冷,用乙醚提取3次,每次15ml,弃去乙醚液,再用水饱合的正丁醇提取3次,每次15ml,合并正丁醇液,加等体积氨试液,摇匀,放置分层,分取上清液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取栀子苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:丙酮:甲酸:水=5:5:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,在110℃烘10分钟,至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(2)取本品龙胆泻肝颗粒12g,研细,加甲醇50ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水15ml,加热使溶解,放冷,用水饱合正丁醇提取2次,每次15ml,合并正丁醇提取液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含5mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1.1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取上述(2)项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取甘草对照药材2g,加甲醇20ml,加热回流30分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:甲酸:冰醋酸:水=15:1:1:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取上述(2)项下的供试品溶液,加于已处理好的中性氧化铝柱上,所装中性氧化铝120目,2g,柱内径15mm,用甲醇20ml洗脱,洗脱液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各3μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿:甲醇:水=13:6:2,10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检识;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(二)含量测定方法
(1)对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含60μl的溶液,即得;
供试品溶液制备:取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒,充分研细,取1.5g,精密称定,置50ml量瓶中,加60%甲醇45ml,超声处理, 30分钟,功率150W,频率25KHz,放冷至室温,加60%甲醇至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得;
照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇:水:磷酸=47:53:0.2为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算,应不低于2500;
测定法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱液,测定,即得;
(三)检查方法:
照中国药典2005年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基键合硅胶为填充剂;甲醇:水:冰醋酸=57:43:1为流动相;检测波长为317nm,理论塔板数按马兜铃酸A峰计算应不低于8000;
对照品溶液的制备:精密称取马兜铃酸A对照品5mg,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取0.5ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得,每1ml含马兜铃酸A为1μg;
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒,混匀,研细,取5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇:甲酸=98:2,50ml,称定重量,超声处理30分钟,功率250W,频率40kHz,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液10ml,蒸干,残渣加水20ml使溶解,用10%的盐酸溶液调pH值2-3,用乙醚提取4次,每次10ml,合并乙醚提取液,置60℃水浴上挥干,残渣加少量甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本发明优点是:规范了龙胆泻肝颗粒的检测方法,在原有对栀子鉴别的基础上,通过建立对君药龙胆的鉴别,及对臣药黄芩、使药甘草的鉴别,以及对臣药黄芩的含量测定,能更全面的检测药物的成分和其配伍,了解其含量和稳定性,也有助于说明药物的药用物质基础;同时增加对马兜铃酸的检查,更有利于降低其毒副作用。
具体实施方式
龙胆泻肝颗粒由吉林紫鑫药业股份有限公司按背景技术中处方和工艺生产提供。
包括如下的鉴别方法和含量测定方法和检查方法:
(一)鉴别方法
(1)取本品龙胆泻肝颗粒12g,加水30ml,加热使溶解,放冷,用乙醚提取3次,每次15ml,弃去乙醚液,再用水饱合的正丁醇提取3次,每次15ml,合并正丁醇液,加等体积氨试液,摇匀,放置分层,分取上清液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取栀子苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:丙酮:甲酸:水=5:5:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,在110℃烘10分钟,至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(2)取本品龙胆泻肝颗粒12g,研细,加甲醇50ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水15ml,加热使溶解,放冷,用水饱合正丁醇提取2次,每次15ml,合并正丁醇提取液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含5mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1.1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取上述(2)项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取甘草对照药材2g,加甲醇20ml,加热回流30分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:甲酸:冰醋酸:水=15:1:1:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(4)取上述(2)项下的供试品溶液,加于已处理好的中性氧化铝柱上,所装中性氧化铝120目,2g,柱内径15mm,用甲醇20ml洗脱,洗脱液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各3μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿:甲醇:水=13:6:2,10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检识;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(二)含量测定方法
(1)对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含60μl的溶液,即得;
供试品溶液制备:取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒,充分研细,取1.5g,精密称定,置50ml量瓶中,加60%甲醇45ml,超声处理, 30分钟,功率150W,频率25KHz,放冷至室温,加60%甲醇至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得;
照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇:水:磷酸=47:53:0.2为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算,应不低于2500;
测定法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱液,测定,即得;
(三)检查方法:
照中国药典2005年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基键合硅胶为填充剂;甲醇:水:冰醋酸=57:43:1为流动相;检测波长为317nm,理论塔板数按马兜铃酸A峰计算应不低于8000;
对照品溶液的制备:精密称取马兜铃酸A对照品5mg,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取0.5ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得,每1ml含马兜铃酸A为1μg;
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒,混匀,研细,取5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇:甲酸=98:2,50ml,称定重量,超声处理30分钟,功率250W,频率40kHz,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液10ml,蒸干,残渣加水20ml使溶解,用10%的盐酸溶液调pH值2-3,用乙醚提取4次,每次10ml,合并乙醚提取液,置60℃水浴上挥干,残渣加少量甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
Claims (1)
1.一种龙胆泻肝颗粒的检测方法,包括栀子的鉴别方法:
取本品龙胆泻肝颗粒12g,加水30ml,加热使溶解,放冷,用乙醚提取3次,每次15ml,弃去乙醚液,再用水饱合的正丁醇提取3次,每次15ml,合并正丁醇液,加等体积氨试液,摇匀,放置分层,分取上清液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取栀子苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:丙酮:甲酸:水=5:5:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸乙醇溶液,在110℃烘10分钟,至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
其特征在于还包括如下的鉴别方法和含量测定方法和检查方法:
(一)鉴别方法
(1)取本品龙胆泻肝颗粒12g,研细,加甲醇50ml,加热回流1小时,滤过,滤液蒸干,残渣加水15ml,加热使溶解,放冷,用水饱合正丁醇提取2次,每次15ml,合并正丁醇提取液,减压回收正丁醇至干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含5mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯:丁酮:甲酸:水=5:3:1.1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%三氯化铁乙醇溶液;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(2)取上述(1)项下的供试品溶液,作为供试品溶液;另取甘草对照药材2g,加甲醇20ml,加热回流30分钟,滤过,滤液浓缩至2ml,作为对照药材溶液;照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各2μl,分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯:甲酸:冰醋酸:水=15:1:1:2为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(3)取上述(1)项下的供试品溶液,加于已处理好的中性氧化铝柱上,所装中性氧化铝120目,2g,柱内径15mm,用甲醇20ml洗脱,洗脱液浓缩至2ml,作为供试品溶液;另取龙胆苦苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验,吸取上述两种溶液各3μl,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以氯仿:甲醇:水=13:6:2,10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置254nm紫外光灯下检识;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;
(二)含量测定方法
(1)对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含60μl的溶液,即得;
供试品溶液制备:取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒,充分研细,取1.5g,精密称定,置50ml量瓶中,加60%甲醇45ml,超声处理, 30分钟,功率150W,频率25KHz,放冷至室温,加60%甲醇至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液,取续滤液,即得;
照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇:水:磷酸=47:53:0.2为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算,应不低于2500;
测定法:分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱液,测定,即得;
(三)检查方法:
照中国药典2005年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定;
色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基键合硅胶为填充剂;甲醇:水:冰醋酸=57:43:1为流动相;检测波长为317nm,理论塔板数按马兜铃酸A峰计算应不低于8000;
对照品溶液的制备:精密称取马兜铃酸A对照品5mg,置25ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密吸取0.5ml,置100ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得,每1ml含马兜铃酸A为1μg;
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒,混匀,研细,取5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇:甲酸=98:2,50ml,称定重量,超声处理30分钟,功率250W,频率40kHz,取出,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液10ml,蒸干,残渣加水20ml使溶解,用10%的盐酸溶液调pH值2-3,用乙醚提取4次,每次10ml,合并乙醚提取液,置60℃水浴上挥干,残渣加少量甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得;
测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
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Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20130403 |