CN118130694B - 一种四逆散加减颗粒的质量控制方法 - Google Patents
一种四逆散加减颗粒的质量控制方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种四逆散加减颗粒的质量控制方法，涉及中药质量控制技术领域。本发明的方法分别针对四逆散加减颗粒剂中的柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参进行薄层色谱鉴别，仅通过两种提取方法即可实现七种成分的鉴别，具有高稳定性和重复性的优点，同时简化质量检测步骤、环保、提高检测效率。
Description
技术领域
本发明涉及中药质量控制技术领域，尤其是涉及一种四逆散加减颗粒的质量控制方法。
背景技术
四逆散加减颗粒是由柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等组成的中药制剂，方中酸枣仁养心补肝，宁心安神；蒲公英清肝经火热，丹参清心凉血，除烦安神；白术健脾益气，顾护中焦脾胃，诸药共奏疏肝解郁，清肝降火之功效。临床疗效也进一步显示该颗粒具有改善失眠，抗抑郁及抗焦虑的作用。
文献“四逆散颗粒质量标准的研究”中，采用薄层色谱法对四逆散颗粒制剂中柴胡、白芍、枳实、甘草进行了定性鉴别。针对柴胡，取四逆散颗粒1.5g，加20mL甲醇，超声振荡提取30min滤过，滤液蒸干，残渣加水适量溶解，用乙醚10mL萃取3次，弃去乙醚层，再用水饱和正丁醇15mL萃取3次，合并正丁醇萃取液，减压蒸干，以少量甲醇溶解残渣，过中性氧化铝柱(1.2cm×4cm)，以甲醇50mL洗脱，收集甲醇洗脱液，回收甲醇，残渣以甲醇1mL溶解，得供试液。针对白芍、枳实、甘草，取四逆散颗粒1.5g，加20mL甲醇，超声振荡提取30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。然后分别准备四种成分的对照品溶液和阴性对照液，利用薄层色谱进行分析。
另外，文献“四逆散质量标准研究”中，也采用薄层色谱法对柴胡、枳壳、白芍、甘草进行了鉴别。针对柴胡，取本品10g，加乙醚40mL，超声处理20分钟，滤过，弃去滤液，残渣加甲醇40mL，置80℃水浴回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至5mL，滤过，滤液作为供试品溶液。针对白芍、枳实、甘草，取本品10g，加乙醚40mL，超声处理20分钟，滤过，弃去滤液残渣加甲醇40mL，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣如甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。然后分别准备四种成分的对照品溶液和阴性对照液，利用薄层色谱进行分析。
不过，以上研究针对的是四逆散颗粒，由四种成分组成，而四逆散加减颗粒成分更多、更复杂，现有的针对单种成分或部分成分的薄层色谱分析方法均无法准确排除干扰，不适用于更为复杂的复方鉴别。目前尚缺乏针对四逆散加减颗粒的有效的质量控制方法。
有鉴于此，为了对四逆散加减颗粒实现有效的质量监控，本发明建立了质量评价方法，操作简单，高效，无干扰。
发明内容
本发明的目的是提供一种四逆散加减颗粒的质量控制方法，针对柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等成分组成的四逆散加减颗粒剂，从诸多有效药物成分中分离提取待测定成分，在保证鉴定效果的基础上，实现2种样品即可同时鉴别多种中药成分，并具有高稳定性和重复性，简化质量检测、环保、提高检测效率。
为实现上述发明目的，本发明技术方案如下：
本发明提供一种四逆散加减颗粒的质量控制方法，包括以下步骤：
（1）丹参、枳实的特征鉴别：将供试品溶液A、丹参对照药材溶液或丹酚酸B对照品溶液、枳实对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂1展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视；
（2）蒲公英的特征鉴别：将供试品溶液A、蒲公英对照药材溶液或菊苣酸对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂2展开，取出，晾干，氨气熏后喷以三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视；
（3）白术的特征鉴别：将供试品溶液A、白术对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂3展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；
（4）酸枣仁的特征鉴别：将供试品溶液C、酸枣仁对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂4展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视；
（5）柴胡的特征鉴别：将供试品溶液C、柴胡对照药材溶液或柴胡皂苷对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂5展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；
（6）白芍的特征鉴别：吸取供试品溶液C、芍药苷对照品溶液或芍药对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂1展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视，
其中，
所述供试品溶液A按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，加稀盐酸，振摇，加入乙酸乙酯振摇，离心，上清液作为供试品溶液A；
所述供试品溶液C按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，加水溶解，用水饱和正丁醇提取，用氨试液洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液C；
所述展开剂1为体积比5-7:1-3:7-9:2-4:0.5-1.5的二氯甲烷- 甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液；
展开剂2为体积比1-3:7-9:1-3:0.5-1.5的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水混合液；
展开剂3为体积比6-8:2-4的环己烷-乙酸乙酯混合液；
展开剂4为水饱和正丁醇；
展开剂5为体积比5-7:25-30:8-10:2-4的二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水混合液。
优选地，所述供试品溶液A按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，称取1.5g置于离心管中，加1%盐酸3mL，振摇至无团块，加入乙酸乙酯2mL振摇均匀，离心，上清液作为供试品溶液A。
优选地，所述供试品溶液C按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，称取4g，加水20mL溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15mL，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15mL，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液C。
优选地，
所述展开剂1为体积比6:2:8:3:1的二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液；
所述展开剂2为体积比2:8:2:1的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水混合液；
所述展开剂3为体积比7:3的环己烷-乙酸乙酯混合液；
所述展开剂4为水饱和正丁醇；
所述展开剂5为体积比6:28:9:3的二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水混合液。
优选地，步骤（1）、步骤（4）和步骤（6）中，所述香草醛硫酸溶液的浓度为5%，所述加热的温度为105℃。
优选地，步骤（1）中，所述丹参对照药材溶液的制备方法为：丹参对照药材加甲醇，超声处理，滤过，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为丹参对照药材溶液。
进一步优选为：取丹参对照药材0.5g，加甲醇12 mL，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为丹参对照药材溶液。
优选地，步骤（1）中，所述枳实阴性供试品溶液的制备方法为：枳实对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液作为枳实对照药材溶液。
进一步优选为：取枳实对照药材0.1g，加甲醇30 mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为枳实对照药材溶液。
优选地，步骤（1）中，所述丹酚酸B对照品溶液的制备方法为：取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1mL含1.5 mg的溶液，作为丹酚酸B对照品溶液。
优选地，步骤（1）中，所述供试品溶液A点样量为2-6μL；丹酚酸B对照品溶液点样量为4-6μL；丹参对照药材溶液点样量为4-6μL；枳实对照药材溶液点样量为2-6μL。
优选地，步骤（2）中，所述蒲公英对照药材溶液的制备方法为：取蒲公英对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液作为蒲公英对照药材溶液。
进一步优选为：取蒲公英对照药材0.2g，加80%甲醇2mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为蒲公英对照药材溶液。
优选地，步骤（2）中，所述菊苣酸对照品溶液的制备方法为：取菊苣酸对照品加甲醇，作为菊苣酸对照品溶液。
进一步优选为：取菊苣酸对照品加甲醇制成每1mL各含0.6mg的溶液，作为菊苣酸对照品溶液。
优选地，步骤（2）中，氨气熏5min后喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视。
优选地，步骤（2）中，所述供试品溶液A点样量为2-6μL所述蒲公英对照药材溶液点样量为2-6μL。
优选地，步骤（2）中，所述薄层板平衡饱和30min以上。
优选地，步骤（3）中，所述白术对照药材溶液的制备方法为：取白术对照药材加乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液作为对照药材溶液。
进一步优选为：取白术对照药材0.25g，加乙酸乙酯4 mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为白术对照药材溶液。
优选地，步骤（3）和步骤（5）中，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，所述加热的温度为60℃。
优选地，步骤（3）中，所述供试品溶液A点样量为2-6μL；所述白术对照药材溶液点样量为4-8μL。
优选地，步骤（4）中，所述酸枣仁对照品溶液的制备方法为：取酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品，加甲醇制成每1mL各含0.1mg的混合溶液，作为酸枣仁对照品溶液。
优选地，步骤（4）中，所述供试品溶液C点样量为2-6μL；所述酸枣仁对照品溶液点样量为4-6μL。
优选地，步骤（5）中，所述柴胡对照药材溶液的制备方法为：取柴胡对照药材加甲醇，超声处理，滤过，上清液作为柴胡对照药材溶液。
进一步优选为：取柴胡对照药材0.25g，加甲醇8mL，超声处理20分钟，滤过，上清液作为柴胡对照药材溶液。
优选地，步骤（5）中，所述柴胡皂苷对照品溶液的制备方法为：分别取柴胡皂苷a、d对照品加甲醇制成每1mL含0.125mg的溶液，作为柴胡皂苷对照品溶液。
优选地，步骤（5）中，显色清晰超过2h后，置紫外光灯下检视。
优选地，步骤（5）中，所述供试品溶液C点样量为2-6μL；所述柴胡对照药材溶液点样量为2-8μL；所述柴胡皂苷对照品溶液点样量为2-6μL。
优选地，步骤（6）中，所述芍药苷对照品溶液的制备方法为：取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.65-1mg的溶液，作为芍药苷对照品溶液。
优选地，步骤（6）中，所述供试品溶液C点样量为2-6μL；所述芍药苷对照品溶液点样量为2-6μL。
优选地，步骤（2）、步骤（3）和步骤（5）中，所述紫外光的波长是365nm。
本发明的有益效果为：
（1）本发明提供了针对四逆散加减颗粒的质量控制方法，填补了当下四逆散加减颗粒质量控制的空缺。
（2）本发明针对柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等成分建立特定的提取制备工艺，能够从颗粒剂的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分，在保证鉴定效果的基础上，实现2种样品即可同时检测多种中药成分，并在不同质控环境下验证了所建立的薄层鉴别方法的稳定性和重复性。
（3）本发明针对四逆散加减颗粒的药味组成，分别选择了特定的展开剂，无干扰，检测效果好。
（4）本发明针对四逆散加减颗粒的药味组成，以及各个供试品溶液的特点，分别选择了特定的显色方法。
（5）本发明能够在一个薄层板上同时检测枳实和丹参成分，提高了检测效率，为二者检测提供一种高效的检测条件。
（6）本发明不使用有害溶剂，同时大大减少了溶剂用量（使用十分低的提取溶剂）具有简化质量检测、环保、节省成本、提高检测效率的技术效果。
附图说明
图1为实施例1中2.4的结果图，其中，1-丹参对照药材溶液；2-枳实对照药材溶液；3-供试品溶液A ；4-供试品溶液C；5-供试品溶液D； 6-芍药苷对照品溶液。
图2为实施例1中2.3的结果图，以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6:4:8:1:4）为展开剂；其中，1-丹参阴性供试品溶液；2-丹参酸B对照品溶液；3-丹参对照药材溶液；4-供试品溶液A；5-供试品溶液A；6-供试品溶液A；7-枳实对照药材溶液；8-枳实阴性供试品溶液，其中，4、5、6为三批次的供试品溶液A。
图3为实施例1中2.3的结果图，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂；其中，1-丹参阴性供试品溶液；2-丹参酸B对照品溶液；3-丹参对照药材溶液；4-供试品溶液A；5-供试品溶液A；6-供试品溶液A；7-枳实对照药材溶液；8-枳实阴性供试品溶液，其中，4、5、6为三批次的供试品溶液A。
图4为实施例1中2.5的结果图，其中，1-丹酚酸B对照品溶液 2μL；2-丹酚酸B对照品溶液 4μL；3-丹酚酸B对照品溶液 6μL；4-丹参对照药材溶液 2μL；5-丹参对照药材溶液4μL；6-丹参对照药材溶液 6μL；7-枳实对照药材溶液 2μL；8-枳实对照药材溶液 4μL；9-枳实对照药材溶液 6μL；10-供试品溶液A 2μL；11-供试品溶液A 4μL；12-供试品溶液A 6μL。
图5为实施例1中3.2的直接检视结果。
图6为实施例1中3.2的氨熏检视结果。
图7为实施例1中3.2的氨熏+三氯化铝检视结果。
其中，图5-7中，1-蒲公英对照药材溶液1；2-蒲公英对照药材溶液2；3-供试品溶液A；4-供试品溶液B；5-供试品溶液C。
图8为实施例1中3.2的结果图，展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（2:8:2:1），其中，1-蒲公英对照药材溶液1；2-蒲公英对照药材溶液2；3-供试品溶液A；4-供试品溶液B；5-供试品溶液C。
图9为实施例1中3.2的结果图，其中，1-菊苣酸对照品溶液 2μL；2-菊苣酸对照品溶液 4μL；3-菊苣酸对照品溶液 6μL；4-蒲公英对照药材溶液 2μL；5-蒲公英对照药材溶液4μL；6-蒲公英对照药材溶液 6μL；7-供试品溶液 2μL；8-供试品溶液 4μL；9-供试品溶液 6μL。
图10为实施例1中3.5的结果图。
图11为实施例1中3.6的结果图。
其中，图10-11中，1-蒲公英阴性供试品溶液；2-菊苣酸对照品溶液；3-蒲公英对照药材溶液；4-供试品溶液A；5-供试品溶液A；6-供试品溶液A，其中，4、5、6为三批次的供试品溶液A。
图12为实施例1中4.2的结果图，其中，1-白术对照药材溶液；2-供试品溶液A。
图13为实施例1中4.3的结果图，展开剂为石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯（10:0.2）。
图14为实施例1中4.3的结果图，展开剂为环己烷-乙酸乙酯（7:3）。
其中，图13-14中，1-白术对照药材溶液；2-白术阴性对照溶液；3-供试品溶液A；4-供试品溶液A；5-供试品溶液A，其中，3、4、5为三批次的供试品溶液A。
图15为实施例1中4.4的结果图，其中，1-白术对照药材溶液 2μL；2-白术对照药材溶液 4μL；3-白术对照药材溶液 6μL；4-白术对照药材溶液8μL；5-供试品溶液A 2μL；6-供试品溶液A 4μL；7-供试品溶液A 6μL；8-供试品溶液A 8μL。
图16为实施例1中5.2的结果图，其中，1-酸枣仁皂苷A/B对照品溶液（Rf值大的为酸枣仁皂苷B）；2-酸枣仁对照药材溶液；3-供试品溶液C ；4-供试品溶液D；5-供试品溶液A。
图17为实施例1中5.3的结果图，其中，1-酸枣仁对照药材溶液 2μL；2-酸枣仁对照药材溶液 4μL；3-酸枣仁对照药材溶液 6μL；4-供试品溶液C 2μL；5-供试品溶液C 4μL；6-供试品溶液C 6μL。
图18为实施例1中5.4的结果图，其中，1-酸枣仁阴性供试品溶液；2-酸枣仁皂苷A/B对照品溶液（Rf值大的为酸枣仁皂苷B）； 3-供试品溶液C；4-供试品溶液C；5-供试品溶液C，其中，3、4、5为三批次的供试品溶液C。
图19为实施例1中6.2的结果图，其中，1-柴胡对照药材溶液；2-供试品溶液A；3-供试品溶液C；4-供试品溶液D。
图20为实施例1中6.3的结果图，展开剂为乙酸乙酯-乙醇-水（8: 2:1）。
图21为实施例1中6.3的结果图，展开剂为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（2:8:2:1）。
图22为实施例1中6.4的结果图，展开时间0h。
图23为实施例1中6.4的结果图，展开时间1h。
图24为实施例1中6.4的结果图，展开时间24h。
其中，图20-24中，1-柴胡阴性供试品溶液；2-柴胡皂苷a/d对照品溶液（Rf值大的为柴胡皂苷d）；3-柴胡对照药材溶液；4-供试品溶液C；5-供试品溶液C；6-供试品溶液C，其中，4、5、6为三批次的供试品溶液C。
图25为实施例1中6.5的结果图，其中，1-柴胡皂苷a/d对照品溶液对照品溶液2μL；2-柴胡皂苷a/d对照品溶液对照品溶液4μL；3-柴胡皂苷a/d对照品溶液对照品溶液6μL；4-柴胡皂苷a/d对照品溶液对照品溶液8μL；5-柴胡对照药材溶液2μL；6-柴胡对照药材溶液4μL；7-柴胡对照药材溶液6μL；8-柴胡对照药材溶液8μL；9-供试品溶液C 2μL；10-供试品溶液C 4μL；11-供试品溶液C 6μL；12-供试品溶液8μL。
图26为实施例1中7.2的结果图，其中，1-芍药苷对照品溶液；2-白芍对照药材溶液；3-供试品溶液C；4-供试品溶液A；5-供试品溶液D。
图27为实施例1中7.3的结果图，其中，1-芍药苷对照品溶液 2μL；2-芍药苷对照品溶液 4μL；3-芍药苷对照品溶液 6μL；4-供试品溶液 2μL；5-供试品溶液 4μL；6-供试品溶液 6μL。
图28为实施例1中7.4的结果图，其中，1-芍药阴性供试品溶液；2-芍药苷对照品溶液；3-供试品溶液C；4-供试品溶液C；5-供试品溶液C，其中，4、5、6为三批次的供试品溶液C。
具体实施方式
以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本发明要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本发明的发明作出多种改变和修饰，而其也应当属于本申请要求保护的范围之中。
下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。若无特殊说明，下文中所述含量均为质量含量。若无特殊说明，理解为在室温下进行。
本发明中，若无特殊说明，涉及的百分数均为是质量百分数。
其中，2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液中，2%为质量百分数，20%为体积百分数。
“本品”为四逆散加减颗粒，产品信息：醋北柴胡10g、生白芍10g、麸炒枳实6g、珍珠母20g、炒酸枣仁15g、 炒白术6g、蒲公英6g、丹参10g，取以上8味药，加水煎煮3次，每次提取1小时，煎液滤过，滤液合并浓缩至相对密度1.21-1.25（55℃），加入适量糊精，制成颗粒，干燥，制得。
本发明所用药材饮片均符合药典标准。
若无特殊说明，实施例均在室温（24℃）下实验。
实施例1
1. 制备供试品溶液：
供试品溶液A的制备：本品研细，称取1.5g 置于离心管中，加1%盐酸3mL，振摇至无团块，加入乙酸乙酯2mL振摇均匀，离心，上清液作为供试品溶液A。
供试品溶液B的制备：本品研细，称取2g，加水20mL溶解，用乙醚振摇提取2次，每次30mL，合并乙醚层，蒸干，残渣加入甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液B。
供试品溶液C：本品研细，称取4g，加水20mL溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次,每次15mL，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次15mL，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液C。
供试品溶液D：本品研细，称取1g，加甲醇 15mL，超声处理 30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL 溶解，作为供试品溶液D。
2. 丹参、枳实的特征鉴别：
2.1 丹参对照药材溶液：取丹参对照药材0.5g，加甲醇12 mL，超声处理20分钟，滤过，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为丹参对照药材溶液。
枳实对照药材溶液：取枳实对照药材0.1g，加甲醇30 mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为枳实对照药材溶液。
丹酚酸B对照品溶液：取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1mL含1.5 mg的溶液，作为丹酚酸B对照品溶液。
芍药苷对照品溶液：取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为芍药苷对照品溶液。
2.2 吸取上述溶液和供试品溶液A各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板（德国默克）上，以二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6:2:8:3:1）为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，进行检视，结果如图1。
2.3 展开剂的影响
丹参阴性供试品溶液：取缺丹参阴性提取物1.5g，按供试品溶液A的制备方法制备丹参阴性供试品溶液。
枳实阴性供试品溶液：缺枳实阴性提取物1.5g，按按供试品溶液A的制备方法制备枳实阴性供试品溶液。
吸取不同量的供试品溶液A、对照品溶液，按照2.2的方法，但分别以三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6:4:8:1:4）、甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂，结果如图2、3。
比较图2、3可得，丹参酸B及丹参药材在三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6:4:8:1:4）的展开条件下与供试品溶液在相应位置上有对应斑点，但阴性对照液相应位置上有明显干扰；在甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）的展开条件下与供试品溶液在相应位置上有对应斑点，且阴性对照液相应位置上无干扰。
图3显示：供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，阴性对照品色谱中，在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上无斑点，从结果看出阴性无干扰，专属性良好。
2.4 不同供试品溶液
取丹参对照药材溶液、枳实对照药材溶液、芍药苷对照品溶液、供试品溶液A、供试品溶液C、供试品溶液D，按照2.2的方法进行，结果如图1。
从图1可见，显色后，在与丹参、枳实对照药材色谱相应的位置上，供试品溶液A色谱中有明显的对应斑点；供试品溶液C、D与丹参无对应，与枳实虽有对应，但因含杂质较多，有可能有干扰。芍药苷在供试品溶液A中量少、斑点不清晰。
2.5 不同点样量
吸取不同量的供试品溶液A、对照品溶液，按照2.2的方法进行，结果如图4。图4表明供试品溶液A点样量以2μL较为适宜；丹酚酸B对照品点样量选择4μL较为适宜；丹参对照药材溶液点样量选择4μL较为适宜；枳实对照药材溶液点样量选择2μL时较为适宜。
2.6 其他因素
采用两种温度30℃（恒温培养箱）、24℃（室温）、8℃（冰箱冷藏室）进行实验；
采用两种相对湿度20%、80%行实验；
采用三家薄层预制板（德国默克、青岛海洋、烟台银龙）进行实验；
均按照2.3条件，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂进行薄层试验，结果表明：在不同温度、湿度、不同厂家薄层板条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值变化不大，说明温度在8-30℃范围内，相对湿度度在20-80%范围内，对本品的薄层鉴别没有明显影响，不需控制环境温度、湿度和薄层板，本发明的方法稳定性、重复性好。
3. 蒲公英的特征鉴别：
3.1 蒲公英对照药材溶液1：取蒲公英对照药材0.2 g，加80%甲醇2mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为蒲公英对照药材溶液1。
蒲公英对照药材溶液2：取蒲公英对照药材0.5 g，加水20mL回流提取1.5h，滤过，滤液乙醚提取2次，每次15 mL，合并乙醚液挥干，甲醇 1mL 溶解，作为作为蒲公英对照药材溶液2。
菊苣酸对照品溶液：取菊苣酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.2 mg及0.6mg的溶液，作为对照品溶液。
3.2 吸取上述对照品溶液、供试品溶液A、B、C各3μL、分别点于同一硅胶G薄层板（德国默克，放入展开缸平衡饱和30min）上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（6:12:5:2）溶液为展开剂，展开，取出，晾干。
直接置紫外光灯（365nm）下检视结果见图5；再氨气熏5min后，置紫外光灯（365nm）下检视结果见图6；再喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视，结果见图7。
图7结果显示，供试品溶液A和蒲公英对照药材溶液1搭配，有更多的对应斑点，检测效果显着优于其他组合。
此外，图5-7结果表明，显色方法明显影响观察结果，晾干后在365nm处观察斑点蓝色较模糊，氨熏后部分斑点变为暗黄绿色，再喷氯化铝主斑点变为亮黄色，其它部分斑点变为亮蓝色，清晰度明显提高。预试中曾选择晾干后喷氯化铝，在365nm处观察，主斑点有部分斑点微发黄，整体仍不太清晰，继续氨熏，主斑点变为亮黄色，其它部分斑点变为亮蓝色，清晰度也明显提高。因此，蒲公英显色需要氨和氯化铝两种试剂作用，优选先氨熏，再喷氯化铝。因此，后续蒲公英鉴别的实验均在该条件下检视：氨气熏5min后，再喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯（365nm）下检视。
3.3 展开剂的影响
按照3.2的方法，但分别以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（6:12:5:2）、二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（2:8:2:1）为展开剂，结果如图7、8。
结果表明，二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（2:8:2:1）为展开剂时，结果更清晰，同时二氯甲烷毒性更低，安全性更高。
3.4 不同点样量
吸取不同量的供试品溶液A、蒲公英对照药材溶液1、菊苣酸对照品溶液，按照3.2的方法进行，结果如图9。结果表明，蒲公英对照药材溶液选择2μL较为适宜；菊苣酸对照品以2μL较为适宜；供试品溶液点样量以2μL最适宜。
3.5 专属性
准备按照供试品A的制备方法制备的缺蒲公英阴性供试品溶液、蒲公英对照药材溶液1、菊苣酸对照品溶液、供试品溶液A，按照3.2的方法进行，结果如图10。结果表明，三批次供试品色谱在与蒲公英对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，阴性对照品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上无斑点。因此阴性无干扰，专属性良好。
3.6 平衡饱和时间的影响
薄层板未放入展开缸平衡饱和，按照3.2进行。结果如图11。图10和图11结果表明，薄层板应平衡饱和30min，菊苣酸对照品斑点Rf值变大，因此更优选平衡饱和30min以上再进行展开。
3.7 其他因素
采用两种温度30℃（恒温培养箱）、24℃（室温）、8℃（冰箱冷藏室）进行实验；
采用两种相对湿度20%、80%进行实验；
采用三家薄层预制板（德国默克、青岛海洋、烟台银龙）进行实验；
均按照3.2进行，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂进行薄层试验，结果表明：在不同温度、湿度条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值变化不大，说明温度在8-30℃范围内，相对湿度度在20～80%范围内，对本品的薄层鉴别没有明显影响，不需控制环境温度和湿度，本发明的方法稳定性好。
在不同厂家薄层板条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值有不同，但整体稳定性良好。可以优先选择银龙、默克板进行蒲公英的鉴别。
4. 白术的特征鉴别
4.1 取白术对照药材0.25g，加乙酸乙酯4 mL，超声处理20分钟，滤过，滤液作为白术对照药材溶液。
4.2 吸取上述白术对照药材溶液和供试品溶液A各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板（德国默克）上，以环己烷-乙酸乙酯（7:3）溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365nm）下检视。结果如图12，结果表明有对应斑点、结果清晰。
4.3展开剂的影响
按照4.2的方法，但分别以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯（10:0.2）、环己烷-乙酸乙酯（7:3）为展开剂，结果分别如图13、14。结果表明，石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯（10:0.2）为展开剂的薄层板中白术对照药材与供试品溶液在相应位置上没有对应斑点；环己烷-乙酸乙酯（7:3）未展开剂薄层板中白术对照药材与供试品溶液在相应位置上有对应斑点，Rf值适合，分离度好，且阴性对照相同位置上无干扰。图14表明，三批次供试品色谱在与白术对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，阴性对照品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上无斑点，因此可知阴性无干扰，专属性较好。
4.4不同点样量
吸取不同量的供试品溶液A、白术对照药材溶液，按照4.2的方法进行，结果如图15。结果表明，白术对照药材溶液选择4μL时较为适宜；供试品溶液A点样量以4μL最适宜。
4.5 其他因素
采用两种温度30℃（恒温培养箱）、24℃（室温）、8℃（冰箱冷藏室）进行实验；
采用两种相对湿度20%、80%进行实验；
采用三家薄层预制板（德国默克、青岛海洋、烟台银龙）进行实验；
均按照4.2进行，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂进行薄层试验，结果表明：在不同温度、湿度、不同厂家薄层板条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值变化不大，说明温度在8-30℃范围内，相对湿度度在20-80%范围内，对本品的薄层鉴别没有明显影响，不需控制环境温度、湿度和薄层板，本发明的方法稳定性好。
5. 酸枣仁的特征鉴别：
5.1 取酸枣仁对照药材1g，加甲醇30 mL，加热回流1h，滤过，滤液浓缩至0.5 mL作为酸枣仁对照药材溶液。
酸枣仁对照品溶液制备：取酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品，加甲醇制成每1mL各含0.1mg的混合溶液，作为酸枣仁对照品溶液。
5.2 吸取酸枣仁对照药材溶液、酸枣仁对照品溶液、供试品溶液A、C、D各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上（德国默克），以水饱和正丁醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰，结果如图16所示。结果表明，仅供试品溶液C与酸枣仁对照药材及对照品都有清晰的对应斑点，此外供试品溶液D出现杂质较多。另外，其中酸枣仁对照药材除酸枣仁皂苷A、B外未见其它斑点与供试品相对应，所以选择酸枣仁皂苷A、B为对照品，不使用对照药材。
5.3 不同点样量
吸取不同量的供试品溶液C、酸枣仁对照药材溶液，按照5.2的方法进行，结果如图17。酸枣仁对照药材溶液选择4μL较为适宜；供试品溶液以4μL最为适宜。
5.4 专属性
分别称取三批颗粒研细粉4g，加水20 mL溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次,每次15mL，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次,每次15mL，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。
称取缺酸枣仁阴性样品细粉，按4.3.1项下供试品溶液方法制备样品，作为阴性供试品溶液。
将上述溶液、酸枣仁对照品溶液、供试品溶液C按照5.2的方法进行，结果如图18，三批次供试品色谱在与酸枣仁对结果照品色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，阴性对照品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上无斑点。因此从结果看出阴性无干扰，专属性较好。
5.5 其他因素
采用两种温度30℃（恒温培养箱）、24℃（室温）、8℃（冰箱冷藏室）进行实验；
采用两种相对湿度20%、80%进行实验；
采用三家薄层预制板（德国默克、青岛海洋、烟台银龙）进行实验；
均按照5.2进行，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂进行薄层试验，结果表明：在不同温度、湿度、不同厂家薄层板条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值变化不大，说明温度在8-30℃范围内，相对湿度度在20～80%范围内，对本品的薄层鉴别没有明显影响，不需控制环境温度、湿度和薄层板，本发明的方法稳定性好。
6. 柴胡的特征鉴别
6.1 柴胡对照药材溶液：取柴胡对照药材0.25g，加甲醇8 mL，超声处理20分钟，滤过，上清液作为柴胡对照药材溶液。
柴胡皂苷对照品溶液：分别取柴胡皂苷a、d对照品加甲醇制成每1 mL含0.125mg的溶液，作为对照品溶液。
6.2 吸取柴胡对照药材溶液、供试品溶液A、C、D各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板（德国默克）上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水（6:28:9:3）溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，60℃加热至斑点显色清晰，2h后置紫外光灯（365nm）下检视。结果见图19。结果表明，供试品溶液C与柴胡对照药材在相应的位置上有对应斑点，其余供试品溶液均效果不佳。
6.3 展开剂的影响
按照6.2的方法，但分别以乙酸乙酯-乙醇-水（8: 2:1）、二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（2:8:2:1）为展开剂，结果分别如图20、21。结果表明，二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水（2:8:2:1）为展开剂的薄层板中柴胡对照药材、对照品与供试品溶液在相应位置上都有对应斑点，且柴胡皂苷a分离效果更好。
图21表明，三批次供试品色谱在与柴胡对照品及对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，阴性对照品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上无斑点。因此从结果看出阴性无干扰，专属性较好。
6.4 显色条件
实验表明，日光下可见供试品在柴胡皂苷a的位置上与之有斑点对应，但颜色更深，说明此位置上有别的成分干扰，因此本发明的方法不使用日光下观察。
按照6.2的方法进行，分别在展开不同时间后，在紫外光（365nm）下检视，结果见图21-24。结果表明，展开2h以上，斑点显示更加清晰、完整，且颜色至1天不再产生明显变化。
6.5 不同点样量
吸取不同量的柴胡皂苷对照品溶液、柴胡对照药材溶液、供试品溶液C，按照6.2的方法进行，结果如图25。柴胡对照药材溶液选择4μL时较为适宜；柴胡皂苷对照品溶液以4μL较为适宜；供试品溶液以4μL最适宜。
6.6 其他因素
采用两种温度30℃（恒温培养箱）、24℃（室温）、8℃（冰箱冷藏室）进行实验；
采用两种相对湿度20%、80%进行实验；
采用三家薄层预制板（德国默克、青岛海洋、烟台银龙）进行实验；
均按照6.2进行，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂进行薄层试验，结果表明：在不同温度、湿度、不同厂家薄层板条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值变化不大，说明温度在8-30℃范围内，相对湿度度在20～80%范围内，对本品的薄层鉴别没有明显影响，不需控制环境温度、湿度和薄层板，本发明的方法稳定性、重复性好。不同薄层板检测时，Rf值稍有不同。海洋、默克板相对更适合柴胡的鉴别。
7. 白芍的特征鉴别
7.1 白芍对照药材溶液：取白芍对照药材0.2 g，加甲醇10mL，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至4 mL作为对照药材溶液。
芍药苷对照品溶液：取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.45 mg及0.65mg的溶液，作为对照品溶液。
7.2 吸取芍药苷对照品溶液、白芍对照药材溶液、供试品溶液A、C、D，分别点于同一硅胶G薄层板（德国默克）上，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）溶液为展开剂，展开，取出，晾干。喷以5% 香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果如图26所示。结果表明，供试品溶液C与芍药苷对照品有对应斑点、显色清晰。
7.3不同点样量
吸取不同量的供试品溶液C、芍药苷对照品溶液，按照7.2的方法进行，结果如图27。结果表明，芍药苷对照品点样量以2μL较为适宜；供试品溶液点样量以2μL较适宜。
7.4 专属性
按照供试品溶液C的制备方法制备缺芍药阴性供试品溶液，取阴性供试品溶液、芍药苷对照品溶液、供试品溶液C，按照7.2的方法进行，结果如图28。三批次供试品色谱在与芍药苷对照品色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，阴性对照品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上无斑点。因此从结果看出阴性无干扰，专属性较好。
7.5其他因素
采用两种温度30℃（恒温培养箱）、24℃（室温）、8℃（冰箱冷藏室）进行实验；
采用两种相对湿度20%、80%进行实验；
采用三家薄层预制板（德国默克、青岛海洋、烟台银龙）进行实验；
均按照7.2进行，以甲苯-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:6:8:3:1）为展开剂进行薄层试验，结果表明：在不同温度、湿度、不同厂家薄层板条件下，供试品色谱在与对照品和对照药材色谱的相应位置上，均有相同颜色的斑点，且分离度良好，Rf值变化不大，说明温度在8-30℃范围内，相对湿度度在20-80%范围内，对本品的薄层鉴别没有明显影响，不需控制环境温度、湿度和薄层板，本发明的方法稳定性、重复性好。
综上可知，本发明针对柴胡、白芍、枳实、酸枣仁、白术、蒲公英、丹参等成分建立特定的提取制备工艺，能够从颗粒剂的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分，在保证鉴定效果的基础上，通过提取工艺、展开剂、检测条件的特定组合，实现了仅制备供试品溶液A、C即可同时检测上述所有中药成分，并具有良好的稳定性和重复性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种四逆散加减颗粒的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）丹参、枳实的特征鉴别：将供试品溶液A；丹参对照药材溶液或丹酚酸B对照品溶液；枳实对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂1展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视；
（2）蒲公英的特征鉴别：将供试品溶液A、蒲公英对照药材溶液或菊苣酸对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂2展开，取出，晾干，氨气熏后喷以三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视；
（3）白术的特征鉴别：将供试品溶液A、白术对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂3展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；
（4）酸枣仁的特征鉴别：将供试品溶液C、酸枣仁对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂4展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视；
（5）柴胡的特征鉴别：将供试品溶液C、柴胡对照药材溶液或柴胡皂苷对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂5展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置紫外光灯下检视；
（6）白芍的特征鉴别：吸取供试品溶液C、芍药苷对照品溶液或芍药对照药材溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，使用展开剂1展开，取出，晾干，喷以香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰进行检视，
其中，
所述供试品溶液A按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，加稀盐酸，振摇，加入乙酸乙酯振摇，离心，上清液作为供试品溶液A；
所述供试品溶液C按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，加水溶解，用水饱和正丁醇提取，用氨试液洗涤，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇使溶解，作为供试品溶液C；
所述展开剂1为体积比5-7:1-3:7-9:2-4:0.5-1.5的二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液；
展开剂2为体积比1-3:7-9:1-3:0.5-1.5的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水混合液；
展开剂3为体积比6-8:2-4的环己烷-乙酸乙酯混合液；
展开剂4为水饱和正丁醇；
展开剂5为体积比5-7:25-30:8-10:2-4的二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水混合液。
2.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，所述供试品溶液A按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，称取1.5g置于离心管中，加1%盐酸3mL，振摇至无团块，加入乙酸乙酯2mL振摇均匀，离心，上清液作为供试品溶液A；
所述供试品溶液C按照以下步骤制备：四逆散加减颗粒研细，称取4g，加水20mL溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次15mL，弃去氨试液，再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次15mL，弃去水洗液，取正丁醇液蒸干，残渣加入甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液C。
3.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，
所述展开剂1为体积比6:2:8:3:1的二氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸混合液；
所述展开剂2为体积比2:8:2:1的二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸-水混合液；
所述展开剂3为体积比7:3的环己烷-乙酸乙酯混合液；
所述展开剂4为水饱和正丁醇；
所述展开剂5为体积比6:28:9:3的二氯甲烷-乙酸乙酯-无水乙醇-水混合液。
4.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，步骤（1）、步骤（4）和步骤（6）中，所述香草醛硫酸溶液的浓度为5%，所述加热的温度为105℃，
步骤（1）中，所述丹参对照药材溶液的制备方法为：丹参对照药材加甲醇，超声处理，滤过，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为丹参对照药材溶液；
步骤（1）中，所述枳实对照药材溶液的制备方法为：枳实对照药材加甲醇，超声处理，滤过，滤液作为枳实对照药材溶液；
步骤（1）中，所述丹酚酸B对照品溶液的制备方法为：取丹酚酸B对照品，加甲醇制成每1mL含1.5 mg的溶液，作为丹酚酸B对照品溶液。
5.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，
步骤（1）中，所述供试品溶液A点样量为2-6μL丹酚酸B对照品溶液点样量为4-6μL；丹参对照药材溶液点样量为4-6μL；枳实对照药材溶液点样量为2-6μL；
步骤（2）中，所述供试品溶液A点样量为2-6μL；所述蒲公英对照药材溶液点样量为2-6μL；
步骤（3）中，所述供试品溶液A点样量为2-6μL；所述白术对照药材溶液点样量为4-8μL；
步骤（4）中，所述供试品溶液C点样量为2-6μL；所述酸枣仁对照品溶液点样量为4-6μL；
步骤（5）中，所述供试品溶液C点样量为2-6μL；所述柴胡对照药材溶液点样量为2-8μL；所述柴胡皂苷对照品溶液点样量为2-6μL；
步骤（6）中，所述供试品溶液C点样量为2-6μL；所述芍药苷对照品溶液点样量为2-6μL。
6.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，步骤（2）中，所述蒲公英对照药材溶液的制备方法为：取蒲公英对照药材加80%甲醇，超声处理，滤过，滤液作为蒲公英对照药材溶液；
步骤（2）中，所述菊苣酸对照品溶液的制备方法为：取菊苣酸对照品加甲醇制成每1mL各含0.6mg的溶液，作为菊苣酸对照品溶液；
步骤（2）中，氨气熏5min后喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯下检视。
7.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，步骤（3）中，所述白术对照药材溶液的制备方法为：取白术对照药材加乙酸乙酯，超声处理，滤过，滤液作为白术对照药材溶液；
步骤（3）和步骤（5）中，喷以2%对二甲氨基苯甲醛20%硫酸乙醇溶液，所述加热的温度为60℃。
8.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，步骤（4）中，所述酸枣仁对照品溶液的制备方法为：取酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品，加甲醇制成每1mL各含0.1mg的混合溶液，作为酸枣仁对照品溶液。
9.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，步骤（5）中，所述柴胡对照药材溶液的制备方法为：取柴胡对照药材加甲醇，超声处理，滤过，上清液作为柴胡对照药材溶液；
步骤（5）中，所述柴胡皂苷对照品溶液的制备方法为：分别取柴胡皂苷a、d对照品加甲醇制成每1mL含0.125mg的溶液，作为柴胡皂苷对照品溶液；
步骤（5）中，显色清晰超过2h后，置紫外光灯下检视。
10.根据权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于，步骤（6）中，所述芍药苷对照品溶液的制备方法为：取芍药苷对照品，加甲醇制成每1mL含0.65-1mg的溶液，作为芍药苷对照品溶液；
步骤（2）、步骤（3）和步骤（5）中，所述紫外光的波长是365nm。
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|---|---|---|---|
| CN202410560279.2A CN118130694B (zh) | 2024-05-08 | 一种四逆散加减颗粒的质量控制方法 |
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| CN118130694A CN118130694A (zh) | 2024-06-04 |
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Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN106324174A (zh) * | 2015-06-18 | 2017-01-11 | 天津市药品检验所 | 一种中药配方颗粒的质量标准 |
| CN109406651A (zh) * | 2018-11-01 | 2019-03-01 | 贵州大隆药业有限责任公司 | 一种治疗心神不宁药物组合的质量检测方法 |
Patent Citations (2)
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