CN108362788A - 一种清蒸黄精品质检测分析方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种清蒸黄精品质检测分析方法，包括以下步骤：取新鲜清蒸黄精，考察期外观色泽，有发黑变质、腐败的不合格；合格的清蒸黄精样品，进一步检测清蒸黄精中5‑HMF含量、薯蓣皂苷元含量、多糖含量、水溶性浸出物含量、灰分含量、水分含量。本发明清蒸黄精品质检测分析方法，针对于清蒸黄精品质评价缺乏统一规范标准，结合清蒸黄精形貌、品质特点等进行设计，筛选适宜的检测分析方式及参数条件，使得检测分析结果能够更加准确的反应清蒸黄精品质，为中药材炮制加工企业提供指导意见，也为消费者选购高品质清蒸黄精提供参考。

Description

一种清蒸黄精品质检测分析方法
技术领域
本发明涉及一种清蒸黄精品质检测方法，属于中药材炮制技术领域。
背景技术
黄精，polygonati rhizoma，为百合科植物本品为百合科植物滇黄精、黄精或多花黄精的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。黄精，味甘性平，归脾、肺、肾经。补气养阴，健脾，润肺，益肾。用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴。
黄精含有多种天然药物化学成分，对于调理人参机体健康状态具有良好益处。但是，生黄精具有麻味，直接服用会刺激咽喉，口舌麻木，直接接触生黄精或黄精汁液会导致皮肤瘙痒。因此采摘得到的新鲜黄精需要经过炮制，消除其刺激性副作用，才能更好的应用。
现有黄精炮制工艺包括饮片、酒黄精等。《中国药典》公开了两种规范的黄精炮制工艺，分别是黄精饮片和酒黄精。黄精饮片是将黄精除去杂质，洗净，略润，切厚片，干燥所得成品；酒黄精是将黄精洗净，照酒炖法或酒蒸法炖透或蒸透，稍晾，切厚片，干燥。
虽然中药研究者知晓上述两种炮制工艺，但是对于不同的炮制工艺所得黄精产品的具体品质、属性，却缺乏统一可靠的检测分析方法。因而，中药材原料加工企业、研究人员难以判断炮制得到的黄精品质等级；同时，消费者在选购市售炮制黄精产品时，也难以对不同黄精进行品质优劣甄别。无论是对于企业技术升级换代，还是对于市场选择优质黄精产品的角度来看，现有的研究水平都非常不利于黄精在中药材市场、保健品市场的推广应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中缺少统一可靠的黄精品质检测分析方法，使得中药炮制企业和消费者难以筛选优质黄精产品的不足，提供一种清蒸黄精品质检测分析方法。
采用本发明提供的清蒸黄精检测分析方法，可以更好的检验分析黄精品质，鉴定黄精中各种营养成分含量，综合全面的考察不同炮制工艺加工得到的黄精品质等级。促进中药材加工企业技术革新，保障消费者选购优质清蒸黄精产品的利益。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
一种清蒸黄精品质检测分析方法，包括以下步骤：
取新鲜清蒸黄精，考察其外观色泽，有发黑变质、腐败的不合格。
合格的清蒸黄精样品，进一步检测清蒸黄精中5-HMF含量、薯蓣皂苷元含量、多糖含量、水溶性浸出物含量、灰分含量、水分含量。
(1)黄精中5-HMF含量测定：
101：对照品溶液配制，精密称取5-HMF对照品，用甲醇溶解制成对照品溶液，避光低温保存。
102：供试品溶液配制，精密称取黄精，加入10-20倍重量的甲醇超声提取10-30min，过滤，滤渣加10-20倍重量甲醇超声提取10-30min，过滤。合并滤液，定容。
103：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，计算得出黄精中5-HMF含量。
(2)黄精中薯蓣皂苷元含量测定，采用HPLC检测分析清蒸黄精中薯蓣皂苷元含量：
201：对照品溶液配制，精密称取薯蓣皂苷元对照品，用甲醇溶解制备成的对照品，避光1-6℃温保存。
202：供试品溶液配制，称取黄精粉末，加入10-20倍重量乙醇，摇匀，称重，加热回流2-5h，放冷，称重，用乙醇不足重量，摇匀，过滤。滤液浓缩至干，残渣加1-4mol/L的盐酸溶解，沸水回流2-5h，冷却，移至分液漏斗中，加入氯仿，萃取2-5次，合并氯仿溶液，减压浓缩至干，残渣加入甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液。
203：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，计算得出黄精中薯蓣皂苷元含量。
(3)多糖含量测定：
301：对照品溶液配制，精密称定无水葡萄糖，加水溶解，配制成多个梯度浓度的葡萄糖溶液。
302：样品溶液配制，取黄精样品，粉碎，干燥至恒重，加入乙醇回流提取1-3h，过滤，残渣用60-90v％乙醇洗涤2-4次，每次10mL。将残渣及滤纸，加水，加热回流1-3h，过滤，残渣用热水洗涤1-4次，每次10mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL具塞干燥试管中，备用。
303：检测分析，采用UV2600紫外可见分光光度计测试对照品溶液和样品溶液吸光度，计算得出黄精中多糖含量。
本发明清蒸黄精检测分析方法包括对于清蒸黄精的外观形貌快速检查分析，排除肉眼可见的明显不合格品。然后对于清蒸黄精品质等级重要参数进行研究分析，包括对于清蒸黄精5-HMF和薯蓣皂苷元含量的HPLC检测。5-HMF和薯蓣皂苷元含量的检测分析是清蒸黄精品质表征过程中最重要的两项指标，分别反应了清蒸黄精炮制程度和黄精作为保健品食用的功效价值。通过对于两项主要的指标进行精确的检测分析，可以初步确定清蒸黄精的整体品质等级。最后，还包括了多糖含量、水溶性浸出物含量、灰分含量、水分含量等参数的检测分析，从多个维度考察清蒸黄精的品质等级，提供优质黄精的研究分析考察。
进一步，本发明清蒸黄精品质检测分析方法中各个测试项目不区分先后顺序，可以任意调整测试顺序。重点优先检测分析薯蓣皂苷元含量、5-HMF含量，确保清蒸黄精得到充分炮制，具有良好的保健功效。同时，兼具考察清蒸黄精口感、形貌品质、糖分和水分的含量。
进一步，步骤103中，HPLC色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：1％磷酸水＝5：95体积比；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量10μL。
选用上述ODS-B色谱柱填充高纯度的多孔硅胶，能够很好的实现对于弱极性的5-HMF，分离效果稳定。配合体积比＝5:95的乙腈：1wt％磷酸水溶液作为洗脱液，高效率的筛分洗脱清蒸黄精炮制以后药材中含量的大量5-HMF，提升检测效率，实现高效率的分离作用。
最后，结合5-HMF分子结构特点，用284nm波长的紫外光进行检测分析，具有最大吸收峰，检测结果灵敏可靠。
进一步，步骤1，黄精中5-HMF含量测定：
101：对照品溶液配制，精密称取5-HMF对照品，用甲醇溶解制成对照品溶液，避光低温保存。
102：供试品溶液配制，精密称取黄精，加入10mL甲醇超声提取10-30min，过滤，滤渣加10mL甲醇超声提取10-30min，过滤。合并滤液，定容至25mL量瓶中。
103：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，在如下色谱条件进行检测：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：1wt％磷酸水(5：95，vol)；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量10μL。计算得出黄精中5-HMPF含量。
进一步，步骤203，色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水＝96：4；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μL。
黄精中5-HMF含量测定采用甲醇超声提取，结合清蒸炮制黄精的特点，利用超声提取快速破坏炮制黄精的植物细胞结构，释放黄精内部含有的成分。同时，5-HMF分子在超声剪切作用下非常容易释放到提取液中，通过连续两次超声提取处理可以将黄精中的5-HMF充分提取，确保检测精度。
然后，在检测分析薯蓣皂苷元的时候，结合薯蓣皂苷元分子结构特点，选用ODS-B色谱柱，色谱柱主要填充高品质C18硅胶微粒，吸附力适中，配合96v％乙腈+4v％水作为流动相，5-HMF洗脱速度适中，分离效率高，无杂质成分干扰影响。HPLC色谱仪出口采用紫外分光光度计检测分析，测试203nm处5-HMF吸收峰的响应值，精确分析5-HMF含量。
进一步，步骤2，黄精中薯蓣皂苷元含量测定：
201：对照品溶液配制，精密称取薯蓣皂苷元对照品，用甲醇溶解制备成的对照品，避光低温保存。
202：供试品溶液配制，称取黄精粉末，加入乙醇，摇匀，称重，加热回流2-5h，放冷，称重，用乙醇不足重量，摇匀，过滤。滤液浓缩至干，残渣加1-4mol/L的盐酸溶解，沸水回流2-5h，冷却，移至分液漏斗中，加入氯仿，萃取2-5次，合并氯仿溶液，减压浓缩至干，残渣加入甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液。
203：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，计算得出黄精中薯蓣皂苷元含量。
进一步，步骤203，色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水＝96：4；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μL。
薯蓣皂苷元是一种植物类固醇，具有大分子甾环结构，分子上含有羟基易溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，不溶于水。在HPLC色谱仪检测分析过程中，选用ODS-B色谱柱，对于弱碱性分子具有良好的吸附作用，且色谱柱填充料中含量大量孔隙结构，对于大分子甾环筛分效果好，配合96％乙腈+4％水作为流动相，薯蓣皂苷元在色谱柱中保留时间适宜，和其他非目标检测成分相互分离度高，能够很好的实现分离检测。
进一步，清蒸黄精品质检测分析方法中，(3)多糖含量测定过程如下：
301：对照品溶液配制，精密称定无水葡萄糖，加水溶解，配制成多个梯度浓度的葡萄糖溶液。
302：样品溶液配制，取黄精样品细粉，干燥至恒重，加入80％乙醇，水浴加热回流1-3h，趁热过滤，残渣用80％热乙醇洗涤2-4次，每次10mL，将残渣及滤纸，加水，沸水浴加热回流1-3h，趁热过滤，残渣用热水洗涤1-4次，每次10mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL具塞干燥试管中，备用。
303：检测分析，采用UV2600紫外可见分光光度计在485-495nm波长范围内测试对照品溶液和样品溶液吸光度，计算得出黄精中多糖含量。
多糖是由糖苷键结合的糖链，至少要超过10个的单糖组成的聚合糖高分子碳水化合物，多糖分子含量大量的羟基，采用乙醇加热回流提取，多糖在乙醇中快速分散实现精确的提取作用，完成对于多糖的筛选萃取。残渣用热乙醇(温度70-95℃的热乙醇)提取，合并滤液完成提取，提取过程操作简单，且效率极高，快速完成多糖充分提取。然后，结合多糖在490nm左右的最大吸收峰特点，采用紫外可见分光光度计进行快速测定，可以精密的确定清蒸黄精样品中的多糖含量。
进一步，清蒸黄精品质检测分析方法中，(4)水溶性浸出物测试过程如下：
401：精密称取供试品1-3g，置于锥形瓶中，加水50ml，密塞，称定重量，静置1-3h。
402：连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失重量。
403：摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，先在水浴上蒸干，然后于105℃干燥2-4小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。
计算出浸出物含量，x＝(干燥后蒸发皿重量－蒸发皿原始重量)/供试品原始重量×100％。
参考《中国药典》水溶性浸出物检测方法，结合清蒸黄精本身固有溶解分散特性进行水溶性浸出物测试，将清蒸黄精样品至于锥形瓶中用过量的水进行加热回流溶解，使水溶性浸出物充分释放出来。如此进行检测分析的过程中，水溶性浸出物释放效率能够快速达到最大化，确保检测分析结果准确可靠。对于已经完全进行水溶性浸出得到的滤液，分成两步进行干燥处理，第一步干燥采用水浴干燥，干燥过程较为温和，避免挥发性物质损失，提高检测精度。在水浴蒸干以后，再将蒸发皿转移至105℃环境下进行充分干燥，蒸发皿干燥至最终固定重量。
进一步，清蒸黄精品质检测分析方法中，(5)，灰分含量测试过程如下：
将供试品粉碎，精密称取，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量。缓缓炽热，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(％)。
灰分测试主要反映清蒸黄精炮制过程中对于杂质成分的去除，经过清蒸处理黄精的大部分杂质灰分成分已经除去，可以一定程度反映清蒸炮制的效果。灰分含量测试时，采用炽灼缓慢炭化完全灰化至恒重。优选地，炽灼升温过程中，升温速度1-5℃/min。
优选地，加热过程中，注意避免供试品燃烧。
进一步，清蒸黄精品质检测分析方法中，(6)，水分含量测定方式如下：
601：精密称取供试品，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5～10mm，精密称定。
602：开启瓶盖在100～105℃干燥4-6h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷10-60min，精密称定。
603：将称量瓶瓶盖开启，再在步骤602所述温度干燥1小时，移置干燥器中，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，否则重复干燥、放冷、称重操作。根据减失的重量，计算供试品中含水量。
清蒸黄精水分含量测定过程中，将黄精在略高于水沸腾的温度进行加热干燥脱除水分，脱水效率极高，经过反复干燥处理的清蒸黄精样品水分含量降低到最低。干燥过程又分为封闭瓶盖加热干燥和开启瓶盖加热干燥处理，先在封闭条件下脱去大部分水分，然后敞口状态下干燥至完全失去水分，精密测定得出清蒸黄精中水分含量。
优选地，疏松供试品平铺于称量瓶中厚度不超过10mm。疏松平铺清蒸黄精样品更有利于水分蒸发释放，提高蒸发效率，避免黄精干燥过程中局部温度过高或者水蒸气难以释放。
优选地，S602中，干燥5-5.5h。
优选地，S602，移置干燥器中，放冷30-40min。
本发明采用以下方法进行测试。通过测试炮制黄精中多种组分的含量确定黄精的整体品质表现，进而确定黄精是否达到预期的炮制效果，清蒸黄精产品是否合格。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
1.本发明清蒸黄精品质检测分析方法，针对于清蒸黄精品质评价缺乏统一规范标准，结合清蒸黄精形貌、品质特点等进行设计，筛选适宜的检测分析方式及参数条件，使得检测分析结果能够更加准确的反应清蒸黄精品质，为中药材炮制加工企业提供指导意见，也为消费者选购高品质清蒸黄精提供参考。
2.本发明清蒸黄精品质检测分析方法，结合不同炮制可能造成品质差异的重点项目，进行针对性测定。通过对比分析炮制清蒸黄精多糖、5-HMF、薯蓣皂苷元、浸出物、灰分和水分等含量，可以更好的鉴定分析炮制后的黄精是否品质得到优化，采用何种方式进行炮制加工可以更好的提升清蒸黄精的品质等级。
附图说明：
图1是葡萄糖含量标准曲线。
图2是5-HMF对照品溶液液相色谱图对应保留时间。
图3是黄精样品液相色谱图，其中5-HMF保留时间加以标记。
图4是5-HMF标准曲线。
图5是薯蓣皂苷元对照品标准曲线。
图6是薯蓣皂苷元对照品HPLC色谱图，其中薯蓣皂苷元保留时间加以标记。
图7是黄精样品液相色谱图，其中薯蓣皂苷元保留峰单独标记。
具体实施方式
下面结合试验例及具体实施方式对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本发明的范围。
<实施例1>
清蒸黄精品质检测分析
取新鲜清蒸黄精，肉眼观察外观色泽，有发黑变质、腐败的不合格。
对于合格的清蒸黄精样品，进一步检测清蒸黄精中5-HMF含量、薯蓣皂苷元含量、多糖含量、水溶性浸出物含量、灰分含量、水分含量。
(1)黄精中5-HMF含量测定：
101：对照品溶液配制，精密称取5-HMF对照品，用甲醇溶解制成对照品溶液，避光低温保存。
102：供试品溶液配制，精密称取黄精，加入10-20倍重量的甲醇超声提取10-30min，过滤，滤渣加10-20倍重量甲醇超声提取10-30min，过滤。合并滤液，定容。
103：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，HPLC色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：1wt％磷酸水＝5：95体积比；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量10μL。计算得出黄精中5-HMF含量。
(2)黄精中薯蓣皂苷元含量测定，采用HPLC检测分析清蒸黄精中薯蓣皂苷元含量：
201：对照品溶液配制，精密称取薯蓣皂苷元对照品，用甲醇溶解制备成的对照品，避光1-6℃温保存。
202：供试品溶液配制，称取黄精粉末，加入10-20倍重量乙醇，摇匀，称重，加热回流2-5h，放冷，称重，用乙醇不足重量，摇匀，过滤。滤液浓缩至干，残渣加1-4mol/L的盐酸溶解，沸水回流2-5h，冷却，移至分液漏斗中，加入氯仿，萃取2-5次，合并氯仿溶液，减压浓缩至干，残渣加入甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液。
203：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水＝96：4；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μL。计算得出黄精中薯蓣皂苷元含量。
(3)多糖含量测定：
301：对照品溶液配制，精密称定无水葡萄糖，加水溶解，配制成多个梯度浓度的葡萄糖溶液。
302：样品溶液配制，取黄精样品，粉碎，干燥至恒重，加入乙醇回流提取1-3h，过滤，残渣用60-90v％乙醇洗涤2-4次，每次10mL。将残渣及滤纸，加水，加热回流1-3h，过滤，残渣用热水洗涤1-4次，每次10mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL具塞干燥试管中，备用。
303：检测分析，采用UV2600紫外可见分光光度计测试对照品溶液和样品溶液吸光度，计算得出黄精中多糖含量。
<实施例2>
黄精中5-HMF含量测定：
1对照品溶液配制，精密称取5-HMF对照品，用甲醇溶解制成对照品溶液，避光低温保存。
2供试品溶液配制，精密称取黄精，加入10mL甲醇超声提取10-30min，过滤，滤渣加10mL甲醇超声提取10-30min，过滤。合并滤液，定容至25mL量瓶中。
3采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，在如下色谱条件进行检测：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：1％磷酸水(5：95)；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量10μL。计算得出黄精中5-HMPF含量。
<实施例3>
黄精中薯蓣皂苷元含量测定：
1：对照品溶液配制，精密称取薯蓣皂苷元对照品，用甲醇溶解制备成的对照品，避光低温保存。优选地，避光1-6℃低温保存。
2：供试品溶液配制，称取黄精粉末，加入乙醇，摇匀，称重，加热回流2-5h，放冷，称重，用乙醇不足重量，摇匀，过滤。滤液浓缩至干，残渣加1-4mol/L的盐酸溶解，沸水回流2-5h，冷却，移至分液漏斗中，加入氯仿，萃取2-5次，合并氯仿溶液，减压浓缩至干，残渣加入甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液。
3：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水＝96：4；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μL。计算得出黄精中薯蓣皂苷元含量。
<实施例4>
清蒸黄精检测方法：多糖含量测定
1对照品溶液的制备
精密称定，105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品17.50mg，置100ml量瓶中，加适量水，置超声溶解后，并加水稀释至刻度，摇匀，即得0.1750mg/ml的对照品(每1ml中含无水葡萄糖0.1754mg)。
精密吸取对照品溶液0.4ml，置10ml具塞刻度试管中，加水至2.0ml，摇匀，将试管置冷水中，加4％苯酚溶液1ml，混匀，并迅速加入硫酸7.0ml，摇匀，于40℃水浴中保温30分钟，取出，置冰水浴中5分钟，取出备用。
2样品溶液的制备
称取60℃干燥至恒重的各产地黄精经炮制后细粉约0.25g，置圆底烧瓶中，加80％乙醇150ml，采用水浴加热回流1小时，趁热过滤，残渣用80％热乙醇洗涤3次，每次10ml，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150ml，置沸水浴中加热回流1小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10ml，合并滤液与洗液，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml具塞干燥试管中，同对照品溶液显色备用。
3最大吸收波长的确定
将制备好的对照品溶液和样品溶液分别在，UV2600紫外可见分光光度计上于200-600nm波长范围内扫描。对照品最大吸收波长为490nm，样品最大吸收波长为487nm，两者相差不大，选用487nm为检测波长。
4标准曲线的制备
精密量取，对照品溶液0ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，0.7ml，0.8ml分别置10ml具塞刻度试管中，按照对照品同样的方法显色。照紫外-可见分光光度法，测定吸光度，结果如表1所示，不同浓度的标准溶液测试得到不同的吸光值。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，如图1所示，拟合结果y＝52.38x+0.116，R2＝0.999。
表1标准曲线的制备
5实验结果
在2.4相同的测试参数条件下进行样品测试，分别得到实施例1制备的清蒸黄精中多糖含量，并计算出清蒸黄精中多糖含量的百分比例(％)。
表2清蒸黄精中多糖含量
<实施例5>
清蒸黄精检测方法：5-HMF含量测定
5-羟甲基糠醛(5-HydroxyMethylFurfural，5-HMF是一种糖的热降解产物，在含糖的中药炮制过程中都有可能生成，与炮制时间和温度密切相关，是一种可用于指示炮制程度的物质，现已成为中药炮制原理研究的活性成分。
1对照品溶液的配制
取5-HMF对照品适量，精密称定，用甲醇溶解制备成的5-HMF对照品20.96μg/mL溶液，避光低温保存。
2供试品溶液的制备
取黄精不同炮制品约0.2g精密称定，置150m具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，超声提取20min，滤过。滤渣加甲醇10mL，超声提取10min，滤过，滤液定容至25mL量瓶中，即得。
3色谱条件
依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈:1％磷酸水(5：95)；流速:1.0ml/min；检测波长:284；柱温:30℃；进样量为10μL。
4线性关系考察
精密称取5-羟甲基糠醛对照品，用甲醇配制成浓度为20.96μg/ml的5-羟甲基糠醛对照品溶液。采用HPLC液相色谱进行检测，测定得到5-HMF保留时间。其中，5-HMF标准品保留时间如图2所示。然后，精密吸取此液2，4，6，8，10，12μL，注入液相色谱仪中，测得色谱峰面积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果如图4所示，得线性回归方程为：y＝187675x-9603.1(R2＝0.9999)，结果表面，5-HMF在0.04-0.25μg范围内与峰面积线性关系良好。
5实验结果
将清蒸黄精供试品用HPLC进行检测分析，测其中黄精液相色谱图如图3所示，根据HPLC测定的5-HMF保留峰面积，带入上述线性回归方程，计算得到清蒸黄精中5-HMF含量，结果如下表所示。
表3清蒸黄精中5-HMF含量
<实施例6>
薯蓣皂苷元含量测定
薯蓣皂苷元是甾体皂苷元，甾体皂苷元难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂。
1对照品溶液的配制
取薯蓣皂苷元对照品适量，精密称定，用甲醇溶解制备成的对照品；0.844mg/ml溶液。避光低温保存。
2供试品溶液的制备
黄精粉末约2g，置平底烧瓶中加50mL乙醇，摇匀，称重，加热回流4h，放冷，称重，用乙醇补足重量，摇匀，过滤。将滤液20mL浓缩至干，残渣加80mL,3mol/L的盐酸溶解，沸水回流4h，冷却，移至分液漏斗中，加氯仿40mL(20,10,10mL)萃取3次，合并氯仿液，减压浓缩干氯仿，残渣加甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，用高效液相色谱法测定。
3色谱条件
依利特ODS-B色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈：水(96：4)；流速：1.0ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μl。
4线性关系考察
精密吸取上述配制的薯蓣皂苷元对照品溶液2，4，6，8，10，12μL，注入液相色谱仪中，确定薯蓣皂苷元保留时间，液相色谱图如图6所示。然后，测定不同对照品溶液注入量测得色谱峰面积，以进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，结果如图5所示，拟合得线性回归方程为：y＝336438x+53652(R＝0.9991)，结果表明，薯蓣皂苷元在1.69-10.13μg范围内与峰面积线性关系良好。
5实验结果
称取上述4.2准备的供试品溶液在相同的液相色谱条件下进行检测分析，其中黄精液相色谱图如图7所示。根据液相色谱测定薯蓣皂苷元峰面积，计算确定各清蒸黄精样品中薯蓣皂苷元含量，结果如下表所示。
表4清蒸黄精中薯蓣皂苷元含量
<实施例7>
清蒸黄精检测方法：水溶性浸出物
1实验方法
取供试品约2g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(％)。
2实验结果
表5清蒸黄精中浸出物含量
<实施例8>
清蒸黄精检测方法：水分含量测定
1实验方法
取供试品2g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，精密称定，开启瓶盖在100～105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量(％)。
2实验结果
表6清蒸黄精中水分含量
<实施例9>
清蒸黄精检测方法：灰分含量测定
1实验方法
测定用的供试品须粉碎，使能通过二号筛，混合均匀后，取供试品2g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01g)，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(％)。
2实验结果
表7清蒸黄精中总灰分含量
本发明清蒸黄精品质检测分析方法，通过对比黄精炮制后的多糖、5-HMF、薯蓣皂苷元的含量，以及浸出物、水分、灰分。对于清蒸黄精中保健功效、药效成分等进行检测分析，对比不同的炮制工艺所得黄精品质，可以快速筛选出高品质的清蒸黄精。
经过分析优质清蒸黄精相比新鲜黄精多糖有所降低，但炮制后清蒸黄精多糖含量不低于4％。5-HMF具有抗心肌缺血、抗氧化、降血糖、改变血液流变性和神经保护性，对人体有一定的作用，因此可以作为炮制程度的一个标准，需要对其含量进行测定，优质黄精的含量不得少于0.50mg/g。
薯蓣皂苷元甾体皂苷类成分包括薯蓣皂苷元、菝葜皂苷元等皂苷元，主要以薯蓣皂苷元为主，炮制后黄精的薯蓣皂苷元含量与未炮制的黄精相比，含量降低，经过分析黄精炮制后的薯蓣皂苷元含量，现规定优质炮制后薯蓣皂苷元含量不得低于1.5mg/g。
最后，清蒸黄精的杂项：水溶性浸出物不得少于50％，水分不得高于7％，灰分不得高于5％。

Claims (10)

1.一种清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
取新鲜清蒸黄精，考察其外观色泽，有发黑变质、腐败的不合格；
合格的清蒸黄精样品，进一步检测清蒸黄精中5-HMF含量、薯蓣皂苷元含量、多糖含量、水溶性浸出物含量、灰分含量、水分含量；
（1）黄精中5-HMF含量测定：
101：对照品溶液配制，精密称取5-HMF对照品，用甲醇溶解制成对照品溶液，避光低温保存；
102：供试品溶液配制，精密称取黄精，加入10-20倍重量的甲醇超声提取10-30min，过滤，滤渣加10-20倍重量甲醇超声提取10-30min，过滤；合并滤液，定容；
103：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，计算得出黄精中5-HMF含量；
（2）黄精中薯蓣皂苷元含量测定，采用HPLC检测分析清蒸黄精中薯蓣皂苷元含量：
201：对照品溶液配制，精密称取薯蓣皂苷元对照品，用甲醇溶解制备成的对照品，避光1-6℃温保存；
202：供试品溶液配制，称取黄精粉末，加入10-20倍重量乙醇，摇匀，称重，加热回流2-5h，放冷，称重，用乙醇不足重量，摇匀，过滤；滤液浓缩至干，残渣加1-4mol/L的盐酸溶解，沸水回流2-5h，冷却，移至分液漏斗中，加入氯仿，萃取2-5次，合并氯仿溶液，减压浓缩至干，残渣加入甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液；
203：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，计算得出黄精中薯蓣皂苷元含量；
（3）多糖含量测定：
301：对照品溶液配制，精密称定无水葡萄糖，加水溶解，配制成多个梯度浓度的葡萄糖溶液；
302：样品溶液配制，取黄精样品，粉碎，干燥至恒重，加入乙醇回流提取1-3h，过滤，残渣用60-90v%乙醇洗涤2-4次，每次10mL；将残渣及滤纸，加水，加热回流1-3h，过滤，残渣用热水洗涤1-4次，每次10mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL具塞干燥试管中，备用；
303：检测分析，采用UV2600紫外可见分光光度计测试对照品溶液和样品溶液吸光度，计算得出黄精中多糖含量。
2.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，步骤103中，HPLC色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈：1%磷酸水=5：95体积比；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量10μL。
3.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，步骤1，黄精中5-HMF含量测定：
101：对照品溶液配制，精密称取5-HMF对照品，用甲醇溶解制成对照品溶液，避光低温保存；
102：供试品溶液配制，精密称取黄精，加入10mL甲醇超声提取10-30min，过滤，滤渣加10mL甲醇超声提取10-30min，过滤；合并滤液，定容至25mL量瓶中；
103：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，在如下色谱条件进行检测：依利特ODS-B色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈：1%磷酸水(5：95)；流速：1.0ml/min；检测波长：284nm；柱温：30℃；进样量10μL；
计算得出黄精中5-HMPF含量。
4.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，步骤203，色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈：水=96：4；流速：1.0 ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μL。
5.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，步骤2，黄精中薯蓣皂苷元含量测定：
201：对照品溶液配制，精密称取薯蓣皂苷元对照品，用甲醇溶解制备成的对照品，避光低温保存；
202：供试品溶液配制，称取黄精粉末，加入乙醇，摇匀，称重，加热回流2-5h，放冷，称重，用乙醇不足重量，摇匀，过滤；滤液浓缩至干，残渣加1-4mol/L的盐酸溶解，沸水回流2-5h，冷却，移至分液漏斗中，加入氯仿，萃取2-5次，合并氯仿溶液，减压浓缩至干，残渣加入甲醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液；
203：采用HPLC测试对照品溶液和供试品溶液，计算得出黄精中薯蓣皂苷元含量；
步骤203，色谱条件如下：依利特ODS-B色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈：水=96：4；流速：1.0 ml/min；检测波长：203nm；柱温：30℃；进样量为10μL。
6.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，清蒸黄精品质检测分析方法中，（3）多糖含量测定过程如下：
301：对照品溶液配制，精密称定无水葡萄糖，加水溶解，配制成多个梯度浓度的葡萄糖溶液；
302：样品溶液配制，取黄精样品细粉，干燥至恒重，加入80%乙醇，水浴加热回流1-3h，趁热过滤，残渣用80%热乙醇洗涤2-4次，每次10mL，将残渣及滤纸，加水，沸水浴加热回流1-3h，趁热过滤，残渣用热水洗涤1-4次，每次10mL，合并滤液与洗液，放冷，转移至250mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL具塞干燥试管中，备用；
303：检测分析，采用UV2600紫外可见分光光度计在485-495nm波长范围内测试对照品溶液和样品溶液吸光度，计算得出黄精中多糖含量。
7.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，清蒸黄精品质检测分析方法中，（4）水溶性浸出物测试过程如下：
401：精密称取供试品1-3g，置于锥形瓶中，加水50ml，密塞，称定重量，静置1-3h；
402：连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1h；放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用水补足减失的重量；
403：摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，先在水浴上蒸干，然后于105℃干燥2-4小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量；
计算出浸出物含量，x=（干燥后蒸发皿重量－蒸发皿原始重量）/供试品原始重量×100%。
8.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，清蒸黄精品质检测分析方法中，（5），灰分含量测试过程如下：
将供试品粉碎，精密称取，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量；缓缓炽热，至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600℃，使完全灰化并至恒重；根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量。
9.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，炽灼升温过程中，升温速度1-5℃/min。
10.如权利要求1所述清蒸黄精品质检测分析方法，其特征在于，清蒸黄精品质检测分析方法中，（6），水分含量测定方式如下：
601：精密称取供试品，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5～10mm，精密称定；
602：开启瓶盖在100～105℃干燥4-6h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷10-60min，精密称定；
603：将称量瓶瓶盖开启，再在步骤602所述温度干燥1小时，移置干燥器中，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，否则重复干燥、放冷、称重操作；根据减失的重量，计算供试品中含水量。
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