CN102426207B - 一种甘木通黄酮类成分的检测方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种甘木通黄酮类成分的检测方法及应用。本发明以含山柰素的甲醇溶液为对照品溶液，采用高效液相色谱法对配制好供试品溶液中甘木通黄酮类成分进行定性和/或定量分析。本发明可应用于检测提取方法相同或相近的含有甘木通组成的提取物、制剂、饮片或药材中黄酮类成分的检测，阴性无干扰，具有较强的专属性和良好的重现性，可有效确保含甘木通的制剂品种均一、稳定、有效、可控，保证了工艺的规范化和质量的稳定一致。

Description

一种甘木通黄酮类成分的检测方法及应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及中药、饮片、提取物及制剂中黄酮类成分的检测技术，特别是涉及一种甘木通药材提取物中黄酮类成分的检测方法及应用。 

背景技术

甘木通(Clematis filamentosa Dunn)俗称眼蛇药，为毛茛科丝铁线莲属植物，主要分布在广东、广西、海南、云南等地，在粤北乳源山区有较为丰富的野生资源，对心血管疾病(冠心病、高血压)有显著疗效。甘木通中黄酮类化合物是其有效成分之一。 

以甘木通为原料生产的“冠心康片”临床治疗冠心病心绞痛、高血压等疗效突出。冠心康片用于肝经有热、肝阳上亢、脉络瘀阻所致之头痛眩晕、胸痹心痛、肢体麻木等症，还适用于防治心血管疾病，特别是冠心病和高血压的治疗，同时具有用量少、药效长、无副作用等优点。 

现有的甘木通中黄酮类成分的检测方法有：以芦丁为对照品建立标准曲线，以75％乙醇为溶剂，在90℃加热回流提取甘木通茎、叶中总黄酮类成分，用紫外分光光度法在波长510nm处测定总黄酮含量。但是这种应用紫外分光光度法检测甘木通中黄酮类成分的检测方法专属性较差，不能反映本药材黄酮类具体成分的含量。 

发明内容

本发明的一个目的在于填补现有甘木通黄酮类成分检测技术的不足，提供一种新的甘木通黄酮类成分的检测方法。是一种利用甘木通药材、总黄酮 提取物或制剂指纹图谱进行检测的方法，并通过确定科学的检测保证药材、提取物、制剂的质量更加安全、可靠。 

本发明的另一个目的是提供所述方法的应用。 

本发明的目的通过以下技术方案予以实现： 

本发明提供一种甘木通黄酮类成分的检测方法，以含山柰素的甲醇溶液为对照品溶液，采用高效液相色谱法对供试品溶液中甘木通黄酮类成分进行定性和/或定量分析；所述对照品溶液中每1mL甲醇含5～110μg山柰素。 

所述检测条件为： 

采用填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相为甲醇与水(或缓冲盐溶液)、甲醇与酸水、或乙腈与水(或缓冲盐溶液)或乙腈与酸水的混合物；等度或梯度洗脱；流速0.1～1.5mL/min；检测波长200～400nm；进样量1～20μL；采用黄酮类标准品为内标或外标，进行黄酮类成分含量测定。 

本发明进一步提供更为优选的检测条件为： 

C18(Φ4.6mmX250mm，5μm)色谱柱；流速：0.1～1.5mL/min，柱温：20～50℃；检测波长：200～400nm；进样量：1～20μL；流动相：乙腈(A)-0.1％冰乙酸水溶液(B)，采用梯度洗脱：A相梯度：0～15min，13％；15～30min，13％→17％；30～50min，17％→22％；50～60min，22％→27％；60～75min，27％→37％。 

优选的检测波长为326nm、254nm或370nm。 

具体地，本发明所述供试品溶液的制备方法包括以下几种： 

步骤(1)所述供试品溶液通过以下方法制备得到：取过三号筛的待测药材粉末1～50.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比浓度为30～ 80％乙醇5～500mL，称定重量，超声提取0.5～3.5h，放冷，再称定重量，用体积比浓度为30～80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，重复提取1～5次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用水稀释至5～150mL，每次加入石油醚(60～90℃)5～150mL萃取2～5次，石油醚液弃去；水层继续用5～150mL乙酸乙酯萃取2～5次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10～250mL，过0.22～0.45μm微孔滤膜即得。 

或者，步骤(1)所述供试品溶液通过以下方法制备得到：取过三号筛的药材粉末1～50.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比浓度为30～80％乙醇5～500mL，称定重量，微波提取三次，第一次功率560～500w，提取时间10～20min；放冷，再称定重量，用体积比浓度为30～80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，重复提取3次，第二次功率500～400w，提取时间10～20min；第三次功率400～350w，提取时间10～20min；合并提取液，减压浓缩至无醇味，用水稀释至5～150mL，每次加入石油醚(60～90℃)5～150mL萃取2～5次，石油醚液弃去；水层继续用5～150mL乙酸乙酯萃取2～5次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10～250mL，过0.22～0.45μm微孔滤膜，即得。 

或者，步骤(1)所述供试品溶液通过以下方法制备得到：取过三号筛的待测药材粉末1～50.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比浓度为30～80％乙醇5～500mL，称定重量，索氏回流提取0.5～3.5h，放冷，再称定重量，用体积比浓度为30～80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，重复提取1～5次，合并提取液，减压浓缩至无醇味，用水稀释至5～150mL，每次加入石油醚(60～90℃)5～150mL萃取2～5次，石油醚液弃去；水层继 续用5～150mL乙酸乙酯萃取2～5次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10～250mL，过0.22～0.45μm微孔滤膜，即得； 

或者，步骤(1)所述供试品溶液通过以下方法制备得到：取过三号筛的药材粉末1～50.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水5～500mL，称定重量，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入乙醇使含醇量达65～70％，静置，滤过，滤液浓缩至无醇味，用水稀释至5～150mL，每次加入石油醚(60～90℃)5～150mL萃取2～5次，石油醚液弃去；水层继续用5～150mL乙酸乙酯萃取2～5次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至10～250mL，过0.22～0.45μm微孔滤膜，即得。 

通过有效性评价，本发明所述检测方法的专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、测定范围以及耐用性较好。 

本发明所述的检测方法，其中优选在326nm、254nm或370nm波长下山奈素对照的色谱图的保留时间与峰面积，再使用matlab 7.1进行编程，将不同波长下的色谱图中相同组分按最大峰面积覆盖融合。 

本发明所述的检测方法，可应用于检测提取方法相同或相近的含有甘木通组成的任何一种提取物、制剂、饮片或药材；所述制剂包括颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂、软胶囊剂、滴丸剂等。 

与现有技术相比较，本发明具有以下有益效果： 

(1)本发明建立了高效液相指纹图谱检测黄酮类成分含量的方法，与现有检测方法相比较，专属性良好，能准确反映甘木通黄酮类具体某成分的含量。 

(2)本发明首次采用高效液相色谱法对甘木通中黄酮类成分中的12个共有峰进行了分离，并以山奈素为内标，建立了甘木通中黄酮类成分定性以及定量分析的科学方案，提高了药材、制剂、提取物的检测标准，从而有效确保了含甘木通的品种均一、稳定、有效、可控，保证了工艺的规范化和质量的稳定一致。 

(3)本发明提供的检测方法，其优点是简便、稳定、精密度高、重现性好、易于掌握，能从色谱的整体特征面貌上把握甘木通药材、饮片、其提取物和制剂的品种和质量情况。 

附图说明

图1 326nm波长下对照品山奈素的色图谱； 

图2 326nm波长下样品的色图谱； 

图3 326nm波长下样品中添加内标山奈素的色图谱； 

图4 326nm波长下甘木通总黄酮的色图谱； 

图5指纹图谱各共有指纹峰； 

图6 254nm波长下甘木通总黄酮的色图谱； 

图7 370nm波长下甘木通总黄酮的色图谱。 

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例详细说明本发明。 

实施例1 

Waters 600高效液相色谱仪，紫外检测器、柱温箱；色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂：XBridge Shield RP18(4.6mm×250mm，5μm)。乙腈(色谱纯，美国默克公司)，超纯水；其它试剂为分析纯。 

1、供试品溶液的制备：取甘木通药材粉末(过三号筛)5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比浓度为80％的乙醇50mL，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。 

2、内标溶液的制备：精密称取山柰素对照品适量，用甲醇配制成每1mL含11.2μg的内标溶液。 

3、进行高效液相色谱测定：参照中国药典2010版一部附录VI D进行测定。流动相梯度：流动相：乙腈(A)-0.1％冰乙酸水溶液(B)，采用梯度洗脱：A相梯度：0～15min，13％；15～30min，13％→17％；30～50min，17％→22％；50～60min，22％→27％；60～75min，27％→37％；流速1.0mL/min；检测波长326nm；进样量20μL，理论塔板数计算，应不低于3000； 

4、方法学考察，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性及线形范围。

4.1内标物的选择 

用内标溶液、样品溶液，按照上述色谱条件测试，结果样品HPLC图谱中在与内标液山奈素HPLC图谱中相同保留时间处未出现色谱峰，样品中加入内标液HPLC图，样品中与山奈素相邻的峰达到很好分离，见附图1～5所示。如附图5所示，有13个共有峰，各特征峰以13号峰(RT＝72.59)为参照峰，相对保留时间分别为：0.067，0.126，0.135，0.204，0.314，0.361， 0.420，0.436，0.578，0.589，0.845，1.00。在326nm波长下测得山奈素的保留时间是72.59，峰面积分别是524684，样品中对应的峰是13号。采用相同的方法分别在254nm和370nm波长下检测甘木通总黄酮，检测得到的色图谱见附图6和附图7所示。附图中横坐标代表出峰时间(分钟)，纵坐标代表峰的高度。 

4.2内标溶液线性关系考察 

精密称取山奈素对照品适量，加甲醇制成每1ml含11.2μg的溶液，精密吸取2、4、8、12、16、20μl，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以山奈素峰面积值为Y，进样量为x(μg)，进行线性回归，得线性方程：Y＝2328.4x-4947.1，r＝0.9999。结果表明，山柰素在22.4～224ng的范围内呈良好线性关系。见表1所示。 

表1内标物线性关系实验数据 

4.3样品与内标物峰面积比值与样品含量线性关系考察 

取甘木通药材粉末(过三号筛)5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比浓度为80％的乙醇50mL，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至25mL，分别精密量取5、4、3、2、1mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，过0.45μm微孔滤膜，得各供试样品溶液。 

各供试样品分别与浓度为11.2μg/mL的内标溶液按1∶1(体积比)均匀混合，按照测定方法进样，计算样品中12号峰与13号峰(山奈素)的面积比值，以及供试样品取样量(mL)/10的比值，对两个比值进行线性回归，得回归方程为：Y＝1.9056X+0.0066(r＝0.9999)； 

实验表明样品中黄酮类成分以12号峰计，与内标物山奈素的峰面积比与样品中12号峰含量呈良好的线性关系。 

4.4精密度试验 

取内标溶液连续测定六次，结果6次测定图谱中对照品的峰保留时间和峰面积的RSD均小于2％，证明仪器精密度良好。 

表2对照品HPLC精密度数据表 

4.5溶液的稳定性试验 

取同一加入内标液的供试品溶液，分别在0、2、4、8、12h进样5次，计算色谱图中13个共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％，见表3～4所示，证明样品在12h内稳定。 

表3样品HPLC稳定性各特征峰相对保留时间表 

表4样品HPLC稳定性各特征峰相对峰面积表 

4.6重复性试验 

取同一批加入内标液的供试品溶液，按上述色谱条件连续进样5次，结果13个共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％，见表5～6所示。证明方法的重复性良好。 

表5样品HPLC重复性各特征峰相对保留时间表 

表6样品HPLC重复性各特征峰相对峰面积表 

4.7限度确定 

取甘木通药材，分别按供试品溶液制备方法制备，用上述方法分别测定12号峰的含量，十批样品检测结果见表7所示。 

表7甘木通含量测定结果 

十批样品测定结果，甘木通中黄酮类成分以山奈素计，含量在0.101～0.119mg/g范围内，产生的差别应为药材来源、加工、采收季节等因素造成。 

实施例2本发明检测方法的应用 

1、片剂的制备(可参照现有常规方法。例如根据部颁药品标准WS3-B-2759-97中给出的提取工艺制备而成的冠心康片)可取甘木通叶切碎，加水煎煮两次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入乙醇使含醇量达65～70％(体积比浓度)，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加入适量辅料，常规方法制粒、干燥、压制成片、包衣，即得片剂。 

2、取上述片剂20片，除去糖衣或薄膜衣，素片研细，称取粉末约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比浓度为80％的乙醇50mL，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照以下色谱条件测定： 

C18(Φ4.6mm×250mm，5μm)色谱柱；流速：0.1～1.5mL/min，柱温：25℃；检测波长：370nm；进样量：20μL；流动相：乙腈(A)-0.1％冰乙酸水溶液(B)，采用梯度洗脱：A相梯度：0～15min，13％；15～30min，13％→17％；30～50min，17％→22％；50～60min，22％→27％；60～75min，27％→37％。 

检测知每片含有总黄酮按山奈素计0.109mg/片。 

实施例3本发明检测方法的应用 

1、片剂的制备：取甘木通叶，切碎，加乙醇使含醇量达65～70％，回流提取两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，滤液浓缩至 稠膏状(密度为：1.3～1.4，80℃测定)，加入适量辅料，常规制粒，干燥，压制成片，包衣，即得。 

2、取上述片剂20片，除去糖衣或薄膜衣，素片研细，称取粉末约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％乙醇50mL，称定重量，超声(功率200w，频率40kHz)提取0.5～1h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照实施例3所述色谱条件测定，每片含有总黄酮按山奈素计0.112mg/片。 

实施例4本发明检测方法的应用 

1、片剂的制备同实施例2。 

2、取上述片剂20片，精密称定，研细，精密称取1g置于烧瓶中，加70％乙醇溶液100mL，回流1h，抽滤，减压回收乙醇，用石油醚(60～90℃)15mL萃取3次，弃去石油醚层，将提取液挥干石油醚，转移至50mL量瓶中，加70％乙醇定容即得供试品溶液。过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照实施例3所述色谱条件测定，每片含有总黄酮按山奈素计0.130mg/片。 

实施例5本发明检测方法的应用 

1、胶囊剂的制备(可参照现有常规)：取甘木通叶，切碎，加水煎煮两次，第一次2小时，第二次1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入乙 醇使含醇量达65～70％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏状，加入适量辅料，制粒，干燥，装入胶囊壳(1号、2号或3号)，即得。 

2、取上述胶囊内容物，称取粉末约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％乙醇50mL，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照实施例3所述色谱条件测定，每片含有总黄酮按山奈素计0.128mg/粒。 

实施例6本发明检测方法的应用 

1、颗粒剂的制备：取甘木通药材5kg，切碎，加水煎煮两次，第一次加入水量为15倍(体积倍数)药材量，煎煮2小时；第二次加入水量为10倍药材量，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入乙醇使含醇量达65～70％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏(密度为1.35～1.40，80℃测)；将稠膏经0.1Mpa，60℃条件下干燥，粉碎，即得干膏粉258g。 

2、取干膏粉258g，加入淀粉750g、糊精750g和糖粉1500g，混合均匀后加入体积比浓度为80％乙醇约100～200mL为润湿剂，过16目筛制备湿颗粒，湿颗粒在小于60℃的温度下烘干30min，16目筛整粒后干燥，干颗粒包装即得颗粒剂； 

3、取上述颗粒剂适量，称取颗粒约5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％乙醇50mL，称定重量，加热回流1.5h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释 至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照以下色谱条件测定： 

C18(Φ4.6mmX250mm，5μm)色谱柱；流速：0.1～1.5mL/min，柱温：20～50℃；检测波长：326nm；进样量：10μL；流动相：乙腈(A)-0.1％冰乙酸水溶液(B)，采用梯度洗脱：A相梯度：0～15min，13％；15～30min，13％→17％；30～50min，17％→22％；50～60min，22％→27％；60～75min，27％→37％。检测得含有总黄酮按山奈素计0.103mg/袋。 

实施例7本发明检测方法的应用 

1、取甘木通药材5kg，切碎，加水煎煮两次，第一次煎煮2小时(每次煎煮加入水的质量为8～20倍药材质量)，第二次1小时(每次煎煮加入水的质量为8～20倍药材质量)，过滤，合并滤液(A)，浓缩至适量，加入体积比浓度为95％的乙醇使浓缩液含醇量达65～70％(体积比浓度)，静置(优选24小时以上)，过滤，滤液(B)浓缩至稠膏状(密度为1.35～1.40，80℃测)，测定稠膏中黄酮含量；将稠膏经0.1～0.9Mpa、60～90℃条件下干燥，粉碎，即得干粉。 

将适量的PEG4000或PEG6000于80℃边搅拌边加热，直至熔融；将上述粉末加入熔融的基质，混合均匀；调整滴丸机(可采用型号DWJ-2000S5的滴丸机或者类似的产品)的温度控制系统，使滴丸机的滴头温度加热并保持在50～90℃，冷凝剂的温度冷却并保持在-5～40℃，将含有药物提取物的熔融液，在与滴头温度相近的温度条件下经充分搅拌使均匀，保温，置于滴 丸机的滴头罐内，通过滴头滴入冷凝剂中，由滴丸机出口将收缩成型的滴丸取出。 

2、取上述滴丸40粒，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％乙醇50mL，称定重量，超声(功率200w，频率40kHz)提取1h，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照实施例7所述色谱条件测定，每丸含有总黄酮按山奈素计0.034mg/丸。 

实施例8本发明检测方法的应用 

1、软胶囊剂的制备： 

总黄酮提取工艺：取甘木通药材5kg，切碎，加水煎煮两次，第一次加入水量为15倍(体积倍数)药材量，煎煮2小时；第二次加入水量为10倍药材量，煎煮1小时，滤过，合并滤液，浓缩至适量，加入95％乙醇使含醇量达65～70％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏(密度为1.35～1.40，80℃测)；将稠膏经0.1Mpa，60℃条件下干燥，粉碎，即得干膏粉258g。加入适量辅料，按软胶囊剂制备方法压制成软胶囊，干燥，包装即得。 

2、取上述软胶囊剂20丸，除去胶皮，内容物混匀，称取内容物约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％乙醇50mL，称定重量，超声(功率200w，频率40kHz)提取0.5～1h，放冷，再称定重量，用80％乙醇补足减失重量，摇匀，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，用水稀释至15mL，每次加入石油醚(60～90℃)15mL萃取2次，石油醚液弃去；水层继续用15mL 乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯液并减压蒸干，殘渣加甲醇溶解并定容至100mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液，按照上述色谱条件测定，每粒含有总黄酮按山奈素计0.098mg/粒。 

综上所述，本发明可应用于含有甘木通组成的提取物、制剂、饮片或药材中黄酮类成分的检测，阴性无干扰，具有较强的专属性和良好的重现性，可有效确保含甘木通的制剂品种均一、稳定、有效、可控，保证了工艺的规范化和质量的稳定一致。 

Claims (5)

1.一种甘木通黄酮类成分的检测方法，其特征在于是以含山柰素的甲醇溶液为对照品溶液，采用高效液相色谱法对供试品溶液中甘木通黄酮类成分进行定性和/或定量分析；所述检测条件为：

规格为Ф4.6mm×250mm、5μm的C₁₈色谱柱；流速：0.1～1.5mL/min，柱温：20～50℃；检测波长：200～400nm；进样量：1～20μL；流动相：乙腈A相-0.1％冰乙酸水溶液B相，采用梯度洗脱：A相梯度：0～15min，13％；15～30min，13％→17％；30～50min，17％→22％；50～60min，22％→27％；60～75min，27％→37％；

所述对照品溶液是每1mL甲醇含5～110μg山柰素的溶液；

所述供试品溶液通过以下方法制备得到：取待测药材粉末，经加水煎煮或体积比浓度为80％的乙醇提取得到提取液，再经石油醚萃取后取水层，水层用乙酸乙酯萃取得到的萃取液蒸干而得残渣，残渣加甲醇溶解并定容后过微孔滤膜，制得供试品溶液。

2.根据权利要求1所述的甘木通黄酮类成分的检测方法，其特征在于所述乙醇提取是索氏回流提取、超声提取或微波提取。

3.根据权利要求1所述的甘木通黄酮类成分的检测方法，其特征在于所述检测波长为326nm、254nm或370nm。

4.一种权利要求1、2或3所述检测方法的应用，其特征在于应用于检测提取方法相同或相近的含有甘木通组成的提取物、制剂、饮片或药材中黄酮类成分。

5.根据权利要求4所述检测方法的应用，其特征在于所述制剂为颗粒剂、胶嚢、片剂、丸剂、软胶囊剂或滴丸剂。