CN112697949A - 一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本公开涉及了一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，可同时进行保元汤及其类似方提取物及制剂中主要药味人参、黄芪、甘草的鉴别，避免了3味药味单独制样、点板、展开、显色、检视，操作简单、检测周期短、检验效率高，使用该方法所得薄层色谱图分离度好、斑点显色清晰，并且避免了氨水、三氯甲烷、冰醋酸等刺激性试剂的使用。

Description

一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法

技术领域

本公开涉及一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，属于中药检测方法领域。

背景技术

保元汤，配方来自《古代经典名方目录(第一批)》中的保元汤，所含药味为人参、黄芪、甘草、肉桂、生姜。经典名方系指至今仍广泛应用、疗效确切、具有明显特色与优势的古代中医典籍所记载的方剂，国家鼓励基于经典名方的产品研发。

保元汤类似方，是指历代医家临床应用时，以保元汤作为基础调整药物用量，或适当增减药物组成，其至少含有人参、黄芪、甘草三味基础药味。保元汤及其类似方，主治元气虚弱，精神倦怠，肌肉柔慢，饮食少进，面青

白，睡卧宁静等，临床多用于治疗体虚乏力等症。其功效有广泛的适用性，可作为平常百姓的滋补强身之品。

随着现代科技的发展，保元汤及其类似方不仅以饮片煎汤服用，还以提取物、颗粒、片剂、胶囊剂、口服液等剂型应用于临床。因此，本发明所涉及的薄层色谱鉴别方法，可应用于保元汤及其类似方的提取物及颗粒、片剂、胶囊剂、口服液等剂型。

薄层色谱法，是一种常见的检验方法，广泛用于各种中药材、中药饮片、中成药的鉴别，其原理是利用待测品中各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。

现有技术中，保元汤及其类似方提取物及制剂质量检测方法研究较少。薄层鉴别方法主要是按其中所含药味参考药典方法分别进行单味药材鉴别，常规的薄层鉴别无法将人参、黄芪和甘草三味药材同时进行鉴定，且前处理复杂需要对人参进行氨水处理、黄芪过过氧化铝柱等。此外，现行中国药典记载的人参和黄芪的薄层鉴别中，其展开剂都含有毒试剂三氯甲烷，而甘草的薄层鉴别中，其展开剂使用了冰醋酸，对操作者的眼和鼻有较强的刺激性作用。

本发明提供一种用于保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，可快速、简便地同时鉴别其中的人参、黄芪、甘草三味药材，全面提高质控水平，保证保元汤及其类似方提取物及制剂质量可控、稳定。

发明内容

为了解决上述技术问题，本公开的目的在于提供一种用于保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，可快速、简便地同时鉴别该类方剂中的主要药味人参、黄芪、甘草三味药材，保证保元汤及其类似方提取物及制剂的质量。

具体来讲，本公开提供了以下技术方案：

本发明的一个方面，提供了一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法包括以下步骤：

步骤1)供试品溶液制备：保元汤及其类似方提取物或制剂中加入正戊醇萃取，超声处理，静置分层，上清液加水洗涤，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

步骤2)对照品溶液制备：分别制备甘草酸铵对照品溶液、黄芪甲苷对照品溶液和人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品混合溶液；

步骤3)展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、水，配成展开剂溶液；

步骤4)点样、展开、显色。

前述制备方法，其中，所述步骤1)中，所述正戊醇与所述保元汤及其类似方提取物或制剂的体积比为(1～5)：1；优选地，所述正戊醇与所述保元汤及其类似方提取物或制剂的体积比为(1～3)：1。

前述制备方法，其中，所述步骤1)中，所述超声处理时间为20-40分钟。

前述制备方法，其中，所述步骤2)中，所述制备甘草酸铵对照品溶液为取甘草酸铵对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml甘草酸铵溶液；

前述制备方法，其中，所述步骤2)中，所述制备黄芪甲苷对照品溶液为取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml黄芪甲苷溶液；

前述制备方法，其中，所述步骤2)中，所述制备人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品混合溶液为取人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

前述制备方法，其中，所述步骤3)中，所述展开剂溶液中，乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(40-100)：(5-30)：(5-30)。

前述制备方法，其中，所述展开剂溶液中，乙酸乙酯甲酸：水的体积比例为 (40-60)：(5-20)：(5-20)。优选地，所述展开剂溶液中，乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(45-55)：(5-15)：(5-15)。

前述制备方法，其中，所述步骤4)中，所述点样步骤为用薄层点样器吸取上述对照品溶液及供试品溶液，分别点于同一薄层板上。

前述制备方法，其中，所述步骤4)中，所述展开步骤为将薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干。

前述制备方法，其中，所述步骤4)中，所述显色步骤为对晾干后的薄层板喷以10％硫酸乙醇溶液，在加热至斑点显色清晰后检视。

与现有技术相比，本公开的有益效果包括：

(1)本发明提供的薄层鉴别方法可同时进行保元汤及其类似方提取物及制剂中主要药味人参、黄芪、甘草的鉴别，避免了3味药味单独制样、点板、展开、显色、检视，该方法不仅操作简单、检测周期短，而且使用该方法所得薄层色谱图分离度好、斑点显色清晰。

(2)本发明提供的薄层鉴别方法避免了人参氨水处理、黄芪过氧化铝柱等繁琐的样品处理步骤，又简化了检验步骤，节省了检验成本，提高了检验效率，更利于产业化生产检测应用。

(2)本发明提供的薄层鉴别方法中，未使用三氯甲烷，有利于避免操作者健康损害。

(4)本发明提供的薄层鉴别方法中，未使用冰醋酸，避免了刺激性作用，有利于操作者的检验操作和避免健康损害。

附图说明

图1为本公开实施例2中保元汤口服液的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：黄芪甲苷和人参皂苷Rb1、Re及Rg1；4：甘草酸铵； 5：供试品溶液；

图2为本公开实施例3中保元汤片剂的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液；

图3为本公开实施例4中保元汤口服液的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液A；5：供试品溶液B；

图4为本公开实施例5中保元汤口服液的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液A；5：供试品溶液B；

图5为本公开实施例6和对比例1-2中保元汤提取物的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液1；5：供试品溶液2；6：供试品溶液3；

图6为本公开对比例3-5中保元汤提取物的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷； 2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液4；5：供试品溶液5； 6：供试品溶液6；

图7为本公开对比例6中保元汤口服液的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液A；5：供试品溶液B；

图8为本公开对比例7中保元汤口服液的薄层鉴别结果，图中，1：黄芪甲苷；2：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；3：甘草酸铵；4：供试品溶液A；5：供试品溶液B；

图9为本公开对比例8中采用药典鉴别人参的方法同时鉴别人参、黄芪、甘草的薄层鉴别结果，图中，1：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；2：甘草酸铵；3：黄芪甲苷； 4：供试品溶液；

图10为本公开对比例9中采用药典鉴别甘草的方法同时鉴别人参、黄芪、甘草的薄层鉴别结果，图中，1：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；2：甘草酸铵；3：黄芪甲苷； 4：供试品溶液；

图11为本公开对比例10中采用药典鉴别黄芪的方法同时鉴别人参、黄芪、甘草的薄层鉴别结果，图中，1：人参皂苷Rb1、Re及Rg1；2：甘草酸铵；3：黄芪甲苷； 4：供试品溶液。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。

“保元汤及其类似方”指方剂中以人参、黄芪、甘草作为主要成分且功效类似的方剂，其中保元汤及其类似方可以由人参、黄芪、甘草组成，也可以在人参、黄芪、甘草的基础上，选择加入肉桂、桂枝、生姜、白术、茯苓等其他可配伍的药味中的一种或几种组合而成。

本公开的一个方面，涉及一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法包括以下步骤：

步骤1)供试品溶液制备：所述保元汤及其类似方提取物或制剂中加入正戊醇萃取，超声处理，静置分层，上清液加水洗涤，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

步骤2)对照品溶液制备：分别制备甘草酸铵对照品溶液、黄芪甲苷对照品溶液和人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品混合溶液；

步骤3)展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、水，配成展开剂溶液；

步骤4)点样、展开、显色。

在一个实施例中，所述保元汤及其类似方提取物或制剂中，所述保元汤及其类似方提取物的原料药包括人参、黄芪和甘草，优选地，所述保元汤及其类似方提取物的原料药还包括肉桂、桂枝、生姜、白术、茯苓中的一种或几种。

在一个实施例中，所述保元汤及其类似方中，所述人参、黄芪、甘草的比例为：人参300～400重量份、黄芪600～800重量份、甘草100～200重量份。

在一个实施例中，所述保元汤及其类似方制剂包括固体制剂和液体制剂。优选地，所述固体制剂包括颗粒剂、片剂、胶囊剂内容物等。优选地，所述液体制剂包括汤剂、口服液等。

在一个实施例中，所述保元汤及其类似方中的所有药味，需经粉碎、切制等前处理后，用水进行提取、浓缩，做成液体提取物、汤剂或口服液；或进行干燥，制得固体提取物；或提取物加入辅料，制成颗粒剂、胶囊、片剂等剂型。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述保元汤及其类似方提取物或制剂中加入正戊醇萃取，包括取保元汤及其类似方的固体提取物或固体制剂，研细，加水，搅匀，或直接取保元汤及其类似方的液体提取物或液体制剂，作为供试品样本液；再在所述供试品样本液中加入正戊醇萃取，超声处理，静置分层，上清液加水洗涤，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，得到供试品溶液。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述供试品样本液的制备方法为取所述保元汤及其类似方的固体提取物或固体制剂0.5-2g，研细，加水10-20滴，搅匀；或直接取所述保元汤及其类似方的液体提取物或液体制剂10-20ml。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述正戊醇与所述保元汤及其类似方提取物或制剂的体积比为(1～5)：1；优选地，所述正戊醇与所述保元汤及其类似方提取物或制剂的体积比为(1～3)：1。

本公开的薄层鉴别方法中，采用正戊醇或正丁醇均可实现对有效成分的萃取，并经进一步处理后用于薄层鉴别，其中，正戊醇萃取的效果比正丁醇的好，所显色的斑点更规则清晰，且各组分分离度较好。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述超声处理时间为20-40分钟。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述静置时间为5-20分钟。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述加水洗涤为洗涤2-4次，每次加水量与正戊醇的体积比为1：(0.5～2)。

在一个实施例中，所述步骤1)中，所述甲醇的用量为0.5-2ml。

在一个实施例中，所述步骤1)中供试品溶液制备的方法为：取所述固体提取物、颗粒剂、片剂、胶囊剂内容物约0.5-2g，研细，加水10-20滴，搅匀；或取液体提取物、汤剂口服液10-20ml；加入正戊醇10-30ml，超声处理20-40分钟，静置5-20分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2-4次，每次10-30ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液。

在一个实施例中，所述步骤2)中，所述制备甘草酸铵对照品溶液为取甘草酸铵对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml甘草酸铵溶液；

在一个实施例中，所述步骤2)中，所述制备黄芪甲苷对照品溶液为取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml黄芪甲苷溶液；

在一个实施例中，所述步骤2)中，所述制备人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品混合溶液为取人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml人参皂苷Rb1、 Re及Rg1混合溶液。

在一个实施例中，所述步骤3)中，所述展开剂按乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(40-100)：(5-30)：(5-30)进行配置，优选乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为 (40-60)：(5-20)：(5-20)，更优选乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(45-55)：(5-15)： (5-15)。

在一个实施例中，所述步骤4)中，所述点样步骤为用薄层点样器吸取上述对照品溶液及供试品溶液，分别点于同一薄层板上；优选地，所述对照品溶液及供试品溶液点样量为各约2-10μl。

在一个实施例中，所述步骤4)中，所述展开步骤为将薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干；优选地，所述薄层板为硅胶H薄层板或硅胶G 薄层板。

在一个实施例中，所述步骤4)中，所述显色步骤为对晾干后的薄层板喷以10％硫酸乙醇溶液，在加热至斑点显色清晰后检视；优选地，所述加热至斑点显色清晰的加热温度为105℃；优选地，所述检视线为分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视。

在一个实施例中，所述步骤4)中的方法为照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各约2-10μl，分别点于同一硅胶H 薄层板或硅胶G薄层板上；将薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为 365nm的紫外光灯检视。

在一个实施例中，所述甲醇、乙酸乙酯、甲酸、正戊醇，皆为分析纯级别试剂。

在一个实施例中，所述步骤2)所用甘草酸铵、黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，皆为购自中国食品药品检定研究院的对照品。

在一个实施例中，所述保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法的步骤为：

步骤1)：供试品溶液制备：取所述提取物、颗粒剂、片剂或胶囊剂内容物约0.5-2g，研细，加水10-20滴，搅匀；或取口服液10-20ml；加入正戊醇10-30ml，超声处理 20-40分钟，静置5-20分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2-4次，每次加水10-30ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇0.5-2ml使溶解，作为供试品溶液；

步骤2)：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、 Re及Rg1对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

步骤3)：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、水，按乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(40-100)：(5-30)：(5-30)，配成展开剂溶液。

步骤4)：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各约2-10μl，分别点于同一硅胶H薄层板或硅胶G薄层板上；将硅胶H薄层板或硅胶G薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm 的紫外光灯下检视。

实施例

实施例1：保元汤类似方提取物的制备

1)液体提取物的制备：取人参300～400重量份、黄芪600～800重量份、甘草 100～200重量份、肉桂50～100重量份、生姜100～400重量份，混合，粉碎，加水进行加热回流提取两次，过滤，合并两次提取液，减压浓缩，得液体提取物。

2)固体提取物的制备：取1)中的液体提取物，经冷冻干燥后，即得保元汤及其类似方固体提取物。

实施例2：保元汤口服液薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：取保元汤口服液10ml，加入正戊醇10ml，超声处理25分钟，静置10分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤3次，每次15ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成0.5mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成0.5mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、 Re及Rg1对照品，加甲醇制成0.5mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、水，按乙酸乙酯－甲酸－水 (100:30:30)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各约6μl，分别点于同一硅胶H薄层板上；将硅胶H薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图1 所示。

图谱分析：由图1可知，对照品溶液色谱中，黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及 Rg1和甘草酸铵均不在同一高度；供试品溶液色谱中，在与甘草酸铵和人参皂苷Rb1、 Re及Rg1和黄芪甲苷对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

结论：本实施例的薄层鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及 Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好。

实施例3：保元汤片剂薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：取保元汤片剂2g，研细，加水4ml，搅匀；加入正戊醇20ml，超声处理40分钟，静置10分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤4次，每次30ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，加甲醇制成1mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、纯化水，按乙酸乙酯－甲酸－纯化水(60:15:15)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各约10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上；将硅胶G薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图2所示。

图谱分析：由上图2可见，对照品溶液色谱中，黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re 及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度；供试品溶液色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷 Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

结论：本实施例的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re 及Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好。

实施例4：保元汤口服液薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：供试品制备两组，A组取保元汤口服液10ml，B 组此处不加任何物质，然后两组分别加入正戊醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2次，每次10ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，分别得到供试品溶液A和供试品溶液B。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，加甲醇制成1mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、纯化水，按乙酸乙酯－甲酸－纯化水(50:10:10)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液A、供试品溶液B各约5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上；将硅胶G薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图3所示。

图谱分析：由上图3可见，对照品溶液色谱中，黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re 及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度；供试品溶液A色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点规则清晰。供试品溶液B色谱中无斑点。

结论：以供试品溶液B作为阴性对照，其结果可以证明本实施例所提供的薄层鉴别方法对检测结果无干扰。本实施例的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好。

实施例5：保元汤口服液薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：供试品制备两组，A组取保元汤口服液10ml，B 组此处不加任何物质，然后两组分别加入正戊醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2次，每次10ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，分别得到供试品溶液A和供试品溶液B。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，加甲醇制成1mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、纯化水，按乙酸乙酯－甲酸－纯化水(50:10:10)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液A、供试品溶液B各约5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上；将硅胶H薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图4所示。

图谱分析：由图4可知，对照品溶液色谱中，黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及 Rg1和甘草酸铵均不在同一高度；供试品溶液A色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷 Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点规则清晰。供试品溶液B色谱中无斑点。

结论：以供试品溶液B作为阴性对照，其结果可以证明本公开所提供的薄层鉴别方法对检测结果无干扰。本实施例的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好。

实施例6：保元汤提取物薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：取保元汤提取物1g，加水4ml，搅匀；加入正戊醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2次，每次 10ml，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液1。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，加甲醇制成1mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、纯化水，按乙酸乙酯－甲酸－纯化水(50:10:10)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液各约5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上；将硅胶G薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图5 所示。

图谱分析：由图5可知，对照品溶液色谱中，黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及 Rg1和甘草酸铵均不在同一高度；供试品溶液1色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷 Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，斑点规则清晰。

结论：本实施例的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re 及Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好。

对比例1

同实施例6，所不同的是本对比例的步骤1为：取保元汤提取物1g，加水4ml，搅匀；加入正丁醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加氨试液洗涤2次，每次10ml，弃去氨试液层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液2。结果如图5所示。

图谱分析：由图5可知，对照品溶液色谱中，黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及 Rg1和甘草酸铵均不在同一高度；但是供试品溶液2色谱中，在与甘草酸铵对照品色谱相应的位置上，无相同颜色的斑点。

结论：由实施例6和对比例1可知，虽然实施例6的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，但是用水洗涤上清液的实施例6的黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好，而用氨液洗涤上清液的对比例1无法在鉴定出人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷的同时鉴定出甘草酸铵。

对比例2

同实施例6，所不同的是本对比例的步骤1为：取保元汤提取物1g，加水4ml，搅匀；加入正丁醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2次，每次10ml，弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液3。结果如图5所示。

图谱分析：由图5可知，供试品溶液3色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、 Re及Rg1和甘草酸铵对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但是甘草酸铵显色不够明显。

结论：由实施例6和对比例2可知，虽然实施例6的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，但是以正戊醇为萃取剂的实施例6的黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，分离度良好，而以正丁醇为萃取剂的对比例2对甘草酸铵的鉴定效果不好。

对比例3

同实施例6，所不同的是本对比例的步骤3为：取三氯甲烷、甲醇、纯化水，按三氯甲烷－甲醇－纯化水(13:7:2)的体积比例，取下层溶液为展开剂溶液。步骤1 得到的供试品溶液记为供试品溶液4，结果如图6所示。

图谱分析：由图6可知，对照品溶液色谱中，甘草酸铵不显色，黄芪甲苷和人参皂苷Rg1在同一高度，存在干扰；供试品溶液4色谱中，与对照品溶液同高度的显色点附近斑点堆积，不易区分。

结论：由实施例6和对比例3可知，实施例6的供试品溶液利用对比例3的展开剂无法同时鉴定甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，即使能够同时鉴定出人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，也存在较大的干扰，不易区分。

对比例4

同对比例1，所不同的是本对比例的步骤3为：取三氯甲烷、甲醇、纯化水，按三氯甲烷－甲醇－纯化水(13:7:2)的体积比例，取下层溶液为展开剂溶液。步骤1 得到的供试品溶液记为供试品溶液5，结果如图6所示。

图谱分析：由图6可知，对照品溶液色谱中，甘草酸铵不显色，黄芪甲苷和人参皂苷Rg1在同一高度，存在干扰；供试品溶液5色谱中，与对照品溶液同高度的显色点附近斑点堆积，不易区分。

结论：由对比例1和对比例4可知，对比例1的供试品溶液利用对比例4的展开剂无法同时鉴定甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，即使能够同时鉴定出人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，也存在较大的干扰，不易区分。

对比例5

同对比例2，所不同的是本对比例的步骤3为：取三氯甲烷、甲醇、纯化水，按三氯甲烷－甲醇－纯化水(13:7:2)的体积比例，取下层溶液为展开剂溶液。步骤1 得到的供试品溶液记为供试品溶液6，结果如图6所示。

图谱分析：由图6可知，对照品溶液色谱中，甘草酸铵不显色，黄芪甲苷和人参皂苷Rg1在同一高度，存在干扰；供试品溶液6色谱中，与对照品溶液同高度的显色点附近斑点堆积，不易区分。

结论：由对比例2和对比例5可知，对比例2的供试品溶液利用对比例5的展开剂无法同时鉴定甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，即使能够同时鉴定出人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，也存在较大的干扰，不易区分。

综上所述，本发明只有在同时以正戊醇为萃取剂，以乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂，用水洗涤上清液时，才能够利用薄层色谱法同时鉴定出甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re 及Rg1和黄芪甲苷，且分离度高，分离效果好。

对比例6：保元汤口服液薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：供试品制备两组，A组取保元汤口服液10ml，B 组此处不加任何物质，然后两组分别加入正丁醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2次，每次10ml，弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，分别得到供试品溶液A和供试品溶液B。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、纯化水，按乙酸乙酯-甲酸- 纯化水(50:10:10)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液A、供试品溶液B各约5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上；将硅胶G薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图7所示。

图谱分析：由图7可知，供试品溶液A色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、 Re及Rg1和甘草酸铵对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但甘草酸铵的显色不明显；供试品B色谱中无斑点。

结论：以供试品溶液B作为阴性对照，其结果可以证明本对比例所提供的薄层鉴别方法对检测结果无干扰。本对比例的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，但对甘草酸苷的鉴定不明显。与实施例4相比，实施例4 的斑点更规则清晰，且各组分分离度更好，也即正戊醇的萃取效果优于正丁醇。

对比例7：保元汤口服液薄层鉴别方法

1)步骤1：供试品溶液制备：供试品制备两组，A组取保元汤口服液10ml，B 组此处不加任何物质，然后两组分别加入正丁醇10ml，超声处理20分钟，静置5分钟，分层，吸取上清液，加水洗涤2次，每次10ml，弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，分别得到供试品溶液A和供试品溶液B。

2)步骤2：对照品溶液制备：取甘草酸铵对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵溶液；取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成1mg/ml黄芪甲苷溶液；取人参皂苷Rb1、Re 及Rg1对照品，加甲醇制成1mg/ml甘草酸铵人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

3)步骤3：展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、纯化水，按乙酸乙酯－甲酸－纯化水(50:10:10)的体积比例，配成展开剂溶液。

4)步骤4：照《中国药典》通则薄层色谱法试验，用薄层点样器，吸取上述对照品溶液及供试品溶液A、供试品溶液B各约5μl，分别点于同一硅胶H薄层板上；将硅胶H薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及波长为365nm的紫外光灯下检视，结果如图8所示。

图谱分析：由图8可知，供试品溶液A色谱中，在与黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、 Re及Rg1和甘草酸铵对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但甘草酸铵的显色不明显；供试品B色谱中无斑点。

结论：以供试品溶液B作为阴性对照，其结果可以证明本对比例所提供的薄层鉴别方法对检测结果无干扰。本对比例的薄层色谱鉴别方法能够同时检测甘草酸铵、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷，且黄芪甲苷、人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵均不在同一高度，但对甘草酸苷的鉴定不明显。与实施例5相比，实施例5 的斑点更规则清晰，且各组分分离度更好，也即正戊醇的萃取效果优于正丁醇。

对比例8：药典鉴别人参的方法同时鉴别人参、黄芪、甘草

按照《中国药典》2015版中人参项下鉴别方法，制备样品并点样，展开结果如图9所示。

图谱分析：由图9可见，供试品溶液色谱中，在与甘草酸铵对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；但人参皂苷Rb1、Re及Rg1其中一个成分与黄芪甲苷对照品溶液的斑点高度接近，存在干扰，无法确认。

对比例9：药典鉴别甘草的方法同时鉴别人参、黄芪、甘草

按照《中国药典》2015版中甘草项下鉴别方法，制备样品并点样，结果如图10 所示。

图谱分析：由图10可知，对照品溶液色谱中，人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品溶液的斑点高度较低，接近点样原点，且其中一个成分与甘草酸铵对照品溶液的斑点高度接近，极易产生干扰；供试品溶液色谱中，在与人参皂苷Rb1、Re及Rg1和黄芪甲苷对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与甘草酸铵对照品溶液色谱相应位置上，无相同颜色的斑点，且供试品溶液未能完全展开。

对比例10：药典鉴别黄芪的方法同时鉴别人参、黄芪、甘草

按照《中国药典》2015版中黄芪项下鉴别方法，制备样品并点样，结果如下图 11所示。

图谱分析：由图11可知，人参皂苷Rb1、Re及Rg1与黄芪甲苷、甘草酸铵对照品溶液的斑点高度接近，极易产生干扰，供试品溶液色谱中，在与黄芪甲苷对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与人参皂苷Rb1、Re及Rg1和甘草酸铵对照品溶液色谱相应位置上，样品斑点显示不清晰，且分离度较差，难以确认。

以上3个对比例结果表明，药典鉴别人参、甘草和黄芪的三种方法不能同时对三味药材进行鉴别，或者效果非常差，说明三味药材的主要有效成分理化性质不同，若想将三味药材同时在一块薄层板上进行薄层鉴别，简单套用现有技术关于三味药材的薄层鉴别方法是不可行的。由此也说明本发明所提供的快速、简便的同时检测三味药材的薄层鉴别方法是需要经过创造性劳动获得的，并具有意想不到的技术效果。

Claims (10)

1.一种保元汤及其类似方提取物及制剂的薄层鉴别方法，其特征在于，所述薄层鉴别方法包括以下步骤：

步骤1)供试品溶液制备：保元汤及其类似方提取物或制剂中加入正戊醇萃取，超声处理，静置分层，上清液加水洗涤，弃去水层，正戊醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

步骤2)对照品溶液制备：分别制备甘草酸铵对照品溶液、黄芪甲苷对照品溶液和人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品混合溶液；

步骤3)展开剂溶液配制：取乙酸乙酯、甲酸、水，配成展开剂溶液；

步骤4)点样、展开、显色。

2.根据权利要求1的方法，其中，所述步骤1)中，所述正戊醇与所述保元汤及其类似方提取物或制剂的体积比为(1～5)：1；优选地，所述正戊醇与所述保元汤及其类似方提取物或制剂的体积比为(1～3)：1。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述超声处理时间为20-40分钟。

4.根据权利要求1-3任一项的方法，其中，所述步骤2)中，所述制备甘草酸铵对照品溶液为取甘草酸铵对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml甘草酸铵溶液；

优选地，所述制备黄芪甲苷对照品溶液为取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml黄芪甲苷溶液；

优选地，所述制备人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品混合溶液为取人参皂苷Rb1、Re及Rg1对照品，加甲醇制成0.5-3mg/ml人参皂苷Rb1、Re及Rg1混合溶液。

5.根据权利要求1-4任一项的方法，其中，所述步骤3)中，所述展开剂溶液中，乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(40-100)：(5-30)：(5-30)。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述展开剂溶液中，乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(40-60)：(5-20)：(5-20)。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述展开剂溶液中，乙酸乙酯：甲酸：水的体积比例为(45-55)：(5-15)：(5-15)。

8.根据权利要求1-7任一项的方法，其中，所述步骤4)中，所述点样步骤为用薄层点样器吸取上述对照品溶液及供试品溶液，分别点于同一薄层板上。

9.根据权利要求1-8任一项的方法，其中，所述步骤4)中，所述展开步骤为将薄层板置于展开缸中，以上述展开剂溶液展开，取出，晾干。

10.根据权利要求1-9任一项的方法，其中，所述步骤4)中，所述显色步骤为对晾干后的薄层板喷以10％硫酸乙醇溶液，在加热至斑点显色清晰后检视。

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