CN113866338B - 一种乳膏剂中地肤子鉴别方法 - Google Patents

一种乳膏剂中地肤子鉴别方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种乳膏剂中地肤子鉴别方法，包括如下步骤：1)供试品溶液的制备：将乳膏剂和水混合，加热，使其油水分离，取水液，用乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯液，用水饱和的正丁醇提取，合并正丁醇液，蒸干，蒸干后用水溶解，通过大孔树脂柱，洗脱，弃去洗脱液，最后用70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，得到供试品溶液；2)阳性对照品溶液和阴性对照品溶液的制备；3)薄层色谱法鉴别：将供试品溶液、阴性对照品溶液和阳性对照品溶液分别点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水的放置至少12小时的下层溶液为展开剂，以磷钼酸硫酸溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰，判断供试品中是否含有地肤子，本发明显色较为清晰，阴性对照无干扰。

Description

一种乳膏剂中地肤子鉴别方法
技术领域
本发明属于中药组分鉴别领域，具体是涉及到一种乳膏剂中地肤子鉴别方法。
背景技术
地肤子为藜科植物地肤子Kochia scoparia(L.)Schrad.的干燥成熟果实，中国药典2020版公开了其薄层色谱鉴别方法，即：
取本品粉末1g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品瑢液。另取地肤子皂苷Ⅰc对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同—硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(16：9：2)为展开剂，展开，取出，晾千，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点。
采用药典方法用于鉴别乳膏剂中地肤子时，其显色往往不清晰，导致难以有效的鉴别地肤子。
复方肤参止痒霜质量标准研究，彭芳辰等，中国药物与临床2019年4月第19卷第7期，公开了复方肤参止痒霜中地肤子的薄层色谱鉴别方法，取复方肤参止痒霜20ml，加丙酮30ml振摇，过滤，收集续滤液备用；取续滤液15ml，置水浴蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。按样品的制备工艺制备缺地肤子的阴性对照样品。取地肤子药材粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml密塞，称定重量，放置过夜，超声处理30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。取地肤子皂苷Ic的对照品，加入甲醇制备每1ml含有0.5mg的溶液，将其作为对照品的溶液。对以上4种溶液均分别吸取5μl，点在同一个硅胶G薄层板的上面，将三氯甲烷-甲醇-水(16∶9∶2)作为展开剂，展开并晾干之后，喷上10％的硫酸乙醇溶液，使用热风吹到斑点的显色比较清晰。供试品的色谱中，在和对照品的色谱所对应的位置上，显出相同的紫红色的斑点，阴性的对照溶液则没有出现相关斑点。这种方法和中国药典2015版的方法接近。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种乳膏剂中地肤子鉴别方法，显色较为清晰，阴性对照无干扰。
本发明的内容包括一种乳膏剂中地肤子鉴别方法，包括如下步骤：
1)供试品溶液的制备：将乳膏剂和水混合，加热，使其油水分离，取水液，用乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯液，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇液，蒸干，蒸干后用水溶解，通过大孔树脂柱，用水洗脱，弃去水液，然后依次用体积浓度为30％、50％的乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，得到供试品溶液；
2)阳性对照品溶液和阴性对照品溶液的制备；
3)薄层色谱法鉴别：将供试品溶液、阴性对照品溶液和阳性对照品溶液分别点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水的重量比为15：40：22：10的放置至少12小时的下层溶液为展开剂，以磷钼酸硫酸溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰，判断供试品中是否含有地肤子。
本发明的乳膏剂优选为止痒润肤乳，由当归、苦参、红花、桃仁、薄荷脑、大风子仁、地肤子、何首乌等组成。以上药味，除冰片外，其余当归等加水煎煮两次，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.20(25℃)的清膏；冰片研为细粉，过筛，备用。另将油相硬脂酸、凡士林、液体石蜡、单甘油酯、吐温80与水相氢氧化钾、甘油、蒸馏水分别加热至80℃，在搅拌下将水相加入油相中，冷却至40℃，加入对羟基苯甲酸乙酯，搅匀，制成基质。取上述药液，加热至50～60℃，加入基质中，搅拌，加入冰片细粉，搅匀，制成软膏，即得。
本发明的乳膏剂还可以为其他的止痒润肤乳，比如天下康千草王草本乳膏，只要乳膏剂中含有地肤子皂苷，都为本发明的检测对象。
优选的，乳膏剂和水混合后，加热的温度为95℃。
优选的，所述乳膏剂和乙酸乙酯的重量体积比为3g：1ml。
优选的，所述乳膏剂和水饱和的正丁醇的重量体积比为2g：3ml。
优选的，所述大孔树脂柱为D101大孔树脂柱。
优选的，乳膏剂和甲醇的重量体积比为60g：1ml。
优选的，阳性对照品溶液为地肤子皂苷Ic和甲醇混合，得到地肤子皂苷Ic含量为0.1mg/ml的溶液，为阳性对照品溶液。
优选的，阴性对照品溶液的制备方法为，将乳膏剂中除地肤子外的其他药味按照乳膏剂的制备方法制备得到缺地肤子的阴性样品，然后按照供试品的制备方法得到阴性对照品溶液。
优选的，三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水的放置温度为10℃以下。
优选的，以磷钼酸硫酸溶液为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰。
本发明的有益效果是，本发明通过加热的方式，使用乙酸乙酯萃取，将乳膏剂中的脂溶性成分和基质去除，使用正丁醇有效的富集皂苷类成分，使用大孔树脂分离纯化，去除黄酮类物质，富集地肤子皂苷，使用磷钼酸硫酸溶液相比硫酸乙醇，显色更清晰，灵敏度更高。
本发明具有以下优点：
①采用加热油水分离，可以去除乳膏剂当中的脂溶性基质。
②采用乙醚萃取，可以去除脂溶性成分杂质及进一步除去脂溶性基质。
③采用正丁醇萃取，可以初步富集目标鉴定皂苷类成分。
④采用大孔树脂分离纯化，可以去除黄酮类等其他成分，最大限度富集地肤子皂苷。
⑤本发明的展开剂配制方法得当，能排除色带干扰，显色更清晰，灵敏度更高。
⑥采用磷钼酸硫酸溶液显色，相比药典显色剂硫酸乙醇，磷钼酸硫酸显色更清晰，灵敏度更高。
附图说明
图1为实施例1的薄层色谱法显色图。
图2为对比例1的的薄层色谱法显色图。
图3为对比例2的的薄层色谱法显色图。
图4为对比例3的的薄层色谱法显色图。
图5为对比例4的的薄层色谱法显色图。
图6为对比例5的的薄层色谱法显色图。
其中，0为缺地肤子的阴性对照品溶液15μl，1为地肤子皂苷Ic的阳性对照品溶液5μl，3为供试品(批号20201019)15μl，4为供试品(批号20201020)15μl，5为供试品(批号20201021)15μl。
T：20～25℃，RH：40～65％，展距：8～9cm，薄层板：预制硅胶G板。
具体实施方式
实施例1
本品为止痒润肤乳，由当归、苦参、红花、桃仁、薄荷脑、大风子仁、地肤子、何首乌等组成。以上药味，除冰片外，其余当归等加水煎煮两次，水煎液滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.20(25℃)的清膏；冰片研为细粉，过筛，备用。另将油相硬脂酸、凡士林、液体石蜡、单甘油酯、吐温80与水相氢氧化钾、甘油、蒸馏水分别加热至80℃，在搅拌下将水相加入油相中，冷却至40℃，加入对羟基苯甲酸乙酯，搅匀，制成基质。取上述药液，加热至50～60℃，加入基质中，搅拌，加入冰片细粉，搅匀，制成软膏，即得。
取本品60g，加水10ml，置于95℃以上的水浴锅里彻底油水分离，取水液，用20ml乙酸乙酯萃取一次，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取三次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，蒸干后残渣加水10ml溶解，通过D101大孔树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，用100ml水洗，弃去水液，再用体积浓度为30％乙醇60ml，体积浓度为50％乙醇60ml洗脱，弃去洗脱液，最后用体积浓度为70％乙醇60ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解作为供试品溶液。
取地肤子皂苷Ic对照品，加甲醇制成每l ml含0.1mg的溶液，作为阳性对照品溶液。
按处方配比称取除地肤子外的其他药味适量，照制法制成缺地肤子的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备缺地肤子的阴性对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取阴性对照品溶液15μl，阳性对照品溶液5μl，供试品溶液15μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水的重量比为15：40：22：10在10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，分别喷以磷钼酸硫酸溶液溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，在于日光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点供试品色谱，且阴性没干扰，见图1。
对比例1
取本品60g，加甲醇100ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇2ml使溶解作为供试品溶液。
取地肤子皂苷Ic对照品，加甲醇制成每l ml含0.1mg的溶液，作为阳性对照品溶液。
阴性对照品溶液同实施例1。
照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取对照品溶液及对照药材溶液5μl，供试品溶液15μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—甲醇—水(重量比为16∶9∶2)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置于日光灯下拍摄。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，供试品色谱中未显相同的紫红色斑点，见图2。
对比例2
取本品60g，加水10ml，置于95℃以上的水浴锅里彻底油水分离，取水液，用乙酸乙酯萃取2次，每次25ml，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使之溶解作为供试品溶液。
取地肤子皂苷Ic对照品，加甲醇制成每l ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性对照品溶液同实施例1。
照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取对照品溶液5μl，供试品溶液15μl分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷—甲醇—水(16∶9∶2)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在于日光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，未显相同的紫红色斑点，见图3。
对比例3
取本品60g，加水10ml，置于95℃以上的水浴锅里彻底油水分离，取水液，用20ml乙酸乙酯萃取一次，弃去乙酸乙酯液，再用水饱和的正丁醇振摇提取三次，每次30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，蒸干后加10ml水溶解，通过D101大孔树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，用100ml水洗，弃去水液，再用30％乙醇60ml，50％乙醇60ml洗脱，弃去洗脱液，最后用70％乙醇60ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解作为供试品溶液。
取地肤子皂苷Ic对照品，加甲醇制成每l ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性对照品溶液同实施例1。
照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取阴性对照溶液15μl，对照品溶液5μl，供试品溶液15μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水(15：40：22：10)10℃以下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且阴性没干扰，但斑点不如实例1清晰。见图4。
对比例4
同实施例1相比，区别在于：供试品溶液的制备方法中，通过D101大孔树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)后，用100ml水洗，弃去水液，再用体积浓度为20％乙醇60ml，体积浓度为40％乙醇60ml洗脱，弃去洗脱液，最后用体积浓度为70％乙醇60ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加1ml甲醇溶解作为供试品溶液，其他同实施例1相同，得到的薄层色谱法显色图如图5所示。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，斑点不清晰。
对比例5
同实施例1相比，展开剂为三氯甲烷—甲醇—水(重量比为16∶9∶2)，其他同实施例1相同，得到的薄层色谱法显色图如图6所示。供试品色谱及对照品色谱斑点均不清晰。
所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本公开的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本申请中一个或多个实施例的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。
本申请中一个或多个实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本申请中一个或多个实施例的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本公开的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种乳膏剂中地肤子鉴别方法，其特征是，包括如下步骤：
1)供试品溶液的制备：将乳膏剂和水混合，加热，使其油水分离，取水液，用乙酸乙酯萃取，弃去乙酸乙酯液，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇液，蒸干，蒸干后用水溶解，通过大孔树脂柱，用水洗脱，弃去水液，然后依次用体积浓度为30％、50％的乙醇洗脱，弃去洗脱液，最后用70％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解，得到供试品溶液；
2)阳性对照品溶液和阴性对照品溶液的制备；
3)薄层色谱法鉴别：将供试品、阴性对照品和阳性对照品溶液分别点于硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水的重量比为15：40：22：10的放置至少12小时的下层溶液为展开剂，以磷钼酸硫酸溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰，判断供试品中是否含有地肤子；
乳膏剂和水混合后，加热的温度为95℃；
所述乳膏剂和乙酸乙酯的重量体积比为3g：1ml；
所述乳膏剂和水饱和的正丁醇的重量体积比为2g：3ml；
所述大孔树脂柱为D101大孔树脂柱；
乳膏剂和甲醇的重量体积比为60g：1ml。
2.如权利要求1所述的乳膏剂中地肤子鉴别方法，其特征是，阳性对照品溶液为地肤子皂苷Ic和甲醇混合，得到地肤子皂苷Ic含量为0.1mg/ml的溶液，为阳性对照品溶液。
3.如权利要求1所述的乳膏剂中地肤子鉴别方法，其特征是，阴性对照品溶液的制备方法为，将乳膏剂中除地肤子外的其他药味按照乳膏剂的制备方法制备得到缺地肤子的阴性样品，然后按照供试品的制备方法得到阴性对照品溶液。
4.如权利要求1所述的乳膏剂中地肤子鉴别方法，其特征是，三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—水的放置温度为10℃以下。
5.如权利要求1所述的乳膏剂中地肤子鉴别方法，其特征是，以磷钼酸硫溶液为显色剂，105℃加热至斑点显色清晰。
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