CN110187032A - 一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法 - Google Patents

一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，包括有以下步骤：步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液；步骤2）：取杜仲药材处理成絮状后，得到待测样品；步骤3）：依次以三氯甲烷和甲醇提取待测样品后用甲醇溶解，得到供试品溶液；步骤4）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量；色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为体积比为25：75的甲醇‑水溶液；检测波长277nm；进样量10uL；本发明采取的技术方案解决了解决目前在测定杜仲含量时对杜仲检测方法所得到的谱图均存在色谱峰性不佳，杂峰较多的问题。

Description

一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法
技术领域
本发明涉及药品成份含量检测领域，具体涉及一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法。
背景技术
杜仲为杜仲科植物杜仲的干燥树皮，又名思仙、思仲、木棉，为我国名贵滋补药材。杜仲作为中药在我国已有2000多年的药用历史，具有补肝肾、强筋骨、降血压、抗肿瘤、安胎等诸多功效，《神农本草经》将其列为上品。目前已知杜仲的主要化学成分有木质素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类等几十种化合物，研究表明其中部分活性成分桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷、绿原酸、京尼平苷酸、京尼平苷具有抗肿瘤、降血压、抗菌、抗血栓等药理作用。杜仲药材中含有大量的杜仲胶，而杜仲胶是影响杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定的主要因素，目前在测定杜仲含量时，存在样品处理时间长，检测方法所得到的谱图均存在色谱峰型不佳，杂峰较多且系统适用性试验不易通过等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，解决目前在测定杜仲含量时对杜仲检测方法所得到的谱图均存在色谱峰型不佳，样品处理时间长、杂峰较多等问题。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，包括有以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液；
步骤2）：取杜仲药材处理成絮状后，得到待测样品；
步骤3）：依次用杜仲胶提取液和松脂醇二葡萄糖苷提取液提取待测样品后，用甲醇溶解待测样品，得到供试品溶液；
步骤4）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-磷酸（14：86:0.3）的溶液为流动相；检测波长277nm；进样量10uL；
进一步的，步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取松脂醇二葡萄苷对照品，加入甲醇制成没1mL甲醇含有0.5mg的松脂醇二葡萄糖苷的溶液，即得到松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液；
进一步的，步骤3）松脂醇二葡萄糖苷提取液为甲醇；杜仲胶提取液为三氯甲烷；
进一步的，步骤3）包括：
步骤S1：精密称定0.2g待测样品，置平底蒸馏烧瓶中，加150mL甲醇，置水浴上加热回流2.5h；
步骤S2：滤过，滤液蒸干，残渣以30mL水分3次，每次10mL溶解，并转移至分液漏斗中，以三氯甲烷萃取3次，每次20mL，弃去三氯甲烷液。
步骤S3：水液蒸干，以适量甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到供试品溶液；
进一步的，步骤S1中，甲醇加热回流时的温度在80℃～85℃，保持微沸；
进一步的，步骤4）中，色谱检测的色谱柱的温度为30℃～35℃；
进一步的，步骤4）中，色谱柱理论塔板数按松脂醇二葡萄糖苷计算≥2000；
更进一步的技术方案是步骤4）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、杜仲的特性质脆，易折断，断面有细密、银白色、富弹性的橡胶丝相连，粉碎处理困难，所含物质松脂醇二葡萄糖苷在橡胶丝含量高于皮部，对杜仲进行处理成絮状后，加热回流处理样品更能让有效物质的释放，对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将有效成分从样品中溶解出来；
2、加热回流是直接对提取物进行加热,提取效能比索氏提取器高，大大缩短了提取时间，也降低了能耗；采取先提取后萃取的处理顺序，除杂更彻底，减少了杂峰干扰。
3、采用合适的色谱检测条件，检测得到的谱图峰型好，柱效高，系统适用性试验更容易通过；
4、通过选择合适的检测条件，使得该HPLC测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量的分离度、准确性、重现性、稳定性等都满足标准要求。
附图说明
图1为对照品溶液的色谱图。
图2为供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于，包括有以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液；
步骤2）：取杜仲药材处理成絮状后，得到待测样品；
步骤3）：依次用杜仲胶提取液和松脂醇二葡萄糖苷提取液提取待测样品后，用甲醇溶解待测样品，得到供试品溶液；
步骤4）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水-磷酸（14：86:0.3）溶液；检测波长277nm；进样量10uL。
杜仲的特性质脆，易折断，断面有细密、银白色、富弹性的橡胶丝相连，粉碎处理困难，所含物质松脂醇二葡萄糖苷在橡胶丝含量高于皮部，对杜仲进行处理成絮状后，加热回流处理样品更能让有效物质的释放，对有效成分溶解度大而对其他成分溶解度小的溶剂，将有效成分从样品中溶解出来。
步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取松脂醇二葡萄苷对照品，加入甲醇制成没1mL甲醇含有0.5mg的松脂醇二葡萄糖苷的溶液，即得到松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液；
步骤3）中杜仲胶提取液为三氯甲烷；所述的松脂醇二葡萄糖苷提取液为甲醇。
三氯甲烷能够有效提取杜仲药材中的杜仲胶，甲醇能够有效提取松脂醇二葡萄糖苷，分别使用两种提取液，有利于降低杜仲胶对检测的影响，提高检测结果的准确性。
步骤3）包括：
步骤S1：精密称定0.2g待测样品，置平底蒸馏烧瓶中，加150mL甲醇，置水浴上加热回流2.5h；
步骤S2：滤过，滤液蒸干，残渣以30mL水分3次，每次10mL溶解，并转移至分液漏斗中，以三氯甲烷萃取3次，每次20mL，弃去三氯甲烷液；
步骤S3：水液蒸干，以适量甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到供试品溶液。
步骤S1中，甲醇加热回流时的温度在80℃～85℃，保持微沸。
步骤4）中，色谱检测的色谱柱的温度为30℃～35℃。
步骤4）中，色谱柱理论塔板数按松脂醇二葡萄糖苷计算≥2000。
步骤4）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
实施例2：一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于，包括有以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液；
步骤2）：取杜仲药材处理成絮状后，得到待测样品；
步骤3）：依次用杜仲胶提取液和松脂醇二葡萄糖苷提取液提取待测样品后，得到供试品溶液；
步骤4）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为体积比为25：75的甲醇-水溶液；检测波长277nm；进样量10uL。
步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取松脂醇二葡萄苷对照品，加入甲醇制成每1mL甲醇含有0.5mg的松脂醇二葡萄糖苷的溶液，即得到松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液；
步骤3）中杜仲胶提取液为三氯甲烷；所述的松脂醇二葡萄糖苷提取液为丙酮。
步骤3）包括：
步骤S1：精密称定0.2g待测样品，置索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6h过滤；
步骤S2：弃去三氯甲烷液，滤渣挥去三氯甲烷，再置于索氏提取器中，加入丙酮，加热回流6h；
步骤S3：回收丙酮后，转移至10mL容量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得到供试品溶液。
步骤S1中，杜仲胶提取液加热回流时的温度在60℃～65℃，保持微沸。
步骤S2中，松脂醇二葡萄糖苷提取液加热回流时的温度在64℃～70℃，保持微沸。
步骤4）中，色谱检测的色谱柱的温度为20℃～30℃。
步骤4）中，色谱柱理论塔板数按松脂醇二葡萄糖苷计算≥1000。
步骤4）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
实施例3：一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于，包括有以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液；
步骤2）：取杜仲药材处理成絮状后，得到待测样品；
步骤3）：依次用杜仲胶提取液和松脂醇二葡萄糖苷提取液提取待测样品后，得到供试品溶液；
步骤4）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为体积比为25：75的甲醇-水溶液；检测波长277nm；进样量10uL。
步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取松脂醇二葡萄苷对照品，加入甲醇制成没1mL甲醇含有0.5mg的松脂醇二葡萄糖苷的溶液，即得到松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液。
步骤3）中杜仲胶提取液为三氯甲烷；所述的松脂醇二葡萄糖苷提取液为正丁醇。
步骤3）包括：
步骤S1：精密称定0.2g待测样品，置索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6h过滤；
步骤S2：弃去三氯甲烷液，滤渣挥去三氯甲烷，再置于索氏提取器中，加入正丁醇，加热回流6h；
步骤S3：回收正丁醇后，转移至10mL容量瓶中，加丙酮至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得到供试品溶液。
步骤S1中，杜仲胶提取液加热回流时的温度在60℃～65℃，保持微沸。
步骤S2中，松脂醇二葡萄糖苷提取液加热回流时的温度在64℃～70℃，保持微沸。
步骤4）中，色谱检测的色谱柱的温度为20℃～30℃。
步骤4）中，色谱柱理论塔板数按松脂醇二葡萄糖苷计算≥1000。
步骤4）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开和权利要求的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变形和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。

Claims (8)

1.一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于，包括有以下步骤：
步骤1）：以甲醇溶液为溶剂制备松脂醇二葡萄糖苷的对照品溶液；
步骤2）：取杜仲药材处理成絮状后，得到待测样品；
步骤3）：依次用杜仲胶提取液和松脂醇二葡萄糖苷提取液提取待测样品后，用甲醇溶解待测样品，得到供试品溶液；
步骤4）：采用高效液相色谱法测定对照品溶液和供试品溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量；
色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-水-磷酸（14：86:0.3）溶液；检测波长277nm；进样量10uL。
2.根据权利要求1所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤1）中制备对照品溶液的具体操作为：精密称取松脂醇二葡萄苷对照品，加入甲醇制成没1mL甲醇含有0.5mg的松脂醇二葡萄糖苷的溶液，即得到松脂醇二葡萄糖苷对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤3）中；所述的松脂醇二葡萄糖苷提取液为甲醇；杜仲胶提取液为三氯甲烷。
4.根据权利要求3所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤3）包括：
步骤S1：精密称定0.2g待测样品，置平底蒸馏烧瓶中，加150mL甲醇，置水浴上加热回流2.5h；
步骤S2：滤过，滤液蒸干，残渣以30mL水分3次，每次10mL溶解，并转移至分液漏斗中，以三氯甲烷萃取3次，每次20mL，弃去三氯甲烷液；
步骤S3：水液蒸干，以适量甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得到供试品溶液。
5.根据权利要求4所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤S1中，甲醇加热回流时的温度在80℃～85℃，保持微沸。
6.根据权利要求1所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤4）中，色谱检测的色谱柱的温度为30℃～35℃。
7.根据权利要求1所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤4）中，色谱柱理论塔板数按松脂醇二葡萄糖苷计算≥2000。
8.根据权利要求1所述的一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法，其特征在于：步骤4）中色谱检测的洗脱方式为等度洗脱。
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