CN106680399B - 一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法 - Google Patents
一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106680399B CN106680399B CN201710048155.6A CN201710048155A CN106680399B CN 106680399 B CN106680399 B CN 106680399B CN 201710048155 A CN201710048155 A CN 201710048155A CN 106680399 B CN106680399 B CN 106680399B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- morroniside
- loganin
- fructus corni
- acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- YTZSBJLNMIQROD-SFBCHFHNSA-N Morroniside Chemical compound O([C@@H]1OC=C([C@H]2C[C@H](O)O[C@@H](C)[C@H]21)C(=O)OC)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O YTZSBJLNMIQROD-SFBCHFHNSA-N 0.000 title claims abstract description 186
- YTZSBJLNMIQROD-UHFFFAOYSA-N (4aS)-1c-beta-D-glucopyranosyloxy-6xi-hydroxy-8t-methyl-(4ar,8ac)-5,6,8,8a-tetrahydro-1H,4aH-pyrano[3,4-c]pyran-4-carboxylic acid methyl ester Natural products C12C(C)OC(O)CC2C(C(=O)OC)=COC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O YTZSBJLNMIQROD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 93
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 title claims abstract description 80
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 title claims abstract description 80
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 title claims abstract description 73
- JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N Epioleonolsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4CCC3C21C JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N Oleanolic acid Natural products CC1(C)CC2C3=CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC4(C)C3(C)CCC2(C1)C(=O)O YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N Oleanolinsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- 229940100243 oleanolic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 73
- HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N prosapogenin PS-A Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(O)=O)CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OCC(O)C(O)C1O HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N (3beta)-3-hydroxyurs-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C WCGUUGGRBIKTOS-GPOJBZKASA-N 0.000 title claims abstract description 72
- 229940096998 ursolic acid Drugs 0.000 title claims abstract description 72
- PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N ursolic acid Natural products CC1CCC2(CCC3(C)C(C=CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C)C2C1C)C(=O)O PLSAJKYPRJGMHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 72
- AMBQHHVBBHTQBF-UHFFFAOYSA-N Loganin Natural products C12C(C)C(O)CC2C(C(=O)OC)=COC1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O AMBQHHVBBHTQBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 68
- AMBQHHVBBHTQBF-UOUCRYGSSA-N loganin Chemical compound O([C@@H]1OC=C([C@H]2C[C@H](O)[C@H](C)[C@H]21)C(=O)OC)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AMBQHHVBBHTQBF-UOUCRYGSSA-N 0.000 title claims abstract description 68
- -1 Fructus Corni Chemical compound 0.000 title claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 39
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 29
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 116
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 57
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 18
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims description 14
- GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N gamma-cyclodextrin Chemical group OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO GDSRMADSINPKSL-HSEONFRVSA-N 0.000 claims description 13
- 229940080345 gamma-cyclodextrin Drugs 0.000 claims description 13
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 11
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 9
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 claims description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 241000918728 Monotes Species 0.000 claims 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 9
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 8
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 31
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 241001656831 Arctous alpina Species 0.000 description 5
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 5
- 244000107975 Strychnos nux-vomica Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- UGWAFWFSLCHCJD-UHFFFAOYSA-N Cornuside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(C=C)C(CCOC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(C(O)=O)=CO1 UGWAFWFSLCHCJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008845 cholagoga Substances 0.000 description 1
- 229940124571 cholagogue Drugs 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-MRCIVHHJSA-N dextrin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-MRCIVHHJSA-N 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 150000002373 hemiacetals Chemical group 0.000 description 1
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 1
- LHVVWWADJUJFEH-HKNOZQPISA-N hexadecanoic acid (9Z,12Z)-octadeca-9,12-dienoic acid octadecanoic acid (9Z,12Z,15Z)-octadeca-9,12,15-trienoic acid (Z)-octadec-9-enoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O.CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O LHVVWWADJUJFEH-HKNOZQPISA-N 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229930182489 iridoid glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 1
- SMTKSCGLXONVGL-ZEIULZLQSA-N methyl (2r,3s,4r)-3-ethenyl-4-[2-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxyethyl]-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydro-2h-pyran-5-carboxylate Chemical compound O([C@H]1OC=C([C@@H]([C@@H]1C=C)CCOC(=O)C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)C(=O)OC)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SMTKSCGLXONVGL-ZEIULZLQSA-N 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000003648 triterpenes Chemical class 0.000 description 1
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
本发明提供了一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法，首先在超声条件下，采用极性有机溶剂对待测样品进行提取，得到提取液；然后将得到的提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量。采用本发明提供的方法能够实现同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量，且分离度好、灵敏度高、重复性高、回收率较高，为以此5种活性成分为质量检测指标的制剂提供了有效的检测手段。
Description
技术领域
本发明涉及有效成分测定技术领域，具体涉及一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法。
背景技术
保肝剂是以中药材山茱萸为主经提取获得的制剂，主要活性成分为莫诺苷(morroniside)、马钱苷(1oganin)、山茱萸新苷(cornuside)、齐墩果酸(oleanolic acid)和熊果酸(ursolic acid)。其中，莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷属于环烯醚萜苷类化合物(Iridoids)，具有降糖降脂、保肝利胆、抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗氧化以及调节心血管系统和消化系统等药理活性；齐墩果酸和熊果酸属于有机酸类化合物，是一对结构类似的五环三萜类同分异构体，能够通过降低血清中丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)活性、阻止胸腺萎缩、增加超氧化物歧化酶表达、降低丙二醛含量，减轻肝细胞肿胀、灶性坏死和汇管区炎细胞浸润等病理形态学损伤来改善肝功能，进而起到对抗由刀豆蛋白A(ConA)诱导的急性免疫性肝损伤的作用。
基于莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸对肝细胞的保护与再生作用，将这5种活性成分作为保肝剂的活性质控成分。但是，齐墩果酸和熊果酸是一对结构相近的同分异构体，且水溶性极差，在乙腈与0.1％磷酸为流动相梯度洗脱时，两峰重叠不能分开；同时，齐墩果酸和熊果酸与莫诺苷、马钱苷和山茱萸新苷的结构、性质差异较大，进一步增加了同时检测这5种活性成分含量的难度。现有技术中没有同时检测这5种活性成分含量的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法，该方法分离度好、灵敏度高、重复性高、回收率较高，为以此5种活性成分为质量检测指标的制剂提供了有效的检测手段。
本发明提供了一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法，包括以下步骤：
(1)在超声条件下，采用极性有机溶剂对待测样品进行提取，得到提取液；
(2)将所述步骤(1)得到的提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量；其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2～3mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％；
梯度洗脱程序：0～10min，流动相A由10％增加至13％；10～11min，流动相A由13％增加至15％；11～15min，流动相A由15％增加至20％；15～39min，流动相A由20％增加至42％；39～42min，流动相A由42％增加至55％；42～46min，流动相A由55％增加至60％；46～76min，流动相A由60％增加至85％；
检测器：VWD检测器。
优选的，所述步骤(1)中超声的功率为200～300W。
优选的，所述步骤(1)中超声的频率为35～45kHz。
优选的，所述步骤(1)中超声的温度为25～35℃。
优选的，所述步骤(1)中超声的时间为25～35min。
优选的，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析前，将所述提取液过0.22μm微孔滤膜。
优选的，所述步骤(2)中流动相的体积流量为0.8～1.2mL/min。
优选的，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析时采用分段变波长测定，所述分段变波长测定的程序为：[0，15)min，检测波长为240nm，[15，40)min，检测波长为218nm，[40，56)min，检测波长为360nm，[56，76]min，检测波长为210nm。
优选的，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析时采用的色谱柱为Zorbax SB-C18柱。
优选的，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析时的柱温为25～35℃。
本发明提供了一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法，首先在超声条件下，采用极性有机溶剂对待测样品进行提取，得到提取液；然后将得到的提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量。采用本发明提供的方法能够实现同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量。本发明提供的方法分离度好，各组分的分离均能达到基线分离，尤其能够将莫诺苷的两种环口差向异构体成功分离为两个独立的色谱峰(分离度R＝2.2)，且能够实现齐墩果酸和熊果酸完全分离(分离度R≥3.0)；灵敏度高，根据信噪比(S/N)为3得到5种活性成分的最低检测限分别为莫诺苷0.247mg/L、马钱苷0.294mg/L、山茱萸新苷0.0593mg/L、齐墩果酸2.28mg/L、熊果酸2.76mg/L；重复性高，对同一批样品进行6次平行测定，结果显示莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD分别为1.29％、1.43％、1.39％、1.57％和1.64％；回收率较高，加样回收率试验中，莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别为96.97％、95.89％、97.99％、96.65％、97.46％，RSD分别为1.79％、1.57％、1.91％、1.85％、1.77％。本发明提供的方法为以此5种活性成分为质量检测指标的制剂提供了有效的检测手段。
附图说明
图1为莫诺苷的两种环口差向异构体的色谱图；
图2为未除去干扰峰的混合对照品溶液的色谱图；
图3为除去干扰峰的混合对照品溶液的色谱图；
图4为保肝剂样品的色谱图；
图5为未除去干扰峰的流动相色谱图；
图6为除去干扰峰的流动相色谱图；
图7为不含γ-环糊精的流动相的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法，包括以下步骤：
(1)在超声条件下，采用极性有机溶剂对待测样品进行提取，得到提取液；
(2)将所述步骤(1)得到的提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量；其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2～3mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％；
梯度洗脱程序：0～10min，流动相A由10％增加至13％；10～11min，流动相A由13％增加至15％；11～15min，流动相A由15％增加至20％；15～39min，流动相A由20％增加至42％；39～42min，流动相A由42％增加至55％；42～46min，流动相A由55％增加至60％；46～76min，流动相A由60％增加至85％；
检测器：VWD检测器。
本发明在超声条件下，采用极性有机溶剂对待测样品进行提取，得到提取液。在本发明的实施例中，具体选择保肝剂(液体制剂)作为样品，将所述保肝剂进行蒸干处理，然后将得到的残余物作为待测样品进行提取。本发明对于所述蒸干处理所采用的蒸干方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的蒸干方式即可。本发明优选采用水浴蒸干。
本发明对于进行提取时采用的超声条件没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的超声条件即可。在本发明中，所述超声的功率优选为200～300W，更优选为230～270W；所述超声的频率优选为35～45kHz，更优选为38～42kHz；所述超声的温度优选为25～35℃，更优选为28～32℃；所述超声的时间优选为25～35min，更优选为28～32min。
本发明对于进行提取时采用的极性有机溶剂的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的能够用于提取莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的色谱纯极性有机溶剂即可。本发明优选采用乙醇对待测样品进行提取。在本发明的实施例中，具体采用体积百分含量为85％的乙醇水溶液作为提取剂。为了保证检测结果的准确性，在本发明的实施例中，具体是将待测样品与体积百分含量为85％的乙醇水溶液混合，称重，提取结束后，用体积百分含量为85％的乙醇水溶液填补提取过程中损失的质量，得到提取液。
得到提取液后，本发明将所述提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量；其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2～3mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％；
梯度洗脱程序：0～10min，流动相A由10％增加至13％；10～11min，流动相A由13％增加至15％；11～15min，流动相A由15％增加至20％；15～39min，流动相A由20％增加至42％；39～42min，流动相A由42％增加至55％；42～46min，流动相A由55％增加至60％；46～76min，流动相A由60％增加至85％；
检测器：VWD检测器。
进行高效液相色谱分析前，本发明优选将所述提取液过0.22μm微孔滤膜。
本发明优选在进行高效液相色谱分析前，对莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸对照品进行紫外扫描测试，结果表明，莫诺苷和马钱苷的最大紫外吸收波长为240nm，山茱萸新苷的最大紫外吸收波长为218nm，齐墩果酸和熊果酸的最大紫外吸收波长为210nm。但是，为了完全能分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸，在流动相B中添加的γ-环糊精会于46.215min、49.831min及53.083min出现3个大的干扰峰；为了除去干扰峰，本发明优选在[40，56)min，检测波长为360nm，在不影响5种活性成分含量测定的情况下能够达到去除干扰峰的目的，而且谱图外观漂亮。
进行高效液相色谱分析时，本发明优选采用分段变波长测定，所述分段变波长测定的程序优选为：[0，15)min，检测波长为240nm，[15，40)min，检测波长为218nm，[40，56)min，检测波长为360nm，[56，76]min，检测波长为210nm。
在本发明中，所述流动相的体积流量优选为0.8～1.2mL/min，更优选为1.0mL/min。
在本发明中，进行高效液相色谱分析时采用的色谱柱优选为Zorbax SB-C18柱。
在本发明中，进行高效液相色谱分析时的柱温优选为25～35℃，更优选为30℃。
在本发明中，进行高效液相色谱分析时的进样量优选为3μL。
将所述提取液进行高效液相色谱分析后，本发明根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量。在本发明中，所述莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线为莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的质量含量与色谱峰面积的标准曲线。
在本发明中，建立莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸标准曲线的方法优选包括以下步骤：
提供不同浓度的莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液；
将所述不同浓度的混合对照品溶液分别进行高效液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，峰面积对浓度作线性方程，分别得到莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的标准曲线。
本发明首先提供不同浓度的莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸混合对照品溶液。本发明对于所述混合对照品溶液中溶剂的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的用于配制所述混合对照品溶液的溶剂即可。在本发明的实施例中，具体采用乙醇为溶剂。
本发明对于配制混合对照品溶液的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的配制溶液的技术方案即可。在本发明的实施例中，具体是分别精密称取莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸对照品1.6、3.6、1.4、1.6、2.0mg，采用乙醇为溶剂，配成1.2mL的混合对照品溶液；将所得混合对照品溶液进行倍比稀释，得到不同稀释浓度的混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中莫诺苷的质量浓度分别为1333.33、666.67、333.33、166.67、83.33、41.67、20.83、10.42mg/L，马钱苷的质量浓度分别为3000.00、1500.00、750.00、375.00、187.5、93.75、46.88、23.44mg/L，山茱萸新苷的质量浓度分别为1166.67、583.33、291.67、145.03、72.92、36.46、18.23、9.11mg/L，齐墩果酸的质量浓度分别为1333.33、666.67、333.33、166.67、83.33、41.67、20.83、10.42mg/L，熊果酸的质量浓度分别为1666.67、833.33、416.67、208.33、104.17、52.08、26.04、13.02mg/L。
得到不同稀释浓度的混合对照品溶液后，按照所述混合对照品溶液的质量浓度从大到小依次排列，本发明优选采用后6个质量浓度的混合对照品溶液分别进行高效液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，峰面积对浓度作线性方程，得到莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸标准曲线。
本发明优选将所述混合对照品溶液过0.22μm微孔滤膜后，再进行高效液相色谱分析。在本发明中，所述高效液相色谱分析的条件优选与本申请上述技术方案中测定待测样品时采用的高效液相色谱分析的条件一致。在本发明的实施例中，所述高效液相色谱分析的条件具体如下：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％；
梯度洗脱程序：0～10min，流动相A由10％增加至13％；10～11min，流动相A由13％增加至15％；11～15min，流动相A由15％增加至20％；15～39min，流动相A由20％增加至42％；39～42min，流动相A由42％增加至55％；42～46min，流动相A由55％增加至60％；46～76min，流动相A由60％增加至85％；
分段变波长测定的程序：[0，15)min，检测波长为240nm，检测莫诺苷和马钱苷；[15，40)min，检测波长为218nm，检测山茱萸新苷；[40，56)min，检测波长为360nm，去除流动相的干扰峰；[56，76]min，检测波长为210nm，检测齐墩果酸和熊果酸；
色谱柱：Zorbax SB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃；
进样量：3μL；
高效液相色谱仪：Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括四元泵(G1311C)、自动进样器(G1329B)、VWD检测器(G1314F)和色谱工作站。
莫诺苷的结构式如下：
文献(Bock K.,Jensen S.R.,Nielsen B.J..Acta Chem.Scand.B,1976,30(8):743-748)指出，化合物莫诺苷的分子结构在第7位存在半缩醛结构，由于7-OH可有不同的取向，能够形成两种构型，称为环口差向异构体。莫诺苷的两种环口差向异构体在常温溶液中可相互转化，从而形成动态平衡。莫诺苷的两种环口差向异构体在本发明提供的色谱条件下成功分离为两个独立的色谱峰(分离度R＝2.2)，分别记为莫诺苷1和莫诺苷2，见图1，图1中1为莫诺苷1，2为莫诺苷2。本发明利用Agilent 1260型高效液相色谱仪提供的化合物组功能分析软件，能够得到莫诺苷1和莫诺苷2的标准曲线。
在本发明的实施例中，所述莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的标准曲线方程、相关系数和线性范围具体见下表：
其中，C分别为莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的质量浓度，A分别对应莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱图峰面积积分值。
根据所述莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的标准曲线，可以得到提取液中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的质量含量，进而得到样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量。其中，所述莫诺苷以环口差向异构体形式存在，记为莫诺苷1和莫诺苷2，所述莫诺苷1和莫诺苷2的总浓度为莫诺苷的真实浓度。本发明利用Agilent 1260型高效液相色谱仪提供的化合物组功能分析软件，能够得到提取液中莫诺苷的真实质量含量，进而得到样品中莫诺苷的真实含量。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
(1)标准曲线的建立
对照品莫诺苷(批号20150617)、山茱萸新苷(批号20140529)、马钱苷(批号20150112)、齐墩果酸(批号20150826)和熊果酸(批号20150727)均购自上海源叶生物科技有限公司，质量分数均≥98.0％。
分别精密称取莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸对照品1.6、3.6、1.4、1.6、2.0mg，采用乙醇为溶剂，配成1.2mL的混合对照品溶液；将所得混合对照品溶液进行倍比稀释，得到不同稀释浓度的混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中莫诺苷的质量浓度分别为1333.33、666.67、333.33、166.67、83.33、41.67、20.83、10.42mg/L，马钱苷的质量浓度分别为3000.00、1500.00、750.00、375.00、187.5、93.75、46.88、23.44mg/L，山茱萸新苷的质量浓度分别为1166.67、583.33、291.67、145.03、72.92、36.46、18.23、9.11mg/L，齐墩果酸的质量浓度分别为1333.33、666.67、333.33、166.67、83.33、41.67、20.83、10.42mg/L，熊果酸的质量浓度分别为1666.67、833.33、416.67、208.33、104.17、52.08、26.04、13.02mg/L；
按照所述混合对照品溶液的质量浓度从大到小依次排列，将后6个质量浓度的混合对照品溶液过0.22μm微孔滤膜，然后分别进行高效液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，峰面积对浓度作线性方程，得到莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸标准曲线；其中，所述高效液相色谱分析的条件具体如下：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％；
梯度洗脱程序：0～10min，流动相A由10％增加至13％；10～11min，流动相A由13％增加至15％；11～15min，流动相A由15％增加至20％；15～39min，流动相A由20％增加至42％；39～42min，流动相A由42％增加至55％；42～46min，流动相A由55％增加至60％；46～76min，流动相A由60％增加至85％
分段变波长测定的程序：[0，15)min，检测波长为240nm，检测莫诺苷和马钱苷；[15，40)min，检测波长为218nm，检测山茱萸新苷；[40，56)min，检测波长为360nm，去除流动相的干扰峰；[56，76]min，检测波长为210nm，检测齐墩果酸和熊果酸；
色谱柱：Zorbax SB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温30℃；
进样量：3μL；
高效液相色谱仪：Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括四元泵(G1311C)、自动进样器(G1329B)、VWD检测器(G1314F)和色谱工作站。
所述莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的标准曲线方程、相关系数和线性范围见表1：
表1莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的标准曲线方程、相关系数和线性范围
表1中，C分别为莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的质量浓度，A分别对应莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的高效液相色谱图峰面积积分值。
在上述高效液相色谱分析的条件下，根据信噪比(S/N)为3得到5种活性成分的最低检测限分别为莫诺苷0.247mg/L、马钱苷0.294mg/L、山茱萸新苷0.0593mg/L、齐墩果酸2.28mg/L、熊果酸2.76mg/L。
(2)提取液的制备
以保肝剂作为样品，所述保肝剂是由天津市第一中心医院重点实验室自行研制、以中药材山茱萸为主制备得到的液体制剂，批号分别为20150316、20150629、20150716、20150817、20150929和20160316；所述山茱萸药材(产品批号131203)购自中国安国市昌达中药材饮片有限公司。
取保肝剂1mL置于聚乙烯塑料管中，水浴蒸干，加入体积百分含量为85％的乙醇水溶液1mL，称重；在250W、40kHz、30℃条件下超声提取30min，用体积百分含量为85％的乙醇填补损失的质量，得到提取液。
(3)高效液相色谱分析
将所得提取液过0.22μm微孔滤膜，按照建立标准曲线时的高效液相色谱条件对过滤后的提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与提取液的液相色谱图，可以得到提取液中各化合物的质量含量，进而得到保肝剂样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量。
图2～7分别为混合对照品溶液、保肝剂样品以及流动相的高效液相色谱图，图2～7中，1为莫诺苷1、2为莫诺苷2、3为马钱苷、4为山茱萸新苷、5为齐墩果酸、6为熊果酸；A为46.215min干扰峰；B为49.831min干扰峰；C为53.083min干扰峰。
为了能够完全分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸，在流动相B中添加的2mmol/L的γ-环糊精会于46.215min、49.831min及53.083min出现3个干扰峰；在[40，56)min，检测波长为360nm，能够达到去除干扰峰的目的。图2为未除去干扰峰的混合对照品溶液的色谱图，其中，在[40，56)min，检测波长为210nm，如图2所示，保留时间为46.215min、49.831min及53.083min处出现3个干扰峰。图3为除去干扰峰的混合对照品溶液的色谱图，即在[40，56)min，检测波长为360nm，如图3所示，保留时间为46.215min、49.831min及53.083min处的干扰峰消失。说明本发明提供的技术方案能够在不影响5种活性成分含量测定的情况下成功去除干扰峰，而且色谱图外观漂亮。
图4为保肝剂样品的色谱图，由图4可知，莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸各组分的分离均能达到基线分离，峰形对称，分离度好。
图5为未除去干扰峰的流动相色谱图，其中，进样流动相中流动相A和流动相B的体积比为1：1(其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％)，在[40，56)min，检测波长为210nm；图6为除去干扰峰的流动相色谱图，其中，进样流动相中流动相A和流动相B的体积比为1：1(其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％)，在[40，56)min，检测波长为360nm；图7为不含γ-环糊精的流动相的色谱图，其中，进样流动相中流动相A和流动相B的体积比为1：1(其中，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分含量为0.1％磷酸水溶液)，在[40，56)min，检测波长为210nm。图5～7佐证了干扰峰确为γ-环糊精所为；除此以外，未见其它干扰峰相扰。
(4)精密度试验
取含莫诺苷41.67mg/L、马钱苷93.75mg/L、山茱萸新苷36.46mg/L、齐墩果酸41.67mg/L和熊果酸52.08mg/L的混合对照品溶液，在步骤(3)所述高效液相色谱条件下连续进样6次，结果莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为1.36％、1.41％、1.26％、1.62％和1.77％，说明本发明提供的技术方案具有较好的精密度。
(5)稳定性试验
取同一批保肝剂(批号20160316)作为样品，按照步骤(2)所述方法处理后，分别在0、4、8、12、24、48h按照步骤(3)所述高效液相色谱条件进样测定，结果莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD分别为1.22％、1.37％、1.25％、1.51％和1.46％，说明所述样品在48h内稳定。
(6)重复性试验
取同一批保肝剂(批号20160316)作为样品，按照步骤(2)所述方法平行制备6份提取液，按照步骤(3)所述高效液相色谱条件进样测定，结果莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸峰面积的RSD分别为1.29％、1.43％、1.39％、1.57％和1.64％，说明本发明提供的技术方案具有较好的重复性。
(7)加样回收率试验
取已测定的保肝剂(批号20160316)1mL，平行9份，分为3组，每组中分别加入0.1mL混合对照品溶液(莫诺苷的质量浓度分别为166.67、83.33、41.67mg/L、马钱苷的质量浓度分别为375、187.5、93.75mg/L、山茱萸新苷的质量浓度分别为145.03、72.92、36.46mg/L、齐墩果酸的质量浓度分别为166.67、83.33、41.67mg/L和熊果酸的质量浓度分别为208.33、104.17、52.08mg/L)，按照步骤(2)所述方法处理后，再按照步骤(3)所述高效液相色谱条件进样测定。结果莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的平均回收率分别为96.97％、95.89％、97.99％、96.65％、97.46％，RSD分别为1.79％、1.57％、1.91％、1.85％、1.77％。
(8)样品测定
取6批保肝剂样品(批号分别为20150316、20150629、20150716、20150817、20150929、20160316)各1mL，按照步骤(2)所述方法处理后，再按照步骤(3)所述高效液相色谱条件进样测定，结果见表2。由表2可知，6批保肝剂中含莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的平均质量浓度分别在659.9～683.0、849.1～869.1、93.0～96.0、163.21～169.9、84.6～87.0mg/L。
表2保肝剂样品测定结果
从以上实施例可以看出，采用本发明提供的方法能够实现同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量，且分离度好、灵敏度高、重复性高、回收率较高，为以此5种活性成分为质量检测指标的制剂提供了有效的检测手段。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法，包括以下步骤：
(1)在超声条件下，采用极性有机溶剂对待测样品进行提取，得到提取液；所述待测样品为保肝剂；
(2)将所述步骤(1)得到的提取液进行高效液相色谱分析，根据莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的标准曲线与待测样品的液相色谱图，得到待测样品中莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸的含量；其中，所述高效液相色谱的色谱条件为：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为乙腈；流动相B为γ-环糊精的磷酸水溶液，所述流动相B中γ-环糊精的摩尔浓度为2～3mmol/L，磷酸的体积百分含量为0.1％；
梯度洗脱程序：0～10min，流动相A由10％增加至13％；10～11min，流动相A由13％增加至15％；11～15min，流动相A由15％增加至20％；15～39min，流动相A由20％增加至42％；39～42min，流动相A由42％增加至55％；42～46min，流动相A由55％增加至60％；46～76min，流动相A由60％增加至85％；
检测器：VWD检测器；
色谱柱：Zorbax SB-C18柱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声的功率为200～300W。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声的频率为35～45kHz。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声的温度为25～35℃。
5.根据权利要求1、2或4所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声的时间为25～35min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析前，将所述提取液过0.22μm微孔滤膜。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中流动相的体积流量为0.8～1.2mL/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析时采用分段变波长测定，所述分段变波长测定的程序为：[0，15)min，检测波长为240nm，[15，40)min，检测波长为218nm，[40，56)min，检测波长为360nm，[56，76]min，检测波长为210nm。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中进行高效液相色谱分析时的柱温为25～35℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710048155.6A CN106680399B (zh) | 2017-01-20 | 2017-01-20 | 一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710048155.6A CN106680399B (zh) | 2017-01-20 | 2017-01-20 | 一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106680399A CN106680399A (zh) | 2017-05-17 |
| CN106680399B true CN106680399B (zh) | 2019-01-22 |
Family
ID=58860802
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710048155.6A Expired - Fee Related CN106680399B (zh) | 2017-01-20 | 2017-01-20 | 一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106680399B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110559688A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-13 | 浙江工业大学 | 一种分离同分异构体齐墩果酸和熊果酸的方法 |
| CN111024877A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-17 | 扬州市食品药品检验检测中心 | 益肾壮骨丸中的中药成分检测方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100999536A (zh) * | 2006-12-29 | 2007-07-18 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 一种山茱萸环烯醚萜苷类提取物同时提取及检测方法 |
| CN103175924A (zh) * | 2013-03-15 | 2013-06-26 | 陕西师范大学 | 同时测定山茱萸多种有效成分含量的新方法 |
| CN104147079A (zh) * | 2014-07-09 | 2014-11-19 | 陕西师范大学 | 超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷及其提取和测定方法 |
| CN104991002A (zh) * | 2015-07-01 | 2015-10-21 | 陕西师范大学 | 一种利用uflc快速测定山茱萸6种成分的方法 |
-
2017
- 2017-01-20 CN CN201710048155.6A patent/CN106680399B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN100999536A (zh) * | 2006-12-29 | 2007-07-18 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 一种山茱萸环烯醚萜苷类提取物同时提取及检测方法 |
| CN103175924A (zh) * | 2013-03-15 | 2013-06-26 | 陕西师范大学 | 同时测定山茱萸多种有效成分含量的新方法 |
| CN104147079A (zh) * | 2014-07-09 | 2014-11-19 | 陕西师范大学 | 超声-微波协同提取的山茱萸环烯醚萜苷及其提取和测定方法 |
| CN104991002A (zh) * | 2015-07-01 | 2015-10-21 | 陕西师范大学 | 一种利用uflc快速测定山茱萸6种成分的方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| RP-HPLC-ELSD同时测定山茱萸中马钱苷、齐墩果酸与熊果酸的含量;胡荣 等;《中药材》;20100131;第33卷(第1期);第70-72页 |
| RP-HPLC同时测定护肝剂中9种活性成分;刘宏胜 等;《中草药》;20160331;第47卷(第6期);第933-937页 |
| 山茱萸药材HPLC指纹图谱的优化研究;杨宁 等;《药物分析杂志》;20141231;第34卷(第11期);第1989-1994页 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106680399A (zh) | 2017-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105738546B (zh) | 毛郁金药材指纹图谱的建立方法及其指纹图谱 | |
| CN106680399B (zh) | 一种同时测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、齐墩果酸和熊果酸含量的方法 | |
| CN101966223A (zh) | 一种复方扶芳藤制剂的指纹图谱检测方法 | |
| CN109884232A (zh) | 一种艾纳香中挥发性成分的分析方法 | |
| CN1850193A (zh) | 橘红枇杷胶囊的制备方法及其质量控制技术 | |
| CN106198832A (zh) | 一种强力枇杷露的生产质量控制方法 | |
| CN106198810B (zh) | 一种具有治疗肿瘤放化疗骨髓抑制的中药组合物的质量检测方法 | |
| CN103630614B (zh) | 养血清脑颗粒的高效液相色谱检测方法 | |
| CN105891403A (zh) | 地乌药材hplc-uv特征图谱构建方法 | |
| CN112666277B (zh) | 一种香附药材、饮片、标准汤剂、配方颗粒hplc特征图谱的构建及检测方法 | |
| CN101816753B (zh) | 一种治疗感冒的复方制剂的质量检测方法 | |
| CN107449848A (zh) | 一种鉴别化妆品原料中拉瑞阿提取物的方法 | |
| CN105842381A (zh) | 芪骨胶囊的检测方法 | |
| CN109212121A (zh) | 红参药材指纹图谱及其与制剂成分关联性的构建方法 | |
| CN105486761A (zh) | 一种中药颗粒剂中黄芩苷的含量测定方法 | |
| CN109100432A (zh) | 羊耳菊提取物中九种有效成分在Caco-2细胞模型中摄取和转运机制的研究方法 | |
| CN107389827A (zh) | 益母草或其复方制剂中盐酸水苏碱含量的测定方法 | |
| Zhang et al. | Simultaneous determination of saponins in Radix Glycyrrhizae, Notoginseng and Ginseng by high performance liquid chromatography | |
| CN111398505B (zh) | 同时检测一种治疗小儿遗尿症中药的五种成分含量的方法 | |
| CN107064402B (zh) | 一种益气养血、补肾壮阳的药物制剂的检测方法 | |
| Ghosh et al. | Development and validation of dissolution test method for andrographolide from film coated polyherbal tablet formulation | |
| CN114720568A (zh) | 一种太子参药材的指纹图谱建立方法及其应用 | |
| Rumalla et al. | Quantitative HPTLC analysis of phenylpropanoids in Rhodiola species | |
| CN102095817A (zh) | 胡芦巴酊中胡芦巴碱的测定方法 | |
| CN110187032A (zh) | 一种杜仲药材中松脂醇二葡萄糖苷含量的测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190122 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |