CN106370738A

CN106370738A - 一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法

Info

Publication number: CN106370738A
Application number: CN201610688610.4A
Authority: CN
Inventors: 刘越飞; 耿福能; 沈咏梅
Original assignee: SICHUAN GOOD DOCTOR PANXI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SICHUAN GOOD DOCTOR PANXI PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2016-08-18
Filing date: 2016-08-18
Publication date: 2017-02-01
Anticipated expiration: 2036-08-18
Also published as: CN106370738B

Abstract

本发明涉及一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。本发明建立的美洲大蠊药材的指纹图谱色谱峰的分离度好，检测时间合理，重复性和稳定性好。与现有报道的美洲大蠊药材指纹图谱技术相比，本发明提高了对美洲大蠊原料药材的质量控制水平。本发明使用的指纹图谱技术能更有效地评价和控制美洲大蠊原料药材质量，保证了在一定制备工艺条件下，所得美洲大蠊提取物的质量稳定，从而能进一步有效的控制由美洲大蠊提取物制成的包含但不仅限于康复新片、康复新胶囊、康复新液、心脉隆及肝龙胶囊等制剂的质量。

Description

一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法

技术领域

本发明涉及一种中药材的质量测定方法，特别涉及一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。

背景技术

美洲大蠊药材收载于《云南省药品标准》1996年版。美洲大蠊药材主要含有神经肽类、核苷类、氨基酸类、多糖等成分，已经被开发成多种制剂，如康复新液、肝龙胶囊、心脉隆及消症益肝片等。专利号CN101320027公布了一种美洲大蠊药材及其提取物的指纹图谱质量测定方法，该方法中美洲大蠊药材供试品溶液的制备方法过于繁琐，且耗时长，势必会导致样品检测的误差，降低分析的精确度，且所建立的指纹图谱信息量小，难以对成分复杂的美洲大蠊药材得到较为全面的表征。因此本文通过建立简便的美洲大蠊样品前处理方法，同时又能反映更多信息的HPLC指纹图谱，以期为较为全面的评价和控制美洲大蠊药材的质量提供参考。

发明内容

本发明的目的在于公开一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法。

本发明是通过如下技术方案实现的。

本发明美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，该方法包括如下步骤：

(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过40-60目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；

(b)供试品溶液的制备：精密称取药渣1～5重量份，置于锥形瓶中，加入20％～80％乙醇30～150体积份，于50℃超声处理0.5～3h，放冷，减压蒸馏出乙醇后，将药渣转移至25～100体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；

(c)对照品溶液的制备：精密称取尿嘧啶，加水制成每1mL含尿嘧啶15μg的溶液，备用；

(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。

步骤(b)供试品溶液的制备优选为：精密称定药渣1重量份，置于锥形瓶中，加入40％乙醇30体积份，于50℃超声处理1h，放冷，减压蒸馏出乙醇，后转移至25体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。

高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0-3min，3％B-5％B；3min-15min，5％B-10％B；15min-20min，10％B-30％B；20min-30min，30B％-50％B；30min-40min，50B％-60％B；40min-50min，60B％-3％B，检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.45mL/min；理论板数按尿嘧啶计算不低于5000。

美洲大蠊药材共有13个共有指纹峰，参照峰S为尿嘧啶色谱峰，13个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.417±0.042，2号峰0.624±0.062，3号峰0.827±0.083，4(S)号峰1.000±0.000，5号峰1.426±0.143，6号峰1.632±0.163，7号峰1.933±0.193，8号峰1.983±0.198，9号峰2.717±0.272，10号峰2.929±0.293，11号峰3.135±0.314，12号峰3.268±0.327，13号峰3.664±0.366。

本发明的优点如下：

1.本发明确定了美洲大蠊乙醇提取物最优提取条件，为美洲大蠊开发利用制成各种制剂提供参考依据。

2.本发明提供的指纹图谱质量测定方法分离度好，重复性及稳定性好。

3.本发明提供的指纹图谱有13个共有峰，可作为鉴别美洲大蠊乙醇提取液的特征性指纹图谱，并可对美洲大蠊药材进行鉴别真伪和质量控制。

具体实施方式

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1

(1)仪器及试药

LC-6AD高效液相色谱仪(日本岛津公司)，KQ5200超声清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)，RE-52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

无水乙醇为分析纯，甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，自制超纯水。

美洲大蠊样品由四川好医生攀西药业有限责任公司提供。

(2)美洲大蠊乙醇提取物提取条件的考察

a.样品前处理

取美洲大蠊虫体的干燥样品用粉碎机粉碎成粉末状，过40-60目筛，除去较大的颗粒。在浸渍样品前先除去所含的脂类物质，减少其对试验的影响。用石油醚处理前，将待测样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管内。采用索氏提取方法，往提取瓶内加入石油醚，加热提取瓶，石油醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝聚成液滴滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，直到提取管内凝成液体的石油醚澄清后，倒出药渣，并将药渣挥干。美洲大蠊乙醇提取物质不溶于石油醚，提取液与药渣易分离，静置所得溶液澄清，提取分离工艺简单，耗时短。

b.提取方法考察

准确称取1.0g美洲大蠊粉末3份分别置于100mL锥形瓶中，加入85％乙醇10mL浸渍并密封瓶口，分别对3份样品按以下条件处理：①冷浸12h，②冷浸12h、室温超声60min，③冷浸12h、60℃超声60min，条件②和③处理样品静置冷却至室温。再对4份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇得到美洲大蠊提取物的水溶液，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。4份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，计算美洲大蠊样品全部吸收峰的峰面积见表1。结果表明在条件③下超声提取美洲大蠊化学成分全部吸收峰的峰面积积分最大，即这种方法提取物的所含化学成分最多。与传统的冷浸法相比，超声提取法操作简单、快速、提取效率高。

表1 美洲大蠊不同提取方法峰面积积分

提取方法	①	②	③
				峰面积积分	16644500	22266817	27160763

c.提取温度考察

准确称取1.0g美洲大蠊粉末5份分别置于100mL锥形瓶中，加入85％乙醇10mL并密封瓶口浸渍12h，分别对5份样品在以下温度超声提取60min并静置冷却至室温：①室温，②40℃，③50℃，④60℃，⑤70℃。再对5份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇得到美洲大蠊提取物的水溶液，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。5份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，计算美洲大蠊样品全部吸收峰的峰面积见表2。结果表明在条件③下超声提取美洲大蠊化学成分全部吸收峰的峰面积积分最大，因此确定后续实验中的提取温度为50℃。

表2 美洲大蠊不同提取温度峰面积积分

提取温度	①	②	③	④	⑤
						峰面积积分	22266817	24145291	29219297	27160763	27292103

d.提取时间考察

准确称取1.0g美洲大蠊粉末4份分别置于100mL锥形瓶中，加入85％乙醇10mL并密封瓶口浸渍12h，分别对4份样品在以下提取时间50℃超声并静置冷却至室温：①30min，②45min，③60min，④75min。再对4份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇得到美洲大蠊提取物的水溶液，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。4份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，计算美洲大蠊样品全部吸收峰的峰面积见表3。结果表明在条件③下超声提取美洲大蠊化学成分全部吸收峰的峰面积积分接近条件④。

表3 美洲大蠊不同提取时间峰面积积分

提取时间	①	②	③	④
					峰面积积分	23308637	27358717	29990255	30180345

e.乙醇浓度考察

准确称取1.0g美洲大蠊粉末10份分别置于100mL锥形瓶中，分别加入以下不同浓度乙醇10mL并密封瓶口浸渍12h：①10％乙醇，②20％乙醇，③30％乙醇，④40％乙醇，⑤50％乙醇，⑥60％乙醇，⑦70％乙醇，⑧80％乙醇，⑨90％乙醇，⑩100％乙醇，对这10份样品50℃超声60min并静置冷却至室温。再对10份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。10份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，计算美洲大蠊样品全部吸收峰的峰面积见表4，不同乙醇浓度对各吸收峰峰面积影响见表5。结果表明当乙醇浓度达到20％时，提取所得美洲大蠊提取物积分峰面积最大，因此总的化学成分含量也应最多。但分别对13个吸收峰的峰面积计算，发现5、6号峰的峰面积随着乙醇浓度增加而减少，其余11吸收峰总体是先增加后减少，在乙醇浓度为40％时，这11个吸收峰各自的峰面积积分最大，故选用40％乙醇作为提取时的最佳浓度。

表4 美洲大蠊不同乙醇提取浓度峰面积积分

乙醇浓度	①	②	③	④	⑤
						峰面积积分	71023485	83590134	78568848	73156861	62805621
乙醇浓度	⑥	⑦	⑧	⑨	⑩
						峰面积积分	47029532	38428693	35878110	30156626	13531549

表5 不同乙醇浓度对各吸收峰峰面积影响

f.料液比考察

准确称取6份各1.0g美洲大蠊粉末分别置于100mL锥形瓶中，加入以下质量体积比例的40％乙醇并密封瓶口浸渍12h，①1:10，②1:15，③1:20，④1:25，⑤1:30，⑥1:35，对这6份样品50℃超声60min并静置冷却至室温。再对6份样品进行抽滤获得澄清溶液，用旋转蒸发仪进行减压蒸馏挥发出乙醇得到美洲大蠊提取物的水溶液，将其转移至25mL容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀。6份样品各取100μL稀释溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，各取10μL依次注入高效液相色谱仪进行分析，对不同料液比所得色谱图计算美洲大蠊样品吸收峰的峰面积见表6。结果表明第6个共有峰随着料液比的增加显著增加，料液比为1:30时，除了11号吸收峰的峰面积积分有所减少外，其余12个吸收峰的各自峰面积积分总体达到最大，能够把化学成分充分提取出来。

表6 不同料液比对各吸收峰峰面积积分影响

Peak	①	②	③	④	⑤	⑥
							01	79935	101452	100081	123126	127125	95155
02	147066	166885	178135	200204	245407	214841
							03	84133	86433	98936	110447	116250	110885
04	283116	318181	321659	367720	363124	345710
							05	107857	110159	151623	180458	199020	172128
06	13132171	14103795	17599965	25647159	26112629	25423036
							07	618073	696896	766379	769053	774631	779306
08	108406	123036	129671	145439	144359	143138
							09	238901	246803	284017	324283	323377	331932
10	1204434	1290686	1459506	1554269	1792981	1402641
							11	553261	545147	540099	538305	515069	463252
12	62419	78471	79824	84988	89248	87658
							13	452460	469626	504063	579038	666969	647220

(3)色谱条件

美洲大蠊药材的HPLC指纹图谱的色谱条件如下：LC-6AD高效液相色谱仪，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为0.1％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)梯度洗脱(条件如表7所示)，分析时间50min，流速0.45mL/min，检测波长254nm，柱温25℃，进样量10μL。

表7 色谱洗脱条件

(4)指纹图谱

根据10美洲大蠊药材HPLC图谱所给出的相关参数，美洲大蠊药材按前述制备方法进行测定所得的主要色谱峰在45分钟内出现。比较各批样品的色谱图发现有13个峰是各批次共有的，由此建立标准指纹图谱。

(5)共有指纹峰的标定

对10批美洲大蠊药材供试品指纹图谱分析，以尿嘧啶(4号峰)作为内参比峰，定为S峰，以峰的共有率大于80％为依据，标定了13个峰，分别为1号峰(0.417)，2号峰(0.624)，3号峰(0.827)，4号峰(1.000)，5号峰(1.426)，6号峰(1.632)，7号峰(1.933)，8号峰(1.983)，9号峰(2.717)，10号峰(2.929)，11号峰(3.135)，12号峰(3.268)，13号峰(3.664)。以此作为共有指纹峰标定的依据，允许相对偏差为±10％。

(6)共有指纹峰相对保留时间

10批美洲大蠊药材供试品指纹图谱中，共有指纹峰的相对保留时间见表8。

表8 美洲大蠊药材共有指纹峰相对保留时间(n＝10)

10批美洲大蠊药材相对保留时间的RSD均小于2.0％，显示各批次样品的一致性较好。

(7)共有指纹峰相对峰面积

10批美洲大蠊药材供试品指纹图谱中，共有指纹峰的相对峰面积见表9。13个共有峰相对峰面积的RSD值均小于2％，表明各共有峰的相对含量符合中国药典对中药制剂HPLC指纹图谱的要求。

表9 美洲大蠊药材共有指纹峰相对峰面积(n＝10)

(8)非共有峰面积

除去不经柱保留的峰，计算了10批供试品的非共有峰总面积占总峰面积的比例，结果见表10。各批美洲大蠊药材非共有峰总面积占总面积的比例均小于10％，符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》的规定。

表10 美洲大蠊药材的非共有峰总面积占总峰面积的百分比(n＝10)

批号	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
											所占比例	7.43	6.72	7.56	7.42	7.35	5.90	7.68	6.90	7.43	7.13

(9)美洲大蠊药材指纹图谱相似性评价

将10批次美洲大蠊药材的高效液相原始数据以及通过面积归一化法的积分数据导入浙大版中药指纹图谱相似度计算软件。采用夹角余弦法计算10批次美洲大蠊药材之间的相似度，结果表明10批次美洲大蠊药材相似度都较高，最小值为0.990。

(10)精密度实验

取本发明美洲大蠊药材供试品溶液为测定对象，在本发明所述的色谱条件下，连续测定6次，记录各共有色谱峰的相对保留时间及相对峰面积，结果见表11～12。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和峰面积的RSD均小于2％。证明仪器的精密度良好，符合HPLC指纹图谱技术要求。

表11 美洲大蠊药材精密度试验相对保留时间

表12 美洲大蠊药材精密度试验相对峰面积

(11)重现性实验

取本发明美洲大蠊药材供试品6份，在本发明所述色谱条件下进行分析，记录相关数据。以参照物尿嘧啶的保留时间为参照，换算出各共有峰的相对保留时间及峰面积的比值，结果见表13～14。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2％，表明该方法的重现性良好，符合指纹图谱技术要求。

表13 美洲大蠊药材重现性试验相对保留时间

表14 美洲大蠊药材重现性试验相对峰面积

(12)稳定性实验

取本发明美洲大蠊药材供试品溶液为测定对象，在本发明所述的色谱条件下，分别在0、2、4、6、8、12h进行检测，记录相关数据。以参照物尿嘧啶的保留时间为参照，换算出各共有峰的相对保留时间及峰面积的比值，结果见表15～16。结果表明，各色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％，证明样品在12h内稳定，符合HPLC指纹图谱技术要求。

表15 美洲大蠊药材稳定性试验相对保留时间

表16 美洲大蠊药材稳定性试验相对峰面积

实施例2

(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过40目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；

(b)供试品溶液的制备：精密称定药渣1重量份，置于锥形瓶中，加入40％乙醇30体积份，于50℃超声处理1h，放冷，减压蒸馏出乙醇，后转移至25体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；

(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以0.08％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。

高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；0.08％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0-3min，3％B-5％B；3min-15min，5％B-10％B；15min-20min，10％B-30％B；20min-30min，30B％-50％B；30min-40min，50B％-60％B；40min-50min，60B％-3％B，检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.45mL/min；理论板数按尿嘧啶计算不低于5000。

美洲大蠊药材共有13个共有指纹峰，参照峰S为尿嘧啶色谱峰，13个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.419，2号峰0.628，3号峰0.829，4(S)号峰1.000，5号峰1.426，6号峰1.633，7号峰1.933，8号峰1.984，9号峰2.719，10号峰2.930，11号峰3.135，12号峰3.269，13号峰3.665。

实施例3

(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过60目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；

(b)供试品溶液的制备：精密称取药渣5重量份，置于锥形瓶中，加入80％乙醇150体积份，于50℃超声处理3h，放冷，减压蒸馏出乙醇后，将药渣转移至100体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；

(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。

高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0-3min，3％B-5％B；3min-15min，5％B-10％B；15min-20min，10％B-30％B；20min-30min，30B％-50％B；30min-40min，50B％-60％B；40min-50min，60B％-3％B，检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.45mL/min；理论板数按尿嘧啶计算不低于5000。

美洲大蠊药材共有13个共有指纹峰，参照峰S为尿嘧啶色谱峰，13个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.419，2号峰0.628，3号峰0.829，4(S)号峰1.000，5号峰1.433，6号峰1.642，7号峰1.944，8号峰1.985，9号峰2.719，10号峰2.934，11号峰3.141，12号峰3.269，13号峰3.670。

实施例4

(a)样品前处理：取美洲大蠊干燥样品粉碎并过50目筛后，将所得样品包在脱脂滤纸包内，放入提取管中，往提取瓶内加入石油醚，采用索氏提取方法，去除美洲大蠊样品中的油脂，倒出药渣，并将药渣挥干；

(b)供试品溶液的制备：精密称取药渣3重量份，置于锥形瓶中，加入20％乙醇100体积份，于50℃超声处理0.5h，放冷，减压蒸馏出乙醇后，将药渣转移至50体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用；

(d)测定：吸取供试品与对照品溶液各10μl注入高效液相色谱仪，以1.0％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到美洲大蠊药材的指纹图谱。

高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；1.0％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0-3min，3％B-5％B；3min-15min，5％B-10％B；15min-20min，10％B-30％B；20min-30min，30B％-50％B；30min-40min，50B％-60％B；40min-50min，60B％-3％B，检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.45mL/min；理论板数按尿嘧啶计算不低于5000。

美洲大蠊药材共有13个共有指纹峰，参照峰S为尿嘧啶色谱峰，13个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.425，2号峰0.634，3号峰0.831，4(S)号峰1.000，5号峰1.423，6号峰1.630，7号峰1.937，8号峰1.973，9号峰2.720，10号峰2.935，11号峰3.141，12号峰3.272，13号峰3.674。

Claims

1.一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于：步骤(b)供试品溶液的制备优选为：精密称定药渣1重量份，置于锥形瓶中，加入40％乙醇30体积份，于50℃超声处理1h，放冷，减压蒸馏出乙醇，后转移至25体积份量瓶中，加水定容摇匀，溶液置于离心机5000rpm离心5分钟，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，备用。

3.根据权利要求1所述的一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0-3min，3％B-5％B；3min-15min，5％B-10％B；15min-20min，10％B-30％B；20min-30min，30B％-50％B；30min-40min，50B％-60％B；40min-50min，60B％-3％B，检测波长为254nm；柱温为25℃；流速为0.45mL/min；理论板数按尿嘧啶计算不低于5000。

4.根据权利要求1、2所述的一种美洲大蠊药材的指纹图谱质量测定方法，其特征在于：美洲大蠊药材共有13个共有指纹峰，参照峰S为尿嘧啶色谱峰，13个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.417±0.042，2号峰0.624±0.062，3号峰0.827±0.083，4(S)号峰1.000±0.000，5号峰1.426±0.143，6号峰1.632±0.163，7号峰1.933±0.193，8号峰1.983±0.198，9号峰2.717±0.272，10号峰2.929±0.293，11号峰3.135±0.314，12号峰3.268±0.327，13号峰3.664±0.366。