CN102743598A - 一种叠鞘石斛提取物及其配方颗粒 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种叠鞘石斛提取物及其制备方法：它是采用醇水双提法进行提取后，再浓缩、干燥制备得到叠鞘石斛提取物。本发明还提供了一种叠鞘石斛配方颗粒及其制备方法。本发明叠鞘石斛提取物的制备方法，通过对提取工艺条件参数的有机组合，能够较为完全的提取叠鞘石斛中的各种有效成分，石斛酚的转移率达到80%以上，不仅保证了叠鞘石斛提取物与原药材药效物质基础的一致性，有利于后期制备配方颗粒，还有效避免了药材资源的浪费。

Description

一种叠鞘石斛提取物及其配方颗粒

技术领域

本发明涉及一种叠鞘石斛提取物及其配方颗粒。

背景技术

石斛，是著名的补阴中药，具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳、益肾明目等功效。现代研究表明，具有抗肿瘤、增强机体免疫能力、抗血小板凝集、改善视力、扩张血管、抗氧化等作用。石斛属Dendrobium为兰科最大的属之一，全世界共有一千五百多种，广泛分布于亚洲、欧洲及大洋洲等热带及亚热带地区。我国约有76种，主要分布于西南、华东及华南地区。由于石斛属植物种类多，目前报道的可作药用的石斛属植物约有30多种，石斛不同种，化学成分含量也不相同，药效上有较大的差异。为了保障药效和用药安全性，201 0年版《中国药典》限定的石斛药用品种中，记载“铁皮石斛、金钗石斛、鼓槌石斛、流苏石斛及近似种的新鲜或干燥茎”，仅明确记载了上述四种石斛，其余近似种还有待进一步研究。

叠鞘石斛Dendrobium aurantiacum Rchb.f.var.denneanum(Kerr.)Z.H.si是四川历史悠久的道地药材，除有野生资源分布，在夹江、彭州等地，目前主要是产业化人工栽培。现代研究发现，叠鞘石斛中主要含香豆素类、联苄类及多糖类等成分。郑卫平等对我国云南西双版纳的叠鞘石斛的化学成分进行了初步的研究，从中分离得到8个单体化合物，经波谱学方法确定为香豆素，2,5-二甲基-4-甲氧基菲，4,4'-二羟基-3,3,5-三甲氧基二苄，2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯，反式对羟基肉桂酸三十烷酯，3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十八烷酯，胡萝卜苷，均为首次从该种植物中分得。杨莉等对叠鞘石斛中联苄类成分进行了定性定量分析。具有抗肿瘤、抗血小板凝聚、抗氧化等活性，其中石斛酚和杓唇石斛素的相对含量较高，药理试验报道，其具有较好的抗诱变活性。罗傲雪等对川产叠鞘石斛进行抗肿瘤和增强免疫功能的研究，结果叠鞘石斛多糖能极显著的促进荷瘤小鼠的免疫功能恢复，是叠鞘石斛中具有抗肿瘤作用的主要活性成分。罗傲霜等研究了叠鞘石斛多糖对动物血糖的调节作用，结果叠鞘石斛多糖能显著降低四氧嘧啶高血糖小鼠空腹血糖，增强四氧嘧啶高血糖大鼠的糖耐量，而对正常小鼠空腹血糖和正常大鼠糖耐量没有明显影响，研究表明，叠鞘石斛多糖具有明显的降血糖作用。

当前叠鞘石斛的服药方式，以汤剂为主，可体现中医辨证施治，随证加减，灵活用药的特点，吸收快，作用强而使用不衰，但随着时代的发展、科技的进步，传统的服用方法已不能满足现在快节奏的生活方式。随着西方药物的进入，众多制剂的出现，中药材传统饮片越来越暴露出它的弱点和不足。而中药配方颗粒是一种兼顾随证调方和复方合煎两个特点的汤剂改革尝试，它在一定程度上体现了汤剂的特色，相比丸、散、膏、丹等中药传统剂型方便的多。但其在临床应用中仍存在许多问题，如中药配方颗粒的品种相对不足，包装规格较少，价钱较贵，对其理论，工艺方法及质量标准的表述还都处于探索阶段。因此开展中药配方颗粒的制备工艺研究，以及中药配方颗粒的质量标准研究，将会推动和引导配方颗粒的标准化规范化生产，为临床用药提供质量保证。

在制备配方颗粒时，为了保证配方颗粒具有与原药材相近似的化学成分和药效作用，需要一种有效的提取方法将药材的化学成分尽可能多地转移到配方颗粒中。目前，还未见叠鞘石斛提取方法的研究报道，也未见将叠鞘石斛制备配方颗粒的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种叠鞘石斛提取物及其配方颗粒。本发明的另一目的在于提供上述提取物及配方颗粒的制备方法。

具体地，本发明提供了叠鞘石斛提取物的制备方法，它包括如下操作步骤：

（1）取叠鞘石斛，加入药材重量8~12倍V/W的60~80%V/V乙醇回流提取2~4次，每次0.5~1.5h，过滤，分别得到乙醇提取液和药渣；所得乙醇提取液，减压浓缩，浓缩液备用；

（2）取步骤（1）所得药渣，加入原药材重量6~10倍的水，煎煮1~3次，每次0.5~1.5h，得到水提液；

（3）取步骤（1）所得浓缩液，与步骤（2）所得水提液合并后，减压浓缩，干燥，所得干浸膏即为叠鞘石斛提取物。

进一步地，步骤（1）中，加入药材重量10倍V/W的70%V/V乙醇回流提取2次，每次1.5h；步骤（2）中，加入原药材重量8倍水，煎煮3次，每次1h。

进一步地，步骤（1）中，所述浓缩液中，每1ml相当于1g叠鞘石斛药材。

进一步地，步骤（1）中，减压浓缩的条件为：浓缩温度为55℃；步骤（3）中，减压浓缩的温度为70℃；采用70℃常压干燥。

本发明还提供了上述制备方法得到的叠鞘石斛提取物。

本发明还提供了一种叠鞘石斛配方颗粒，所述配方颗粒是由如下重量配比的原辅料制备而成的：

上述叠鞘石斛提取物10份、填充剂7~9份；，所述填充剂为可溶性淀粉、糊精、乳糖或微晶纤维素。

更进一步地，所述配方颗粒是由如下重量配比的原辅料制备而成的：

叠鞘石斛提取物10份、可溶性淀粉8份。

其中，每1g叠鞘石斛配方颗粒中含石斛酚不少于0.4mg。

本发明还提供了上述叠鞘石斛配方颗粒的制备方法，它包括如下操作步骤：

A、按重量配比称取原辅料；

B、将叠鞘石斛提取物和填充剂混匀后，以叠鞘石斛提取物重量0.4~0.6倍V/W的80~95%V/V乙醇为粘合剂，制粒，即得石斛配方颗粒。

进一步地，步骤B中，以叠鞘石斛提取物重量0.5倍V/W的90%V/V乙醇为粘合剂。

本发明叠鞘石斛提取物的制备方法，通过对提取工艺条件参数的有机组合，能够较为完全的提取叠鞘石斛中的各种有效成分，石斛酚的转移率达到80%以上，不仅保证了叠鞘石斛提取物与原药材药效物质基础的一致性，有利于后期制备配方颗粒，还有效避免了药材资源的浪费。

附图说明

图1石斛酚对照品色谱图

图2石斛配方颗粒色谱图

图3石斛药材色谱图

图4吸湿性考察曲线图（RH=75%）

图5吸湿性考察曲线图（RH=92%）

图6颗粒吸湿速度图

图7颗粒临界相对湿度曲线图

图8配方颗粒制备的工艺路线图

具体实施方式

实施例1  本发明叠鞘石斛提取物的制备方法

（1）取叠鞘石斛100g，切段后，加入1000ml 70%V/V乙醇回流提取2次，每次1.5h，过滤，分别得到乙醇提取液和药渣；所得乙醇提取液，在55℃下减压浓缩，浓缩液备用；

（2）取步骤（1）所得药渣，加入800ml水，煎煮3次，每次1h，得到水提液；

（3）取步骤（1）所得浓缩液，与步骤（2）所得水提液合并后，70℃下减压浓缩后，再于70℃下常压干燥，所得干浸膏即为叠鞘石斛提取物，约10g。

实施例2  本发明叠鞘石斛配方颗粒的制备方法

取实施例1制备的叠鞘石斛提取物10g，与8g可溶性淀粉混合均匀后，以5ml 90%v/v乙醇为粘合剂，制粒，得颗粒剂约18g。

实施例3  本发明叠鞘石斛配方颗粒的含量检测

对实施例2制备的叠鞘石斛配方颗粒进行含量测定，方法和结果如下：

【含量测定】照高效液相色谱法（附录VI D）测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.5%冰醋酸(70∶30)为流动相；检测波长为254nm；流速为1ml·min^-1；柱温为25℃；进样量10μl；理论板数按石斛酚计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取石斛酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品1g，精密称定，精密加入甲醇20ml，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇溶解，并定容至5ml，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

表1  配方颗粒含量测定结果

本品每1g含石斛酚，不得少于0.4mg。

实施例4  本发明叠鞘石斛配方颗粒制备方法的筛选

1工艺条件研究

1.1提取工艺条件筛选

在参考文献基础上，对提取工艺中提取溶剂、溶剂用量、提取时间、提取次数等因素进行考察，通过对指标性成分及干膏收率的测定、转移率的计算，评价各影响因素，确定最优条件。

1.1.1醇提工艺条件筛选

石斛中含香豆素类成分，现代药理研究表明香豆素具有扩张平滑肌、抗凝血等作用，为一类活性成分，故以香豆素含量、浸膏得率为考察指标，以乙醇浓度(A)、用量(B)、提取时间(C)为因素进行醇提工艺筛选试验试验方法及数据。

a.醇浸膏得率的测定：取石斛药材10g，按下表中参数配比安排试验，定容至50ml，精密吸取20ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，移置干燥器中冷却30min,迅速精密称定重量，计算总干膏重量，按下式计算浸膏得率:

醇浸膏得率（%）=总干膏量/药材量*100%

b.香豆素含量测定：按下表中参数配比安排试验，取上述浓缩药液20ml，水浴挥干，三氯甲烷超声溶解，过滤，水浴挥干，甲醇定容至2ml，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液10μl，按高效液相法测定香豆素含量。

色谱条件：色谱柱：C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水(体积比为20∶80；流速：1ml·min^-1；检测波长：274nm；柱温：30℃。

表2  试验表及结果

从上述试验中可以看出，在编号5的提取工艺参数下，香豆素的提取率和浸膏得率均最高，显著优于其他各种参数组合。考虑大生产安全性及成本问题，在编号5各参数的基础上，对工艺进行优化，提出一下方案：

方案二：10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1h；

方案三10倍量70%乙醇回流提取2次，第一次1.5h，第二次1h。

称取药材，按编号5的工艺参数和方案二、三进行对比试验，结果见下表。

表3  优化试验结果

由上表可知，虽然方案二和三与编号5的工艺参数无显著差异，但是，提取效率却存在显著变化，为了最大程度地提取石斛中的有效成分，选择编号5的工艺参数为本发明的最佳醇提工艺，即加入药材重量10倍量V/W的70%乙醇回流提取2次，每次1.5h。

验证实验：称取药材按上述最佳提取方案进行验证试验，结果见表4。

表4  验证试验结果

结果表明：按上述条件进行提取，香豆素含量及浸膏收率均较稳定，表明该工艺合理可靠。

1.1.2水提工艺考察

石斛中含多糖等水溶性物质，是石斛中具有免疫增强和抗肿瘤作用的活性成分，以多糖含量、浸膏得率为考察指标，对提取的加水量、煎煮时间、煎煮次数进行探讨。

试验方法及数据：

a.浸膏得率的测定：取石斛药材5g，经70%乙醇回流提取后，药渣按下表参数安排试验，蒸馏水定容至5ml，精密吸取2ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，移置干燥器中冷却30min,迅速精密称定重量，计算总干膏重量，按下式计算浸膏得率。

醇浸膏得率（%）=总干膏量/药材量*100%

b.多糖含量测定：吸取样品液适量定容至25ml，吸取0.5ml置具塞刻度试管中，各精密加入5%苯酚溶液1.0ml，摇匀，迅速加入5.0ml浓硫酸，在沸水浴中加热20min，冷却至室温，按紫外分光光度法，在486nm处测定吸光度，结果见表5。

表5  试验表及结果

由上述结果可知，编号5、6、8的提取工艺参数下，多糖的提取率和浸膏得率均明显高于其他参数，表明该三种提取工艺参数显著优于其他各种参数组合。其中，以编号8所得多糖含量、浸膏得率最大。但考虑到编号6和8多糖含量差别不大，为提高生产效率最终确定编号6的工艺参数为最佳工艺，即水提工艺为：加入药材重量8倍量V/W的水，煎煮3次，每次1h。

验证实验：对以上工艺进行验证试验，结果见表6。

表6  验证试验结果

结论：该工艺稳定可行。

1.2浓缩工艺研究

1.2.1醇提液的浓缩

醇溶液的浓缩主要有水浴浓缩和减压浓缩两种方法。减压浓缩温度低且效率较水浴浓缩高，故本试验采用减压浓缩方法对醇提液进行浓缩。在试验室条件下，我们测试了用Buchi旋转蒸发仪回收石斛醇提液的条件。经测试，温度为55℃、转速为20-30r/min时，回收效率较高。

1.2.2水煎液的浓缩

水溶液的浓缩常采用直火浓缩和减压浓缩两种方法。试验中以多糖含量和浸膏收率为指标对这两种方法进行了考察。取水煎液分别直火浓缩和减压浓缩至0.5g生药/ml，进行测定，测定方法如前，结果见下表。

表7  水煎液浓缩工艺考察结果表

结果表明，减压浓缩和直火浓缩均会降低多糖含量和浸膏收率，减压浓缩较直火浓缩对多糖含量损失较少，故水煎液采用减压浓缩工艺。

1.3成型工艺研究

1.3.1制粒方法的考察

由于该方浸膏粘性较大，制剂所允许加入的辅料用量较少，故不宜使用湿法制粒及沸腾制粒粒；另一方面，干浸膏吸湿性强，易吸湿粘结造成水分超标，常规制粒方法无法满足需要。而干法制粒物料不需经过湿和热的过程，同时具有工时短、生产效率高等优点。故拟采用干法制粒。由于该提取液具有膜样物质，若采用喷雾干燥，易造成喷头堵塞，且喷雾干燥粉末吸湿性较强，不适合采用喷雾干燥。经预试验，提取液在常压下较易干燥，故采用常压干燥成浸膏粉后制粒。

1.3.2辅料种类及用量的考察

（1）辅料种类考察

在制备颗粒的过程中，常需加入一定的辅料以降低浸膏粉的吸湿性及制粒的难度，常用辅料主要有淀粉、乳糖、糊精等，以制粒难易、细粉率及吸湿性为指标，确定最佳辅料，结果见表8、9。

吸湿性测定：取糊精、乳糖、可溶性淀粉各1g，分别与浸膏粉以1：1混合均匀，在温度25℃，相对湿度分别为75％（饱和氯化钠溶液|）、92％（饱和硝酸钾溶液）的环境下测定各辅料吸湿性，分别于一定时间下进行测定，直至吸湿平衡为止，按下式计算吸湿百分率：

样品的增重=某时间样品重量-干燥恒重后该样品的重量

样品吸湿百分率(％)=(样品的增重/干燥恒重后该样品的重量)×100％

以相对湿度75％、92%吸湿平衡时的吸湿百分率表示颗粒吸湿性。

表8  辅料种类筛选试验结果

表9  吸湿率考察结果

以时间为横坐标，吸湿率为纵坐标，分别作吸湿曲线，如图4、5。

上述结果表明，三种辅料在两种湿度环境下改善吸湿性的效果为乳糖＞可溶性淀粉＞糊精，但乳糖制粒较困难，结合大生产，可溶性淀粉具有溶化性好，价格便宜等优点，广泛运用于颗粒剂大生产中，故选用可溶性淀粉作为辅料。

（2）辅料用量的考察

取适量的干浸膏粉与不同量的可溶性淀粉混合，用90%乙醇湿法制粒，考察制粒情况，结果见下表。

表10  辅料用量筛选试验结果

上述结果表明，浸膏∶辅料=1∶0.8时，制粒容易，颗粒疏松均匀，在保证制剂成型的条件下，为了尽量减少服用量和节省生产成本，辅料尽量少故确定最佳辅料用量为8%。

1.3.3乙醇浓度筛选

以乙醇为粘合剂，制得颗粒均匀，流动性较好，故确定乙醇为粘合剂，设计用80%、85%、90%和95%的乙醇为粘合剂，以成型情况为指标，确定最佳乙醇浓度，结果见下表。

表11  乙醇浓度筛选试验结果

上述结果表明，90%的乙醇能顺利制粒，且颗粒均匀度较好，故确定乙醇浓度为90%。

1.3.4乙醇用量筛选

不同的乙醇用量对制粒效果有较大影响，用量过少可致细分率高，过多可致制粒困难，粘结而难过筛。分别取5g浸膏粉按比例加入可溶性淀粉，按下表加入一定量90%乙醇制粒，以成型情况和细粉率综合考察乙醇用量，结果见下表。

表12  乙醇用量筛选试验结果

结果表明，乙醇的用量为2.5ml较好，即0.05ml/g（乙醇量：药材）较好。因此选定0.05ml/g为乙醇用量。

2.3相对临界湿度的测定

2.3.1颗粒的干燥恒重

精密称取颗粒2.0g，置真空干燥箱中于60℃下干燥至恒重。根据以下公式计算平均含水量，试验结果如下：

平均含水量(％)=∑减重／∑恒重前

表13  颗粒的干燥恒重

2.3.2颗粒吸湿速率与吸湿百分率的测定

将恒温恒湿箱的温度设置为25℃，相对湿度为75％，达到要求后，将已干燥恒重的颗粒放人恒温恒湿箱中准确称重，并定时称量，直至吸湿平衡为止，按下式计算吸湿百分率：

样品的增重=某时间样品重量-干燥恒重后该样品的重量

样品吸湿百分率(％)=(样品的增重/干燥恒重后该样品的重量)×100％以相对湿度75％吸湿平衡时的吸湿百分率表示颗粒吸湿性，平行做3份，结果见下表。

表14  颗粒吸湿速度变化情况(T=25℃，RH=75％，n=3)

以上表数据吸湿百分率为纵坐标，时间为横坐标作图，见图6。

2.3.3临界相对湿度测定

中药颗粒多具吸湿性，分装时对环境湿度有一定要求，为确定分装环境，进行临界相对湿度测定。

配制不同浓度H₂SO₄溶液。分别置于玻璃干燥器中密闭放置48h，使其内部湿度平衡构成不同相对湿度的环境(分别32％，42％，58％，65％，75％，88％，95%)。将干燥至恒重的颗粒1.5g 3份，置恒重的扁称量瓶中，精密称量，置于不同的湿度干燥器中(打开称量瓶盖)，在室温25℃下考察7d，期间隔一定时间精密稳定样品重量，计算颗粒吸湿百分率，结果见表15。

表15  不同RH下颗粒的吸湿性

以相对湿度为横坐标，吸湿平衡后的吸湿率为纵坐标，绘制吸湿曲线，见图7。

结果表明，临界相对湿度为63%，即分装环境的湿度应控制在63%以下。

综上所述，本发明叠鞘石斛提取物的制备方法，通过对提取工艺条件参数的有机组合，能够较为完全的提取叠鞘石斛中的各种有效成分，石斛酚的转移率达到80%以上，不仅保证了叠鞘石斛提取物与原药材药效物质基础的一致性，有利于后期制备配方颗粒，还有效避免了药材资源的浪费。

Claims (10)

1.叠鞘石斛提取物的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

（1）取叠鞘石斛，加入药材重量8~12倍V/W的60~80%V/V乙醇回流提取2~4次，每次0.5~1.5h，过滤，分别得到乙醇提取液和药渣；所得乙醇提取液，减压浓缩，浓缩液备用；

（2）取步骤（1）所得药渣，加入原药材重量6~10倍水，煎煮1~3次，每次0.5~1.5h，得到水提液；

（3）取步骤（1）所得浓缩液，与步骤（2）所得水提液合并后，减压浓缩，干燥，所得干浸膏即为叠鞘石斛提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中，加入药材重量10倍V/W的70%V/V乙醇回流提取2次，每次1.5h；

步骤（2）中，加入原药材重量8倍水，煎煮3次，每次1h。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述浓缩液中，每1ml相当于1g叠鞘石斛药材。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，减压浓缩的条件为：浓缩温度为55℃；

步骤（3）中，减压浓缩的温度为70℃；采用70℃常压干燥。

5.权利要求1-4任意一项所述制备方法得到的叠鞘石斛提取物。

6.一种叠鞘石斛配方颗粒，其特征在于：所述配方颗粒是由如下重量配比的原辅料制备而成的：

权利要求5所述的叠鞘石斛提取物  10份、填充剂7~9份，所述填充剂为可溶性淀粉、糊精、乳糖或微晶纤维素。

7.根据权利要求6所述的叠鞘石斛配方颗粒，其特征在于：所述配方颗粒是由如下重量配比的原辅料制备而成的：

叠鞘石斛提取物10份、可溶性淀粉8份。

8.根据权利要求6或7所述的叠鞘石斛配方颗粒，其特征在于：每1g叠鞘石斛配方颗粒中含石斛酚不少于0.4mg。

9.权利要求6-8任意一项所述叠鞘石斛配方颗粒的制备方法，其特征在于：它包括如下操作步骤：

A、按重量配比称取原辅料；

B、将叠鞘石斛提取物和填充剂混匀后，以叠鞘石斛提取物重量0.4~0.6倍V/W的80~95%V/V乙醇为粘合剂，制粒，即得石斛配方颗粒。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于：步骤B中，以叠鞘石斛提取物重量0.5倍V/W的90%V/V乙醇为粘合剂。

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