CN108132324A - 一种复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法 - Google Patents

Abstract

取复方斑蝥胶囊内容物适量，研细，加适量氯仿回流提取2.5h，取出滤筒，晾干，加适量甲醇，回流提取4h，挥尽甲醇，用水溶解，用水饱和正丁醇振摇萃取，氨试液洗涤，蒸干正丁醇液，用水溶解，过大孔吸附树脂柱，先后用水、乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。在硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑水10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液。在100‑108℃加热5‑8分钟至显色清晰，优选105℃，置365nm紫外灯下检视。供试品色谱中，与对照品色谱在相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。结果薄层色谱斑点清晰，重现性较好。

Description

一种复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体为一种复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法。

背景技术

复方斑蝥胶囊中重要的药材之一---人参为多年生喜阴凉草本植物。人参的肉质根为著名强壮滋补药，适用于调整血压、恢复心脏功能、神经衰弱及身体虚弱等症，也有祛痰、健胃、利尿、兴奋等功效。大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神，主治体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷；心力衰竭，心原性休克。用于气短喘促，心悸健忘，口渴多汗，食少无力，一切急慢性疾病及失血后引起的休克、虚脱。大补元气，固脱生津，安神。治劳伤虚损，食少，倦怠，反胃吐食，大便滑泄，虚咳喘促，自汗暴脱，惊悸，健忘，眩晕头痛，阳痿，尿频，消渴，妇女崩漏，小儿慢惊，及久虚不复，一切气血津液不足之证。人参多生长在北纬40°-45°，东经117.5°-134°之间，分布于辽宁东部、吉林东半部和黑龙江东部，河北、山西、山东有引种，是闻名遐迩的“东北三宝”之一。

对于人参的相关研究国内已有很多报道，尤其以药典最具权威。但国内缺乏复方斑蝥胶囊针对人参的鉴别项报道，仅有个别研发单位有其自己的鉴别方法及贵州省药品检验所起草的复方斑蝥胶囊注册标准(WS3-B-3272-98)。人参和黄芪是复方斑蝥胶囊含有的两味中药之一，人参的主要成分有人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf，黄芪主要含有黄芪甲苷。现有的鉴别方法中：供试品溶液的制备过程包含了氯仿提取、甲醇提取、水洗，水饱和正丁醇萃取、过中性氧化铝柱、蒸干再溶解等，但该薄层鉴方法易受外界因素的影响，经常造成黄芪甲苷与人参皂苷Rg1不能很好地分离，从而影响薄层色谱检测结果，且除人参外还有三七等药材也含有人参皂苷Rg1，故其专属性不强，造成难以判断是否有人参药材的存在。

发明内容

本发明是针对以上的技术问题，提供一条可以很好对复方斑蝥胶囊中人参药材的鉴别方法

本发明的具体技术方案如下

一种复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法，该方法包括以下步骤。

(1)取复方斑蝥胶囊内容物适量，研细，加适量氯仿回流提取2.5h，取出滤筒，晾干，加适量甲醇，回流提取4h，挥尽甲醇，用水溶解，用水饱和正丁醇振摇萃取，氨试液洗涤，蒸干正丁醇液，用水溶解，过大孔吸附树脂柱，先后用水、乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml溶解，作为供试品溶液。

(2)另取人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

(3)在硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水10℃以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液。

(4)在100-108℃加热5-8分钟至显色清晰，优选105℃，置365nm紫外灯下检视。

作为优选，步骤(1)具体为取复方斑蝥胶囊内容物5.0g，研细，置索氏提取器中，加适量氯仿，置水浴上回流提取2.5h，弃去氯仿液，取出滤筒，至通风厨内晾干，待氯仿挥尽，再置索氏提取器中，加适量甲醇，置水浴上回流提取4h，回收甲醇至干。残渣用水30ml溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣用水30ml溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高为15cm)。先后用水30ml，40％乙醇30ml，70％乙醇50ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。

所述的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，以体积比计，三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-15∶5-8∶0.5-3，优选以体积比计，三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2。

所用树脂柱为D101大孔吸附树脂柱，内径1.5cm，柱高为15cm。

本发明的积极效果体现在：

(一)本发明较现有公开方法的操作过程简化。

(二)本方法利用人参中的人参皂苷Rb1、人参皂苷Re这两个已知成分大大增加了该方法针对人参药材的专属性。

(三)该方法结果不再受黄芪甲苷所影响，薄层色谱斑点清晰，重现性良好。

附图说明

图1为贵州省药品检验所起草的复方斑蝥胶囊注册标准(WS3-B-3272-98)具体实施方式中供试品与对照品的薄层鉴别图；

其中1为人参皂苷Rg1、为黄芪甲苷混合对照，2为复方斑蝥胶囊151001，3为复方斑蝥胶囊151215，4为复方斑蝥胶囊160209，5为复方斑蝥胶囊160301。

图2为具体实施方式中三批供试品与对照品的薄层鉴别图；

其中1为人参皂苷Rb1、为人参皂苷Re混合对照，2为复方斑蝥胶囊人参阴性对照，3为复方斑蝥胶囊151215，4为复方斑蝥胶囊160209，5为复方斑蝥胶囊160301。

具体实施方式

1药品与仪器

仪器：三用紫外分析仪(ZF-C型，上海康禾光电仪器有限公司)、电热恒温水浴锅(HH-S4型，石家庄金菱科教实验设备有限公司)、硅胶G薄层板(10cm*20cm，青岛海洋化工分厂，批号：20160512)、电热鼓风干燥箱(101-1型，北京中兴伟业仪器有限公司)、索氏提取器(250ml，成都昌元玻璃制品有限公司)。

试药：复方斑蝥胶囊(批号：151215，160209，160301，陕西方舟制药有限公司)；

人参皂苷Rg1(110703-21530，中国药品生物制品检定所)、人参皂苷Rb1(110704-201223，中国药品生物制品检定所)、人参皂苷Re(110754-200421，中国药品生物制品检定所)、黄芪甲苷(0781-9908，中国药品生物制品检定所)。

三氯甲烷、甲醇、D101大孔吸附树脂、正丁醇等均为分析纯。

2溶液的制备

2.1供试品溶液的制备

取复方斑蝥胶囊内容物5.0g，研细，置索氏提取器中，加适量氯仿，置水浴上回流提取2.5h，弃去氯仿液，取出滤筒，至通风厨内晾干，待氯仿挥尽，再置索氏提取器中，加适量甲醇，置水浴上回流提取4h，回收甲醇至干。残渣用水30ml溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣用水30ml溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高为15cm)。先后用水30ml，40％乙醇30ml，70％乙醇50ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。

2.2对照品溶液的制备

取人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3阴性对照溶液的制备

取未加入人参药材的复方斑蝥胶囊内容物5.0g，研细，置索氏提取器中，加适量氯仿，置水浴上回流提取2.5h，弃去氯仿液，取出滤筒，至通风厨内晾干，待氯仿挥尽，再置索氏提取器中，加适量甲醇，置水浴上回流提取4h，回收甲醇至干。残渣用水30ml溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣用水30ml溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高为15cm)。先后用水30ml，40％乙醇30ml，70％乙醇50ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为阴性对照溶液。

3、薄层色谱条件

薄层板：硅胶G薄层板(10cm*20cm)

展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)

检视：喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。

结果：供试品色谱中，与对照品色谱在相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点。阴性对照在相应的位置上无荧光斑点。(见图2)

4、复方斑蝥胶囊人参的专属性

分别吸取复方斑蝥胶囊供试品溶液、人参皂苷Rb1和人参皂苷Re对照品溶液以及阴性对照溶液分别点样于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层色谱条件展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰分钟，置365nm的紫外光灯下检视，在与对照品色谱的相应位置显相同颜色的斑点，且阴性样品无干扰。

由于含有人参皂苷Rg1的药材还有三七等，如果仅对复方斑蝥胶囊中的人参皂苷Rg1考量，虽然最后薄层鉴别出来的图即使表示出，供试品溶液与对照品色谱相应位置显相同颜色的斑点，任然不能确定鉴别出来的药材即为人参(见图1)。

5、不同批次样品薄层鉴别对比研究

采用正文所述薄层鉴别方法对不同批次的复方斑蝥胶囊进行鉴别，实验结果表明，供试品色谱中，随机抽取的3批复方斑蝥胶囊在与对照品的色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，重现性较好。

对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制与本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖性特点相一致的最宽的范围。

Claims (4)

1.一种复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(1)取复方斑蝥胶囊内容物适量，研细，加适量氯仿回流提取，取出滤筒，晾干，加适量甲醇，回流提取，挥尽甲醇，用水溶解，用水饱和正丁醇振摇萃取，氨试液洗涤，正丁醇液蒸干，用水溶解，过大孔吸附树脂柱，先后用水、乙醇洗脱，乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。

(2)另取人参皂苷Rb1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

(3)在硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％(v/v)硫酸乙醇溶液。

(4)在100-108℃加热5-8分钟至显色清晰，优选105℃，置365nm紫外灯下检视。

2.根据权利要求1所述复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：步骤(1)中取复方斑蝥胶囊内容物5.0g，研细，置索氏提取器中，加适量氯仿，置水浴上回流提取2.5h，弃去氯仿液，取出滤筒，晾干，待氯仿挥尽，再置索氏提取器中，加适量甲醇，置水浴上回流提取4h，回收甲醇至干。残渣用水30ml溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤2次，每次20ml，正丁醇液蒸干，残渣用水30ml溶解，通过D101大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高为15cm)。先后用水30ml，40％乙醇30ml，70％乙醇50ml洗脱，收集70％乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。

3.根据权利要求1所述复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，以体积比计，三氯甲烷∶甲醇∶水＝10-15∶5-8∶0.5-3。

4.根据权利要求1所述复方斑蝥胶囊中人参组分的薄层色谱鉴别方法，其特征在于：所述的展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，以体积比计，三氯甲烷∶甲醇∶水＝13∶7∶2。