CN107515266B - 一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法。该方法通过优化提取溶剂、提取时间、提取方法，使得厚朴七物汤的药物制剂中各化学成分实现最大程度地被提取，通过优化色谱柱、流动相、流动相的洗脱方式，使得各化学成分实现较好的分离，从而建立了针对该药物制剂的指纹图谱的方法，获得了较为全面的图谱信息；进一步通过优化选择8号峰柚皮苷作为内参考峰，确认了共有特征峰9号峰为新橙皮苷，14号峰为甘草酸铵，15号峰为芦荟大黄素，17号峰为大黄酸，18号峰为大黄素，19号峰为和厚朴酚和21号峰为厚朴酚，并确定了21个共有特征峰的相对保留时间，结合该指纹图谱中多个色谱峰的信息，能够全面地、系统地检测其质量。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法。
背景技术
厚朴七物汤一方出自东汉张仲景所著的《金匮要略》，由厚朴、甘草、大黄、大枣、枳实、桂枝、生姜组成，功能主治：病腹满，发热十日，脉浮而数，饮食如故，厚朴七物汤主之，具有行气除满、解表散寒的功效，在现代临床上已广泛用于急性肠炎、习惯性便秘、慢性肠胃炎、肠梗阻等的治疗。
中药成分复杂，药效部位常常不是单一成分，以某种单一成分作为质量控制指标已越来越不适应中药质量控制的要求。因此，中药指纹图谱技术应运而生。中药指纹图谱技术源于指纹鉴定学，利用现代信息技术和质量分析手段较全面的反映了中药所含化学成分的种类和数量。对于中药材，指纹图谱可以用来鉴别真伪、评判优劣；对于中成药，指纹图谱可以鉴别产品真伪，评判制备工艺的合理性，有效地控制产品质量。现阶段中药的有效成分大多数尚不明确，中药指纹图谱的整体性和模糊性正好适应这一特点，较单一成分的质量控制方法更具有科学性和全面性。目前，国际上已认可将中药指纹图谱作为中药质量的控制模式。高效液相色谱法具有分离效能高、分析速度快等优点，已成为当今指纹图谱的主要分析手段。
目前，现有技术中尚没有关于厚朴七物汤颗粒的质量检测和质量控制方法的报道，可进行参考的是张文娓等的“正交试验优化厚朴七物汤水提取工艺”(《哈尔滨商业大学学报(自然科学版)》，2016，32(4)，421-425)，其中公开了：厚朴七物汤颗粒中厚朴酚、和厚朴酚、大黄总蒽醌量的含量测定方法。然而，上述对厚朴七物汤的质量控制方法中，选取了厚朴七物汤中某几个化学成分进行含量测定，用其含量的多少判定质量好坏。但由于中药材质量受产地、气候、季节等多方面影响，导致所含成分的种类及含量往往不稳定，这导致只检测其中单一成分的含量具有一定片面性。因此，以上方法均不能系统、全面的反映厚朴七物汤颗粒的内在质量。
因此，建立一种能够全面地、系统地检测厚朴七物汤颗粒的方法，特别是建立厚朴七物汤的指纹图谱的方法，对于其全面质量检测和整体质量控制具有重要意义。
发明内容
为此，本发明提出一种建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法，进而提供一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法。
为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，
该方法包括如下建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法的步骤：
取待测药物制剂，研细，取0.5～2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50～95％的甲醇水溶液或甲醇10-50体积份，称定重量，超声回流或振摇处理15-60分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为50～95％的甲醇水溶液或甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为50～95％的甲醇水溶液或甲醇制成每1mL含柚皮苷1～10mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；流速为0.8-1.2mL/min，柱温为25～35℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得；
所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。
优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，以AgilentZORBAXEclipse XDB-C18色谱柱为色谱柱。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，所述建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法具体如下：
取待测药物制剂，研细，取1重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为80％的甲醇水溶液25体积份，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为80％的甲醇水溶液制成每1mL含柚皮苷4mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min，柱温为30℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，还包括如下鉴别或含量测定方法中的至少一种：
A、厚朴的薄层鉴别
取待测药物制剂5～20重量份，研细，加60～90℃的石油醚20～80体积份，超声5～30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每lmL各含0.1～1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液5～10μL和对照品溶液1～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.2的环己烷-乙酸乙酯-无水甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积浓度为0.5～2％的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
B、大黄的薄层鉴别
取待测药物制剂0.5～2重量份，研细，加5～40体积份甲醇，浸泡0.5～2小时，滤过，取续滤液1～10体积份，蒸干，残渣加1～20体积份水溶解，加0.5～2体积份盐酸，加热回流5～60分钟，立即冷却，用乙醚分1～3次振摇提取，每次5～50体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2体积份使溶解，作为供试品溶液；
取大黄对照药材0.05～0.2重量份，研细，加5～40体积份甲醇，浸泡0.5～2小时，滤过，取续滤液1～10体积份，蒸干，残渣加1～20体积份水溶解，加0.5～2体积份盐酸，加热回流5～60分钟，立即冷却，用乙醚分1～3次振摇提取，每次5～50体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2体积份使溶解，作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液1～10μL、对照药材溶液2～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
C、甘草的薄层鉴别
取待测药物制剂1～5重量份，研细，加甲醇5～50体积份，超声5～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水1～10体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各5～20体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5～5体积份使溶解，作为供试品溶液；
取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1mL含0.5～5mg的溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液1～5μL和对照品溶液2～10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；
D、枳实的薄层鉴别
取待测药物制剂1～5重量份，研细，加甲醇5～50体积份，超声5～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水1～10体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各5～20体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5～5体积份使溶解，作为供试品溶液；
取枳实对照药材0.1～1重量份，加甲醇5～20体积份，超声5～60分钟，取上清液作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各0.5～2μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为13：6：2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾于，喷以0.1～0.5％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；
E、厚朴中和厚朴酚与厚朴酚含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.5～5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～40体积份，称定重量，超声处理5～60分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含和厚朴酚10～30μg及厚朴酚20～60μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为55％：45％→63％：37％；20min，A：B为63％：37％；检测波长294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
F、大黄中大黄总蒽醌的含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.1～1重量份，精密称定，置茄形瓶中，加体积浓度为5～10％的盐酸溶液5～15体积份，超声处理1～5分钟，再加三氯甲烷5～20体积份，加热回流0.5～2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2～5次，每次5～20体积份，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至2～10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
分别精密称取芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素、大黄素各10～50μg、大黄酚30～70μg、大黄素甲醚5～25μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
精密称取大黄酸对照品适量，精密称定，加0.5～2mL氯仿和甲醇制成每1mL含大黄酸30～90μg的溶液，摇匀，即得大黄酸对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为68％：32％→69％：31％；20-25min，A：B为69％：31％；25-30min，A：B为69％：31％→72％：28％；30min，A：B为72％：28％；30-40min，A：B为72％：28％→76％：24％；40min，A：B为76％：24％；40-50min，A：B为76％：24％→80％：20％；50-60min，A：B为80％：20％；60-70min，A：B为80％：20％→90％：10％；70min，A：B为90％：10％；检测波长254nm，理论塔板数按大黄酚峰计应不低于3000；
分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和大黄酸对照品溶液各5～15μL，注人液相色谱仪，测定，即得；
G、枳实中柚皮苷及新橙皮苷的含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.5～2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50～150体积份，称定重量，超声处理10～50分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷及新橙皮苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含柚皮苷和新橙皮苷各0.05～0.25mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为18：82的乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相；检测波长283nm，理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，注人液相色谱仪，测定，即得。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，所述鉴别或含量测定方法具体如下：
A、厚朴的薄层鉴别
取待测药物制剂10重量份，研细，加60～90℃的石油醚50体积份，超声15分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每lmL各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液7μL和对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.2的环己烷-乙酸乙酯-无水甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积浓度为1％的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
B、大黄的薄层鉴别
取待测药物制剂0.7重量份，研细，加20体积份甲醇，浸泡1小时，滤过，取续滤液5体积份，蒸干，残渣加10体积份水溶解，加1体积份盐酸，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷1体积份使溶解，作为供试品溶液；
取大黄对照药材0.1重量份，研细，加20体积份甲醇，浸泡1小时，滤过，取续滤液5体积份，蒸干，残渣加10体积份水溶解，加1体积份盐酸，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷1体积份使溶解，作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
C、甘草的薄层鉴别
取待测药物制剂2重量份，研细，加甲醇25体积份，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各10体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2体积份使溶解，作为供试品溶液；
取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液3μL和对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；
D、枳实的薄层鉴别
取待测药物制剂2重量份，研细，加甲醇25体积份，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各10体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2体积份使溶解，作为供试品溶液；
取枳实对照药材0.5重量份，加甲醇10体积份，超声30分钟，取上清液作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各1μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为13：6：2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾于，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；
E、厚朴中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定
取待测药物制剂，研细，取2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25体积份，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含和厚朴酚20μg及厚朴酚40μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为55％：45％→63％：37％；20min，A：B为63％：37％；检测波长294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
F、大黄中大黄总蒽醌的含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.5重量份，精密称定，置茄形瓶中，加体积浓度为8％的盐酸溶液10体积份，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10体积份，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10体积份，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
分别精密称取芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素、大黄素各30μg、大黄酚50μg、大黄素甲醚15μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
精密称取大黄酸对照品适量，精密称定，加1mL氯仿和甲醇制成每1mL含大黄酸60μg的溶液，摇匀，即得大黄酸对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为68％：32％→69％：31％；20-25min，A：B为69％：31％；25-30min，A：B为69％：31％→72％：28％；30min，A：B为72％：28％；30-40min，A：B为72％：28％→76％：24％；40min，A：B为76％：24％；40-50min，A：B为76％：24％→80％：20％；50-60min，A：B为80％：20％；60-70min，A：B为80％：20％→90％：10％；70min，A：B为90％：10％；检测波长254nm，理论塔板数按大黄酚峰计应不低于3000；
分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和大黄酸对照品溶液各10μL，注人液相色谱仪，测定，即得；
G、枳实中柚皮苷及新橙皮苷的含量测定
取待测药物制剂，研细，取1重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇100体积份，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷及新橙皮苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含柚皮苷和新橙皮苷各0.15mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为18：82的乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相；检测波长283nm，理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注人液相色谱仪，测定，即得。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，所述厚朴七物汤的原料药组成为：厚朴19～30重量份，甘草7～11重量份，大黄7～11重量份，大枣20～30重量份，枳实8～12重量份，桂枝4.8～7.2重量份，生姜12～18重量份。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，所述厚朴七物汤的原料药组成为：厚朴24重量份，甘草9重量份，大黄9重量份，大枣25重量份，枳实10重量份，桂枝6重量份，生姜15重量份。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，
所述厚朴七物汤的药物制剂通过以下方法制备而成：分别取选定重量份的厚朴、甘草、大黄、大枣、枳实、桂枝和生姜，加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.20～1.40的清膏，干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的药物制剂；
所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，
所述厚朴七物汤的药物制剂通过以下方法制备而成：分别取选定重量份的厚朴、甘草、大黄、大枣、枳实、桂枝和生姜，加水煎煮1～3次，每次加水8～15倍量，每次煎煮0.5～3小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.20～1.40的清膏，干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的药物制剂。
更进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，
所述厚朴七物汤的药物制剂通过以下方法制备而成：分别取选定重量份的厚朴、甘草、大黄、大枣、枳实、桂枝和生姜，加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.30的清膏，干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的药物制剂；
所述药学上可接受的辅料为：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂、基质等。填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等；崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素纳等；润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等；助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等；粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等；甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等；矫味剂包括：甜味剂及各种香精；防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等；基质包括：PEG6000、PEG4000、虫蜡等。
进一步优选地，本发明上述厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，所述厚朴七物汤的药物制剂的标准指纹图谱中，包括21个共有特征峰，以8号峰为内参考峰，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.28，2号峰0.36，3号峰0.44，4号峰0.47，5号峰0.69，6号峰0.71，7号峰0.75，8号峰1.00，9号峰1.22，10号峰1.53，11号峰1.62，12号峰1.81，13号峰1.89，14号峰1.97，15号峰2.02，16号峰2.04，17号峰2.10，18号峰2.41，19号峰2.45，20号峰2.50，21号峰2.57；其中，8号峰为柚皮苷，号峰为新橙皮苷，14号峰为甘草酸铵，15号峰为芦荟大黄素，17号峰为大黄酸，18号峰为大黄素，19号峰为和厚朴酚，21号峰为厚朴酚。
本发明还提供上述方法在厚朴七物汤的药物制剂的质量检测和质量控制中的应用。
与现有技术相比，本发明的上述技术方案具有以下优点：
(1)本发明所述建立厚朴七物汤的药物制剂的方法，以厚朴七物汤的药物制剂为检测对象，通过优化提取溶剂、提取时间、提取方法，使得厚朴七物汤的药物制剂中各化学成分实现最大程度地被提取，通过优化色谱柱、流动相、流动相的洗脱方式，使得各化学成分实现较好的分离，从而建立了针对该药物制剂的指纹图谱的方法，获得了较为全面的图谱信息；
(2)本发明所述建立厚朴七物汤的药物制剂的方法，进一步通过优化选择8号峰柚皮苷作为指纹图谱中的内参考峰，确认了共有特征峰9号峰为新橙皮苷，14号峰为甘草酸铵，15号峰为芦荟大黄素，17号峰为大黄酸，18号峰为大黄素，19号峰为和厚朴酚和21号峰为厚朴酚，并确定了厚朴七物汤颗粒的21个共有特征峰的相对保留时间，结合该指纹图谱中多个色谱峰的信息，能够全面地、系统地检测厚朴七物汤颗粒的质量；
(3)本发明所述建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法具有稳定性高、精密度高、重复性好等优点；
(4)本发明所述建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法，进一步结合该药物制剂的其他成分的鉴别或含量测定方法，更加有利于其全面质量检测和整体质量控制，从而有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：
图1是本发明厚朴七物汤颗粒中厚朴的薄层鉴别色谱图，其中，1表示的为阴性对照品，2表示的为厚朴酚与和厚朴酚对照品，3表示的为厚朴七物标准颗粒样品，4表示的为糊精；
图2是本发明厚朴七物汤颗粒中大黄的薄层鉴别色谱图，其中，1表示的为阴性对照，2表示的为大黄对照药材，3表示的为厚朴七物标准颗粒样品，4表示的为糊精；
图3是本发明厚朴七物汤颗粒中甘草的薄层鉴别色谱图，其中，1表示的为糊精，2表示的为厚朴七物标准颗粒样品，3表示的为甘草酸铵对照品，4表示的为阴性对照；
图4是本发明厚朴七物汤颗粒中枳实的薄层鉴别色谱图，其中，1表示的为阴性对照，2表示的为糊精，3表示的为大黄对照药材，4表示的为厚朴七物标准颗粒样品；
图5是本发明厚朴七物汤颗粒中厚朴的和厚朴酚与厚朴酚含量测定的HPLC色谱图；
图6是本发明厚朴七物汤颗粒中大黄的大黄总蒽醌的含量测定的HPLC色谱图；
图7是本发明厚朴七物汤颗粒中枳实的柚皮苷和新橙皮苷的含量测定的HPLC色谱图；
图8是本发明3批厚朴七物汤颗粒的原始指纹图谱；
图9是本发明厚朴七物汤颗粒的对照指纹图谱，其中，8号峰为柚皮苷，9号峰为新橙皮苷，14号峰为甘草酸铵，15号峰为芦荟大黄素，17号峰为大黄酸，18号峰为大黄素，19号峰为和厚朴酚，21号峰为厚朴酚；
图10是本发明厚朴七物汤颗粒匹配后的指纹图谱；
图11是本发明厚朴七物汤颗粒不同提取溶剂的指纹图谱对比图；
图12是本发明厚朴七物汤颗粒提取方法的指纹图谱对比图；
图13是本发明厚朴七物汤颗粒提取时间的指纹图谱对比图；
图14是本发明厚朴七物汤颗粒溶剂量的指纹图谱对比图；
图15是本发明厚朴七物汤颗粒不同色谱柱的指纹图谱对比图；
图16是本发明厚朴七物汤颗粒指纹图谱紫外全波长扫描图；
图17是本发明厚朴七物汤颗粒不同流动相的指纹图谱对比图；
图18是本发明厚朴七物汤颗粒不同流速的指纹图谱对比图；
图19是本发明厚朴七物汤颗粒不同柱温的指纹图谱对比图；
图20是本发明厚朴七物汤颗粒空白溶剂、辅料、流动相的指纹图谱对比图；
图21是本发明厚朴七物汤颗粒二倍保留时间图谱；
图22(a)～图22(h)是本发明厚朴七物汤颗粒药材相关性对比指纹图谱；
图23是本发明对比例1的HPLC色谱图。
具体实施方式
实施例1
厚朴七物汤颗粒的原料药组成为：厚朴24g，甘草9g，大黄9g，大枣25g，枳实10g，桂枝6g，生姜15g；
其制备方法为：分别取选定重量份的厚朴、甘草、大黄、大枣、枳实、桂枝和生姜，加水煎煮二次，第一次加12倍量水，煎煮2小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.30的清膏，干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的颗粒剂。
实施例2
本实施例建立厚朴七物汤颗粒的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为80％的甲醇水溶液25mL，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为80％的甲醇水溶液制成每1mL含柚皮苷4mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min，柱温为30℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得。
实施例3
本实施例建立厚朴七物汤颗粒的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为95％的甲醇水溶液或甲醇10mL，称定重量，超声回流或振摇处理60分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为95％的甲醇水溶液或甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为95％的甲醇水溶液制成每1mL含柚皮苷1mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％；检测波长为254nm；流速为0.8mL/min，柱温为35℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得。
实施例4
本实施例建立厚朴七物汤颗粒的指纹图谱的方法，包括如下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50％的甲醇水溶液或甲醇50mL，称定重量，超声回流或振摇处理15分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为50％的甲醇水溶液或甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为50％的甲醇水溶液或甲醇制成每1mL含柚皮苷10mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％；检测波长为254nm；流速为1.2mL/min，柱温为25℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各15μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得。
实施例5
本实施例厚朴七物汤颗粒中厚朴的薄层鉴别方法，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒10g，研细，加60～90℃的石油醚50mL，超声15分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作为供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每lmL各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液7μL和对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.2的环己烷-乙酸乙酯-无水甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积浓度为1％的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
厚朴七物汤颗粒中厚朴的薄层鉴别色谱图如图1所示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
实施例6
本实施例厚朴七物汤颗粒中大黄的薄层鉴别，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒0.7g，研细，加20mL甲醇，浸泡1小时，滤过，取续滤液5mL，蒸干，残渣加10mL水溶解，加1mL盐酸，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20mL，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液；
取大黄对照药材0.1g，研细，加20mL甲醇，浸泡1小时，滤过，取续滤液5mL，蒸干，残渣加10mL水溶解，加1mL盐酸，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20mL，蒸干，残渣加三氯甲烷1mL使溶解，作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15：5：1的石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。
厚朴七物汤颗粒中大黄的薄层鉴别色谱图如图2所示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
实施例7
本实施例厚朴七物汤颗粒中甘草的薄层鉴别，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒2g，研细，加甲醇25mL，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各10mL洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液3μL和对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视。
厚朴七物汤颗粒中甘草的薄层鉴别色谱图如图3所示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
实施例8
本实施例厚朴七物汤颗粒中枳实的薄层鉴别，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒2g，研细，加甲醇25mL，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5mL使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各10mL洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液；
取枳实对照药材0.5g，加甲醇10mL，超声30分钟，取上清液作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各1μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为13：6：2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾于，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视。
厚朴七物汤颗粒中枳实的薄层鉴别色谱图如图4所示，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点。
实施例9
本实施例厚朴七物汤颗粒中厚朴中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒，研细，取2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含和厚朴酚20μg及厚朴酚40μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为55％：45％→63％：37％；20min，A：B为63％：37％；检测波长294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
厚朴七物汤颗粒中厚朴的和厚朴酚与厚朴酚含量测定的HPLC色谱图如图5所示，待测厚朴七物汤颗粒每袋含厚朴以厚朴酚(C18H18O2)与和厚朴酚(C18H18O2)的总量计，不得少于2.4mg。
实施例10
本实施例厚朴七物汤颗粒中大黄中大黄总蒽醌的含量测定，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒，研细，取0.5g，精密称定，置茄形瓶中，加体积浓度为8％的盐酸溶液10mL，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10mL，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10mL，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
分别精密称取芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素、大黄素各30μg、大黄酚50μg、大黄素甲醚15μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
精密称取大黄酸对照品适量，精密称定，加1mL氯仿和甲醇制成每1mL含大黄酸60μg的溶液，摇匀，即得大黄酸对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为68％：32％→69％：31％；20-25min，A：B为69％：31％；25-30min，A：B为69％：31％→72％：28％；30min，A：B为72％：28％；30-40min，A：B为72％：28％→76％：24％；40min，A：B为76％：24％；40-50min，A：B为76％：24％→80％：20％；50-60min，A：B为80％：20％；60-70min，A：B为80％：20％→90％：10％；70min，A：B为90％：10％；检测波长254nm，理论塔板数按大黄酚峰计应不低于3000；
分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和大黄酸对照品溶液各10μL，注人液相色谱仪，测定，即得。
厚朴七物汤颗粒中大黄的大黄总蒽醌的含量测定的HPLC色谱图如图6所示，本品每袋含大黄以芦荟大黄素(C15H10O5)、大黄酸(C15H8O6)、大黄素(C15H10O5)、大黄酚(C15H10O4)、大黄素甲醚(C16H12O5)的总量计，不得少于5.5mg。
实施例11
本实施例厚朴七物汤颗粒中枳实中柚皮苷及新橙皮苷的含量测定，包括以下步骤：
取待测厚朴七物汤颗粒，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇100mL，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷及新橙皮苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含柚皮苷和新橙皮苷各0.15mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为18：82的乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相；检测波长283nm，理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注人液相色谱仪，测定，即得。
厚朴七物汤颗粒中枳实的柚皮苷和新橙皮苷的含量测定的HPLC色谱图图7所示，待测厚朴七物汤颗粒每袋含枳实以柚皮苷(C27H32O14)计，不得少于97mg；以新橙皮苷(C28H34O15)计，不得少于76mg。
对比例1
本对比例建立厚朴七物汤颗粒的指纹图谱的方法与实施例2的区别仅在于：按照以下程序进行洗脱：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-15min，A：B为5％：95％→15％：85％；15min，A：B为15％：85％；15-45min，A：B为15％：85％→20％：80％；45min，A：B为20％：80％；45-70min，A：B为20％：80％→40％：60％；70min，A：B为40％：60％；70-90min，A：B为40％：60％→60％：40％；90min，A：B为60％：40％；90-110min，A：B为60％：40％→80％：20％；其余实验条件与操作步骤均与实施例2相同。
本对比例的HPLC色谱图如图23所示。由图23可知，甘草酸铵等色谱峰分离度较差，因此该梯度洗脱条件无法应用于建立指纹图谱。
实验例厚朴七物汤颗粒高效液相指纹图谱建立及方法学研究
1、实验仪器与试剂
1.1系统组成
Agilent 1100高效液相色谱系统；VWD G1314A紫外检测器；Agilent ZORBAXEclipse XDB-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)。
1.2试剂与标准品
柚皮苷对照品：成都曼斯特科技发展有限公司，批号MUST－14030612；
乙腈：色谱纯，Caledon in Canada产品；
甲醇：色谱纯，天津市大茂化学试剂厂产品；
水：去离子水、超纯水；
1.3参照物的选择
指纹图谱中柚皮苷的色谱峰峰型、与相邻色谱峰分离效果均较好，故使用该成分作为指纹图谱参照物。
1.4样品
实施例1制备的厚朴七物汤颗粒，3批中试生产颗粒。
2、实验方法
供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1mL含柚皮苷4mg的溶液，摇匀，即得。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm；理论塔板数按柚皮苷峰计，应不低于3000。
表1梯度洗脱程序表
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录120分钟的色谱图，即得。
供试品指纹图谱与对照指纹图谱应在相应保留时间处出现相同色谱峰，两者相似度应不低于0.90。
2.1供试品溶液的制备方法确定
(1)提取溶剂的考察
拟采用不同溶剂50％甲醇、80％甲醇、95％乙醇和甲醇作为提取溶剂进行了考察。方法为：取中试样品，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加上述4种溶剂25mL，超声提取30min，结果如图11所示。由图11可知，80％甲醇提取效果较好，故选80％甲醇作为提取溶剂。
(2)提取方法的考察
拟采用超声、回流和振摇作为提取方法进行了考察。方法为：取中试样品，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入80％甲醇25mL，分别按上述3种提取方法提取，时间30min。结果如图12所示。由图12可知，3种方法对有效成分的提取效果相差不多，考虑操作方便，选择超声作为厚朴七物标准颗粒指纹图谱的提取方法。
(3)提取时间的考察
拟对不同的提取时间15min、30min、60min进行了考察。方法为：取中试样品，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入80％甲醇25mL，分别按上述3种提取时间超声提取，结果如图13所示。由图13可知，提取成分的多少和吸收值都相差不多，故选择比较适中的超声时间30min。
(4)溶剂量的考察
拟对溶剂不同的体积10mL、25mL、50mL进行了考察。方法为：取中试样品，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密80％甲醇10mL、25mL、50mL，超声提取30min，结果如图14所示。由图14可知，溶剂量为25mL时，有效成分的吸收值比较适中，故选择提取溶剂为25mL。
(5)确定供试品溶液的制备方法
取装量差异项下的本品，研细，取1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇25mL，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2色谱条件与系统适用性试验
(1)色谱柱的考察
考察了Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18、Aglea Durashell C18及Kromasil100-5-C18 3种色谱柱，结果如图15所示。由图15可知，以Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱分离效果最好。
(2)检测波长的考察
通过全波长扫描，如图16所示，发现在254nm下各个峰均能较好的体现，且基线平稳，故选254nm作为厚朴七物标准颗粒指纹图谱的检测波长。
(3)流动相的考察
考察了乙腈-0.1％磷酸水、乙腈-0.3％磷酸水和乙腈-水3种流动相系统，结果如图17所示。由图17可知，结果以乙腈-0.1％磷酸水梯度系统为佳，各色谱峰分离度好，保留时间适中。故选择乙腈-0.1％磷酸水梯度系统为流动相。
(4)流速的考察
分别考察流速：0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min，结果如图18所示。由图18可知，结果以流速1.0mL/min各色谱峰分离度好，整体分布美观。
(5)柱温的考察
分别考察柱温：25℃、30℃、35℃，结果如图19所示。由图19可知，以柱温为30℃时各色谱峰分离度好。
2.3方法学考察
(1)稳定性试验
取样品，研细，按供试品溶液的制备方法制备，分别在第0、2、4、6、12、24小时检测指纹图谱，计算相似度结果，结果如表2所示。由表2可知，各色谱峰的相似度均符合指纹图谱的要求。
表2稳定性试验结果
(2)精密度试验
取样品，研细，按供试品溶液的制备方法制备，连续进样6次，检测指纹图谱，计算相似度结果，结果如表3所示。由表3可知，各色谱峰的相似度均符合指纹图谱的要求。
表3精密度试验结果
(3)重复性试验
取样品，研细，按供试品溶液的制备方法制备供试品6份，检测指纹图谱，计算相似度结果，结果如表4所示。由表4可知，各色谱峰的相似度均符合指纹图谱的要求。
表4重复性试验结果
2.4专属性考察
分别是对空白流动相、80％甲醇溶剂、辅料、二倍保留时间的供试品进行考察，如图20～图21所示。由图20～图21可知，二倍保留时间的供试品图谱证明供试品在120分钟后再无其他色谱峰。
2.5样品验证及参照指纹图谱确定
对3批生产颗粒(批号2016080401、2016080402、2016080403)进行了指纹图谱分析，结果如图8、图10和表5所示。由图8、图10和表5可知，选择批号为2016080401的供试品的指纹图谱作为参照指纹图谱，因为该供试品的指纹图谱相对保留时间较接近于各批供试品的平均相对保留时间，且分离度较好，为较典型的指纹图谱。
表5 3批生产颗粒指纹图谱检测结果
| S1 | S2 | S3 | 对照指纹图谱 | |
| S1 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 |
| S2 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 |
| S3 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 |
| 对照指纹图谱 | 1.000 | 1.000 | 1.000 | 1.000 |
2.6共有指纹峰的标定
3批生产颗粒指纹图谱比较相似，没有特别明显的差异。选每批供试品指纹图谱中都出现的典型色谱峰作为共有指纹峰，共21个共有峰，其中，8号峰为柚皮苷的色谱峰，以“S峰”为表示，各色谱峰分别以1～21的序号表示如图9所示，以8号峰为内参考峰，各共有峰的的相对保留时间分别为：1号峰(0.28)，2号峰(0.36)，3号峰(0.44)，4号峰(0.47)，5号峰(0.69)，6号峰(0.71)，7号峰(0.75)，8号峰(S峰)(1.00)，9号峰(1.22)，10号峰(1.53)，11号峰(1.62)，12号峰(1.81)，13号峰(1.89)，14号峰(1.97)，15号峰(2.02)，16号峰(2.04)，17号峰(2.10)，18号峰(2.41)，19号峰(2.45)，20号峰(2.50)，21号峰(2.57)；部分共有峰的峰形描述：3、4、5、6、10、11号峰不是单峰，而是一簇峰，其余峰基本达到基线分离，8、9、14、17号峰峰高较高，其余号峰较低。
2.7厚朴七物汤颗粒的指纹图谱相似度检测标准的制定
利用药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统，2012版》软件，将3批生产颗粒的指纹图谱进行了分析，结果如图8所示，并生成对照图谱，如图9所示。由图8和图9可知，3批颗粒与共有模式相比，相似度值为1.000，因目前数据量少，故暂规定：供试品指纹图谱与对照指纹图谱应在相应保留时间处出现相同色谱峰，两者相似度应不低于0.90。
2.8厚朴七物标准颗粒的相关性考察
为进一步说明上述各色谱峰的来源进行了相关性考察。照“颗粒制备工艺”，分别制备厚朴、大黄、桂枝、枳实、甘草、生姜、大枣药材单煎液，计算取样量，提取液减压蒸干后按照“供试品溶液的制备方法”分别制成各单味药材供试品溶液，在已确定的色谱条件下，分别检测药材供试品溶液和颗粒供试品溶液，确定颗粒样品指纹图谱中各色谱峰的归属，结果如图22(a)～图22(h)所示。
分析颗粒指纹图谱中5～120min的色谱峰，色谱峰较明显的有21个色谱峰，通过单味药材图谱对比分析这21个色谱峰归属，如表6所示。
表6厚朴七物标准颗粒指纹图谱色谱峰归属
由表6可知，色谱峰8代表的为柚皮苷，色谱峰9代表的为新橙皮苷，色谱峰14代表的为甘草酸铵，色谱峰15代表的为芦荟大黄素，色谱峰17代表的为大黄酸，色谱峰18代表的为大黄素，色谱峰19代表的为和厚朴酚，色谱峰21代表的为厚朴酚。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (9)
1.一种厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，
该方法包括如下建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法的步骤：
取待测药物制剂，研细，取0.5～2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为50～95％的甲醇水溶液10-50体积份，称定重量，超声回流或振摇处理15-60分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为50～95％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为50～95％的甲醇水溶液或甲醇制成每1mL含柚皮苷1～10mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为254nm；流速为0.8-1.2mL/min，柱温为25～35℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得；
所述重量份与所述体积份的关系为g/mL。
2.根据权利要求1所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，以AgilentZORBAXEclipse XDB-C18色谱柱为色谱柱。
3.根据权利要求1所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述建立厚朴七物汤的药物制剂的指纹图谱的方法具体如下：
取待测药物制剂，研细，取1重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为80％的甲醇水溶液25体积份，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用体积浓度为80％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷对照品适量，精密称定，加体积浓度为80％的甲醇水溶液制成每1mL含柚皮苷4mg的溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水溶液为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为5％：95％→16％：84％；20min，A：B为16％：84％；20-45min，A：B为16％：84％→18％：82％；45min，A：B为18％：82％；45-65min，A：B为18％：82％→30％：70％；65min，A：B为30％：70％；65-90min，A：B为30％：70％→50％：50％；90min，A：B为50％：50％；90-115min，A：B为50％：50％→80％：20％；115-120min，A：B为80％：20％；检测波长为254nm；流速为1.0mL/min，柱温为30℃；理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，记录，即得。
4.根据权利要求1所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，还包括如下鉴别或含量测定方法中的至少一种：
A、厚朴的薄层鉴别
取待测药物制剂5～20重量份，研细，加60～90℃的石油醚20～80体积份，超声5～30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每lmL各含0.1～1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液5～10μL和对照品溶液1～5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.2的环己烷-乙酸乙酯-无水甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积浓度为0.5～2％的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
B、大黄的薄层鉴别
取待测药物制剂0.5～2重量份，研细，加5～40体积份甲醇，浸泡0.5～2小时，滤过，取续滤液1～10体积份，蒸干，残渣加1～20体积份水溶解，加0.5～2体积份盐酸，加热回流5～60分钟，立即冷却，用乙醚分1～3次振摇提取，每次5～50体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2体积份使溶解，作为供试品溶液；
取大黄对照药材0.05～0.2重量份，研细，加5～40体积份甲醇，浸泡0.5～2小时，滤过，取续滤液1～10体积份，蒸干，残渣加1～20体积份水溶解，加0.5～2体积份盐酸，加热回流5～60分钟，立即冷却，用乙醚分1～3次振摇提取，每次5～50体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～2体积份使溶解，作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液1～10μL、对照药材溶液2～10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15：5：1的30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
C、甘草的薄层鉴别
取待测药物制剂1～5重量份，研细，加甲醇5～50体积份，超声5～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水1～10体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各5～20体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5～5体积份使溶解，作为供试品溶液；
取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1mL含0.5～5mg的溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液1～5μL和对照品溶液2～10μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；
D、枳实的薄层鉴别
取待测药物制剂1～5重量份，研细，加甲醇5～50体积份，超声5～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水1～10体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各5～20体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇0.5～5体积份使溶解，作为供试品溶液；
取枳实对照药材0.1～1重量份，加甲醇5～20体积份，超声5～60分钟，取上清液作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各0.5～2μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为13：6：2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾于，喷以0.1～0.5％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；
E、厚朴中和厚朴酚与厚朴酚含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.5～5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10～40体积份，称定重量，超声处理5～60分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含和厚朴酚10～30μg及厚朴酚20～60μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为55％：45％→63％：37％；20min，A：B为63％：37％；检测波长294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
F、大黄中大黄总蒽醌的含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.1～1重量份，精密称定，置茄形瓶中，加体积浓度为5～10％的盐酸溶液5～15体积份，超声处理1～5分钟，再加三氯甲烷5～20体积份，加热回流0.5～2小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取2～5次，每次5～20体积份，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至2～10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
分别精密称取芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素、大黄素各10～50μg、大黄酚30～70μg、大黄素甲醚5～25μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
精密称取大黄酸对照品适量，精密称定，加0.5～2mL氯仿和甲醇制成每1mL含大黄酸30～90μg的溶液，摇匀，即得大黄酸对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为68％：32％→69％：31％；20-25min，A：B为69％：31％；25-30min，A：B为69％：31％→72％：28％；30min，A：B为72％：28％；30-40min，A：B为72％：28％→76％：24％；40min，A：B为76％：24％；40-50min，A：B为76％：24％→80％：20％；50-60min，A：B为80％：20％；60-70min，A：B为80％：20％→90％：10％；70min，A：B为90％：10％；检测波长254nm，理论塔板数按大黄酚峰计应不低于3000；
分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和大黄酸对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
G、枳实中柚皮苷及新橙皮苷的含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.5～2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50～150体积份，称定重量，超声处理10～50分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷及新橙皮苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含柚皮苷和新橙皮苷各0.05～0.25mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为18：82的乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相；检测波长283nm，理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各5～15μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
5.根据权利要求4所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述鉴别或含量测定方法具体如下：
A、厚朴的薄层鉴别
取待测药物制剂10重量份，研细，加60～90℃的石油醚50体积份，超声15分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1体积份使溶解，作为供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，加甲醇制成每lmL各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液7μL和对照品溶液2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4：1：0.2的环己烷-乙酸乙酯-无水甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以体积浓度为1％的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
B、大黄的薄层鉴别
取待测药物制剂0.7重量份，研细，加20体积份甲醇，浸泡1小时，滤过，取续滤液5体积份，蒸干，残渣加10体积份水溶解，加1体积份盐酸，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷1体积份使溶解，作为供试品溶液；
取大黄对照药材0.1重量份，研细，加20体积份甲醇，浸泡1小时，滤过，取续滤液5体积份，蒸干，残渣加10体积份水溶解，加1体积份盐酸，加热回流30分钟，立即冷却，用乙醚分2次振摇提取，每次20体积份，蒸干，残渣加三氯甲烷1体积份使溶解，作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液5μL、对照药材溶液6μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为15：5：1的30～60℃石油醚-甲酸乙酯-甲酸的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；
C、甘草的薄层鉴别
取待测药物制剂2重量份，研细，加甲醇25体积份，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各10体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2体积份使溶解，作为供试品溶液；
取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液；
分别吸取供试品溶液3μL和对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为15：1：1：2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯254nm下检视；
D、枳实的薄层鉴别
取待测药物制剂2重量份，研细，加甲醇25体积份，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5体积份使溶解，通过C18固相萃取小柱，依次以水、甲醇各10体积份洗脱，收集甲醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2体积份使溶解，作为供试品溶液；
取枳实对照药材0.5重量份，加甲醇10体积份，超声30分钟，取上清液作为对照药材溶液；
分别吸取供试品溶液和对照药材溶液各1μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以体积比为13：6：2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾于，喷以3％三氯化铝乙醇溶液，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视；
E、厚朴中和厚朴酚与厚朴酚的含量测定
取待测药物制剂，研细，取2重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25体积份，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取厚朴酚与和厚朴酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含和厚朴酚20μg及厚朴酚40μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为55％：45％→63％：37％；20min，A：B为63％：37％；检测波长294nm，理论塔板数按厚朴酚峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
F、大黄中大黄总蒽醌的含量测定
取待测药物制剂，研细，取0.5重量份，精密称定，置茄形瓶中，加体积浓度为8％的盐酸溶液10体积份，超声处理2分钟，再加三氯甲烷10体积份，加热回流1小时，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10体积份，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解，转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
分别精密称取芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含芦荟大黄素、大黄素各30μg、大黄酚50μg、大黄素甲醚15μg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
精密称取大黄酸对照品适量，精密称定，加1mL氯仿和甲醇制成每1mL含大黄酸60μg的溶液，摇匀，即得大黄酸对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.1％磷酸水为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为68％：32％→69％：31％；20-25min，A：B为69％：31％；25-30min，A：B为69％：31％→72％：28％；30min，A：B为72％：28％；30-40min，A：B为72％：28％→76％：24％；40min，A：B为76％：24％；40-50min，A：B为76％：24％→80％：20％；50-60min，A：B为80％：20％；60-70min，A：B为80％：20％→90％：10％；70min，A：B为90％：10％；检测波长254nm，理论塔板数按大黄酚峰计应不低于3000；
分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液和大黄酸对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；
G、枳实中柚皮苷及新橙皮苷的含量测定
取待测药物制剂，研细，取1重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇100体积份，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
取柚皮苷及新橙皮苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1mL含柚皮苷和新橙皮苷各0.15mg的混合溶液，摇匀，即得对照品溶液；
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为18：82的乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相；检测波长283nm，理论塔板数按柚皮苷峰计应不低于3000；
精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述厚朴七物汤的原料药组成为：厚朴19～30重量份，甘草7～11重量份，大黄7～11重量份，大枣20～30重量份，枳实8～12重量份，桂枝4.8～7.2重量份，生姜12～18重量份。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，
所述厚朴七物汤的药物制剂通过以下方法制备而成：分别取选定重量份的厚朴、甘草、大黄、大枣、枳实、桂枝和生姜，加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃下相对密度为1.20～1.40的清膏，干燥，加入常规辅料，按照常规工艺，制成临床上可接受的药物制剂；
所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、口服液体制剂或注射制剂。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的厚朴七物汤的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述厚朴七物汤的药物制剂的标准指纹图谱中，包括21个共有特征峰，以8号峰为内参考峰，各峰号的相对保留时间分别为：1号峰0.28，2号峰0.36，3号峰0.44，4号峰0.47，5号峰0.69，6号峰0.71，7号峰0.75，8号峰1.00，9号峰1.22，10号峰1.53，11号峰1.62，12号峰1.81，13号峰1.89，14号峰1.97，15号峰2.02，16号峰2.04，17号峰2.10，18号峰2.41，19号峰2.45，20号峰2.50，21号峰2.57；其中，8号峰为柚皮苷，9号峰为新橙皮苷，14号峰为甘草酸铵，15号峰为芦荟大黄素，17号峰为大黄酸，18号峰为大黄素，19号峰为和厚朴酚，21号峰为厚朴酚。
9.权利要求1-8任一项所述的方法在厚朴七物汤的药物制剂的质量检测和质量控制中的应用。
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| 提高咳露口服液质量标准的研究;杨东花 等;《西北药学杂志》;20111031;第26卷(第5期);第324-327页 * |
| 高效液相色谱法测定便通胶囊中柚皮苷和新橙皮苷的含量;汪勇良 等;《中国生化药物杂志》;20151231;第35卷(第12期);第174-175页 * |
| 魏惠珍 等.大承气汤高效液相色谱指纹图谱研究.《环球中医药》.2012,第5卷(第6期), * |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107515266A (zh) | 2017-12-26 |
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