CN109115904B - 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用 - Google Patents

一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109115904B
CN109115904B CN201810825827.4A CN201810825827A CN109115904B CN 109115904 B CN109115904 B CN 109115904B CN 201810825827 A CN201810825827 A CN 201810825827A CN 109115904 B CN109115904 B CN 109115904B
Authority
CN
China
Prior art keywords
mobile phase
volume ratio
fingerprint
uplc
dingkundan
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810825827.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109115904A (zh
Inventor
王佩义
张爱荣
郝晋琪
秦雪梅
王楠
高晓霞
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanxi Guangyuyuan Traditional Chinese Medicine Co ltd
Original Assignee
Shanxi Guangyuyuan Traditional Chinese Medicine Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanxi Guangyuyuan Traditional Chinese Medicine Co ltd filed Critical Shanxi Guangyuyuan Traditional Chinese Medicine Co ltd
Priority to CN201810825827.4A priority Critical patent/CN109115904B/zh
Publication of CN109115904A publication Critical patent/CN109115904A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109115904B publication Critical patent/CN109115904B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8686—Fingerprinting, e.g. without prior knowledge of the sample components

Abstract

本发明公开了一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，属于中药技术领域。将供试品溶液和对照品溶液分别进行超高效液相色谱分析，色谱条件为以0.1%甲酸水为流动相A，以0.1%甲酸甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，柱温30℃，进样量5μL，流速0.2mL/min，检测波长280nm，分析定坤丹指纹图谱信息共获得22个共有峰。采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液、对照品溶液的液相色谱进行数据匹配，即得标准指纹图谱。本发明建立的定坤丹指纹图谱能够较全面的反映定坤丹的物质信息，可准确有效评价和控制定坤丹的质量。

Description

一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用
技术领域
本发明涉及中药指纹图谱的构建方法，特别涉及一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，及其在定坤丹质量监控方面的应用。
背景技术
定坤丹是由红参、鹿茸、西红花、三七、白芍、熟地黄、当归、白术、枸杞子、黄芩、香附、茺蔚子、川芎、鹿角霜、阿胶、延胡索等药味经加工制成的大蜜丸，可滋补气血，调经舒郁。该方组方十分复杂，药味众多，为保持这一中药大复方不同批次产品具有稳定的功效，就必须制定严格的企业内控质量标准。2015版《中国药典》规定定坤丹的质量控制标准包括：显微鉴别枸杞子、白术、黄芩、甘草；薄层鉴别当归、川芎、枸杞子、白芍、红参、三七对照药材以及芍药苷、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品；含量测定规定本品每丸含红参和三七以人参皂苷Rg1（C42H72O14）计，不得少于3.0mg。因定坤丹成分复杂，其中任何一种药材均不能评价整体复方的质量，一个或几个化学成分则更不能够准确评价复方的质量。现行质量控制标准并不能反映复方的整体质量。
从整体上综合分析评价定坤丹方可提升复方质量均一性，故可利用高效液相色谱建立定坤丹的指纹图谱，综合反映不同生产批次定坤丹主要成分差异，为其内在质量特征评价和等级分类提供科学依据。目前，关于定坤丹的高效液相色谱指纹图谱研究尚未见文献报道，为保障患者用药安全有效，本发明建立了一种适用于定坤丹质量控制的指纹图谱检测方法。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，该方法可以客观、全面、准确的评价定坤丹的质量，具有方法简单、操作方便、耗时短的优势，对控制定坤丹的内在质量具有重要意义。
本发明采用的技术方案是：一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备
取定坤丹切碎，称取1g，精密称定，加等量硅藻土，研匀，加入甲醇50ml，超声处理至少30min，滤过，旋转蒸发回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
（2）对照品溶液的制备
精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、黄芩苷、藁本内酯对照品并溶于甲醇，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液；
（3）色谱条件
色谱柱：Water Acquity UPLC HSS T3，1.8μm；流动相以0.1%甲酸水为流动相A，以0.1%甲酸甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：
0min时，流动相A 所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；
5min时，流动相A 所占的体积比为93%，流动相B所占的体积比为7%；
16min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；
17.5min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；
38min时，流动相A所占的体积比为15%，流动相B所占的体积比为85%；
41min时，流动相A所占的体积比为5%，流动相B所占的体积比为95%；
45min时，流动相A所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；
柱温：30℃；进样量：5μL；流速：0.2mL/min；紫外检测波长：280nm；
（4）分别精密吸取步骤（1）制备的供试品溶液和步骤（2）制备的对照品溶液5μL注入超高效液相色谱仪中按照步骤（3）的色谱条件进行测定，分别得到供试品和对照品UPLC图谱；
（5）采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液和对照品溶液的UPLC图谱进行数据匹配，得到标准指纹图谱。
进一步地，所述步骤（1）中甲醇加入量为每克定坤丹中加入50ml甲醇；所述步骤（1）中超声提取时间为30min。
进一步地，所述步骤（3）中梯度洗脱条件为：
0-5 min，流动相B与流动相A的体积比由2%：98%到7%：93%；
5-16 min，流动相B与流动相A的体积比由7%：93%到44%：56%；
16-17.5 min，流动相B与流动相A的体积比为44%：56%；
17.5-38 min，流动相B与流动相A的体积比由44%：56%到85%：15%；
38-41 min，流动相B与流动相A的体积比由85%：15%到95%：5%；
41-45 min，流动相B与流动相A的体积比由95%：5%到2%：98%。
进一步地，所述定坤丹UPLC指纹图谱中有22个共有峰，通过对照品对照及UPLC-MS指认，鉴别了定坤丹UPLC指纹图谱中8种成分，其中1号峰为没食子酸，2号峰为5-羟甲基糠醛，3号峰为芍药内酯苷，4号峰为芍药苷，5号峰为阿魏酸，6号峰为甘草苷，10号峰为黄芩苷，18号峰为藁本内酯。
进一步地，所述定坤丹UPLC指纹图谱可用于定坤丹品质评价和质量控制。
本发明的有益效果是：本发明提供的定坤丹成分指纹图谱构建方法，操作方便、方法简便快捷；所构建的指纹图谱可用于定坤丹的质量标准控制，较单独测定一个或几个成分的含量来判定复方整体质量的方法能更加全面的反映复方总体特征，科学评价定坤丹的质量，提升产品一致率，从而使产品的疗效得到保障；且经过流动相筛选，以及紫外全扫描和多波长对比，最终选择了相对全面表征的280nm波长下的指纹图谱，避免了因测单一波长、成分而判定制剂整体质量的片面性，减少了为质量达标而人为处理的可能性。
附图说明
图1是定坤丹UPLC对照特征图谱。
图2是对照品UPLC图谱。
图3是19批次定坤丹UPLC指纹图谱叠加图。
具体实施方式
为了能更清楚地理解本发明的技术方案，下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
本发明所述定坤丹，由山西广誉远国药有限公司提供。
实施例1：定坤丹UPLC指纹图谱的构建
1.1仪器
Waters Acquity UPLC H-Class 超高效液相色谱系统、Empower 工作站含四元梯度泵、自动进样器、PDA 检测器（Waters 公司）；超声清洗仪（KQ2200DB型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司）；万分之一天平（CPA225D电子分析天平，赛多利斯科学仪器有限公司）；Milli-Q Integral Water Purification System（美国Millipore公司）。
1.2试药与试剂
样品：定坤丹（山西广誉远国药有限公司），批号为139170643、139170644、139170645、139170647、139170648、139170649、139170650、139170651、139170652、139170653、139170654、139170655、139170656、139170657、139170658、139170659、139170661、139170662、139170663。
试剂：超纯水；甲醇、甲酸为色谱纯（美国Fisher公司）；其他试剂均为分析纯。
1.3供试品溶液的制备
取不同生产批次的定坤丹切碎，分别称取1g，精密称定，加等量硅藻土，研匀，加入50ml甲醇，超声提取30min，滤过，旋转蒸发回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
1.4对照品溶液的制备
精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、黄芩苷、藁本内酯对照品适量，溶于甲醇，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液。
1.5色谱条件
色谱柱：Water Acquity UPLC HSS T3，1.8μm；流动相为0.1%甲酸水（A）和0.1%甲酸甲醇（B），流速为0.2 mL/min，柱温30℃，紫外检测波长为280 nm；分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液5μL注入超高效液相色谱仪，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件见下表：
Figure 667095DEST_PATH_IMAGE001
1.6共有峰的确定
记录色谱图得到定坤丹指纹图谱，分析定坤丹指纹图谱信息（如图1所示），所得指纹图谱包括22个共有峰，通过对照品对照（如图2所示）及UPLC-MS指认，鉴别了定坤丹UPLC指纹图谱中8种成分，其中1号峰为没食子酸，2号峰为5-羟甲基糠醛，3号峰为芍药内酯苷，4号峰为芍药苷，5号峰为阿魏酸，6号峰为甘草苷，10号峰为黄芩苷，18号峰为藁本内酯。
实施例2：定坤丹对照特征图谱及相似度评价
取不同生产批次的定坤丹共19批，分别按照已建立的定坤丹指纹图谱分析方法进行分析，得到19批次样品的UPLC指纹图谱叠加图（如图3所示）。以上述19批次样品的色谱谱图为基础，使用药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2008版）进行数据处理得到共有模式特征图谱，即为定坤丹对照特征图谱R（如图1所示）。19批次样品各主要色谱峰保留时间基本一致，确定了该检测条件分离较好的22个峰为其共有色谱峰。计算19批次定坤丹指纹图谱和对照特征图谱之间的相似度，发现样品与对照图谱的相似度均大于0.92，结果见表1。
Figure 543785DEST_PATH_IMAGE002
本发明建立的定坤丹指纹图谱操作方法具有良好的重复性和稳定性，因此本发明方案具有可行性，能够用于定坤丹的综合质量控制。
本发明提供的定坤丹成分指纹图谱构建方法，操作方便、方法简便快捷。所构建的指纹图谱可用于定坤丹的质量标准控制，较单独测定一个或几个成分的含量来判定复方整体质量的方法能更加全面的反映复方总体特征，科学评价定坤丹的质量，提升产品一致率，从而使产品的疗效得到保障。且经过流动相筛选，以及紫外全扫描和多波长对比，最终选择了相对全面表征的280nm波长下的指纹图谱，避免了因测单一波长、成分而判定制剂整体质量的片面性，减少了为质量达标而人为处理的可能性。
以上所述仅是本发明的较佳实施方式，故凡依本发明专利申请范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均包括于本发明专利申请范围内。

Claims (4)

1.一种定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）供试品溶液的制备
取定坤丹切碎，称取1g，精密称定，加等量硅藻土，研匀，加入甲醇50ml，超声处理至少30min，滤过，旋转蒸发回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
（2）对照品溶液的制备
精密称取没食子酸、5-羟甲基糠醛、芍药内酯苷、芍药苷、阿魏酸、甘草苷、黄芩苷、藁本内酯对照品并溶于甲醇，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为对照品溶液；
（3）色谱条件
色谱柱：Water Acquity UPLC HSS T3，1.8μm；流动相以0.1%甲酸水为流动相A，以0.1%甲酸甲醇为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱程序为：
0min时，流动相A 所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；
5min时，流动相A 所占的体积比为93%，流动相B所占的体积比为7%；
16min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；
17.5min时，流动相A所占的体积比为56%，流动相B所占的体积比为44%；
38min时，流动相A所占的体积比为15%，流动相B所占的体积比为85%；
41min时，流动相A所占的体积比为5%，流动相B所占的体积比为95%；
45min时，流动相A所占的体积比为98%，流动相B所占的体积比为2%；
柱温：30℃；进样量：5μL；流速：0.2mL/min；紫外检测波长：280nm；
（4）分别精密吸取步骤（1）制备的供试品溶液和步骤（2）制备的对照品溶液5μL注入超高效液相色谱仪中按照步骤（3）的色谱条件进行测定，分别得到供试品和对照品UPLC图谱；
（5）采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液和对照品溶液的UPLC图谱进行数据匹配，得到标准指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤（1）中甲醇加入量为每克定坤丹中加入50ml甲醇；所述步骤（1）中超声提取时间为30min。
3.根据权利要求1所述的定坤丹UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述定坤丹UPLC指纹图谱中有22个共有峰，通过对照品对照及UPLC-MS指认，鉴别了定坤丹UPLC指纹图谱中8种成分，其中1号峰为没食子酸，2号峰为5-羟甲基糠醛，3号峰为芍药内酯苷，4号峰为芍药苷，5号峰为阿魏酸，6号峰为甘草苷，10号峰为黄芩苷，18号峰为藁本内酯。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的定坤丹UPLC指纹图谱构建方法的应用，其特征在于：所述定坤丹UPLC指纹图谱可用于定坤丹品质评价和质量控制。
CN201810825827.4A 2018-07-25 2018-07-25 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用 Active CN109115904B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810825827.4A CN109115904B (zh) 2018-07-25 2018-07-25 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810825827.4A CN109115904B (zh) 2018-07-25 2018-07-25 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109115904A CN109115904A (zh) 2019-01-01
CN109115904B true CN109115904B (zh) 2021-02-02

Family

ID=64862543

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810825827.4A Active CN109115904B (zh) 2018-07-25 2018-07-25 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109115904B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113917012B (zh) * 2021-09-29 2023-06-20 内蒙古京新药业有限公司 一种定坤丹的特征图谱及其构建方法、应用
CN113640432A (zh) * 2021-10-13 2021-11-12 江西省药品检验检测研究院 一种壮腰健身丸的质量评价方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002032438A1 (fr) * 2000-09-13 2002-04-25 Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co. Composition pharmaceutique traitant les maladies gynecologiques associees a la stase sanguine, les maladies cardio-vasculaires et cerebrales, les maladies respiratoires et autres maladies analogues
EP1512970A1 (en) * 2003-09-05 2005-03-09 Nederlandse Organisatie voor toegepast-natuurwetenschappelijk Onderzoek TNO Method for determining the impact of a multicomponent mixture on the biological profile of a disease
CN100450501C (zh) * 2004-03-17 2009-01-14 天津天士力制药股份有限公司 一种治疗心脑血管疾病的中药制剂及其制备方法
CN103808840B (zh) * 2012-11-02 2015-09-09 丽珠集团利民制药厂 一种参芪扶正注射液指纹图谱的建立方法
CN105486762B (zh) * 2014-09-19 2018-08-21 天士力医药集团股份有限公司 一种坤灵丸的高效液相指纹图谱检测方法
CN106645482A (zh) * 2016-12-26 2017-05-10 河北省药品检验研究院 一种二十七味定坤丸中四种人参皂苷类成分的含量测定方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN109115904A (zh) 2019-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102818861B (zh) 一种清毒安肾胶囊的指纹图谱建立方法
CN101991661B (zh) 含白芍、人参、丹参、青蒿、甘草、川芎和当归的中成药的检测方法
CN111999423B (zh) 一种颈痛颗粒指纹图谱的建立方法及其应用
CN110907546B (zh) 一种补肾健骨中药的hplc指纹图谱检测方法
WO2023024322A1 (zh) 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
CN103728387A (zh) 参芪降糖制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法
CN101028388B (zh) 一种治疗眼疾近视及视疲劳中药制剂的质量检测方法
CN105486762B (zh) 一种坤灵丸的高效液相指纹图谱检测方法
CN106290599B (zh) 一种中药组合物的含量测定方法
CN109115904B (zh) 一种定坤丹uplc指纹图谱的构建方法及其应用
CN108459128B (zh) 一种当归四逆汤组合物的质量控制方法
CN113281439B (zh) 肾宝片的质量控制检测方法
CN112798724B (zh) 一种适用于人参属中药材及药材提取物的皂苷类成分色谱指纹图谱的建立方法
CN108459129B (zh) 一种防己茯苓汤组合物的质量控制方法
CN107643343B (zh) 一种玉女煎标准汤的hplc指纹图谱测定方法
CN109142563B (zh) 一种龟龄集uplc指纹图谱的构建方法及其应用
CN103424498A (zh) 一种清毒安肾胶囊指纹图谱的建立方法及其应用
CN113759011B (zh) 一种银柴胡及其制剂特征图谱的建立方法
CN108061772B (zh) 一种寒喘祖帕制剂的质量检测方法
CN106526000A (zh) 升麻葛根汤组合物指纹图谱的建立方法及指纹图谱
CN111474276B (zh) 一种健阳片制剂的质量控制方法
CN112798721B (zh) 一种治疗颈椎病中药制剂的指纹图谱构建方法及应用
CN109781884A (zh) 一种前列欣胶囊指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN114487196B (zh) 天麻眩晕宁颗粒hplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱
CN115201389B (zh) 九味补血口服液中药制剂的指纹图谱建立方法及指纹图谱

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant