CN113917012B - 一种定坤丹的特征图谱及其构建方法、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种定坤丹的特征图谱及其构建方法、应用。该定坤丹的特征图谱中包括9个共有峰，其中5号峰为阿魏酸，7号峰为西红花苷‑Ⅰ，8号峰为藁本内酯。该定坤丹特征图谱的构建方法包括以下步骤：将定坤丹待测液经高效液相色谱法梯度洗脱分离，即可；其中：色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；检测波长为260～280nm；以甲醇为流动相A，以0.05～0.5％甲酸为流动相B。本发明所提供的定坤丹特征图谱的特征峰中包含西红花苷‑Ⅰ，能够有效监测定坤丹中西红花等贵重药材中的特征成分，能够更准确地监测、反映定坤丹的质量。此外，本发明所提供的定坤丹成分特征图谱构建方法，操作方便、方法简便快捷。
Description
技术领域
本发明涉及中药特征图谱的构建方法，特别涉及一种定坤丹的特征图谱及其构建方法、应用。
背景技术
定坤丹是由红参、鹿茸、西红花、三七、白芍、熟地黄、当归、白术、枸杞子、黄芩、香附、芫蔚子、川芎、鹿角霜、阿胶、延胡索等多种药味经加工制成，可滋补气血，调经舒郁。该方组方复杂，药味众多，为保持这一中药大复方不同批次产品具有稳定的功效，就必须制定严格的企业内控质量标准。2015版《中国药典》规定定坤丹的质量控制标准包括：显微鉴别枸杞子、白术、黄芩、甘草；薄层鉴别当归、川芎、枸杞子、白芍、红参、三七对照药材以及芍药苷、人参皂苷Rbi、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R对照品；含量测定规定定坤丹每丸含红参和三七以人参皂苷Rgi(C4gHr2O14)计，不得少于3.0mg。因定坤丹成分复杂，其中任何一种药材均不能评价整体复方的质量，一个或几个化学成分则更不能够准确评价复方的质量。现行质量控制标准并不能反映复方的整体质量。
定坤丹失去了原有饮片的形态学特征，单纯的指标成分的定性鉴别和定量分析，难以反映其质量的优劣。作为衡量定坤丹制剂是否与饮片基本一致的标准参照物，其质量应加强专属性鉴别和多成分、整体质量控制。因而物质基准质量控制要重视以特征图谱为主的整体质量控制。
从整体上综合分析评价定坤丹方可提升复方质量均一性，故可利用高效液相色谱建立定坤丹的特征图谱，综合反映不同生产批次定坤丹主要成分差异，为其内在质量评价和等级分类提供科学依据。
然而，现有技术如CN109115904A公开的一种超高效液相色谱(UPLC)检测定坤丹成分的方法，虽然能够检测其中多个化学成分，但超高效液相色谱仪价格昂贵，检测成本过高，不利于推广应用；并且，其指纹图谱中的特征峰没有包含西红花等贵重药材中的特征成分，可能存在质量监控不准确的风险。
因此，如何通过特征图谱更准确地监测、反映定坤丹的质量(例如通过重点监测定坤丹中的贵重药材的质量)是本领域亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中的定坤丹指纹图谱中的特征峰没有包含西红花等贵重药材中的特征成分，可能存在质量监控不准确风险的缺陷，而提供了一种定坤丹的特征图谱及其构建方法、应用。本发明所提供的定坤丹特征图谱的特征峰中包含西红花苷-Ⅰ，能够有效监测定坤丹中西红花等贵重药材中的特征成分，能够更准确地监测、反映定坤丹的质量。此外，本发明所提供的定坤丹成分特征图谱构建方法，操作方便、方法简便快捷。
本发明提供了一种定坤丹的特征图谱，所述特征图谱中包括9个共有峰，其中5号峰为阿魏酸，7号峰为西红花苷-Ⅰ，8号峰为藁本内酯。
本发明中，优选地，所述特征图谱以5号峰为对照峰，下述共有峰的相对保留时间分别为：
阿魏酸共有峰的相对保留时间的平均值为1min，RSD为0.00％；
西红花苷-Ⅰ共有峰的相对保留时间的平均值为1.265min，RSD为0.22％；
藁本内酯共有峰的相对保留时间的平均值为1.579min，RSD为0.06％；
或者，
阿魏酸共有峰的相对保留时间的平均值为1min，RSD为0.00％；
西红花苷-Ⅰ共有峰的相对保留时间的平均值为1.271min，RSD为0.21％；
藁本内酯共有峰的相对保留时间的平均值为1.642min，RSD为0.53％。
本发明中，优选地，所述特征图谱9个共有峰的相对保留时间(min)的平均值分别为：0.370min，RSD为0.21％；0.419min，RSD为0.17％；0.868min，RSD为0.02％；0.933min，RSD为0.01％；1.000min，RSD为0.00％；1.112min，RSD为0.03％；1.265min，RSD为0.22％；1.579min，RSD为0.06％；1.613min，RSD为0.06％；
或者，所述特征图谱9个共有峰的相对保留时间分别为：0.353min，RSD为1.72％；0.391min，RSD为2.37％；0.855min，RSD为0.42％；0.931min，RSD为0.07％；1.000min，RSD为0.00％；1.113min，RSD为0.06％；1.271min，RSD为0.21％；1.603min，RSD为0.45％；1.642min，RSD为0.53％。
本发明中，所述特征图谱中的共有峰可通过对照品对照及HPLC-MS鉴定。
本发明中，优选地，所述定坤丹的特征图谱如图1、图2、图14或图15所示。
本发明还提供了一种定坤丹特征图谱的构建方法，其包括以下步骤：将定坤丹待测液经高效液相色谱法(HPLC)梯度洗脱分离，即可；
所述液相色谱法中，色谱条件如下：
色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶，例如Inertsil ODS-3C18；
检测波长为260～280nm；
以甲醇为流动相A，以0.05～0.5％甲酸(例如0.2％)为流动相B，百分比是指体积百分比；
以所述流动相的总体积为100％计，所述梯度洗脱分离的程序如下表所示：
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～10 | 5 | 95 |
| 10～25 | 5→20 | 95→80 |
| 25～50 | 20→45 | 80→55 |
| 50～70 | 45→70 | 55→30 |
| 70～85 | 70 | 30 |
| 85～110 | 70→80 | 30→20 |
。
本发明中，所述高效液相色谱法中，所述色谱柱的柱温可为25～30℃，例如25℃。
本发明中，所述高效液相色谱法中，所述色谱柱的内径可为4.6mm。
本发明中，所述高效液相色谱法中，所述色谱柱的柱长可为250mm。
本发明中，所述高效液相色谱法中，所述色谱柱的填料粒径可为5μm。
本发明中，所述高效液相色谱法中，所述检测波长优选为260nm。
本发明中，所述高效液相色谱法中，检测器可为紫外检测器，例如DAD。
本发明中，所述高效液相色谱法中，所述流动相的流速可为0.9～1.1ml/min，例如1ml/min。
本发明中，所述高效液相色谱法中，进样量可为本领域常规的进样量，例如为5～10μl，再例如5μl。
本发明中，所述定坤丹待测液可采用本领域常规的方法制得，例如将定坤丹经50％甲醇溶解并超声制得。
其中，所述定坤丹的质量g和所述甲醇的体积ml之比可为4：(20～40)，例如4:30。
其中，所述超声的时间可为20～40分钟，优选为30分钟。
其中，所述超声的功率可为500W。
其中，所述超声的频率可为40KHz。
本发明中，所述定坤丹待测液可采用下述方法制得：
取定坤丹，剪碎，混匀，取约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇30ml，称定重量，超声处理至少30分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
本发明中，所述定坤丹待测液中的定坤丹可为本领域常规的定坤丹，例如药典(《中国药典》(2020年版一部)P1206页)中所记载的定坤丹大蜜丸、定坤丹水蜜丸。
本发明中，所述定坤丹特征图谱中特征峰所对应的具体成分可通过将对照品溶液经所述高效液相色谱法的梯度洗脱分离方法确认。
其中，所述对照品溶液中的对照品可为阿魏酸、西红花苷-Ⅰ或藁本内酯。
其中，所述对照品溶液中的溶剂可为甲醇。
其中，所述对照品溶液中对照品的浓度可为15μg/mL。
本发明中，所述定坤丹特征图谱的构建方法一般还包括以下步骤：
采用国家药典委员会制定的中药色谱特征图谱相似度评价软件，对所述定坤丹待测液和所述对照品溶液的高效液相色谱图谱进行数据匹配，得到标准特征图谱。
本发明还提供了一种采用上述方法构建得到的定坤丹的特征图谱，所述定坤丹的特征图谱中有9个共有峰，定坤丹的特征图谱中3种成分，其中5号峰为阿魏酸，7号峰为西红花苷-Ⅰ，8号峰为藁本内酯。
其中，所述特征图谱中的共有峰可通过对照品对照及HPLC-MS鉴定。
本发明还提供了一种所述的定坤丹的特征图谱在评价和/或控制定坤丹质量中的应用。
其中，所述应用的步骤可为：
采用软件对待测定坤丹的指纹图谱和定坤丹的标准特征图谱进行分析，相似度大于0.95为合格产品，小于等于0.95为不合格产品。
优选地，所述软件为中药色谱特征图谱相似性评价系统软件。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
(1)本发明所提供的定坤丹特征图谱的特征峰中包含西红花苷-Ⅰ，能够有效监测定坤丹中西红花等贵重药材中的特征成分，能够更准确地监测、反映定坤丹的质量。本发明所构建的特征图谱可用于定坤丹的质量标准控制，较单独测定一个或几个成分的含量来判定复方整体质量的方法能更加全面地反映复方总体特征，科学评价定坤丹的质量，提升产品一致率，从而使产品的疗效得到保障。
(2)本发明所提供的定坤丹的特征图谱构建方法，操作方便、方法简便快捷、经济实用，且经过流动相筛选，以及紫外全扫描和多波长对比，最终选择了相对全面表征的260～280nm波长下的特征图谱，避免了因测单一波长、成分而判定制剂整体质量的片面性，减少了为质量达标而人为处理的可能性。
附图说明
图1为实施例1中13批次定坤丹HPLC特征图谱叠加图，S1 190101，S2 190132，S3190133，S4 19034，S5 190165，S6 190412，S7 190725，S8 190828，S9 190829，S10 191013，S11 191038，S12 191039，S13 191222，R对照。
图2为实施例1中定坤丹HPLC对照特征图谱，峰5(S)为阿魏酸，峰7为西红花苷-Ⅰ，峰8为藁本内酯。
图3为实施例2中精密度叠加图。
图4为实施例2中精密度相似度结果图。
图5为实施例3中重复性叠加图。
图6为实施例3中重复性相似度结果图。
图7为实施例3中稳定性叠加图。
图8为实施例3中稳定性相似度结果图。
图9为实施例4中定坤丹供试品在检测波长为230nm时的色谱图吸收图谱。
图10为实施例4中定坤丹供试品在检测波长为260nm时的色谱图吸收图谱。
图11为实施例4中定坤丹供试品在检测波长为280nm时的色谱图吸收图谱。
图12为实施例4中定坤丹供试品在检测波长为300nm时的色谱图吸收图谱。
图13为实施例4中定坤丹供试品在检测波长为360nm时的色谱图吸收图谱。
图14为实施例5中13批次定坤丹HPLC特征图谱叠加图，S1为供试品191001S，S2为供试品191002S，S3为供试品200303S，S4为供试品200304S，S5为供试品200305S，S6为供试品200306S，S7为供试品200506S，S8为供试品200507S，S9为供试品200508S，S10为供试品200509S，S11为供试品200510S，S12为供试品200511S，S13为供试品191012S，R为对照图谱。
图15为实施例5中定坤丹HPLC对照特征图谱，峰5(S)为阿魏酸，峰7为西红花苷-Ⅰ，峰8为藁本内酯。
图16为实施例5中精密度叠加图。
图17为实施例5中精密度相似度结果图。
图18为实施例6中重复性叠加图。
图19为实施例6中重复性相似度结果图。
图20为实施例6中稳定性叠加图。
图21为实施例6中稳定性相似度结果图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1定坤丹(大蜜丸)HPLC特征图谱的构建
1.1原料
定坤丹(大蜜丸)：批号分别为190101，190132，190133，190341，190165，190412，190725，190828，190829，191013，191038，191039，191222；每丸重10.8g，内蒙古京新药业有限公司。
1.2设备及型号
高效液相色谱仪：Agilent1260Infinity，DAD检测器，安捷伦科技有限公司；
色谱柱：Inertsil ODS-3C18(4.6×250mm，5μm)，日本GLSciences公司；
分析天平：METTLERTOLEDOAL204(万分之一)，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；
分析天平：METTLERTOLEDOXS105(十万分之一)，梅特勒托利多仪器(上海)有限公司；
电子天平：UTP-313，d＝0.01g，上海花潮电器有限公司；
药典筛：三号筛，浙江上虞市华丰五金仪器有限公司；
数控超声波清洗机：KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司；
加热套：5000ml，上海秋佐科学仪器有限公司；
有机相针式滤器：13mm，0.45μm，上海安谱实验科技仪器有限公司。
1.3试剂
甲醇：HPLC级，上海安谱实验科技仪器有限公司；
甲醇：AR级，上海泰坦科技股份有限公司；
乙醇：AR级，上海泰坦科技股份有限公司；
甲酸：AR级，上海泰坦科技股份有限公司；
纯净水：杭州娃哈哈集团有限公司。
1.4色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.2％甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm，流速为每分钟1.0ml；色谱柱的柱温为25℃。理论塔板数按阿魏酸计不小于1500。
表1
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～10 | 5 | 95 |
| 10～25 | 5→20 | 95→80 |
| 25～50 | 20→45 | 80→55 |
| 50～70 | 45→70 | 55→30 |
| 70～85 | 70 | 30 |
| 85～110 | 70→80 | 30→20 |
1.5特征图谱构建方法
供试品溶液的制备：取定坤丹，剪碎，混匀，取约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇30ml，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
对照品溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含15μg的溶液，即得。
测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μL，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
1.6共有峰的确定
对13批定坤丹样品进行了测定，并对所得图谱进行分析，选择图谱中稳定性较好、响应值适宜的色谱峰为共有峰，共标定了9个共有峰，并计算相对保留时间和相对峰面积，以5号峰为S峰。
供试品特征图谱中应呈现9个特征峰，其中阿魏酸参照物峰定为S峰，计算其余特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值±10％之内。规定值为：0.37(峰1)、0.42(峰2)、0.87(峰3)、0.93(峰4)、1.00(峰5)、1.11(峰6)、1.26(峰7)、1.58(峰8)、1.61(峰9)。具体如图2所示，其中：峰5(S)：阿魏酸；峰7：西红花苷-Ⅰ；峰8：藁本内酯。
13批次定坤丹HPLC特征图谱叠加图如图1所示，相对保留时间结果见表2，相对峰面积结果见表3。
表2相对保留时间结果
表3相对峰面积结果
结果显示，13批定坤丹色谱图中，9个共有峰的相对保留时间RSD均小于3.00％，波动较小，可选择上述峰的相对保留时间对特征图谱进行限定。此外，9个共有峰的相对峰面积RSD均大于3.00％，波动较大，故不对9个共有峰的相对峰面积进行限定。
实施例2定坤丹对照特征图谱及相似度评价
取定坤丹(大蜜丸)，按实施例1中供试品溶液的制备和测定法操作，连续进样6次，以上述13批次样品的色谱谱图为基础，使用药典委员会推荐的《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2008版)进行数据处理得到共有模式特征图谱，即为定坤丹对照特征图谱R(如图2所示)，6次进样样品各主要色谱峰保留时间基本一致，确定了该检测条件分离较好的9个峰为其共有色谱峰。
分别按照已建立的定坤丹特征图谱分析方法进行分析，按中药色谱特征图谱相似度评价系统计算其相似度，计算6次进样定坤丹特征图谱和对照特征图谱之间的相似度。发现样品与对照图谱的相似度均大于0.95，结果见精密度叠加图(如图3所示)、精密度相似度结果图(如图4所示)。
图3-4中：S1为精密度1，S2为精密度2，S3为精密度3，S4为精密度4，S5为精密度5，S6为精密度6，R为对照指纹图谱。
可见，本发明建立的定坤丹特征图谱操作方法具有良好的重复性和稳定性，因此本发明方案具有可行性，能够用于定坤丹的综合质量控制。
实施例3方法学验证
对实施例1确定后的HPLC色谱条件，进行重复性、稳定性的考察。
(1)重复性
取定坤丹(大蜜丸)，按实施例1供试品溶液的制备和测定法项下操作，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算其相似度，结果见图5、图6。
图5-6中：S1为重复性1，S2为重复性2，S3为重复性3，S4为重复性4，S5为重复性5，S6为重复性6，R为对照指纹图谱。
结果显示，相似度均大于0.95，说明方法重复性良好。
(2)稳定性
取定坤丹(大蜜丸)，按实施例1供试品溶液的制备和测定法项下操作，分别在制备后放置0、4、8、12、20、24小时进样，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算其相似度，结果见图7、图8。
图7-8中：S1为0小时稳定性，S2为4小时稳定性，S3为8小时稳定性，S4为12小时稳定性，S5为20小时稳定性，S6为24小时稳定性，R为对照指纹图谱。
结果显示，相似度均大于0.95，说明供试品溶液在24小时内稳定性良好。
根据方法学验证的结果可知，重复性考察中样品与对照图谱的相似度均大于0.95，如图5所示的重复性叠加图、如图6所示的重复性相似度结果图。
可见，本发明建立的定坤丹特征图谱操作方法具有良好的重复性和稳定性，因此本发明方案具有可行性，能够用于定坤丹的综合质量控制。
实施例4定坤丹(水蜜丸)HPLC方法的构建
一、实验材料
1原料
定坤丹：水蜜丸，批号191001S，内蒙古京新药业有限公司。
2设备及型号
高效液相色谱仪：Agilent 1260Infinity，DAD检测器，安捷伦科技有限公司；
色谱柱：Inertsil ODS-3C18(4.6×250mm，5μm)，日本GL Sciences公司；
分析天平：METTLER TOLEDO AL204(万分之一)，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司；
分析天平：METTLER TOLEDO XS105(十万分之一)，梅特勒托利多仪器(上海)有限公司；
电子天平：UTP-313，d＝0.01g，上海花潮电器有限公司；
药典筛：三号筛，浙江上虞市华丰五金仪器有限公司；
数控超声波清洗机：KQ-500DE，昆山市超声仪器有限公司；
加热套：5000ml，上海秋佐科学仪器有限公司；
有机相针式滤器：13mm，0.45μm，上海安谱实验科技仪器有限公司。
3试药
甲醇：HPLC级，上海安谱实验科技仪器有限公司；
甲醇：AR级，上海泰坦科技股份有限公司；
乙醇：AR级，上海泰坦科技股份有限公司；
甲酸：AR级，上海泰坦科技股份有限公司；
纯净水：杭州娃哈哈集团有限公司。
二、方法构建
1色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.2％甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm，流速为每分钟1.0ml。
表4
| 时间(分钟) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0～10 | 5 | 95 |
| 10～25 | 5→20 | 95→80 |
| 25～50 | 20→45 | 80→55 |
| 50～70 | 45→70 | 55→30 |
| 70～85 | 70 | 30 |
| 85～110 | 70→80 | 30→20 |
供试品溶液的制备：取本品(定坤丹：水蜜丸，批号191001S)粉末(过三号筛)约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇30ml，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：吸取供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2检测波长
文献报道的检测波长，常常是为测定某一特定成分，不一定完全适合定坤丹特征图谱的需要，为了获取多层次的信息，采用二极管阵列检测器，取适量供试品溶液，在190～400nm波长下进行扫描(步长2nm)。
通过对3D视图和等吸收图谱进行分析，主要吸收在230nm～360nm范围内，因此分别选取230nm、260nm、280nm、300nm、360nm不同波长下的特征图谱进行考察。
观察图9-13不同波长处色谱图发现，230nm(图9)波长时基线漂移严重；300nm(图12)、360nm(图13)波长的色谱图中，色谱峰吸收较弱；260nm(图10)、280nm(图11)波长的色谱图中，色谱峰信息丰富且分离较好，但260nm下的色谱峰整体更均匀。
3方法的初步确定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.2％甲酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为260nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于1500。
表5
参照物溶液的制备：取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含15μg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：取本品粉末(过三号筛)约4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇30ml，称定重量，超声处理(功率500W，频率40KHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
实施例5定坤丹(水蜜丸)HPLC特征图谱的构建
(1)共有峰的确定
采用实施例4中的方法对13批样品(191001S，191002S，200303S，200304S，200305S，200306S，200506S，200507S，200508S，200509S，200510S，200511S，191012S)进行了测定，并对所得图谱进行分析，选择图谱中稳定性较好、响应值适宜的色谱峰为共有峰，共标定了9个共有峰，见图14。
图14中，S1为供试品191001S，S2为供试品191002S，S3为供试品200303S，S4为供试品200304S，S5为供试品200305S，S6为供试品200306S，S7为供试品200506S，S8为供试品200507S，S9为供试品200508S，S10为供试品200509S，S11为供试品200510S，S12为供试品200511S，S13为供试品191012S，R为对照图谱。
(2)特征图谱研究
计算13批定坤丹水蜜丸9个共有峰的相对保留时间和相对峰面积，以5号峰为S峰，见表6、表7。
表6相对保留时间结果
表7相对峰面积结果
结果显示，13批定坤丹(水蜜丸)色谱图中，9个共有峰的相对保留时间RSD均小于3.00％，波动较小，可选择上述峰的相对保留时间对特征图谱进行限定。此外，9个共有峰的相对峰面积除峰2外，RSD均大于3.00％，波动较大，故不对9个共有峰的相对峰面积进行限定。
(3)特征图谱的建立
采用中国药典委员会颁布中药色谱特征图谱相似度评价软件系统(2012.130723版本)，以13批定坤丹HPLC图谱色谱峰进行自动匹配建立特征图谱。
供试品特征图谱中应呈现9个特征峰，其中阿魏酸参照物峰定为S峰，计算其余特征峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值±10％之内。规定值为：0.35(峰1)、0.39(峰2)、0.86(峰3)、0.93(峰4)、1.00(峰5)、1.11(峰6)、1.27(峰7)、1.60(峰8)、1.64(峰9)。
具体如图15所示，其中：峰5(S)：阿魏酸；峰7：西红花苷-Ⅰ；峰8：藁本内酯。
(4)相似度评价
取定坤丹，按实施例4中供试品溶液的制备和测定法操作，连续进样6次，以上述13批次样品的色谱谱图为基础，使用药典委员会推荐的《中药色谱特征图谱相似度评价系统》(2008版)进行数据处理得到共有模式特征图谱，即为定坤丹对照特征图谱R(如图14所示)，6次进样样品各主要色谱峰保留时间基本一致，确定了该检测条件分离较好的9个峰为其共有色谱峰。
分别按照已建立的定坤丹特征图谱分析方法进行分析，按中药色谱特征图谱相似度评价系统计算其相似度，计算6次进样定坤丹特征图谱和对照特征图谱之间的相似度。发现样品与对照图谱的相似度均大于0.95，结果见精密度叠加图(如图16所示)、精密度相似度结果图(如图17所示)。
图16-17中，S1为精密度1，S2为精密度2，S3为精密度3，S4为精密度4，S5为精密度5，S6为精密度6，R为对照特征图谱。
可见，本发明建立的定坤丹特征图谱操作方法具有良好的重复性和稳定性，因此本发明方案具有可行性，能够用于定坤丹的综合质量控制。
实施例6方法学验证
对实施例4确定后的HPLC色谱条件，进行重复性、稳定性的考察。
(1)重复性
取定坤丹(水蜜丸)，粉末(过三号筛)约4g，共6份，精密称定，按实施例4供试品溶液的制备和测定法项下操作，按中药色谱特征图谱相似度评价系统计算其相似度，结果见图18、图19。
图18-19中，S1为重复性1，S2为重复性2，S3为重复性3，S4为重复性4，S5为重复性5，S6为重复性6，R为对照特征图谱
结果显示，相似度均大于0.95，说明该方法重复性良好。
(2)稳定性
取定坤丹(水蜜丸)，粉末(过三号筛)约4g，精密称定，按实施例4供试品溶液的制备和测定法项下操作，分别在制备后放置0、4、8、12、20、24小时进样，按中药色谱特征图谱相似度评价系统计算其相似度，结果见图20、图21。
图20-21中，S1为0h稳定性，S2为4h稳定性，S3为8h稳定性，S4为12h稳定性，S5为20h稳定性，S6为24h稳定性，R对照特征图谱。
结果显示，相似度均大于0.95，说明供试品溶液在24小时内稳定性良好。
以上所述仅是本发明的较佳实施方式，故凡依本发明专利申请范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均包括于本发明专利申请范围内。
Claims (13)
1.一种定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤：将定坤丹待测液经高效液相色谱法梯度洗脱分离，即可；
所述液相色谱法中，色谱条件如下：
色谱柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶；
检测波长为260~280nm；
以甲醇为流动相A，以0.05~0.5%甲酸为流动相B，百分比是指体积百分比；
以所述流动相的总体积为100%计，所述梯度洗脱分离的程序如下表所示：
；
所述定坤丹待测液的制备，其包括下述步骤：将定坤丹经50%甲醇溶解并超声制得。
2.如权利要求1所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，色谱柱为InertsilODS-3C18。
3.如权利要求1或2所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱法满足下述条件中的一种或多种：
①所述高效液相色谱法的柱温为25~30℃；
②所述色谱柱的内径为4.6 mm；
③所述色谱柱的柱长为250mm；
④所述色谱柱的填料粒径为5μm；
⑤所述检测波长为260nm；
⑥所述流动相的流速为0.9~1.1ml/min；
⑦所述流动相B为0.2%甲酸；和
4.如权利要求3所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述高效液相色谱法满足下述条件中的一种或多种：
①所述高效液相色谱法的柱温为25℃；
②所述流动相的流速为1ml/min；和
③所述高效液相色谱法中，进样量为5μl。
5.如权利要求1或2所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述的定坤丹特征图谱的构建方法还包括以下步骤：
对照品溶液制备，其中所述对照品为阿魏酸。
6.如权利要求1所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述定坤丹待测液的制备满足下述条件中的一种或多种：
①所述定坤丹的质量g和所述甲醇的体积ml之比为4:（20~40）；
②所述超声的时间为20~40分钟；
③所述超声的功率为500W；和
④所述超声的频率为40KHz。
7.如权利要求6所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述定坤丹的质量g和所述甲醇的体积ml之比为4:30；
和/或，所述超声的时间为30分钟。
8.如权利要求5所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液为阿魏酸的甲醇溶液。
9.如权利要求8所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述对照品溶液中阿魏酸的浓度为15μg/mL。
10.如权利要求6-9中任一项所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述定坤丹特征图谱的构建方法还包括以下步骤：
将所述定坤丹待测液和对照品溶液注入高效液相色谱仪；
采用国家药典委员会制定的中药色谱特征图谱相似度评价软件，对所述定坤丹待测液和所述对照品溶液的高效液相色谱图谱进行数据匹配，得到标准特征图谱。
11.如权利要求1或2所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述定坤丹的特征图谱中包括9个共有峰，其中5号峰为阿魏酸，7号峰为西红花苷-Ⅰ，8号峰为藁本内酯。
12.如权利要求11所述的定坤丹特征图谱的构建方法，其特征在于，所述特征图谱以5号峰为对照峰，下述共有峰的相对保留时间分别为：
阿魏酸共有峰的相对保留时间的平均值为1min，RSD为0.00%；
西红花苷-Ⅰ共有峰的相对保留时间的平均值为1.265min，RSD为0.22%；
藁本内酯共有峰的相对保留时间的平均值为1.579min，RSD为0.06%；
或者，
阿魏酸共有峰的相对保留时间的平均值为1min，RSD为0.00%；
西红花苷-Ⅰ共有峰的相对保留时间的平均值为1.271min，RSD为0.21%；
藁本内酯共有峰的相对保留时间的平均值为1.642min，RSD为0.53%。
13.一种如权利要求1-12中任一项所述的定坤丹的特征图谱的构建方法在评价和/或控制定坤丹质量中的应用。
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| CN111855867A (zh) * | 2019-04-25 | 2020-10-30 | 北京同仁堂股份有限公司 | 一种中药或中药组合物制剂的特征图谱建立方法与应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Chemical profliling of Dingkun Dan by Ultra High Performance Liquid Chromatography Q Exactive Orbitrap High Resolution Mass Spectrometry;Xiaoxia Gao等;Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis;112732 * |
| 基于~1H-NMR的定坤丹指纹图谱研究;王楠;高晓霞;张爱荣;王佩义;秦雪梅;;山西医科大学学报(04);479-483 * |
| 基于UPLC法的定坤丹指纹图谱研究;王楠;高晓霞;张爱荣;王佩义;秦雪梅;;世界科学技术-中医药现代化(12);2609-2615 * |
| 多波长HPLC法测定加味逍遥丸中多种成分含量及化学计量学分析;于新兰;冯春蕾;王雪;孙磊;;药物分析杂志(07);1262-1268 * |
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