CN115718145A - 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明要求保护一种中药组合物的指纹图谱测定方法，该中药组合物由以下原料药组成：麻黄、石膏、连翘、黄芩、桑白皮、苦杏仁、前胡、半夏、陈皮、贝母、牛蒡子、金银花、大黄、桔梗、甘草，该指纹图谱测定方法，标定了22个主要色谱峰，指认了其中14个，分别为新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚。

Description

一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
技术领域
本发明涉及到一种中药组合物的指纹图谱的测定方法。属于中药检测技术领域。
背景技术
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性。“整体性”和“模糊性”为其显著特点。
中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题，建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。这也正好符合中医药整体学说。在此基础上，如果进一步开展谱效学研究，可使中药质量与其药效真正结合起来，有助于阐明中药作用机理。总之，中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。
目前，中药指纹图谱技术已涉及众多方法，包括薄层扫描（TLCS）、高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和高效毛细管电泳法（HPCE）等色谱法以及紫外光谱法（UV）、红外光谱法（IR）、质谱法（MS）、核磁共振法（NMR）和X-射线衍射法等光谱法。其中色谱方法为主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成为公认的三种常规分析手段。由于HPLC具有分离效能高、选择性高、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点；中药成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，且积累较丰富的应用经验。因此高效液相色谱法已成为中药指纹图谱技术的首选方法。随着HPLC-MS和GC-MS等联用技术的应用，中药指纹图谱技术更趋完善。
专利申请号为200810089447.5，发明名称为：一种含有麻黄的治疗支气管炎的药物及其制备方法，公开了一种含有麻黄、连翘、苦杏仁、半夏等成分的中药组合物及其制备方法，本申请作为该中药组合物的质控方法，考察了该中药组合物的指纹图谱测定，该测定方法并未被公开过。采用该指纹图谱控制该上市品种的质量，有力的保证人民群众的用药安全。
发明内容
本发明提供一种中药组合物的指纹图谱测定方法。
所述指纹图谱测定方法如下：
供试品溶液制备：取所述中药组合物0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40-100%甲醇10-50mL，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用40-100%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 646459DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为C18色谱柱；检测波长245-254nm，流速0.1-0.5ml/min；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-10µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
本发明所述的指纹图谱测定方法，检测的中药组合物制剂是由如下重量份的原料药制成：
麻黄52； 石膏 324； 连翘194； 黄芩78； 桑白皮194； 苦杏仁130； 前胡78； 半夏130； 陈皮78； 贝母78； 牛蒡子130； 金银花130； 大黄39； 桔梗76； 甘草65。
本发明所述的指纹图谱测定方法，检测的中药组合物制剂优选由下列重量份的原料药制成：
麻黄86；石膏194；连翘324；黄芩130；桑白皮324；苦杏仁78；前胡130；半夏78；陈皮130；贝母130； 牛蒡子78；金银花78 ；大黄65；桔梗46； 甘草39。
本发明所述的指纹图谱测定方法，检测的中药组合物制剂还可优选由下列重量份的原料药制成：
麻黄69；石膏259；连翘259；黄芩104；桑白皮259；苦杏仁104；前胡104；半夏104；陈皮104；贝母104； 牛蒡子104；金银花104；大黄52；桔梗61；甘草52。
本发明所述的指纹图谱测定方法，检测的中药组合物制剂也可优选由下列重量份的原料药制成：
麻黄55；石膏254；连翘318；黄芩107；桑白皮203；苦杏仁107；前胡82；半夏105；陈皮84；贝母125； 牛蒡子122；金银花113；大黄42；桔梗60； 甘草50。
本发明所述的指纹图谱测定方法，所检测的中药组合物活性成分的制备方法为：
A、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；
B、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加40-70%乙醇回流提取2次，每次1-4小时，第一次加8-10倍量，第二次加6-9倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，备用；
C、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、金银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次1-4小时，第一次加9-11倍量，第二次加7-9倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，与步骤B所得的清膏合并，备用；
步骤A所得细粉和步骤C所得合并后的清膏共同构成该药物组合物的活性成分。
本发明所述的指纹图谱测定方法，检测的中药组合物可制成胶囊剂、片剂、颗粒剂或口服液，其中片剂的制备方法是：
A、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；
B、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加50%乙醇回流提取2次，每次3小时，第一次加10倍量，第二次加6倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，备用；
C、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、金银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加7倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，与步骤B所得的清膏合并，备用；
D、将步骤C所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；
E、步骤D所得喷雾粉与步骤A所得细粉，以乙醇为黏合剂制软材，过筛制粒干燥后整粒，加入羧甲淀粉钠、微晶纤维素、硬脂酸镁，混匀，压片即得。
本发明所述的指纹图谱测定方法，优选的包括以下步骤：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1-1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.07-0.09mg/ml新绿原酸、0.07-0.09mg/ml绿原酸、0.07-0.09mg/ml隐绿原酸、0.07-0.09mg/ml异连翘酯苷A、0.1-0.3mg/ml连翘酯苷A、0.1-0.3 mg/ml橙皮苷、0.1-0.3 mg/ml黄芩苷、0.1-0.3 mg/ml牛蒡苷、0.04-0.06 mg/ml甘草酸铵、0.01-0.02 mg/ml芦荟大黄素、0.01-0.03 mg/ml大黄酸、0.01-0.03 mg/ml大黄素、0.01-0.03 mg/ml大黄酚、0.005-0.01 mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 913493DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为C18色谱柱；检测波长254nm，流速0.3ml/min；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
本发明指纹图谱的测定方法，更优选的步骤为：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.07-0.09mg/ml新绿原酸、0.07-0.09mg/ml绿原酸、0.07-0.09mg/ml隐绿原酸、0.07-0.09 mg/ml异连翘酯苷A、0.1-0.3 mg/ml连翘酯苷A、0.1-0.3mg/ml橙皮苷、0.1-0.3mg/ml黄芩苷、0.1-0.3mg/ml牛蒡苷、0.04-0.05 mg/ml甘草酸铵、0.01-0.02 mg/ml芦荟大黄素、0.01-0.03 mg/ml大黄酸、0.01-0.02 mg/ml大黄素、0.01-0.02mg/ml大黄酚、0.005-0.009mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 112393DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为C18色谱柱；柱长为100 mm，内径为2.1 mm，粒径为1.8 µm；检测波长254nm，流速0.3ml/min；柱温：30 ℃；进样体积：1μL；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
用实施例1制备的样品，对本发明中药组合物的指纹图谱测定方法，从多个方面评价其可行性，评价方法如下：
1.仪器与材料
1.1仪器
Waters ACQUITY UPLC H-CLASS超高效液相色谱（PDA检测器，Empower 3.0色谱工作站），循环式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司），KQ250DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），瑞士METTLER TOLEDOAL型电子分析天平。
1.2材料
1.2.1对照品信息
Figure 843589DEST_PATH_IMAGE002
1.2.2样品信息
本发明中药组合物（石家庄以岭药业股份有限公司）
1.2.3试剂
乙腈（色谱纯，Merck，批号JB091230），甲醇（色谱纯，Merck，批号l1061607948）。磷酸（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20190518），
2.色谱条件选择
2.1检测波长的选择
对所述中药组合物样品进行全波长测定，对样品进行全波长测定，在不同波长（220nm、254nm、280nm、300nm、330nm）下分别提取色谱图，经过仔细比较，在254nm波长处，提取的色谱峰最多，能较全面反应样品的图谱信息，故选择254nm作为检测波长。
2.2流动相系统的选择
本研究考察了甲醇-水、甲醇-0.1%甲酸水溶液、甲醇-0.1%磷酸水溶液、乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水溶液、结果各色谱峰的峰形不对称，有的色谱峰不能达到基线分离，考察了乙腈-0.1%磷酸水溶液，在此条件下各色谱峰峰形较好，且能达到基线分离。结果显示乙腈-0.1%磷酸系统色谱峰的分离度最好，因此流动相系统为流动相：乙腈—酸水（0.1%磷酸水溶液），流速：0.3mL/min。梯度洗脱表见表2。确定色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1*100mm；设置如下参数为初始条件，波长254nm；柱温：30℃；进样体积：1μL。
Figure 836952DEST_PATH_IMAGE003
2.3流速的选择
考察了不同流速0.2ml/min、0.3ml/min、0.4ml/min对色谱图的影响，流速为0.2ml/min的色谱图，出峰时间较长、峰面积大的化合物色谱峰对称性不好；流速为0.4ml/min的色谱图，多数色谱峰没有达到基线分离，综合考虑，流速为0.3ml/min的色谱图峰形较好且大多数色谱峰基本达到基线分离，所以流速选择0.3ml/min。
2.4柱温选择
在不同柱温下对色谱柱进行了考察，柱温为25℃色谱峰峰型拖尾，30℃时色谱峰优秀，柱温为35℃峰面积较大的色谱峰对称性较差，综合比较选择柱温为30℃。
2.5色谱柱的选择
考察了ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1*100mm；CORTECS UPLC C18 1.6μm，2.1*100mm；ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm，2.1*100mm不同色谱柱，从色谱峰的数量及峰形综合比较，选择ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1*100mm。
2.6对照品、供试品指纹图谱
在已确定的色谱条件下，分别对对照品溶液和供试品溶液进样，供试品溶液的色谱图中确定14个主要色谱峰。根据色谱峰的保留时间和光谱特征，确定指纹图谱中的色谱峰 峰1：新绿原酸，峰2：绿原酸，峰3：隐绿原酸，峰5：异连翘酯苷A，峰7：连翘酯苷A，峰10：橙皮苷，峰12：黄芩苷，峰13：牛蒡苷，峰17：芦荟大黄素，峰18：甘草酸铵，峰19：大黄酸，峰20：大黄素，峰21：大黄酚，峰22：大黄素甲醚。以上对照品与供试品色谱图及光谱图见附图1-2。
3.对照品及样品的配制
3.1对照品溶液的配制
新绿原酸对照品溶液的配制：精密称取新绿原酸对照品21.95mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
绿原酸对照品溶液的配制：精密称取绿原酸对照品20.23mg，置5mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
隐绿原酸对照品溶液的配制：精密称取隐绿原酸对照品19.07mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
异连翘酯苷A对照品溶液的配制：精密称取异连翘酯苷A对照品10.19mg，置5mL容量瓶，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，备用。
连翘酯苷A对照品溶液的配制：精密称取连翘酯苷A对照品11.89mg，置5mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
黄芩苷对照品溶液的配制：精密称取黄芩苷对照品15.42mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
橙皮苷照品溶液的配制：精密称取橙皮苷对照品13.63mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，定容至刻度，摇匀，备用。
牛蒡苷对照品溶液的配制：精密称取牛蒡苷对照品12.80mg，置5mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
甘草酸铵对照品溶液的配制：精密称取甘草酸铵对照品11.36mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品母液的配制：
芦荟大黄素对照品溶液的配制：精密称取芦荟大黄素对照品8.29mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
大黄酸对照品溶液的配制：精密称取大黄酸对照品10.58mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
大黄素对照品溶液的配制：精密称取对照品12.84mg，置25mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
大黄酚对照品溶液的配制：精密称取大黄酚对照品10.56mg，置10mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
大黄素甲醚对照品溶液的配制：精密称取大黄素甲醚对照品约9.58mg，置25mL容量瓶，加甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，备用。
芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚混合对照品溶液的配制：
精密量取1mL芦荟大黄素对照品溶液，1mL大黄酸对照品溶液，1mL大黄素对照品溶液，1mL大黄酚对照品溶液，1mL大黄素甲醚对照品溶液，至50ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚混合对照品溶液。
精密量取1mL新绿原酸对照品溶液，0.5mL绿原酸对照品溶液，1mL隐绿原酸对照品溶液，1mL异连翘酯苷A对照品溶液， 2mL连翘酯苷A对照品溶液， 2mL黄芩苷对照品溶液，3mL橙皮苷对照品溶液， 2mL牛蒡苷对照品溶液，1mL甘草酸铵对照品溶液，芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚混合对照品溶液10ml,至25mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度，配成混合对照品溶液，备用。
3.2供试品溶液的配制
取所述中药组合物适量，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率500W，频率40kHz) 30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心（1400rpm 离心10min），取上清液，0.22µm滤过，取续滤液，即得。
4供试品溶液和参照物溶液的制备
4.1提取溶剂的考察
分别比较了50%甲醇，80%甲醇，100%甲醇的提取效果，见附图3、附图4、附图5，结果表明100%甲醇提取所得指纹图谱中色谱峰最多，因此选择甲醇作为提取溶剂。
4.2提取方法的考察
分别比较了超声和回流两种提取方法见附图6、附图7，超声和回流提取两种方法所得的指纹图谱色谱峰的数目和强度没有明显区别，由于超声提取方法简便，因此选择超声提取。
4.3超声时间的考察
分别比较了超声20分钟、30分钟、40分钟，，结果表明超声30分钟与40分钟所得指纹图谱中色谱峰信息量大，无明显区别，因此最终确定超声时间为30分钟，具体信息见附图8、附图9、附图10。
4.4参照物溶液的制备
取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60μg的溶液，即得，参照物的色谱信息见附图11。
4.5测定法：精密吸取供试品溶液1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
供试品的色谱信息见附图12。
5．方法学考察
5.1精密度试验：取所述中药组合物样品，按3.2的“供试品溶液制备方法”制备，按照色谱条件连续进样6次，各主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD 均小于2%，表明进样精密度良好，结果见表3和表4。
Figure 591282DEST_PATH_IMAGE004
Figure 328294DEST_PATH_IMAGE005
5.2重复性试验：取所述中药组合物内容物6份，按3.2的“供试品溶液制备方法”制备，注入液相色谱仪检测，测定各主要色谱峰保留时间的RSD均小于2%，峰面积的RSD均小于3%，表明方法重复性较好，结果见表5和表6。
Figure 851679DEST_PATH_IMAGE006
Figure 343840DEST_PATH_IMAGE007
5.3稳定性试验：取供试品溶液，分别在0h，2h，4h，8h，12h，24h进样，测定各主要色谱峰保留时间的RSD均小于2%，峰面积的RSD均小于3%，表明供试品溶液在24h内稳定，结果见表7和表8。
Figure 585465DEST_PATH_IMAGE008
Figure 860589DEST_PATH_IMAGE009
5.4指纹图谱的建立及相似度分析
称取7批所述中药组合物样品，按3.2项下要求制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，得到7批所述中药组合物样品的指纹图谱，具体色谱信息见附图13 ，并采用国家药典委员会开发的中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012.0 版软件对7批样品的指纹图谱进行分析，采用中位数法对各指纹图谱色谱峰进行了多点校正和自动匹配，计算相似度并生成对照指纹图谱，相似度结果见表9，对照指纹图谱见附图14，其中共有色谱峰22个，其中以出峰稳定，峰面积较大的12号色谱峰黄芩苷为参照峰。
Figure 504060DEST_PATH_IMAGE010
5.5 7批所述中药组合物样品含量测定，将5.4的供试品溶液和3.1的对照品混标溶液注入液相色谱仪检测，进行含量测定，结果如下见表10。
Figure 839226DEST_PATH_IMAGE011
本发明所述中药组合物为上市品种中成药，目前该品种的质控采用了对部分药材进行单独鉴别，该品种为大复方中药产品，少量的鉴别不足以反映该产品的质量，为了更好保证产品的质量，保障人民群众的用药安全，我们研究了该中药组合物的指纹图谱，对不同7批次的药品进行了指纹图谱研究，指纹图谱分析中筛选出有代表性的22个共有峰，并指认了其中的14个色谱峰，各色谱峰分离度较好。采用指纹图谱进行质量控制，能完整的反映中成药的整体质量，有效的避免了中药品种在上市检验过程中，只添加需要检测的个别成分就可以通过法定程序检测的弊端。
本发明所述的指纹图谱的检测方法是一个完整的技术方案，其中包括了若干技术特征，针对于其中的任何一个技术特征，发明人都进行过多次的试验方法考察，虽然各个技术特征看似简单，但是由无数个技术特征组成的整体的技术方案是为了该制剂的质量控制的最优选的技术方案。特别是通过本方法进行的7批次之间的指纹图谱相似度均大于95%，说明本产品是稳定可控的。
本方法操作简单，可实施性强，用时较短，解决了中药大复方制剂质量控制的难题。由以上实验结果可知，本方法具有良好的精密度和稳定性，以及重复性，为提高该中药组合物的质量控制提供一种新方法。
附图说明
图1 对照品图谱
图2 供试品指纹图谱
图3 50%甲醇的提取效果
图4 80%甲醇的提取效果
图5 100%甲醇的提取效果
图6超声提取指纹图谱
图7回流提取指纹图谱
图8 超声提取20分钟指纹图谱
图9 超声提取30分钟指纹图谱
图10 超声提取40分钟指纹图谱
图11参照物溶液色谱图
图12供试品溶液色谱图
图13 7批所述中药组合物色谱指纹图谱
图14 所述中药组合物对照指纹图谱。
具体实施方式
实施例1
按比例称取：麻黄52g； 石膏 324g； 连翘194g； 黄芩78g； 桑白皮194g； 苦杏仁130g； 前胡78g； 半夏130g； 陈皮78g； 贝母78g； 牛蒡子130g； 金银花130g； 大黄39g；桔梗76g； 甘草65g。
按照以下工艺提取：
A、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；
B、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加50%乙醇回流提取2次，每次3小时，第一次加10倍量，第二次加6倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，备用；
C、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、金银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加7倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.15的清膏，与步骤B所得的清膏合并，备用；
D、将步骤C所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉备用；
E、按常规方法制成胶囊剂。
指纹图谱测定方法：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.088mg/ml新绿原酸、0.078 mg/ml绿原酸、0.076 mg/ml隐绿原酸、0.080 mg/ml异连翘酯苷A、0.177 mg/ml连翘酯苷A、0.157 mg/ml橙皮苷、0.115mg/ml黄芩苷、0.202 mg/ml牛蒡苷、0.045 mg/ml甘草酸铵、0.016 mg/ml芦荟大黄素、0.021mg/ml大黄酸、0.010 mg/ml大黄素、0.015 mg/ml大黄酚、0.008 mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 630465DEST_PATH_IMAGE012
确定色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1*100mm；设置如下参数为初始条件，流速：0.3mL/min；波长254nm；柱温：30 ℃；进样体积：1μL。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
实施例2
按比例称取：麻黄86g；石膏194g；连翘324g；黄芩130g；桑白皮324g；苦杏仁78g；前胡130g；半夏78g；陈皮130g；贝母130g； 牛蒡子78g；金银花78g ；大黄65g；桔梗46g； 甘草39g
按照以下工艺提取：
A、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；
B、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加50%乙醇回流提取2次，每次1小时，第一次加8倍量，第二次加9倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，备用；
C、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、金银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次2小时，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，与步骤B所得的清膏合并，备用；
D、将步骤C所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉，按常规方法制成片剂。
指纹图谱测定方法：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.079mg/ml新绿原酸、0.088 mg/ml绿原酸、0.085 mg/ml隐绿原酸、0.081mg/ml异连翘酯苷A、0.179 mg/ml连翘酯苷A、0.148 mg/ml橙皮苷、0.109 mg/ml黄芩苷、0.226 mg/ml牛蒡苷、0.049mg/ml甘草酸铵、0.018 mg/ml芦荟大黄素、0.025 mg/ml大黄酸、0.015 mg/ml大黄素、0.018mg/ml大黄酚、0.009 mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 709279DEST_PATH_IMAGE012
确定色谱柱ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1*100mm；设置如下参数为初始条件，流速：0.3mL/min；波长254nm；柱温：30 ℃；进样体积：1μL；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
实施例3
原料药配方为：麻黄69g；石膏259g；连翘259g；黄芩104g；桑白皮259g；苦杏仁104g；前胡104g；半夏104g；陈皮104g；贝母104g； 牛蒡子104g；金银花104g；大黄52g；桔梗61g；甘草52g。
按照以下工艺提取：
A、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；
B、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加70%乙醇回流提取2次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加9倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，备用；
C、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、金银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次3小时，第一次加10倍量，第二次加10倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，与步骤B所得的清膏合并，备用；
D、将步骤C所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉，按常规方法制成颗粒剂。
指纹图谱测定方法：
供试品溶液制备：取所述中药组合物0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20mL，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用50%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.080mg/ml新绿原酸、0.082mg/ml绿原酸、0.085 mg/ml隐绿原酸、0.085 mg/ml异连翘酯苷A、0.180 mg/ml连翘酯苷A、0.166 mg/ml橙皮苷、0.116 mg/ml黄芩苷、0.232 mg/ml牛蒡苷、0.046 mg/ml甘草酸铵、0.019 mg/ml芦荟大黄素、0.020mg/ml大黄酸、0.011 mg/ml大黄素、0.016 mg/ml大黄酚、0.009 mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 207257DEST_PATH_IMAGE012
色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm，2.1*100mm色谱柱；检测波长245nm，流速0.1ml/min；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
实施例4
原料药配方为：按比例称取：
麻黄55g；石膏254g；连翘318g；黄芩107g；桑白皮203g；苦杏仁107g；前胡82g；半夏105g；陈皮84g；贝母125g； 牛蒡子122g；金银花113g；大黄42g；桔梗60g； 甘草50g。
按照以下工艺提取：
A、按组方比例称取贝母，粉碎成细粉，备用；
B、按组方比例称取麻黄、连翘、苦杏仁、半夏、牛蒡子、大黄加40-70%乙醇回流提取2次，每次3小时，第一次加8倍量，第二次加7倍量，提取液合并，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，备用；
C、按组方比例称取石膏、桑白皮、前胡、陈皮、金银花、桔梗、甘草，加水煎煮两次，每次2小时，第一次加10倍量，第二次加8倍量，煎液合并，滤过，浓缩至60℃热测相对密度为1.04-1.16的清膏，与步骤B所得的清膏合并，备用；
D、将步骤C所得合并的清膏，喷雾干燥，收集喷雾粉，按常规方法制成丸剂。
指纹图谱测定方法：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，称定重量，超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用80%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.080mg/ml新绿原酸、0.082mg/ml绿原酸、0.085 mg/ml隐绿原酸、0.085 mg/ml异连翘酯苷A、0.180 mg/ml连翘酯苷A、0.166 mg/ml橙皮苷、0.116 mg/ml黄芩苷、0.232 mg/ml牛蒡苷、0.046 mg/ml甘草酸铵、0.019 mg/ml芦荟大黄素、0.020mg/ml大黄酸、0.011 mg/ml大黄素、0.016 mg/ml大黄酚、0.009 mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 978904DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为CORTECS UPLC C18 1.6μm，2.1*100mm色谱柱；检测波长245nm，流速0.1ml/min；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

Claims (5)

1.一种中药组合物的指纹图谱测定方法，该中药组合物由如下重量份的原料药制成：麻黄52-86 ；石膏194-324； 连翘194-324 ；黄芩78-130 ；桑白皮194-324；苦杏仁78-130；前胡78-130； 半夏78-130； 陈皮78-130； 贝母78-130； 牛蒡子78-130； 金银花78-130；大黄39-65； 桔梗46-76； 甘草39-65，其特征在于该中药组合物制剂指纹图谱的测定方法如下：
供试品溶液制备：取所述中药组合物0.5-1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入40-100%甲醇10-50mL，称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用40-100%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为C18色谱柱；检测波长245-254nm，流速0.1-0.5ml/min；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1-10µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
2.如权利要求1所述的指纹图谱测定方法，其特征在于所述指纹图谱测定方法如下：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1-1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.07-0.09mg/ml新绿原酸、0.07-0.09mg/ml绿原酸、0.07-0.09mg/ml隐绿原酸、0.07-0.09mg/ml异连翘酯苷A、0.1-0.3mg/ml连翘酯苷A、0.1-0.3 mg/ml橙皮苷、0.1-0.3 mg/ml黄芩苷、0.1-0.3 mg/ml牛蒡苷、0.04-0.06 mg/ml甘草酸铵、0.01-0.02 mg/ml芦荟大黄素、0.01-0.03 mg/ml大黄酸、0.01-0.03 mg/ml大黄素、0.01-0.03 mg/ml大黄酚、0.005-0.01 mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 925941DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为C18色谱柱；检测波长254nm，流速0.3ml/min；柱温为30℃；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
3.如权利要求2所述的指纹图谱测定方法，其特征在于所述指纹图谱测定方法如下：
供试品溶液制备：取所述中药组合物1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
对照品溶液的制备：分别称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异连翘酯苷A、连翘酯苷A、橙皮苷、黄芩苷、牛蒡苷、芦荟大黄素、甘草酸铵、大黄酚、大黄素、大黄酸、大黄素甲醚对照品，加入甲醇，制成分别含0.07-0.09mg/ml新绿原酸、0.07-0.09mg/ml绿原酸、0.07-0.09mg/ml隐绿原酸、0.07-0.09 mg/ml异连翘酯苷A、0.1-0.3 mg/ml连翘酯苷A、0.1-0.3mg/ml橙皮苷、0.1-0.3mg/ml黄芩苷、0.1-0.3mg/ml牛蒡苷、0.04-0.05 mg/ml甘草酸铵、0.01-0.02 mg/ml芦荟大黄素、0.01-0.03 mg/ml大黄酸、0.01-0.02 mg/ml大黄素、0.01-0.02mg/ml大黄酚、0.005-0.009mg/ml大黄素甲醚混合对照品溶液即得；
参照物溶液的制备：取黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含60µg的溶液，即得；
流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱，洗脱比例如下表：
Figure 808446DEST_PATH_IMAGE001
色谱柱为C18色谱柱；柱长为100mm，内径为2.1mm，粒径为1.8µm；检测波长254nm，流速0.3ml/min；柱温为30℃；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1µL，注入超高液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
4.根据权利要求1-3任一所述的指纹图谱的测定方法，其特征在于所用色谱柱型号为ACQUITY UPLC HSS T3 C18 1.8μm，2.1*100mm。
5.根据权利要求1-3任一所述的指纹图谱的测定方法，其特征在于还包括以下步骤：
a获得对照指纹图谱：将现行标准评价合格的样品的供试品图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》合成对照指纹图谱；
b相似度评价：将待评价样品的供试品指纹图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》，计算相似度，供试品图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.9。
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116165320B (zh) * 2023-04-21 2023-07-21 保定市食品药品检验所 养血安神片的中药指纹图谱检测方法
CN117269352B (zh) * 2023-09-18 2024-06-07 苏中药业集团股份有限公司 一种药物的检测方法
CN116990420A (zh) * 2023-09-27 2023-11-03 江西中医药大学 一种基于特征图谱的蜜麸枳壳综合质量评价方法
CN117233306B (zh) * 2023-11-16 2024-01-30 江西省药品检验检测研究院 一种金丹附延颗粒指纹图谱建立及其成分含量测定方法
CN117288870B (zh) * 2023-11-27 2024-02-09 湖南迪诺制药股份有限公司 蚁灵口服液指纹图谱的建立方法
CN117949560B (zh) * 2024-01-09 2024-09-20 中国中医科学院中药研究所 一种基于多元分析技术的何首乌饮片鉴别方法
CN118010909A (zh) * 2024-03-07 2024-05-10 湖南易能生物医药有限公司 一种包含赤芍的中药复方的指纹图谱构建方法及其应用
CN118501299A (zh) * 2024-07-18 2024-08-16 江中药业股份有限公司 基于电子鼻的太子参环肽b含量的评价方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2524696A1 (en) * 2011-05-19 2012-11-21 A. Nattermann & Cie. GmbH Alcohol-free pharmaceutical composition comprising thyme and primula root liquid extracts
CN104345111B (zh) * 2013-08-08 2017-04-05 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物制剂中多种活性成分含量的测定方法
CN107153098B (zh) * 2016-03-03 2021-05-04 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的指纹图谱的测定方法
CN107149623B (zh) * 2016-03-03 2021-03-12 石家庄以岭药业股份有限公司 一种中药组合物的含量测定方法
CN105806975B (zh) * 2016-03-14 2018-12-04 贵阳德昌祥药业有限公司 一种银翘散uplc指纹图谱的建立方法
CN106198823B (zh) * 2016-08-24 2018-06-26 秦皇岛市山海关药业有限责任公司 一种肾衰宁片有效成分的测定方法
CN108760903B (zh) * 2018-03-30 2020-11-17 山东中医药大学 一种双黄连口服制剂指纹图谱测定方法

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