CN113391002A - 心通颗粒uplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用 - Google Patents

心通颗粒uplc指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于中药制剂分析领域，具体公开了心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法，包括供试品溶液的制备、UPLC色谱条件的确定及UPLC标准指纹图谱的制作。本发明同时公开了由该方法得到的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，所得指纹图谱有41个共有峰。本发明方法操作简便、稳定性高、重现性好，所得图谱特征峰多，通过与标准指纹图谱中共有峰的比较，可对心通颗粒的质量进行全面地评价和控制，有利于稳定产品质量，确保其内在质量的均一和稳定，提高了临床用药的安全性和有效性。

Description

心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用
技术领域
本发明属于中药制剂分析领域，具体涉及一种心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱和应用。
背景技术
心通颗粒收载于国家部颁标准，由黄芪、党参、麦冬、何首乌、淫羊藿、葛根、当归、丹参、皂角刺、海藻、昆布、牡蛎、枳实十三味中药原料制备组成，具有益气活血，化痰通络之功效，用于气阴两虚、痰瘀痹阻所致的胸痹如冠心病、心绞痛，症见心痛、胸闷、气短、呕恶、纳呆风，临床效果显著。
目前，国家部颁标准YBZ16392009-2017中关于心通颗粒的现行检查项目主要有黄芪、何首乌、淫羊藿、丹参的薄层鉴别，葛根的含量测定(HPLC法测定葛根素)。心通颗粒由十三味中药材制成，原料多样，成分复杂，仅用薄层色谱法进行指标成分的定性鉴别，并采用高效液相色谱法进行药效成分含量测定葛根素的含量测定，不足以全面反映心通颗粒的质量优劣。中药指纹图谱作为一项质量控制技术，能够较为全面的控制药品的质量，具有系统性、整体性和稳定性特点。
超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC)借助于HPLC的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量及色谱峰容量，具有简便准确、灵敏度高、重复性好、检测器种类多等特点，是构建指纹图谱的重要方法之一。目前，尚未见有专利公开及文献报道采用UPLC法对心通颗粒进行指纹图谱研究。本发明公开了一种心通颗粒的UPLC指纹图谱，以及用该方法制作的心通颗粒UPLC标准指纹图谱。在使用相似度进行评价的情况下，可用其标准指纹图谱对心通颗粒的质量进行全面地评价和控制，从而保证了产品质量的稳定性及临床用药的安全性和有效性。
发明内容
本发明的目的是针对现有心通颗粒的质量控制方法不足，提供一种心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法。其特点是将心通颗粒制成供试品溶液，经过UPLC分离检测，获得心通颗粒UPLC指纹图谱，从而为心通颗粒的真伪鉴别和内在质量控制提供可靠依据。
本发明的目的是提供一种心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法，包括下列步骤：
(1)供试品溶液配制；
(2)UPLC条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；
流动相：乙腈为流动相A，体积百分数为0.06-0.15％磷酸或体积百分数为0.06-0.15％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱；
柱温：25-35℃；
检测波长：275-285nm；
进样量：0.5-5μl；
(3)将供试品溶液注入色谱系统，按照步骤(2)的色谱条件进行分析测定，得到由共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱。
优选地，所述的供试品溶液的配制方法为精密称取心通颗粒，加入50-100％甲醇溶液，超声溶解，放冷，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
优选地，所述的色谱柱为
Figure BDA0003162677810000021
C18柱，4.6×50mm，2.7μm。
优选地，所述的流动相B为体积百分数为0.06-0.15％磷酸。
优选地，所述的流动相B为体积百分数为0.10％磷酸。
优选地，所述检测波长280nm，柱温30℃。
优选地，所述的流动相梯度如下：
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-55 0.5 60％ 40％
55-56 0.5 60％→5％ 40％→95％
优选地，步骤(3)中将供试品溶液注入UPLC色谱系统进行分析测定，使用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012》软件分析，得到心通颗粒的UPLC标准指纹图谱。
以下内容将进一步详述本发明心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法，包括下列步骤：
(1)供试品溶液的配制：精密称取心通颗粒，加入50-100％的甲醇，超声处理20-40min，放冷，补重，摇匀，滤过，取续滤液，得供试品溶液；
(2)UPLC色谱条件的确定：十八烷基硅烷键合硅胶柱，乙腈为流动相A，0.06-0.15％磷酸溶液为流动相B，按照如下的梯度变化进行检测；检测波长：275-285nm；柱温：25-35℃；进样量：0.5-5μl；
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-55 0.5 60％ 40％
55-56 0.5 60％→5％ 40％→95％
(3)UPLC标准指纹图谱的制作：按步骤(2)色谱条件对心通颗粒供试品溶液进行分析比较，得到由样品共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱。
在一种实施方式中，所述方法包括如下步骤：
(1)对照品及供试品溶液的配制：精密称取适量葛根素对照品及供试品心通颗粒，加入80％的甲醇，超声处理30min，放冷，补重，摇匀，滤过，取续滤液，分别得到对照品及供试品溶液；
(2)UPLC色谱条件的确定：
Figure BDA0003162677810000031
C18柱，乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，按照如下的梯度变化进行检测；检测波长：280nm；柱温：30℃；进样量：2μl；
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-55 0.5 60％ 40％
55-56 0.5 60％→5％ 40％→95％
(3)UPLC标准指纹图谱的制作：按步骤(2)色谱条件对心通颗粒供试品溶液进行分析，以葛根素作为对照峰，使用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012》软件分析，将得到由样品共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱。
本发明的另一方面提供上述方法所得到的心通颗粒指纹图谱。
测定24个批号心通颗粒UPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，包括41个共有峰，如图1-2所示。其中以10号峰为葛根素参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的41个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.084、0.101、0.150、0.215、0.399、0.515、0.684、0.713、0.955、1.000、1.121、1.158、1.229、1.301、1.344、1.455、1.631、1.682、1.769、1.855、2.099、2.182、2.351、2.487、2.642、2.692、2.771、2.827、2.856、3.102、3.264、3.381、3.416、3.453、3.492、4.290、4.331、4.446、4.468、4.563、4.755。
其中，第10号峰为葛根素，第14号峰为大豆苷，第19号峰为二苯乙烯苷，第23号峰为柚皮苷，第28号峰为新橙皮苷，第30号峰为丹酚酸B，第35号峰为淫羊藿苷，第36号峰为大黄素，第41号峰为丹参酮ⅡA。
其中，6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰、11号峰、12号峰、13号峰、14号峰、15号峰、16号峰、17号峰、20号峰、27号峰、28号峰为葛根中的成分；19号峰、36号峰为何首乌中的成分；32号峰、33号峰、34号峰、35号峰为淫羊藿中的成分；23号峰、24号峰、25号峰为枳实中成分；30号峰、31号峰、36号峰、37号峰、38号峰、39号峰、40号峰、41号峰为丹参中的成分；18号峰为黄芪中的成分。
本发明还提供了由上述方法得到的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，具体步骤是将24批心通颗粒样品，按步骤(1)制备成供试品溶液，按步骤(2)以UPLC分离检测，使用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》软件分析，得到心通颗粒UPLC标准指纹图谱。所述UPLC标准指纹图谱有41个共有特征峰。
本发明的第三个目的是提供一种所述的指纹图谱在心通颗粒全过程质量评价体系或心通颗粒工艺关键点控制的应用。
与现有技术对比，本发明取得了以下有益效果：
1)本发明建立的心通颗粒UPLC指纹图谱检测方法，根据心通颗粒的构成特点，优选最佳流动相组成及其梯度洗脱程序、流速、检测波长等，解决了特征峰难以分开及杂质峰干扰大的难题，所得指纹图谱分离度高、峰形好，各特征峰均实现了基线分离，能更全面、更准确地评价心通颗粒的质量。
2)本发明检测方法以葛根素为参照峰，确定41个共有峰为构成心通颗粒指纹图谱的共有峰，指纹图谱的组成更加丰富、全面；从共有峰中鉴定出葛根素、二苯乙烯苷、柚皮苷、新橙皮苷、丹酚酸B、淫羊藿苷、大黄素、丹参酮ⅡA等8个化学成分，并对33个共有峰进行了成分归属，进一步阐明了心通颗粒的化学物质基础。
3)本发明首次建立了心通颗粒的UPLC指纹图谱，为制剂质量提供了全新的检测方法。本发明方法操作简单、准确可靠，具有精密度、稳定性和重复性好的特点。可克服现有技术检测指标单一、不能反映柴银口服液内在质量的不足，实现制剂质量全面、准确评价，从而更有效地保证制剂质量。
4)与现有HPLC指纹图谱检测方法相比，本发明方法检测速度快、进样量小、有机溶剂用量省，节省了时间成本和材料成本，更加高效、环保。
附图说明
图1为心通颗粒UPLC标准指纹图谱(1-41为41个共有峰)
其中，第10号峰为葛根素，第14号峰为大豆苷，第19号峰为二苯乙烯苷，第23号峰为柚皮苷，第28号峰为新橙皮苷，第30号峰为丹酚酸B，第35号峰为淫羊藿苷，第36号峰为大黄素，第41号峰为丹参酮ⅡA。
图2为24批心通颗粒的UPLC指纹图谱叠加图
其中，第10号峰为葛根素，第14号峰为大豆苷，第19号峰为二苯乙烯苷，第23号峰为柚皮苷，第28号峰为新橙皮苷，第30号峰为丹酚酸B，第35号峰为淫羊藿苷，第36号峰为大黄素，第41号峰为丹参酮ⅡA。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应当理解为以下实施例仅用于表述本发明的技术方案，而不用来限制本发明的保护范围。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，所做的显而易见的修饰及改进也属于本发明的保护范围。
实施例1心通颗粒UPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Waters Acquity Arc高效液相色谱仪(美国)；2998PDA检测器；四元超高压梯度泵；Empower色谱工作站。
1.2试药
心通颗粒由鲁南厚普制药有限公司提供，样品批号见表1；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
表1心通颗粒测试样品批号
Figure BDA0003162677810000051
Figure BDA0003162677810000061
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：
Figure BDA0003162677810000062
C18(4.6×50mm，2.7μm)柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.1％磷酸水溶液为流动相B，检测波长：280nm；柱温：30℃；进样体积：2μl；
按下表进行梯度洗脱：
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-55 0.5 60％ 40％
55-56 0.5 60％→5％ 40％→95％
2.2供试品溶液的制备：精密称取心通颗粒2g，置于带塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇10ml，称重，超声处理30min，放冷，补重，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定24个批号心通颗粒UPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，如图1-2所示。其中以10号峰为参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的41个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.084、0.101、0.150、0.215、0.399、0.515、0.684、0.713、0.955、1.000、1.121、1.158、1.229、1.301、1.344、1.455、1.631、1.682、1.769、1.855、2.099、2.182、2.351、2.487、2.642、2.692、2.771、2.827、2.856、3.102、3.264、3.381、3.416、3.453、3.492、4.290、4.331、4.446、4.468、4.563、4.755。
其中，第10号峰为葛根素，第14号峰为大豆苷，第19号峰为二苯乙烯苷，第23号峰为柚皮苷，第28号峰为新橙皮苷，第30号峰为丹酚酸B，第35号峰为淫羊藿苷，第36号峰为大黄素，第41号峰为丹参酮ⅡA。
其中，6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰、11号峰、12号峰、13号峰、14号峰、15号峰、16号峰、17号峰、20号峰、27号峰、28号峰为葛根中的成分；19号峰、36号峰为何首乌中的成分；32号峰、33号峰、34号峰、35号峰为淫羊藿中的成分；23号峰、24号峰、25号峰为枳实中成分；30号峰、31号峰、36号峰、37号峰、38号峰、39号峰、40号峰、41号峰为丹参中的成分；18号峰为黄芪中的成分。
将24个批号的心通颗粒UPLC指纹图谱导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》，进行色谱峰匹配，以10号峰为葛根素参照确定41个共有峰为构成心通颗粒指纹图谱的特征峰，样品共有峰的相对保留时间见表2，24批心通颗粒共有峰的相对峰面积见表3。
24批心通颗粒与标准指纹图谱相似度计算结果依次为：0.999、0.993、0.989、0.998、0.991、0.996、0.993、0.996、0.997、0.998、0.997、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999、0.999。
表2 24批心通颗粒共有峰的相对保留时间(tR)
Figure BDA0003162677810000071
Figure BDA0003162677810000081
续表：
Figure BDA0003162677810000082
Figure BDA0003162677810000091
表3 24批心通颗粒共有峰的相对峰面积(S)
Figure BDA0003162677810000092
Figure BDA0003162677810000101
Figure BDA0003162677810000111
续表：
Figure BDA0003162677810000112
Figure BDA0003162677810000121
2.4方法学考察
(1)精密度试验
取样品(批号：07200611)，按照2.2项下方法制备供试品溶液，连续进样6次，以10号峰为参照峰，计算出1-41号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，同时用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012版》软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明仪器稳精密度良好。
(2)稳定性试验
取样品(批号：07200611)，按照2.2项下方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、16、20、24h进样，以10号峰为参照峰，计算出1-41号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明供试品溶液在24小时内稳定。
(3)重现性试验
取同一批号样品(07200611)，分别精密量取6份，按照2.2项下方法制备供试品溶液，分别进样，以10号峰为参照峰，计算出1-41号共有峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD值均小于3％，同时用相似度评价软件计算各色谱指纹图谱的相似度均大于0.99，表明方法的重现性良好。
实施例2心通颗粒UPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Waters Acquity Arc高效液相色谱仪(美国)；2998PDA检测器；四元超高压梯度泵；Empower色谱工作站。
1.2试药
心通颗粒由鲁南厚普制药有限公司提供，样品批号见表4。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
表4心通颗粒测试样品批号
Figure BDA0003162677810000131
2方法与结果
2.1UPLC色谱条件：色谱柱：
Figure BDA0003162677810000132
C18(4.6×50mm，2.7μm)柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.06％磷酸水溶液为流动相B；检测波长：275nm；柱温：28℃；进样体积：2μl。
按下表进行梯度洗脱：
Figure BDA0003162677810000133
Figure BDA0003162677810000141
2.2供试品溶液的制备：精密称定心通颗粒2g，置带塞锥形瓶中，精密加入50％甲醇10ml，称重，超声处理20min，放冷，补重，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定24个批号心通颗粒UHPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，其中以10号峰为参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的41个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.085、0.102、0.150、0.216、0.400、0.514、0.683、0.712、0.954、1.000、1.121、1.158、1.230、1.301、1.341、1.454、1.630、1.681、1.768、1.854、2.098、2.182、2.350、2.487、2.642、2.691、2.771、2.827、2.857、3.103、3.266、3.381、3.416、3.451、3.493、4.290、4.332、4.446、4.468、4.563、4.755。
实施例3心通颗粒UPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Waters Acquity Arc高效液相色谱仪(美国)：2998PDA检测器；四元超高压梯度泵；Empower色谱工作站。
1.2试药
心通颗粒由鲁南厚普制药有限公司提供，样品批号见表5。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
表5心通颗粒测试样品批号
Figure BDA0003162677810000142
Figure BDA0003162677810000151
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：
Figure BDA0003162677810000152
C18(4.6×50mm，2.7μm)柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.08％磷酸水溶液为流动相B；检测波长：277nm；柱温：29℃；进样体积：2μl；
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-60 0.5 60％ 40％
60-66 0.5 60％→5％ 40％→95％
2.2供试品溶液的制备：精密量取心通颗粒2g，置10ml量瓶中，精密加入65％甲醇，超声处理25min，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定24个批号心通颗粒UPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，其中以10号峰为参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的41个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.084、0.101、0.150、0.215、0.399、0.515、0.684、0.713、0.955、1.000、1.121、1.158、1.229、1.301、1.344、1.455、1.631、1.682、1.769、1.855、2.099、2.182、2.351、2.487、2.642、2.692、2.771、2.827、2.856、3.102、3.264、3.381、3.416、3.453、3.492、4.290、4.331、4.446、4.468、4.563、4.755。
实施例4心通颗粒UHPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Waters Acquity Arc高效液相色谱仪(美国)；2998PDA检测器；四元超高压梯度泵；Empower色谱工作站。
1.2试药
心通颗粒由鲁南厚普制药有限公司提供，样品批号见表6。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
表6心通颗粒测试样品批号
Figure BDA0003162677810000161
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：
Figure BDA0003162677810000162
C18(4.6×50mm，2.7μm)柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.12％磷酸水溶液为流动相B；检测波长：282nm；柱温：31℃；进样体积：2μl；
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-55 0.5 60％ 40％
55-60 0.5 60％→5％ 40％→95％
2.2供试品溶液的制备：精密量取心通颗粒2g，置10ml量瓶中，精密加入90％甲醇，超声处理40min，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定24个批号心通颗粒UPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，其中以10号峰为参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的41个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.083、0.100、0.149、0.214、0.399、0.515、0.684、0.713、0.955、1.000、1.121、1.158、1.229、1.301、1.344、1.455、1.631、1.682、1.769、1.855、2.099、2.182、2.351、2.487、2.642、2.692、2.771、2.827、2.856、3.102、3.264、3.381、3.416、3.453、3.492、4.290、4.331、4.446、4.468、4.563、4.755。
实施例5心通颗粒UPLC标准指纹图谱的建立
1仪器与试药
1.1仪器
Waters Acquity Arc高效液相色谱仪(美国)；2998PDA检测器；四元超高压梯度泵；Empower色谱工作站。
1.2试药
心通颗粒由鲁南厚普制药有限公司提供，见表7。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
表7心通颗粒测试样品批号
Figure BDA0003162677810000171
2方法与结果
2.1色谱条件：色谱柱：
Figure BDA0003162677810000172
C18(4.6×50mm，2.7μm)柱；流动相：以乙腈为流动相A，以体积百分含量为0.15％甲酸水溶液为流动相B；检测波长：285nm；柱温：35℃；进样体积：2μl；
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％)
0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％
27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％
40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％
45-55 0.5 60％ 40％
55-66 0.5 60％→5％ 40％→95％
2.2供试品溶液的制备：精密称取心通颗粒2g，置10ml量瓶中，精密加入100％甲醇，超声处理50min，放冷，定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2.3指纹图谱的建立
测定24个批号心通颗粒UPLC指纹图谱，并进行分析比较，得到由其共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱，其中以10号峰为参照峰，计算得出该标准指纹图谱具有的41个共有峰的相对保留时间tR分别为：0.084、0.101、0.149、0.216、0.400、0.515、0.685、0.713、0.955、1.000、1.121、1.158、1.229、1.299、1.341、1.453、1.630、1.680、1.769、1.853、2.095、2.179、2.347、2.484、2.638、2.687、2.765、2.822、2.850、3.095、3.255、3.398、3.434、3.473、3.521、4.112、4.271、4.313、4.426、4.448、4.543、4.736。

Claims (10)

1.一种心通颗粒UPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)供试品溶液配制；
(2)UPLC条件：
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱；
流动相：乙腈为流动相A，体积百分数为0.06-0.15％磷酸或体积百分数为0.06-0.15％甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱；
柱温：25-35℃；
检测波长：275-285nm；
进样量：0.5-5μl；
(3)将供试品溶液注入色谱系统，按照步骤(2)的色谱条件进行分析测定，得到由共有特征峰构成的心通颗粒UPLC标准指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的供试品溶液的配制方法为精密称取心通颗粒，加入50-100％甲醇溶液，超声溶解，放冷，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的色谱柱为
Figure FDA0003162677800000011
C18柱，4.6×50mm，2.7μm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的流动相B为体积百分数为0.06-0.15％磷酸。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，流动相B为体积百分数为0.10％磷酸。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述检测波长为280nm，柱温30℃。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的流动相梯度洗脱条件如下：
时间(min) 流速(ml/min) 流动相A(％) 流动相B(％) 0-27 0.5→0.3 5％→20％ 95％→80％ 27-40 0.3 20％→35％ 80％→65％ 40-45 0.3→0.5 35％→60％ 65％→40％ 45-55 0.5 60％ 40％ 55-56 0.5 60％→5％ 40％→95％
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中将供试品溶液注入UPLC色谱系统进行分析测定，使用国家药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012》软件分析，得到心通颗粒的UPLC标准指纹图谱。
9.权利要求1-8中任一项所述方法所得到的心通颗粒指纹图谱。
10.权利要求9所述的指纹图谱在心通颗粒全过程质量评价体系或心通颗粒工艺关键点控制的应用。
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