CN111521725A - 一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法。其特征在于：采用同一供试品溶液，在四块薄层板上，鉴别了9味药材，每块板上至少2味药材，信息斑点多、结果的判断目标提升；快速薄层则指供试品、对照药材只需甲醇超声，上清液点样，展开，检视，即可；简便、快捷；同一块薄层班上，不同的检视条件下，检视不同的药材成分，虽斑点重叠、交错，但互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补；与常规的薄层鉴别相比，不但大幅度提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且乳香和没药显色后，激发的荧光斑点；甘草、伸筋草和狗脊，续断和牛膝的同板薄层鉴别亦为初次报道。

Description

一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法

技术领域

本发明涉及一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法。一板双药材系指一块薄层板上检视2味以上的药材；多信息系指不同检视条件下的多个信息斑点；快速薄层鉴别系指供试品、对照药材只需甲醇超声，上清液点样，展开，检视，即可；简便、快捷、环保、无萃取、浓缩、蒸干，造成的严重环境污染。属于薄层鉴别领域。

背景技术

在中药复方制剂中，特别是十二味以上组方的水提取复方制剂，由于药味多，各药味又都是水提取的，依据相似相容的提取原则，脂溶性成分基本已不复存在，提取的都是水溶性或偏水溶性成分，对于一些含量低微的成分，由于提取过程中的成分聚合、分解、破坏，基本也很难再检测到。所以导致薄层鉴别增订率低，定量测定指标少。查阅了2015年版中国药典一部，收载的十二味以上的传统水提取复方制剂不多，有可比性的类似制剂约有36种，薄层鉴别最少的是小儿咳喘颗粒，增订率仅为13.3％，最多的是防风通圣颗粒，增订率为52.9％，平均增订率为26.5％。多是以对照品为对照，进行鉴别，其信息量单一，无法对不同的药材，却都含同一种成分的相互识别，如川芎、当归都含藁苯内酯，大黄、虎杖、决明子都含大黄素等等。而且都是有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别模式。为排除干扰，样品的前处理程序多复杂、烦琐，需用大量的有机试剂反复纯化处理，费力、费时、费试剂、污染环境，危害健康，检测周期长。就以上薄层鉴别情况举3个典型的实例，进行一下剖析，对目前的背景技术，就一目了然。

首先列举鉴别收载率最少的小儿咳喘颗粒：

小儿咳喘颗粒由15味药材组成，仅收载了盐酸麻黄碱和黄芩苷的薄层鉴别，鉴别率13.3％，方法如下：

(1)取本品6g，研细，用热水30ml溶解，滤过，滤液放冷，加氨试液30ml，摇匀，用乙醚60ml，振摇提取，分取乙醚层，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，最为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(5∶1∶0.1)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％茚三酮乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(2)取本品6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，放冷，滤过，滤液浓缩至约5ml，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

上述两项鉴别虽不太繁琐，但完成也需花费时间2小时，提取溶剂93ml，展开剂25ml，因均是以对照品为对照，信息单一，不利于多信息对质量监控。

接着举例鉴别收载率接近平均数的肾炎消肿片：

肾炎消肿片由12味药材组成，收载了三项薄层鉴别，鉴别率(25％)，方法如下：

(1)取本品小片20片或大片12片，糖衣片除去糖衣，研细，加三氯甲烷30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取香加皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取上述两种溶液各2～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

(2)取本品小片3片或大片2片，糖衣片除去糖衣，研细，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取关黄柏对照药材0.1g，加甲醇10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液3～5μl、对照药材溶液1～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以，正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

(3)取本品小片30片或大片20片，糖衣片除去糖衣，研细，加甲醇40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次(30ml，20ml)，乙酸乙酯液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)试验，吸取供试品溶液1～2μl、对照品溶液3μl，分别点于同一用0.5％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂，展距10cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展距10cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

上述三项鉴别需供试品小片53片(17g)、大片34片(19g)，花费时间6小时，有机溶剂183ml，展开剂50ml。

最后举例鉴别收载率最高的防风通圣颗粒：

防风通圣颗粒由17味药材组成，鉴别了9味药材，鉴别率为52.9％，方法如下：

【鉴别】(1)取本品6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml溶解，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，再用水饱和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取5-0-甲基维斯阿米醇苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液6μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

(2)取本品6g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml溶解，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至10，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，低温蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取盐酸麻黄碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液4～8μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-浓氨试液(4∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(3)取本品6g，研细，加盐酸溶液(3→20)10ml，混匀，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，分取三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲酸乙酯-甲醇-甲酸-水(6∶2∶0.4∶0.1∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的橙黄色荧光斑点；置氨气中熏后，斑点变为红色。

(4)取【鉴别】(2)项下的供试品溶液作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液5μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(5)取本品15g，研细，加7％硫酸乙醇溶液-水(1∶3)的混合溶液40ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷提取液，用水30ml洗涤，弃去水洗液，三氯甲烷用铺有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述二种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(6)取本品20g，研细，加乙醚100ml，加热回流1小时，滤过，滤液回收溶剂至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材、川芎对照药材各0.5g，分别同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液20μl、对照药材溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(7)取本品5g，研细，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml溶解，用乙醚振摇提取2次，每次15ml，弃去乙醚液，水溶液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(8)取本品1.5g，研细，加0.5mol/L盐酸溶液5ml，振摇10分钟，离心，残渣加50％乙醇30ml，用碳酸钠溶液调节pH值至7，加热回流提取1小时，滤过，滤液浓缩近干，残渣加50％乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材0.3g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

上述例子中的8项薄层鉴别，鉴别了9味药材，即，以5-0-甲基维斯阿米醇苷为对照的防风、盐酸麻黄碱为对照的麻黄、栀子苷为对照的栀子、黄芩苷为对照的黄芩、还有以对照药材为对照的大黄、桔梗、当归、川芎、甘草，仅样品前处理时间，就要花费20小时，样品60g，有机提取溶剂755ml，加上展开剂120ml与展开时间6小时，1批样品的薄层鉴别，就要花去约4天的时间与875ml有机溶剂。其前提还是有四味药材的鉴别都是采用的对照品做对照，如若采用对照药材，其样品处理时间和花费的溶剂会更多，对照品做对照，信息量单一，不利于质量监督。

还对根痛平片的薄层鉴别进行了专题查阅，查到2篇密切相关报道，其一是药典收载的同处方，不同剂型的跟痛平颗粒，由12味药材组成，对其中2味药材进行了薄层鉴别增订，方法如下：

(1)取本品2g或1.4g(无蔗糖)，加乙醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液8μl、对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(2)取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取对照品溶液及【鉴别】(1)项下的供试品溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(14∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.5％氢氧化钠溶液，置紫外光灯365nm下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

2项鉴别，均是以对照品为对照，进行的薄层鉴别，需要时间2小时，有机溶剂33ml、展开剂25ml。在薄层鉴别中还是属于简便、快捷的。

其二，则是武汉理工大学，汪艳的“椎痛安胶囊质量标准及其药效学研究”硕士学位论文，该篇论文报道的虽药品名称不同，但处方与根痛平是一样的，制定了6味药材的薄层鉴别，方法如下：

(1)乳香的薄层鉴别取本品20粒，研细，称取5g，加乙醚50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为供试品溶液。另取乳香对照药材0.2g，加乙醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醚1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)-乙醚(2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(2)狗脊的薄层鉴别取本品25粒，研细，称取7g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用4％盐酸(4→100)调节pH值至2，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取狗脊对照药材2g，加水50ml，加热回流2小时，滤过，用4％盐酸(4→100)调节pH值至2，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)葛根的薄层鉴别取本品20粒，研细，称取3g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯(8∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点。

(4)桃仁的薄层鉴别取本品20粒，研细，称取5g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为作为供试品溶液。另取桃仁对照药材3g，加乙醚20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(18∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(5)续断的薄层鉴别取本品20粒，研细，称取5g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取续断对照药材3g，加甲醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇萃取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

(6)没药的薄层鉴别取本品20粒，研细，称取3g，加乙醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取没药对照药材3g，加乙醚30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(通则502)试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(8.5∶5)为展开剂，上行展开，展距8～12cm，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。

上述6项鉴别完成，计算一下，需要供试品26g，花费提取溶剂472ml、时间12小时，加上展开剂90ml，展开时间3小时，仅薄层鉴别就要花费约2天时间。突显了一项鉴别，制备一种供试品溶液，一块薄层板，展开一次，鉴别以1味药材的繁琐、费时、污染环境的弊端。

如遇复试，其检测时间和有机试剂都要翻倍，检测速度无法与机械化大生产相匹配。像剖析实例一样的中药传统水提取复方制剂的质量控制方法，因大量脂溶性和含量低微成分的损失，供试品溶液都需要富集和纯化，甚至有的比实例还要更繁琐、复杂，花费的溶剂和时间更多。所以提高检测效率、降低检测成本、减少环境污染，成了检测人员刻不容缓的奋斗目标，我们就是在该背景条件下，以传统水提取的根痛平片为研究对象，进行了简便、快捷、低成本、高效率的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法的探讨，并获得了成功。

根痛平偏的处方组成与制备工艺如下：

制备工艺：处方中的十二味药材，取白芍168g，粉碎成细粉，剩余白芍及其余十一味加水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.1～1.2(50℃)的清膏，与上述细粉混匀，干燥成干膏，粉碎，加淀粉制成颗粒，压片，包糖衣或薄膜衣，即得。

发明内容

建立了一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法。其特征在于：采用同一供试品溶液，在四块薄层板上，鉴别了9味药材，每块板上至少2味药材，信息斑点多、结果判断目标提升；快速薄层则指供试品、对照药材只需甲醇超声，上清液点样，展开，检视，即可；简便、快捷；同一块薄层板上，不同的检视条件下，检视不同的药材成分，虽斑点重叠、交错，但互不干扰，发挥了不同检视条件下的信息斑点互补；与常规的薄层鉴别相比，不但大幅度提高了被鉴别物的质量可控性，有利于质量监督，而且乳香和没药显色后，激发的荧光斑点；甘草、伸筋草和狗脊，续断和牛膝的同板薄层鉴别亦为初次报道。

本发明解决其技术问题所采用的方案为：

(1)乳香和没药的薄层鉴别取本品数片，除去包衣，研细，称取2g，加甲醇4ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取乳香、没药对照药材各0.1g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取对照药材溶液各3～5μl，供试品溶液10-12μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比8∶3∶0.1的环己烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与没药对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热约1～2分钟，置斑点隐约可见，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，至少显3个亮蓝色荧光斑点，在与没药对照药材色谱相应的位置上，显亮蓝绿色荧光主斑点；

(2)葛根和白芍的薄层鉴别取葛根对照药材粉末0.1g，加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材、对照品与供试品溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比4∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与葛根对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)甘草、伸筋草和狗脊的薄层鉴别取甘草对照药材0.1g、伸筋草和狗脊对照药材各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液。吸取甘草对照药材溶液2～3μl、伸筋草对照药材溶液5μl、狗脊对照药材溶液8～10μl、供试品溶液6μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与伸筋草对照药材色谱相应的位置上，至少显3个相同的棕红色斑点；在与狗脊对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

(4)续断和牛膝的薄层鉴别取续断对照药材0.2g、牛膝对照药材0.15g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取续断对照药材溶液4～5μl、牛膝对照药材溶液7～8μl、供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比3∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与续断对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，从薄层板的背面检视，供试品色谱中，在与续断对照药材色谱相应的位置上，显紫红色主斑点；在与牛膝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。

本发明原理如下：

根据中药各有效成分的化学结构和极性不同，随着展开剂的移动，在薄层板上的吸附、解吸附的能力而不一样，使各有效成分的斑点得以分离。又借助各成分极性大小，选取极性近似的有效成分，在不同的检视条件下，呈现各自不同的颜色斑点，虽相互重叠，但又互不干扰，在同一块薄层板上同时检测数种药材，同一供试品溶液，供多项鉴别应用。

本发明的创新点及有益效果如下：

(1)突破了一个传统水提取中药复方制剂，有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，展开N次，鉴别N味药材的传统鉴别方式。建立了供试品、对照药材只需甲醇超声，上清液点样的快捷方式，采用同一供试品溶液，在四块薄层板上，鉴别了9味药材，不同的检视条件下，检视不同的中药成分；各斑点清晰，相互交叉，但不同层次的成分，又互不干扰。将传统水提取制剂的鉴别增订率由平均26.5％，提高到75％。

(2)本申请的9味药材薄层鉴别与同处方椎痛安胶囊的6味药材鉴别相比，不但鉴别项目提高了50％，且各完成一批样品的检测，椎痛安胶囊需要供试品26g，花费提取溶剂472ml、薄层板6块、时间12小时，加上展开剂90ml，展开时间3小时，仅薄层鉴别就要花费约2天时间；而本申请只需样品2g、各对照药材0.1～0.2g、提取溶剂21ml、展开剂50ml、薄层板4块、时间3小时；彰显出本申请的简便、快捷、高效以及较高的质量可控性，目前是已报道方法都不具备的。既具有突破常规的创新性，又具有提高检测效率，节约检测成本，减少环境污染的实用性。

(3)目前为止乳香和没药都是喷雾5％香草醛硫酸溶液，检视颜色斑点，一则浓硫酸腐蚀性高，刺激性强，二则因二者性质近似，很难同时识别没药。在同一块薄层板上，能够寻找到在紫外光灯254nm下检视乳香的棕褐色斑点(图1)；在紫外光灯365nm下检视没药的天蓝色荧光斑点(图2)；喷雾10％硫酸乙醇溶液增荧光后，紫外光灯365nm下检视乳香的2个专属荧光点和没药的1个专属荧光点(图3)；而且增荧光前、后检视的斑点Rf值不同，不是同一化合物，提增了检测指标，在不同的检视条件下，共检视到乳香的3个专属信息斑点，没药的2个专属信息斑点，为首次报道，具有创新性和实用性。

(4)葛根的薄层鉴别，多是以葛根素对照品为对照，以酸性展开剂展开，在紫外光灯365nm下检视葛根素的荧光斑点，也有在紫外光灯254nm下检视棕褐色斑点的。特别是在一个十余味药材组成的复方制剂中，如何排除其他药味的干扰，尽显葛根的多信息斑点，是本申请要解决的技术，经探讨发现，以体积比4∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，以葛根对照药材为对照，展开后，在紫外光灯365nm下检视，基本上排除了其他药味的干扰，供试品共呈现了8个荧光斑点，其中6个荧光斑点与葛根一致(图4)；并且喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，还可检测芍药苷的蓝紫色斑点(图5)，斑点清晰，空白无干扰。

(5)以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开后，置紫外光灯365nm下检视，供试品与甘草对照药材都呈现出3个荧光主斑点(6)；喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，置暗室内透过灯光检视到伸筋草4个棕红色专属斑点和狗脊的1个专属斑点(图7)；在同一块薄层板上，不同的检视条件下，同时鉴别了甘草、伸筋草和狗脊，还未查阅到相同报道。

(6)以体积比3∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开后，置紫外光灯254nm下检视到续断的2个棕褐色专属斑点(图7)；喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，日光下从薄层板的背面检视，续断呈现了2个清晰的斑点，1个是紫红色的，1个是棕褐色的(图9)；牛膝呈现了2个清晰的棕褐色斑点，其中1个与续断的棕褐色斑点Rf值相同，另1个为专属斑点(图9)。与中国药典收载的续断和牛膝药材薄层鉴别相比，大幅度简化了供试品溶液的制备程序，节约了资源，提高了效率，且检出的斑点清晰，信息量大，从展开剂的极性与制备工艺分析，这些斑点都为水溶性的成分。在同一块薄层板上，同时鉴别了续断和牛膝，还未查阅到相同报道。

(7)本申请与目前组方和制备工艺类似的中药水煎煮制剂的薄层鉴别方法相比，不但检测的药味最多，而且花费的时间和有机试剂最少，绿色环保，形成了一套简便、快捷、高效、低耗、低污染、多药味、多信息快速薄层鉴别方法。

附图说明

图1紫外光灯254nm下检视的乳香棕褐色主斑点TLC图。

图2紫外光灯365nm下检视的没药天蓝色荧光主斑点TLC图。

图3喷雾10％硫酸乙醇溶液后紫外光灯365nm下检视的乳香和没药荧光斑点TLC图。

图4紫外光灯365nm下检视的葛根天蓝色荧光斑点TLC图。

图5喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的芍药苷蓝紫色斑点TLC图。

图6紫外光灯365nm下检视的甘草天蓝色荧光斑点TLC图。

图7喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的伸筋草和狗脊的颜色斑点TLC图。

图8紫外光灯254nm下检视的续断棕褐色主斑点TLC图。

图9喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，日光下从薄层板的背面检视的续断紫红色斑点和牛膝棕褐色斑点TLC图。

图1、2、3为同一块薄层板，不同检视条件下的色谱图，图中，1.乳香空白；2.乳香对照药材；3、4、5样品；6.没药对照药材；7.没药空白。

图4、5为同一块薄层板，不同检视条件下的色谱图，图中，1.葛根对照药材；2.芍药苷；3.4.5样品；6.葛根空白；7.白芍空白。

图6、7为同一块薄层板，不同检视条件下的色谱图，图中，1.甘草对照药材；2.甘草空白；3.6.7样品；4.伸筋草空白；5.伸筋草对照药材；8.狗脊空白；9.狗脊对照药材。

图8、9为同一块薄层板，不同检视条件下的色谱图，图中，1.续断空白；2.续断对照药材；3.4.5样品；6.牛膝对照药材；7.牛膝空白。

本发明具体实施方式如下：

(1)乳香和没药的薄层鉴别取本品数片，除去包衣，研细，称取2g，加甲醇4ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取乳香、没药对照药材各0.1g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取对照药材溶液各3～5μl，供试品溶液10-12μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比8∶3∶0.1的环己烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与没药对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热约1～2分钟，置斑点隐约可见，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，至少显3个亮蓝色荧光斑点，在与没药对照药材色谱相应的位置上，显亮蓝绿色荧光主斑点；

(2)葛根和白芍的薄层鉴别取葛根对照药材粉末0.1g，加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材、对照品与供试品溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比4∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与葛根对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)甘草、伸筋草和狗脊的薄层鉴别取甘草对照药材0.1g、伸筋草和狗脊对照药材各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液。吸取甘草对照药材溶液2～3μl、伸筋草对照药材溶液5μl、狗脊对照药材溶液8～10μl、供试品溶液6μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与伸筋草对照药材色谱相应的位置上，至少显3个相同的棕红色斑点；在与狗脊对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

(4)续断和牛膝的薄层鉴别取续断对照药材0.2g、牛膝对照药材0.15g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取续断对照药材溶液4～5μl、牛膝对照药材溶液7～8μl、供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比3∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与续断对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，从薄层板的背面检视，供试品色谱中，在与续断对照药材色谱相应的位置上，显紫红色主斑点；在与牛膝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。

Claims (2)

1.一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法，该片剂由伸筋草、白芍、狗脊、续断、地黄、红花、乳香、没药、桃仁、牛膝、葛根、甘草，经提取，浓缩，加适量淀粉，加工而成，其特征在于：

(1)乳香和没药的薄层鉴别取本品数片，除去包衣，研细，称取2g，加甲醇4ml，超声处理10分钟，离心，上清液作为供试品溶液；另取乳香、没药对照药材各0.1g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取对照药材溶液各3～5μl，供试品溶液10-12μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比8∶3∶0.1的环己烷-醋酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与没药对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热1～2分钟，置斑点隐约可见，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与乳香对照药材色谱相应的位置上，至少显3个亮蓝色荧光斑点，在与没药对照药材色谱相应的位置上，显亮蓝绿色荧光主斑点；

(2)葛根和白芍的薄层鉴别取葛根对照药材粉末0.1g，加甲醇2ml，超声处理15分钟，上清液作为对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取对照药材、对照品与供试品溶液各3～5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比4∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与葛根对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)甘草、伸筋草和狗脊的薄层鉴别取甘草对照药材0.1g、伸筋草和狗脊对照药材各0.2g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液。吸取甘草对照药材溶液2～3μl、伸筋草对照药材溶液5μl、狗脊对照药材溶液8～10μl、供试品溶液6μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比13∶2∶3∶0.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色荧光主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，置暗室内透过灯光检视，供试品色谱中，在与伸筋草对照药材色谱相应的位置上，至少显3个相同的棕红色斑点；在与狗脊对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

(4)续断和牛膝的薄层鉴别取续断对照药材0.2g、牛膝对照药材0.15g，分别加甲醇2ml，超声处理15分钟，离心，上清液作为各自对照药材溶液；吸取续断对照药材溶液4～5μl、牛膝对照药材溶液7～8μl、供试品溶液3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比3∶1∶4∶1的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯254nm下检视，供试品色谱中，在与续断对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点；再喷以体积比1∶6的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，从薄层板的背面检视，供试品色谱中，在与续断对照药材色谱相应的位置上，显紫红色主斑点；在与牛膝对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色主斑点。

2.根据权利要求1所述的一种根痛平片的一板双药材多信息快速薄层鉴别方法，其特征在于9味药材的薄层鉴别，是采用同一供试品溶液，在4块薄层板上完成，每块薄层板至少检出2味药材，且为多信息斑点；其快速则指供试品、对照药材只需甲醇超声，上清液点样，展开，检视，即可；简便、快捷，鉴别增订率达到75％。

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