CN109061029A - 一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法 - Google Patents

一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法。其特征在于：用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液，以极性、中极性、非极性三种不同的展开剂，在三块薄层板上，12种检视条件下，以12张色谱图，检出信息斑点约80余个，涉及30余种中药化学成分。以检出的信息斑点为依据，对改辅料和规格前后的有糖型颗粒和无糖型颗粒进行质量对比，结果说明两种颗粒信息斑点完全一样，颗粒中所含化学成分一致，质量无差异。以多信息梯度薄层进行质量对比，简便、快捷、信息量大、覆盖范围广、成本低、效率高，对比结果直观、真实、可靠。在制药领域具有广阔的应用前景。

Description

一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对 比方法
技术领域
本发明涉及一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法。
背景技术
所谓的中药制剂多信息梯度薄层鉴别，顾名思义就是将中药制剂中的脂溶性、中极性以及水溶性成分，依据相似相容的溶解原则，按非极性、中极性、极性的顺序，在各自不同组分、不同比例、不同极性的展开溶剂中，通过反复地吸附与解吸附，将制剂中有检测信息的大部分有效成分，按着极性大小，在极少数的薄层板上，不同的检视条件下，获得尽可能多的斑点信息图谱，由此组成一套从水溶性到脂溶性成分的全息薄层色谱图，提供采用同一制备工艺，不同的辅料、制备的不同规格的制剂，作为质量对比的依据。简便、快捷、信息量大、覆盖范围广、成本低、效率高，对比结果直观、真实、可靠。在制药领域具有广阔的应用前景。
镇定安神颗粒(有糖型)由柴胡、黄芩、大黄、半夏(制)、桂枝、甘草、龙骨和牡蛎组成。原辅料为淀粉、蔗糖，其规格为每袋14g，每1g相当原生药材1.4578g，一次14g，一日2次，相当于服用生药量40.82g；改辅料和规格之后，为无糖型的，辅料为糊精、甜菊素，其规格为每袋6g，每1g相当原生药材3.4017g，一次6g，一日2次，相当于服用生药量40.82g。即改辅料和规格前后，服用剂量一致。但无糖型的服用剂量减小，扩大了应用人群，适合老年人和糖尿病患者服用。
国家新药审评中心要求，制剂改辅料和规格前后，其质量一定要完全一致。如何判断其一致性，仅以质量标准的检测项目是无法做出全面正确判断的，何况原质量标准只有2项试管反应与常规检查，无薄层鉴别与定量测定，如何有理有据、准确无误地、做出制剂改辅料和规格前后质量的一致的评价，成了研发人员必须解决的课题。
为给改辅料和规格前后的镇静安神颗粒，提供简便、快捷、低成本、高效率的多信息质量对比方法，对其进行了专题梯度薄层鉴别研究。
有糖型镇静安神颗粒的处方与制备工艺
处方：
柴胡 333g 黄芩 250g 大黄 125g
半夏(制) 250g 桂枝 250g 甘草 167g
龙骨 333g 牡蛎 333g
制法：上述处方中八味，除大黄外，半夏50g粉碎成细粉，剩余的半夏与其余柴胡等六味加7倍量水煎煮二次，每次1小时40分钟，合并煎液；药渣与大黄加水6倍量，煎煮40分钟，滤过，滤液与上述煎液合并，静置，取上清液，浓缩成相对密度约为1.31(80℃测)得清膏，加入半夏细粉，淀粉167g，蔗糖粉1033g，混匀，制成颗粒1400g，60℃以下干燥，分装成100袋，即得。
无糖型镇静安神颗粒的处方与制备工艺
处方：
柴胡 555.0g 黄芩 416.7g 大黄 208.3g
半夏(制) 416.7g 桂枝 416.7g 甘草 278.3g
龙骨 555.0g 牡蛎 555.0g
制法：上述处方中八味，除大黄外，半夏83.3g粉碎成细粉，剩余的半夏与其余柴胡等六味加7倍量水煎煮二次，每次1小时40分钟，合并煎液；药渣与大黄加水6倍量，煎煮40分钟，滤过，滤液与上述煎液合并，加甜菊素5g，搅拌溶解，混合均匀，静置，取上清液，浓缩成相对密度约为1.31(80℃测)清膏；加入半夏细粉、糊精630～700g，混匀，制粒，60℃以下干燥，制成颗粒1000g，即得。
发明内容
在高效液相指纹图谱脂溶性、中极性和水溶性有效成分的梯度洗脱测定的启发下，尝试了镇静安神颗粒的梯度薄层鉴别，通过薄层板、显色剂、展开剂的不同组分与其组合比例、检测条件等参数研究，获得以极性、中极性、非极性，三种不同展开剂，展开镇静安神颗粒，在12种检视条件下，以12张色谱图，共检出信息斑点约80余种。以该检出的信息斑点为依据，对改辅料和规格前后的有糖型颗粒和无糖型颗粒进行了质量对比，既简便、快捷、成本低、效率高，而且信息量又大、从极性到非极性，覆盖范围广，结果直观，可比性强、真实、可靠。比高成本、受仪器设备条件限制的指纹图谱更具有应用价值。
本发明解决其技术问题所采用的方案为：
(1)偏脂溶性成分比较取宁神灵颗粒无糖型和有糖型各3g，研细，分别加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，无糖型加甲醇1ml使溶解、有糖型加甲醇0.5ml使溶解，分别作为各自供试品溶液；吸取上述两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比6∶4∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显3个相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，再置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显3个黄绿色荧光斑点和1个亮兰色荧光主斑点；再将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；
(2)中极性成分比较吸取取偏脂溶性成分下的两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比12∶1∶3∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以以体积比1∶6混合的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；
(3)水溶性成分比较 吸取取偏脂溶性成分下的两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光斑点；再将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点。
本发明的原理如下：
依据中药各有效成分的化学结构与性质，遵循相似相容的提取原则，采用适宜的提取溶剂，简便、快捷地制备供试品与对照药材溶液。再采用不同组分、不同比例组成的不同极性的展开剂，进行展开，各种化学成分就会随着不同的展开剂，依据吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的能力不同，而在各自的薄层板上得以良好分离。再借助各种极性近似的有效成分，在同一块薄层板上，不同的检视条件下，虽然重叠，但在不同的层次上，互不干扰，呈现出各自不同的斑点颜色，获得多信息的薄层色谱图。将各薄层板上分离良好的多信息梯度薄层色谱图，按极性大小连接起来，就形成一套全息薄层色谱图。
本发明的创新点及有益效果如下：
用简便、快捷的前处理方法得到供试品与对照药材溶液。通过薄层板、显色剂、展开剂的不同组分与其组合比例、检测条件等参数研究，获得以极性、中极性、非极性，三种不同的展开剂，展开镇静安神颗粒，在12种检视条件下，在12张色谱图上，共检出信息斑点约80余种，涉及30余种中药化学成分。以该检出的信息斑点为依据，对改辅料和规格前后的有糖型颗粒和无糖型颗粒进行了质量对比，不但简便、快捷、成本低、效率高，而且信息、量大、从极性到非极性，就形成一套全息薄层色谱图，覆盖范围广，结果直观，可比性强、真实、可靠。比高成本、受仪器设备条件限制的指纹图谱更具有应用价值，为首次报道。
1.两种颗粒以体积比6∶4∶0.5的环己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开脂溶性成分，获得紫外光灯365nm下检视到的3个清晰的荧光斑点；紫外光灯254nm下检视到的5个棕褐色斑点；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯265nm下检视到的5个荧光斑点，其中3个为黄绿色荧光，2个为大兰色荧光，一个含量高，一个含量低；透过灯光检视到的8个红色、棕红色的颜色斑点；在同一块薄层板，4种检视条件下，共检出脂溶性信息斑点21个，至少为14种化学成分。
2.两种颗粒以体积比12∶1∶3∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开中极性成分，获得紫外光灯365nm下检视到的12个不同颜色的荧光斑点；紫外光灯254nm下检视到的6个棕褐色斑点；喷雾香草醛硫酸乙醇溶液显色后，暗室内透过灯光检视到的11个不同颜色的斑点；同一块薄层板，在3种检视条件下，共检出中极性信息斑点29个，至少为15种化学成分。
3.两种颗粒以体积比1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开水溶性成分，获得紫外光灯365nm下检视到的4个荧光斑点；紫外光灯254nm下检视到的5个棕褐色斑点；喷雾10％硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视到的7个不同颜色的斑点、紫外光灯365nm下检视到的5个亮兰色和黄绿色的荧光斑点、暗室内透过灯光检视到的7个不同颜色的斑点；在同一块薄层板，5种检视条件下，共检出水溶性信息斑点30个，至少为7～8种化学成分。
4.同一快薄层板，在不同的检视条件下，检测到的斑点是不一样的，不是同一种化学成分。以脂溶性成分的检测图谱为例进行说明。横向比较图1、2和图3、4上的斑点，发现图1中的荧光斑点，对应的不是图2中的棕黑色斑点；图3中显色后的增荧光斑点，对应的也不是图4中的颜色斑点；在图1～4中，共检出不同的化学成分至少14种。以此类推，用三种极性不同的展开剂，在3块薄层板上，12种检视条件下，12张色谱图上共检出信息斑点80余个，至少涉及30余种不同的化学成分。
5.本对比方法的关键点，还在于脂溶性展开剂，展开后距展开剂前沿1cm处，不能有任何斑点出现，说明脂溶性成分都在包含在本展开剂的范围内，而且各斑点都要分离良好；而水溶性成分展开剂，展开后其原点位置不能有清晰的残留痕迹，说明所有的水溶性成分，都已随展开剂上行展开，也要求各斑点分离良好；中极性展开剂是承上启下，将脂溶性和水溶性成分衔接起来，形成一套全息薄层鉴别图，检出80余个信息、斑点，30余种不同的化合物，用于两种颗粒质量对比，简便、快捷、覆盖范围广，结果直观，具有新颖性、创造性，在制药领域具有广阔的应用前景。
附图说明
图1两种颗粒脂溶性成分紫外光灯365nm下检视的TLC图。
图2两种颗粒脂溶性成分紫外光灯254nm下检视的TLC图。
图3两种颗粒脂溶性成分10％硫酸乙醇显色后紫外光灯365nm下检视的TLC图。
图4两种颗粒脂溶性成分10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的TLC图。
图5两种颗粒中极性成分紫外光灯365nm下检视的TLC图。
图6两种颗粒中极性成分紫外光灯254nm下检视的TLC图。
图7两种颗粒中极性成分香草醛硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的TLC图。
图8两种颗粒水溶性成分紫外光灯365nm下检视的TLC图。
图9两种颗粒水溶性成分紫外光灯254nm下检视的TLC图。
图10两种颗粒水溶性成分10％硫酸乙醇溶液显色后，日光下检视的TLC图。
图11两种颗粒水溶性成分10％硫酸乙醇溶液显色后，紫外光灯365nm检视的TLC图。
图12两种颗粒水溶性成分10％硫酸乙醇溶液显色后，透过灯光检视的TLC图。
图1、2、3、4为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，图中，1.2.3为有糖型，4.5.6.7为无糖型。
图5、6、7为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，图中，1.2.3为无糖型，4.5.6为有糖型。
图8、9、10、11、12为同一块薄层板，不同检视条件下的薄层色谱图，图中，1.2.3为有糖型，4.5.6.7为无糖型。
本发明具体实施方式如下：
(1)偏脂溶性成分比较 取宁神灵颗粒无糖型和有糖型各3g，研细，分别加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，无糖型加甲醇1ml使溶解、有糖型加甲醇0.5ml使溶解，分别作为各自供试品溶液；吸取上述两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比环6∶4∶0.5的己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显3个相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，再置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显3个黄绿色荧光斑点和1个亮兰色荧光主斑点；再将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；
(2)中极性成分比较 吸取取偏脂溶性成分下的两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比12∶1∶3∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以以体积比1∶6混合的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；
(3)水溶性成分比较 吸取取偏脂溶性成分下的两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光斑点；再将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点。

Claims (3)

1.一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法，其特征在于：
(1)偏脂溶性成分比较 取宁神灵颗粒无糖型和有糖型各3g，研细，分别加甲醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，无糖型加甲醇1ml使溶解、有糖型加甲醇0.5ml使溶解，分别作为各自供试品溶液；吸取上述两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比环6∶4∶0.5的己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显3个相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，再置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显3个黄绿色荧光斑点和1个亮兰色荧光主斑点；再将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；
(2)中极性成分比较 吸取取偏脂溶性成分下的两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比12∶1∶3∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以以体积比1∶6混合的5％香草醛硫酸溶液-乙醇的混合溶液，105℃加热至斑点显色清晰，将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点；
(3)水溶性成分比较 吸取取偏脂溶性成分下的两种供试品溶液各4～6μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比1∶2∶4∶0.5的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，热风吹干，置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的荧光主斑点；置紫外光灯254nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰，日光下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色的主斑点；再置紫外光灯365nm下检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色荧光斑点；再将薄层板在暗室中，透过灯光检视，在两种供试品溶液色谱相应的位置上，分别显相同颜色斑点。
2.根据权利要求1所述的一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法，其特征在于所述的改辅料和规格前，系指有糖型的镇静安神颗粒，每1g相当原生药材1.4578g，一次14g，一日2次；相当于服用生药量40.82g。
3.根据权利要求1所述的一种镇静安神颗粒改辅料和规格前后多信息梯度薄层质量对比方法，其特征在于所述的改辅料和规格后，系指无糖型的镇静安神颗粒，每1g相当原生药材3.4017g，一次6g，一日2次；相当于服用生药量40.82g。
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