CN101513519A - 一种补气养血的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种补气养血的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。该中药组合物由乌鸡、艾叶、益母草、柴胡、干姜、何首乌、玄参、枳实、乳香、知母、茯苓、黄连(酒制)、秦艽、党参、青蒿、熟地黄、川贝母、地骨皮等原料药组成，其制备方法为：乌鸡以外的药味加水煎煮后醇沉取上清液，浓缩，乌鸡加水煎煮，将所得溶液混合制得口服液。本发明的质量控制方法包括黄连、延胡索、香附的定性检测和芍药苷的定量检测。该中药组合物对妇女体弱血虚，月经不调，经期腹痛等症状有显著的疗效。

Description

一种补气养血的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种补气养血的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，具体地本发明涉及一种补气养血，用于治疗妇女体弱血虚，月经不调，经期腹痛的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。属于中药技术领域。

背景技术

痛经是青春期至绝经期年龄段妇女的一种症状，多见于20～25岁以下的未婚女性。一般在初潮后1～2年后出现，大约50％的青年女性在经期有症状，有10％因此而影响正常的生活和工作。一些化学止痛药物，虽然能缓解症状，但不能根治，需反复用药。中医认为，痛经的原因与气血有直接的关系，众所周知，月经的成份主要是血，血由脏腑所化生，通过经络输注下行而为月经。如果血虚则无血可下，气虚则血瘀，使子宫失去血的滋养而产生疼痛。因此，发明一种能补气养血，治疗妇女体弱血虚，月经不调，经期腹痛的中药是切实可行的。

发明内容

本发明的目的是提供一种补气养血，治疗妇女体弱血虚，月经不调，经期腹痛的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。

上述发明目的，是通过以下技术方案实现的。

本发明所述的中药组合物是通过下述重量份的原料药制成的：

乌鸡   108.8重量份      艾叶   18.8重量份     益母草     9.8重量份

柴胡   9.8重量份        干姜   4.5重量份      何首乌     9.8重量份

玄参   9.8重量份        枳实   75重量份       乳香       4.5重量份

知母   9.8重量份        茯苓   12重量份       黄连(酒制) 4.5重量份

秦艽   6.8重量份        党参   9.8重量份      青蒿       18.8重量份

熟地黄 18.8重量份       川贝母 9.8重量份      地骨皮     4.5重量份

制成本发明中药组合物的原料药中，益母草还可以是等重量份的丹参、红花、牛膝、桃仁中的一种或几种；所述的何首乌还可以是等重量份的当归、白芍、阿胶中的一种或几种；所述的玄参还可以是等重量份的生地黄、牡丹皮、水牛角中的一种或几种；所述的枳实还可以是等重量份的香附、青皮、枳实、木香、沉香中的一种或几种；所述的乳香还可以是等重量份的延胡索、郁金、姜黄、没药中的一种或几种；所述的党参还可以是等重量份的黄芪、白术、山药中的一种或几种。

本发明所述的中药组合物的制备方法为：

以上药味，乌鸡切块后加水，加压煎煮三次，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，浓缩至适量，加入适量防腐剂，备用；其余药味加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入等量乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，回收乙醇后备用；另取蔗糖、蜂蜜，加水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加入防腐剂，搅匀，滤过，加水稀释，分装，即得。

本发明所述的中药组合物的制备方法还可以为：

以上药味，乌鸡切块后，每次加8倍量水，在压力为0.05Mpa的条件下加压煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，在70℃、-0.06Mpa条件下减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，加入0.2％的防腐剂，备用；其余药味加水提取两次，第一次2小时，加水量为8倍，第二次2小时，加水量为6倍，合并煎液，滤过，70℃、-0.06Mpa条件下减压浓缩至相对密度为1.10~1.15，加入等量95％乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，在65℃、-0.07Mpa条件下回收乙醇后备用；另取蔗糖300重量份、蜂蜜100重量份，加500体积份水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加入防腐剂1.67重量份，搅匀，滤过，加水稀释至1000体积份，分装，即得。

上述重量份/体积份的比例与g/ml相对应。

本发明所述的中药组合物的质量控制方法，包括下列a、b、c、d四种检测中的至少一种检测：

a.盐酸小檗碱的定性检测：

取本品，用水饱和的正丁醇-无水乙醇混合液，振摇提取，合并提取液，用氨试液洗涤提取液，弃去氨洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液蒸干，残渣加甲醇使溶解，加于中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液。

另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成对照品溶液；

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b.延胡索的定性检测：

取本品，用氨试液调至碱性，用乙醚-无水乙醇振摇提取，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液。

另取延胡索对照药材，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，照供试品溶液制备方法操作，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置波长365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.香附的定性检测：

取本品，用乙醚萃取，合并醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯作为供试品溶液。

另取香附对照药材，加水煎煮，滤过，滤液浓缩，放冷后用乙醚萃取，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为对照药材溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置波长254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

d.芍药苷的定量检测：

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成溶液，即得。

精密量取本品，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明所述的中药组合物的质量控制方法，还可以包括下列a、b、c、d四种检测中的至少一种检测：

a.盐酸小檗碱的定性检测：

取本品50ml，用4∶1比例的水饱和的正丁醇-无水乙醇振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨洗液，再用水洗涤2次，每次50ml，弃去水洗液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加于用8g中性氧化铝处理好的内径2cm的色谱柱上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.3比例的环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

b.延胡索的定性检测：

取本品50ml，用氨试液调至pH10，用4∶1比例的乙醚-无水乙醇振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取延胡索对照药材1g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，照供试品溶液制备方法操作，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15∶4∶1比例的正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置波长为365nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

c.香附的定性检测：

取本品40ml，用乙醚萃取3次，每次40ml，合并醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml作为供试品溶液。

另取香附对照药材5g，加水200ml煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30ml，放冷后用乙醚50ml萃取，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以5∶5∶0.2比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为254nm的紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

d.芍药苷的定量检测：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.2)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含50μg的溶液，即得。

精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，即得。

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1ml含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于0.2mg。

本发明处方中，乌鸡、当归、熟地黄、白芍、阿胶、何首乌养血益阴为君药，党参、黄芪、白术、山药补气活血为臣药；知母、黄芩、黄连、黄柏、龙胆草、苦参、秦艽、青蒿、地骨皮、生地黄、玄参、牡丹皮燥湿止血，干姜、艾叶温经止血，散寒调经以佐制君药滋阴之寒腻；柴胡、青皮、枳实、木香、沉香、香附疏肝理气，调经止痛，牛膝、丹参红花、桃仁、益母草活血调经，引火下行为使药；诸药合用共奏补气养血之功。

本发明的制备方法和质量控制方法，便于药品的标准化、现代化生产，有利于提高生产效率，保证了药品的安全性和有效性。

为了更好地理解本发明，现在结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。

具体实施方式

下述实验例和实施例进一步说明但不限于本发明

实验例1.盐酸小檗碱的定性检测方法研究

1.本检测方法样品溶液的制备中提取液的选择：

取实验例1中所制得的口服液4份，每份50ml，用下述比例的水饱和的正丁醇-无水乙醇振摇提取3次，测定其中盐酸小檗碱含量，结果见下表：

表1提取液的选择优选实验结果

水饱和的正丁醇-无水乙醇	2∶1	3∶1	4∶1	5∶1
					盐酸小檗碱含量(mg)	9.6	14.8	18.4	15.5

由表1可以看出，用4∶1比例的水饱和的正丁醇-无水乙醇振摇提取3次，就可以将其中的盐酸小檗碱提取完全，所以本实验优选提取液为4∶1比例的水饱和的正丁醇-无水乙醇。

2.本检测方法展开剂用量配比的优选：

取实验例1中所制得的口服液50ml，用4∶1比例的水饱和的正丁醇-无水乙醇振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨洗液，再用水洗涤2次，每次50ml，弃去水洗液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加于用8g中性氧化铝处理好的内径2cm的色谱柱上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，分别以5∶3∶1.5∶3∶0.3、5∶3∶3∶1.5∶0.3、6∶3∶1.5∶1.5∶0.3、7∶2∶1∶1∶0.3比例的环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm紫外光灯下检视，观察各薄层板上供试品各斑点展开的效果，结果见下表：

表2展开剂用量配比优选实验结果

展开剂配比	5∶3∶1.5∶3∶0.3	5∶3∶3∶1.5∶0.3	6∶3∶1.5∶1.5∶0.3	7∶2∶1∶1∶0.3
					展开效果	主斑点难以分离	差	好	出现拖尾

从表2可以看出展开剂环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水配比为6∶3∶1.5∶1.5∶0.3时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾等现象。

3、本发明检测方法中样品溶液点样量的优选：

取供试品溶液1μl、3μl、5μl、7μl、9μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶G薄层板上，用环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水配比为6∶3∶1.5∶1.5∶0.3的展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

表3样品溶液点样量优选实验结果

点样量	1μl	3μl	5μl	7μl	9μl
						效果	供试品在相应对照品位置显色较浅	供试品在相应对照品位置斑点显色较浅	供试品在相应对照品位置斑点显色效果好	供试品在相应对照品位置斑点显色斑点较大，分离不好	供试品在相应对照品位置斑点分离不好

从表3可以看出供试品点样量在5μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

4、阴性对照试验

按处方比例制备缺黄连的阴性样品，照上述供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明该方法专属性强。

实验例2延胡索的定性检测方法研究

1.本发明检测方法中展开剂用量配比的优选：

取实验例1中所制得的口服液50ml，用氨试液调至pH10，用4∶1比例的乙醚-无水乙醇振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

另取延胡索对照药材1g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，照供试品溶液制备方法操作，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。取供试品溶液、对照药材溶液各5μl点于不同的硅胶G薄层板上，分别用正己烷-氯仿-甲醇配比为25∶5∶1、20∶5∶1、15∶4∶1、10∶5∶1、5∶5∶1的展开剂展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置波长为365nm的紫外光灯下检视，观察各薄层板上供试品各斑点展开的效果，结果见下表：

表4展开剂用量配比优选实验结果

展开剂配比	25∶5∶1	20∶5∶1	15∶4∶1	10∶5∶1	5∶5∶1
						展开效果	很差	差	好	较差	出现拖尾

从表4可以看出展开剂配比为15∶4∶1时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。

2、本发明检测方法中样品溶液点样量的优选：

取供试品溶液1μl、3μl、5μl、7μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶G薄层板上，用正己烷-氯仿-甲醇配比为15∶4∶1的展开剂展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置波长为365nm的紫外光灯下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

表5样品溶液点样量优选实验结果

点样量	1μl	3μl	5μl	7μl
					效果	供试品在相应对照品位置无斑点	供试品在相应对照品位置斑点显色较浅	供试品在相应对照品位置显相同颜色斑点，显色效果好	供试品在相应对照品位置斑点分离不好

从表5可以看出供试品点样量在5μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

3、阴性对照试验

制备缺延胡所的阴性样品，照上述检测方法中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照药材溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的检测方法专属性强。

实验例3.香附的定性检测试验研究

1、展开剂用量配比的优选：

取实验例1中所制得的口服液40ml，用乙醚萃取3次，每次40ml，合并醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml作为供试品溶液。

另取香附对照药材5g，加水200ml煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30ml，放冷后用乙醚50ml萃取，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，分别用三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸配比为8∶2∶0.2、7∶3∶0.2、5∶5∶0.2、3∶7∶0.2的展开剂展开，取出，晾干，置波长为254nm的紫外光灯下检视，观察各薄层板上供试品各斑点展开的效果，结果见下表：

表6展开剂用量配比优选实验结果

展开剂配比	8∶2∶0.2	7∶3∶0.2	5∶5∶0.2	3∶7∶0.2
					展开效果	很差	主斑点分离不好	好	出现拖尾

从表6可以看出展开剂配比为5∶5∶0.2时，供试品溶液展开效果最好，没有出现拖尾、主斑点分离不好等现象。

2、样品溶液点样量的优选：

取供试品溶液1μl、3μl、5μl、7μl，对照品溶液5μl，点于同一硅胶GF254薄层板上，用三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸配比为5∶5∶0.2的展开剂展开，取出，晾干，置波长为254nm的紫外光灯下检视，观察薄层板上供试品主斑点显色的效果，结果见下表：

表7样品溶液点样量优选实验结果

点样量	1μl	3μl	5μl	7μl
					效果	供试品在相应对照品位置无斑点	供试品在相应对照品位置斑点显色清晰	供试品在相应对照品位置斑点显色清晰	供试品在相应对照品位置斑点分离不好

从表7可以看出供试品点样量在5μl时，在薄层板上显色效果好，适合试验要求。

3、阴性对照试验

按实验例1方法制备缺香附的阴性样品，照上述检测方法中供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，展开后在对照品溶液对应位置上没有出现相应斑点，说明所选取的检测方法专属性强。

实验例4芍药苷的定量检测研究

检测仪器：岛津公司SPD-10ATvp型高效液相色谱仪

色谱柱：安捷伦公司(Zorbax SB-C₁₈ 4.6×150mm，5μm)

流动相：甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.2)(甲醇为色谱级，水为重蒸水)

检测波长：230nm    流速：1.000ml/min      柱温：室温

对照品：芍药苷 购于中国药品生物制品检定所 批号：110736-200526

测定方法：

供试品溶液的制备 精密量取实验例1中所制得的口服液2ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，即得。按实验例1方法制备缺白芍的空白样品，制备阴性对照液，用微孔滤膜(0.45μm)过滤。分别精密吸取阴性对照液与供试品溶液各10μl，对照品液5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

1、含量测定方法考察：

1.1空白试验

空白溶液的制备是按实验例1处方中药味的比例，自配不含白芍的群药，按其工艺制成空白制剂，再按供试品溶液制备方法制备，上述色谱条件测定，结果空白溶液在与芍药苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。

1.2稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时进样10μl，依法测定，结果见下表：                表8.稳定性试验

结果表明：其在24小时内基本稳定。

1.3线性关系考察

取芍药苷对照品溶液(54.5μg/ml)摇匀，分别精密吸取1、2、3、5、7、9μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，结果见下表，并绘制标准曲线，结果表明芍药苷对照品在0.0545μg-0.4905μg间呈线性关系，其回归方程为：y＝1.1794E+06x-1.6901E+04，R＝0.9996

表9.线性关系考察

1.4精密度试验精密吸取对照品溶液5μl，供试品溶液10μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表

表10.精密度试验

1.5重现性试验  取上述供试品溶液连续进样5份，对每份进行测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表

表11.重现性试验

1.6回收率试验  精密量取上述供试品溶液1ml，置50ml量瓶中，再精密加入芍药苷对照品母液溶液(0.109mg/ml)5ml置同一50ml量瓶中，并以50％甲醇稀释至刻度，按正文供试品溶液的制备方法操作，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：

表12.回收率试验

根据以上数据，将含量限度定为：本品每1ml含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于0.2mg。

从以上试验结果可以看出，本发明所采用的含量测定方法其线性关系、稳定性、精密度、重现性、回收率均良好，能够有效控制本发明中药组合物中中芍药苷的含量。

实验例5药理实验

1.材料

1.1试验药物：

本发明中药组和物I、II、III、IV、分别按实施例1、2、3、4制得；乌鸡白凤口服液，北京同仁堂有限责任公司，批号：050216001。

1.2试验器械：半自动血液分析仪，日本东亚公司提供，型号：Sysmex F-820。

1.3试验动物：昆明种小鼠，雌雄各半，北京医科大学动物室提供，医动字：第310101001号。

2.方法与结果

2.1对失血性贫血的影响

将60只小鼠，体重25～30g，雌雄各半，测Hb(血红蛋白)及RBC(红细胞)后眶后静脉丛放血0.5ml/只，24h后尾静脉取血测Hb及RBC，根据测定结果分为6组，每组10只。按下表灌胃给药，连续给药10天。分别于给药后第3天、6天、10天尾静脉取血测定各组的Hb、RBC值。由表13、14可见：本发明中药组合物能使失血性贫血小鼠的RBC及Hb明显升高。

表13.本发明中药组合物对血虚小鼠的Hb、RBC的影响(X±SD)

与造型前相比^*P＜0.05，^**P＜0.01

表14.本发明中药组合物对血虚小鼠的Hb、RBC的影响(X±SD)

与乌鸡白凤口服液相比^**P＜0.05，^**P＜0.01

由以上数据可以看出，本发明中药组合物与乌鸡白凤口服液相比可明显提高小鼠血液Hb及RBC的含量。

2.2本发明中药组合物对缩宫素所致小鼠扭体反应的影响

方法试验用雌性小鼠，体重18-22克，共84只，分为6组，即本发明中药组合物组I-IV、乌鸡白凤口服液组、空白对照组。小鼠腹腔注射己稀雌酚0.4mg/只，连续给药3日，第4日小鼠灌胃被试药物后1小时，腹腔注射缩宫素1u/只，记录扭体出现的潜伏期，给药后0-10分及10-20分钟内出现的扭体次数，比较给药本发明中药组合物组与乌鸡白凤口服液组之间的差别，进行组间t检验，以p＜0.05及p＜0.01为药物作用有显著性差异。

结果  本发明中药组合物组较乌鸡白凤口服液组减少小鼠扭体次数作用显著(表15)。

表15本发明中药组合物对缩宫素引起小鼠痛反应影响

分组	剂量	动物数(只)	扭体次数(次/10分)0-10分	X±S10-20分
					空白对照	-	12	22.9±9.3	7.9±8.6
本发明中药组和物I	4.0ml/kg	14	7.4±3.1＊＊	4.1±2.2
					本发明中药组和物II	4.0ml/kg	13	7.8±2.4＊＊	4.3±2.1
本发明中药组和物III	4.0ml/kg	16	7.6±3.0＊＊	4.4±3.2

本发明中药组和物IV	4.0ml/kg	13	7.0±2.8＊＊	2.4±1.0＊
					乌鸡白凤口服液	18.0ml/kg	14	14.1±6.4	4.5±3.2

注：与参白痛经颗粒组比^*p＜0.05 ^**p＜0.01

由表中结果可以看出，本发明中药组合物，较乌鸡白凤口服液能明显减少缩宫素引起的小鼠扭体反应次数。

实施例1

称取下列重量的原料药：

乌鸡   108.8g   艾叶   18.8g    牛膝(盐制)   9.8g

柴胡   9.8g     干姜   4.5g     白芍(酒炒)   9.8g

牡丹皮 9.8g     香附   75g      延胡索(醋制) 4.5g

知母   9.8g     茯苓   12g      黄连(酒制)   4.5g

秦艽   6.8g     当归   9.8g     黄芪(炙)     9.8g

青蒿   18.8g    地黄   9.8g     熟地黄       18.8g

川贝母 9.8g     地骨皮 4.5g

以上二十味，乌鸡切块后加水，加压煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，浓缩至适量，加入适量防腐剂，备用；香附等十九味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入等量乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，回收乙醇后备用；另取蔗糖300g、蜂蜜100g，加适量水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加适量防腐剂，搅匀，滤过，加水使成1000ml，分装，即得。

【功能主治】补气养血。用于妇女体弱血虚，月经不调，经期腹痛。

【用法用量】口服，一次10毫升，一日2次。

实施例2.

乌鸡   108.8g   艾叶   18.8g   益母草     9.8g

柴胡   9.8g     干姜   4.5g    何首乌     9.8g

玄参   9.8g     枳实   75g     乳香       4.5g

知母   9.8g     茯苓   12g     黄连(酒制) 4.5g

秦艽   6.8g     党参   9.8g    青蒿       18.8g

熟地黄 18.8g    川贝母 9.8g    地骨皮     4.5g

以上十八味，乌鸡切块后加水，加压煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，浓缩至适量，加入适量防腐剂，备用；其余十七味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入等量乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，回收乙醇后备用；另取蔗糖300g、蜂蜜100g，加适量水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加适量防腐剂，搅匀，滤过，加水使成1000ml，分装，即得。

实施例3

乌鸡   108.8g      艾叶   18.8g    丹参         9.8g

柴胡   9.8g        干姜   4.5g     何首乌       9.8g

牡丹皮 9.8g        郁金   75g      延胡索(醋制) 4.5g

知母   9.8g        茯苓   12g      黄连(酒制)   4.5g

秦艽   6.8g        当归   9.8g     黄芪(炙)     9.8g

青蒿   18.8g       地黄   9.8g     熟地黄       18.8g

川贝母 9.8g        地骨皮 4.5g

以上二十味，乌鸡切块后加水，加压煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，浓缩至适量，加入适量防腐剂，备用；香附等十九味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入等量乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，回收乙醇后备用；另取蔗糖300g、蜂蜜100g，加适量水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加适量防腐剂，搅匀，滤过，加水使成1000ml，分装，即得。

实施例4

乌鸡   108.8g  艾叶   18.8g    红花       9.8g

柴胡   9.8g    干姜   4.5g     白芍(酒炒) 9.8g

牡丹皮 9.8g    木香   75g      姜黄       4.5g

知母   9.8g    茯苓   12g      黄连(酒制) 4.5g

秦艽   6.8g    当归   9.8g     白术       9.8g

青蒿   18.8g   熟地黄 18.8g    玄参       9.8g

川贝母 9.8g    地骨皮 4.5g

以上二十味，乌鸡切块后加水，加压煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，浓缩至适量，加入适量防腐剂，备用；香附等十九味加水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入等量乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，回收乙醇后备用；另取蔗糖300g、蜂蜜100g，加适量水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加适量防腐剂，搅匀，滤过，加水使成1000ml，分装，即得。

实施例5-14

按照实施例1相同的方法和药材比例，中试生产10批本发明中药组合物。

实施例15.本发明的质量控制方法：

(1)取本发明口服液50ml，用水饱和的正丁醇-无水乙醇(4∶1)振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨洗液，再用水洗涤2次，每次50ml，弃去水洗液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加于已处理好的中性氧化铝柱(8g，内径2cm)上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本发明口服液50ml，用氨试液调至碱性(pH10)，用乙醚-无水乙醇(4∶1)振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，照供试品溶液制备方法操作，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇(15∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(3)取本发明口服液40ml，用乙醚萃取3次，每次40ml，合并醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml作为供试品溶液。另取香附对照药材5g，加水200ml煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30ml，放冷后用乙醚50ml萃取，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(5∶5∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验  以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶0.2)为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备  取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含50μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备  精密量取本发明口服液2ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，即得。

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1ml含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于0.2mg。

本发明实施例5-14所制得的中药组合物进行了上述质量控制，证明实施例5-14所制得的口服液完全符合本发明的质量控制标准。

表16实施例5-14所得样品的芍药苷含量测定结果

另外，也以处方原料药的比例和制备工艺分别制成了不含黄连、香附和延胡所的阴性样品，按照质量控制方法中供试样品的制备方法制备了阴性对照溶液，按照相应样品的检测方法检测，阴性样品在相应位置上未出现斑点，经反复试验，该质量控制方法专属性、重复性好，因此做为本发明中药组合物质量控制定性检测方法，本发明中药组合物进行质量控制。

Claims (6)

1.一种补气养血的中药组合物，其特征在于该中药组合物是由下述重量份的原料药制成的：

乌鸡108.8重量份  艾叶18.8重量份  益母草9.8重量份

柴胡9.8重量份    干姜4.5重量份   何首乌9.8重量份

玄参9.8重量份    枳实75重量份    乳香4.5重量份

知母9.8重量份    茯苓12重量份    黄连(酒制)4.5重量份

秦艽6.8重量份    党参9.8重量份   青蒿18.8重量份

熟地黄18.8重量份 川贝母9.8重量份 地骨皮4.5重量份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于所述的益母草还可以是等重量份的丹参、红花、牛膝、桃仁中的一种或几种；所述的何首乌还可以是等重量份的当归、白芍、阿胶中的一种或几种；所述的玄参还可以是等重量份的生地黄、牡丹皮、水牛角中的一种或几种；所述的枳实还可以是等重量份的香附、青皮、枳实、木香、沉香中的一种或几种；所述的乳香还可以是等重量份的延胡索、郁金、姜黄、没药中的一种或几种；所述的党参还可以是等重量份的黄芪、白术、山药中的一种或几种。

3.如权利要求2所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的制备方法为：

以上药味，乌鸡切块后加水，加压煎煮三次，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，浓缩至适量，加入适量防腐剂，备用；其余药味加水煎煮二次，合并煎液，滤过，滤液浓缩至适量，加入等量乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，回收乙醇后备用；另取蔗糖、蜂蜜，加水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加入防腐剂，搅匀，滤过，加水稀释，分装，即得。

4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物的制备方法为：

以上药味，乌鸡切块后，每次加8倍量水，在压力为0.05Mpa的条件下加压煎煮三次，每次1小时，合并煎煮液，静置，除去上层脂肪油，取上清液，在70℃、-0.06Mpa条件下减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，加入0.2％的防腐剂，备用；其余药味加水提取两次，第一次2小时，加水量为8倍，第二次2小时，加水量为6倍，合并煎液，滤过，70℃、-0.06Mpa条件下减压浓缩至相对密度为1.10~1.15，加入等量95％乙醇，搅匀，静置过夜，取上清液，在65℃、-0.07Mpa条件下回收乙醇后备用；另取蔗糖300重量份、蜂蜜100重量份，加500体积份水，煮沸使溶解，加入上述药液及乌鸡提取液，混匀，加入防腐剂1.67重量份，搅匀，滤过，加水稀释至1000体积份，分装，即得。

5.如权利要求2所述的中药组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列a、b、c、d四种检测中的至少一种检测：

a.盐酸小檗碱的定性检测：

取本品，用水饱和的正丁醇-无水乙醇混合液，振摇提取，合并提取液，用氨试液洗涤提取液，弃去氨洗液，再用水洗涤，弃去水洗液，提取液蒸干，残渣加甲醇使溶解，加于中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

另取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成对照品溶液；

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液，分别点于同一硅胶重量份薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置波长365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b.延胡索的定性检测：

取本品，用氨试液调至碱性，用乙醚-无水乙醇振摇提取，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为供试品溶液；

另取延胡索对照药材，加甲醇，超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加水使溶解，照供试品溶液制备方法操作，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶重量份薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置波长365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.香附的定性检测：

取本品，用乙醚萃取，合并醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯作为供试品溶液；

另取香附对照药材，加水煎煮，滤过，滤液浓缩，放冷后用乙醚萃取，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为对照药材溶液；

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶重量份F254薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置波长254nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.芍药苷的定量检测：

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成溶液，即得；

精密量取本品，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。

6.如权利要求5所述的中药组合物的质量控制方法，其特征在于该方法包括下列a、b、c、d四种检测中的至少一种检测：

a.盐酸小檗碱的定性检测：

取本品50ml，用4∶1比例的水饱和的正丁醇-无水乙醇振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨洗液，再用水洗涤2次，每次50ml，弃去水洗液，提取液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，加于用8重量份中性氧化铝处理好的内径2cm的色谱柱上，用甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.2m重量份的溶液，作为对照品溶液；

照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，分别点于同一硅胶重量份薄层板上，以6∶3∶1.5∶1.5∶0.3比例的环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水为展开剂，置氨蒸气饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置波长为365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

b.延胡索的定性检测：

取本品50ml，用氨试液调至pH10，用4∶1比例的乙醚-无水乙醇振摇提取3次，每次50ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

另取延胡索对照药材1重量份，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水50ml使溶解，照供试品溶液制备方法操作，残渣加甲醇5ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶重量份薄层板上，以15∶4∶1比例的正己烷-氯仿-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气中熏后，置波长为365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

c.香附的定性检测：

取本品40ml，用乙醚萃取3次，每次40ml，合并醚层，挥干，残渣加乙酸乙酯2ml作为供试品溶液；

另取香附对照药材5重量份，加水200ml煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至30ml，放冷后用乙醚50ml萃取，乙醚液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为对照药材溶液；

照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶重量份F254薄层板上，以5∶5∶0.2比例的三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置波长为254nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

d.芍药苷的定量检测：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以25∶75∶0.2比例的甲醇-水-冰醋酸为流动相；检测波长为230nm；理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000；

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml约含50μ重量份的溶液，即得；

精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，取上清液，即得；

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5ul，10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本品每1ml含白芍以芍药苷(C₂₃H₂₈O₁₁)计，不得少于0.2mg。