CN104991022A - 康肾口服液质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种康肾口服液质量控制方法,包括黄芩鉴别方法、淫羊藿鉴别方法、甘草鉴别方法和人参皂苷含量测定方法。本发明的康肾口服液质量控制方法,提供了鉴别药物中黄芪、淫羊藿和甘草的方法,并提供了高效液相色谱法测定药物中,人参皂苷Rg1、Re成分的含量,该质量控制方法能更好地控制药品的质量,具有较强的专属性和良好的重现性,真正体现药品安全有效、质量可控。
Description
技术领域
本发明属于药物质量控制领域,具体涉及一种康肾口服液的质量控制方法。
背景技术
慢性肾炎(CGN)在我国的发生率有增高的趋势,故早期防治慢性肾炎并延缓其发展为慢性肾衰竭日益受到人们的重视。肾脏病多数属“水肿、腰痛”等病范畴。病因多端,是由于风邪外袭,或饮食所伤,或劳逸失衡,久居湿地等所致。不论外感或内伤,均为肺脾肾三脏水液代谢失常所致,尤以脾肾所伤为主,治疗宜益气温阳,固本涩精,活血通络。
慢性肾小球肾炎是以血尿、蛋白尿、高血压和水肿为主要临床表现的一组原发性肾小球疾病,简称慢性肾炎,其病程长,病情迁延不愈,病理改变各种各样,可有肾功能进行性减退,严重者可能出现尿毒症,预后差异很大,是我国终末期肾病的首位病因,目前尚无特殊有效的治疗方法。慢性肾炎的病因和发病机制复杂,有很多因素参与,如感染、自身免疫、药物、遗传、环境等,其中免疫损伤是多数慢性肾炎发生过程中的共同环节,几乎所有慢性肾炎的发病进程都有免疫学机制的参与。中医学将慢性肾炎归属于“水肿、腰痛、尿血和虚劳”范畴,其病变涉及肺脾肾三脏,重在脾肾,其病理机制为病延日久,脾肾虚损,兼夹淤血。盖脾虚则生化乏源,统摄无权,肾虚则封藏失职,下之失其固摄而蛋白之外精徽外泄于尿,如此反复不已,终成顽疾。
康肾口服液方中以人参、黄芪为君药,两药为辛、温之品,入脾肾二经,补肾健脾,固本涩精;怀山药、白术等健脾生精化源为臣药,重在补后天之本,以助先天之本;淫羊藿、芡实、金樱子温阳固本升清,涩精,以不致精微外泄;地龙、红花化瘀血通经络,共为佐药,使脾肾之络气通畅,又能升轻而降浊;甘草调和诸药,又能缓和诸药阳热过甚,兼有气血双补之功;以上诸药密切配合,重点旨在补肾健脾,兼而活血,使正气自复,淤血自除,肾病得愈。现代药理研究表明:生黄芪、人参等有增强人体免疫功能,抑制过度自身免疫,清除免疫复合物的作用;而红花、地龙等又有抗凝血、抗血小板聚集及抗血栓形成的功能;黄芪、白术等还有利尿消肿的功效;甘草有类糖皮质激素样作用,具备抗炎、抗免疫和组织修复等多重功效。
为保证制剂的稳定性及疗效,对康肾口服液制定了全面的质量标准,人参皂苷Rg1、Re为本品中的有效成分,以高效液相色谱精密定量测定制剂中人参皂苷Rg1、Re的含量,以薄层色谱分别对人参、黄芪、淫羊藿、甘草定性鉴别。对制剂进行了长期稳定性试验,结果表明在24个月内制剂的质量无明显的变化,为制定制剂的有效期提供了有力的证据。
发明内容
本发明的目的之一是为提供一种康肾口服液的质量控制方法,该方法能够快速、准确的鉴别康肾口服液中的黄芪、淫羊藿、甘草,并通过高效液相色谱法测定康肾口服液中人参皂苷Rg1、Re的含量。
本发明提供一种康肾口服液质量控制方法,包括黄芩鉴别方法、淫羊藿鉴别方法、甘草鉴别方法和人参皂苷含量测定方法。
进一步的,所述人参皂苷含量测定方法为采用高效液相色谱法测定:
色谱条件与系统适用性试验,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比20:80的乙腈-0.05%磷酸为流动相,流速为1.0ml/min,柱温为30℃,检测波长为203nm,理论板数按人参皂苷Rg1计算应≥3000;
对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Re对照品,加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg10.5mg、含人参皂苷Re 0.4mg的混合对照品溶液;
供试品溶液的制备,精密量取康肾口服液20ml,置分液漏斗中,加乙醚振摇提取3次,每次15ml,弃去乙醚液,水液加水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次20ml,合并正丁醇液,加氨试液20ml洗涤两次,弃去氨液,正丁醇液用正丁醇饱和水洗涤3次,弃去水层,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得;
测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算即得,本品每毫升含人参以人参皂苷Rg1和Re的总量合计,不得少于0.20mg。
进一步的,所述黄芩鉴别方法为薄层色谱法:取康肾口服液5ml,水饱和正丁醇提取3次,每次20ml,合并提取液,氨试液洗涤2次,每次30ml,合并氨试液洗涤液,用20ml水饱和正丁醇提取一次,合并正丁醇提取液,蒸干,用10ml甲醇溶解残渣,移至25ml容量瓶中,甲醇稀释至刻度,作为供试品溶液;
另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
另取不含黄芪的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;
观察硅胶G薄层板,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,在日光下应显相同的棕褐色斑点,阴性对照样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,应未见对应的斑点。
进一步的,所述淫羊藿鉴别方法为薄层色谱法:取康肾口服液10ml,加乙醚10ml振摇提取,弃去乙醚液,水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
另取不含淫羊藿的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水于10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出晾干,喷以三氯化铝试液,105℃加热2分钟,置紫外灯365nm下检视;
观察硅胶G薄层板,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,应显相同颜色的荧光斑点,阴性对照样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,应未见对应的斑点。
进一步的,所述甘草鉴别方法为薄层色谱法:取康肾口服液20ml,乙醚提取2次,每次30ml,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取甘草酸铵对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;
另取不含甘草的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;
观察硅胶G薄层板,置紫外灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,应显相同颜色的荧光斑点,阴性对照样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,应未见对应的斑点。
本发明的有益效果在于:本发明的康肾口服液质量控制方法,提供了鉴别药物中黄芪、淫羊藿和甘草的方法,并提供了高效液相色谱法测定药物中,人参皂苷Rg1、Re成分的含量,该质量控制方法能更好地控制药品的质量,具有较强的专属性和良好的重现性,真正体现药品安全有效、质量可控。
附图说明
图1所示为本发明康肾口服液质量控制方法的黄芪鉴别薄层色谱图;
图2所示为本发明康肾口服液质量控制方法的淫羊藿鉴别薄层色谱图(紫外灯365nm);
图3所示为本发明康肾口服液质量控制方法的甘草鉴别薄层色谱图(紫外灯365nm);
图4所示为本发明康肾口服液质量控制方法的人参皂苷Rg1和Re含量测定对照品高效液相色谱图;
图5所示为本发明康肾口服液质量控制方法的人参皂苷Rg1和Re含量测定供试品高效液相色谱图。
具体实施方式
下文将结合具体附图详细描述本发明具体实施例。应当注意的是,下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的,它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。
本发明的康肾口服液质量控制方法,包括黄芩鉴别方法、淫羊藿鉴别方法、甘草鉴别方法和人参皂苷含量测定方法。
实施例1,黄芪的鉴别
取康肾口服液5ml,水饱和正丁醇提取3次,每次20ml,合并提取液,氨试液洗涤2次,每次30ml,合并氨试液洗涤液,用20ml水饱和正丁醇提取一次,合并正丁醇提取液,蒸干,用10ml甲醇溶解残渣,移至25ml容量瓶中,甲醇稀释至刻度,作为供试品溶液;
另取不含黄芪的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;
结果如图1本发明康肾口服液质量控制方法的黄芪鉴别薄层色谱图所示,图中1为黄芩甲苷对照品,2-4为供试品,5为阴性对照样品。图中供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,在日光下显相同的棕褐色斑点。阴性对照样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,未见对应的斑点。表明肾康口服液中含有黄芪。
实施例2,淫羊藿的鉴别
取康肾口服液10ml,加乙醚10ml振摇提取,弃去乙醚液,水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取不含淫羊藿的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水于10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出晾干,喷以三氯化铝试液,105℃加热2分钟,置紫外灯365nm下检视;
结果如图2本发明康肾口服液质量控制方法的淫羊藿鉴别薄层色谱图(紫外灯365nm)所示,图中1为淫羊藿苷对照品,2-4为供试品,5为阴性对照样品。图中供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,未见对应的斑点。表明肾康口服液中含有淫羊藿。
实施例3,甘草的鉴别
取康肾口服液20ml,乙醚提取2次,每次30ml,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取不含甘草的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
另取甘草酸铵对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;
结果如图3本发明康肾口服液质量控制方法的甘草鉴别薄层色谱图(紫外灯365nm)所示,图中1为甘草酸铵对照品,2-4为供试品,5为阴性对照样品。图中供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。阴性对照样品色谱中,在与对照品色谱相应位置上,未见对应的斑点。表明肾康口服液中含有甘草。
实施例4,人参皂苷Rg1和Re的含量测定
4.1含量测定的方法
本法采用高效液相色法对方中人参以人参皂苷Rg1和Re为指标进行含量。
色谱条件与系统适用性试验:色谱柱为Diamonsil C18(4.6×150mm,5μm),用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,流动相为乙腈-0.05%磷酸=20/80;流速为1.0ml/min;柱温为30℃;检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1计算应不低于3000。
对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷Rg1、Re对照品适量,加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg10.5mg、含人参皂苷Re 0.4mg的混合对照品溶液。
供试品溶液的制备:精密量取康肾口服液20ml,置分液漏斗中,加乙醚振摇提取3次,每次15ml,弃去乙醚液,水液加水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次20ml,合并正丁醇液,加氨试液20ml洗涤两次,弃去氨液,正丁醇液用正丁醇饱和水洗涤3次,弃去水层,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算即得。本品每ml含人参以人参皂苷Rg1和Re的总量合计,不得少于0.20mg。
测定结果如图4本发明康肾口服液质量控制方法的人参皂苷Rg1和Re含量测定对照品高效液相色谱图和图5为本发明康肾口服液质量控制方法的人参皂苷Rg1和Re含量测定供试品高效液相色谱图所示。
4.2含量测定的方法学研究
4.2.1系统适用性试验
取处方中除去人参的其他药材,按确定的生产工艺制备阴性样品,取缺人参的阴性样品按供试品溶液制备工艺制成阴性供试品溶液。在上述色谱条件下,分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各进样10μl,记录色谱图,结果:样品中人参皂苷Rg1峰的理论塔板数:n=6525(﹥3000);主峰与杂质峰的分离度为远大于1.5;人参皂苷Rg1、Re的保留时间分别为36.8min、39.6min;表明辅料及各种分解产物对主峰干扰较小,符合系统适用性试验的要求。
4.2.2线性关系试验
分别精密称取人参皂苷Rg1、Re对照品适量,加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg10.5mg、含人参皂苷Re0.4mg的混合对照品母液。
精密量取上述1、3、5、7、9ml对照品溶液置10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成不同浓度的对照品溶液,精密量取各10μl,分别注入液相色谱仪,测定峰面积,以人参皂苷Rg1对照品溶液的浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,得回归方程为y=3761.5089x+2.9893,r=0.9990;以人参皂苷Re对照品溶液的浓度为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,得回归方程为y=2972.4048x-1.182,r=0.9992。结果:人参皂苷Rg1在0.05~0.45mg/ml范围内线性良好;人参皂苷Re在0.04~0.36mg/ml范围内线性良好。
4.2.3精密度试验
精密吸取同一混合对照品溶液10μl,重复进样5次。试验结果表明:两个成分峰面积的相对标准差RSD<2%,说明该方法精密度良好。
精密度试验结果
4.2.4稳定性试验
取康肾口服液1瓶,按含量测定项下方法制备样品,得样品供试品溶液;取供试品溶液与对照品溶液,于0h、1h、2h、4h、8h及24h分别进样,每次进样量10μl,记录峰面积值。试验结果表明,对照品及样品供试液在24h内稳定性良好。
稳定性试验结果
4.2.5重复性试验
取康肾口服液6瓶,分别按含量测定项下方法测定,计算含量。结果表明,样品平均含量为0.36mg/ml,RSD<2%,所考察方法重复性良好。
本发明的康肾口服液质量控制方法,提供了鉴别药物中黄芪、淫羊藿和甘草的方法,并提供了高效液相色谱法测定药物中,人参皂苷Rg1、Re成分的含量,该质量控制方法能更好地控制药品的质量,具有较强的专属性和良好的重现性,真正体现药品安全有效、质量可控。
本文虽然已经给出了本发明的一些实施例,但是本领域的技术人员应当理解,在不脱离本发明精神的情况下,可以对本文的实施例进行改变。上述实施例只是示例性的,不应以本文的实施例作为本发明权利范围的限定。
Claims (4)
1.康肾口服液质量控制方法,其特征在于,包括黄芩鉴别方法、淫羊藿鉴别方法、甘草鉴别方法和人参皂苷含量测定方法;
所述人参皂苷含量测定方法为采用高效液相色谱法测定:
色谱条件与系统适用性试验,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以体积比20:80的乙腈-0.05%磷酸为流动相,流速为1.0ml/min,柱温为30℃,检测波长为203nm,理论板数按人参皂苷Rg1计算≥3000;
对照品溶液的制备,精密称取人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Re对照品,加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1 0.5mg、含人参皂苷Re 0.4mg的混合对照品溶液;
供试品溶液的制备,精密量取康肾口服液20ml,置分液漏斗中,加乙醚振摇提取3次,每次15ml,弃去乙醚液,水液加水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次20ml,合并正丁醇液,加氨试液20ml洗涤两次,弃去氨液,正丁醇液用正丁醇饱和水洗涤3次,弃去水层,正丁醇层蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,即得;
测定方法:分别精密吸取所述对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,计算即得,本品每毫升含人参以人参皂苷Rg1和Re的总量合计,不得少于0.20mg。
2.如权利要求1所述的康肾口服液质量控制方法,其特征在于,所述黄芩鉴别方法为薄层色谱法:取康肾口服液5ml,水饱和正丁醇提取3次,每次20ml,合并提取液,氨试液洗涤2次,每次30ml,合并氨试液洗涤液,用20ml水饱和正丁醇提取一次,合并正丁醇提取液,蒸干,用10ml甲醇溶解残渣,移至25ml容量瓶中,甲醇稀释至刻度,作为供试品溶液;
另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
另取不含黄芪的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;
观察硅胶G薄层板,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,在日光下应显相同的棕褐色斑点。
3.如权利要求1所述的康肾口服液质量控制方法,其特征在于,所述淫羊藿鉴别方法为薄层色谱法:取康肾口服液10ml,加乙醚10ml振摇提取,弃去乙醚液,水层用水饱和的正丁醇振摇提取2次,每次10ml,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
另取不含淫羊藿的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为13:7:2的三氯甲烷-甲醇-水于10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出晾干,喷以三氯化铝试液,105℃加热2分钟,置紫外灯365nm下检视;
观察硅胶G薄层板,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
4.如权利要求1所述的康肾口服液质量控制方法,其特征在于,所述甘草鉴别方法为薄层色谱法:取康肾口服液20ml,乙醚提取2次,每次30ml,弃去乙醚液,水液用乙酸乙酯提取2次,每次30ml,合并乙酸乙酯液,蒸干,残渣加甲醇1ml溶解,作为供试品溶液;
另取甘草酸铵对照品,加甲醇制成每1ml含2mg的溶液,作为对照品溶液;
另取不含甘草的阴性对照样品,同法制备阴性对照样品溶液;
照薄层色谱法试验,吸取上述三种溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为15:1:1:2的乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水为展开剂,展开,取出晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;
观察硅胶G薄层板,置紫外灯365nm下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
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