CN110187046A - 生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物有效成分技术领域，具体涉及是一种生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，包括枸杞子薄层鉴别测定方法、柚皮苷薄层鉴别测定方法和淫羊藿苷薄层鉴别测定方法。通过针对生精片中各药物成分的特性，再基于枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴定特定，提供相适应的提取制备工艺，从而能够从生精片的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分完成薄层鉴别测定。解决了生精片中各成分重量较多，且柚皮苷含有挥发油，枸杞子显色困难，样品处理脱色困难，淫羊藿苷存在样品处理提取脱脂困难，因此现有常规的薄层鉴别测定法较难从生精片中提取待测定药物的问题。

Description

生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法

技术领域

本发明涉及药物有效成分技术领域，具体涉及是生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法。

背景技术

生精片为一种常见中成药，其中含有鹿茸、枸杞子、人参、冬虫夏草、菟丝子、沙苑子、淫羊藿、黄精、何首乌、桑椹、补骨脂、骨碎补、仙茅、金樱子、覆盆子、杜仲、大血藤、马鞭草、银杏叶等。具有补肾益精，滋阴壮阳。用于肾阳不足所致腰膝酸软，头晕耳鸣，神疲乏力，男子无精、少精、弱精、精液不液化等症。

由于生精片处方比较复杂，原药材19味，辅料4个，为膏、体混合压片。需要薄层鉴别样品提取较为困难，在药物有效成分分析时需要对其中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷通过薄层鉴别测定法进行鉴定，但是由于生精片中各成分重量较多，且柚皮苷含有挥发油，枸杞子显色困难，样品处理脱色困难，淫羊藿苷存在样品处理提取脱脂困难，因此现有常规的薄层鉴别测定法较难从生精片中提取待测定药物。

发明内容

本发明针对生精片中各成分重量较多，且柚皮苷含有挥发油，枸杞子显色困难，样品处理脱色困难，淫羊藿苷存在样品处理提取脱脂困难，因此现有常规的薄层鉴别测定法较难从生精片中提取待测定药物的问题，提供一种生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法。

本发明解决上述技术问题，采用的技术方案是，一种生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，包括枸杞子薄层鉴别测定方法、柚皮苷薄层鉴别测定方法和淫羊藿苷薄层鉴别测定方法。

进一步的，枸杞子薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取枸杞子，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液过滤，滤液即为对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，将其研细，加水煮沸后，静置至室温，通过离心机进行离心，制得离心液；

S2，取离心液的上清液，通过提取试剂进行提取，浓缩，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并放置入熏蒸室进行熏蒸；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

进一步的，枸杞子薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇；

枸杞子薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S2中提取试剂为乙醚和乙酸乙酯；

枸杞子薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1中展开剂为按照体积比为10:0.2的三氯甲烷和甲醇的混合溶剂，S2中熏蒸室内为氨蒸汽。

可选的，枸杞子薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中枸杞子取1g，添加提取试剂为10mL，S2中先将提取后溶液在50℃水浴中浸泡30分钟后过滤；

枸杞子薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中生精片取4.7g，加水35ml，加热煮沸15min，放冷，通过离心机离心10min，S2取得离心液的上清液后，用乙醚15mL提取一次，乙醚液弃去得水液，水液用乙酸乙酯提取两次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，制得测定组试剂；

枸杞子薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1取对照组试剂和测定组试剂各5μL。

进一步的，柚皮苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取柚皮苷，添加溶剂试剂，制得对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，除去薄膜衣，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水进行溶解，并通过提取试剂进行提取，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以显影试剂；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

可选的，柚皮苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇；

柚皮苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇，S3中提取试剂为乙醚、乙酸乙酯和甲醇；

柚皮苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1展开剂为按照体积比为1:12:2.5:3的甲苯、乙酸乙酯、甲酸和水的混合溶剂，S2显影试剂为三氯化铝溶液。

可选的，柚皮苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中柚皮苷取1mg，添加提取试剂为1mL；

柚皮苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中生精片取4.7g，添加提取试剂为30mL，S2中超声波处理20min，S3中在测定组残渣加水20mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，乙醚液弃去制得水液，在水液加乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，加5％碳酸氢钠20mL洗涤1次，乙酸乙酯液水浴蒸干，制得二次残渣，二次残渣加甲醇1mL使其溶解，制得测定组试剂；

柚皮苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1取对照组试剂和测定组试剂各5μL。

进一步的，淫羊藿苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取淫羊藿苷，添加溶剂试剂，制得对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，除去薄膜衣，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水进行溶解，并通过提取试剂进行提取，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以显影试剂；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

可选的，对照组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇；测定组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇，S3中提取试剂为乙醚、乙酸乙酯和甲醇；薄层鉴别测定步骤中，S1展开剂为在10℃的环境下按照体积比为1.3:1:1的乙酸丁酯、甲酸和水的混合溶剂，S2显影试剂为三氯化铝溶液。

可选的，淫羊藿苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中淫羊藿苷取1mg，添加提取试剂为1mL；

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中生精片取4.7g，添加提取试剂为30mL，S2中超声波处理20min，S3中在测定组残渣加水20mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，乙醚液弃去制得水液，在水液加乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，加5％碳酸氢钠20mL洗涤1次，乙酸乙酯液水浴蒸干，制得二次残渣，二次残渣加甲醇1mL使其溶解，制得测定组试剂；

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1取对照组试剂和测定组试剂各5μL。

本发明的有益效果至少包括以下之一；

1、通过针对生精片中各药物成分的特性，再基于枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴定特点，提供相适应的提取制备工艺和所需的制剂，从而能够从生精片的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分完成薄层鉴别测定。

2、解决了生精片中各成分重量较多，且柚皮苷含有挥发油，枸杞子显色困难，样品处理脱色困难，淫羊藿苷存在样品处理提取脱脂困难，因此现有常规的薄层鉴别测定法较难从生精片中提取待测定药物的问题。

附图说明

图1为枸杞子专属性展开测定图；

图2为枸杞子耐用性紫外光灯(365nm)下硅胶G板展开测定图；

图3为淫羊藿苷专属性展开测定图；

图4为淫羊藿苷耐用性紫外光灯(365nm)下硅胶G板展开测定图；

图5为柚皮苷专属性展开测定图；

图6为柚皮苷耐用性紫外光灯(365nm)下硅胶G板展开测定图；

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点能够更加清晰明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明保护内容。

实施例1

生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其中包括枸杞子薄层鉴别测定方法、柚皮苷薄层鉴别测定方法和淫羊藿苷薄层鉴别测定方法。枸杞子薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取枸杞子，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液过滤，滤液即为对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，将其研细，加水煮沸后，静置至室温，通过离心机进行离心，制得离心液；

S2，取离心液的上清液，通过提取试剂进行提取，浓缩，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并放置入熏蒸室进行熏蒸；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

柚皮苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取柚皮苷，添加溶剂试剂，制得对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，除去薄膜衣，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水进行溶解，并通过提取试剂进行提取，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以显影试剂；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的

位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取淫羊藿苷，添加溶剂试剂，制得对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，除去薄膜衣，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水进行溶解，并通过提取试剂进行提取，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以显影试剂；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

通过针对生精片中各药物成分的特性，再基于枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴定特定，提供相适应的提取制备工艺，从而能够从生精片的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分完成薄层鉴别测定。解决了生精片中各成分重量较多，且柚皮苷含有挥发油，枸杞子显色困难，样品处理脱色困难，淫羊藿苷存在样品处理提取脱脂困难，因此现有常规的薄层鉴别测定法较难从生精片中提取待测定药物的问题。

实施例2

生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其中包括枸杞子薄层鉴别测定方法、柚皮苷薄层鉴别测定方法和淫羊藿苷薄层鉴别测定方法。枸杞子薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取枸杞子1g，将其研细，添加10mL甲醇，进行提取；

S2，将S1提取后先溶液在50℃水浴中浸泡30分钟后过滤，滤液即为对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片4.7g，将其研细，加水35mL，煮沸15min后静置至室温，通过离心机(5000Rad/min)进行离心10分钟，制得离心液；

S2，取离心液的上清液，用乙醚15mL提取一次，乙醚液弃去，水液用乙酸乙酯提取两次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过按照体积比为10:0.2的三氯甲烷和甲醇的混合溶剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并放置入含有氨蒸汽的熏蒸室进行熏蒸30min；

S3，在紫外光灯(365nm)下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

柚皮苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取柚皮苷1mg，添加甲醇1ml使其溶解，制得对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片4.7g，除去薄膜衣，将其研细，添加30mL甲醇，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理20min，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水20mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，乙醚液弃去，水液加乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，加5％碳酸氢钠20mL洗涤1次，乙酸乙酯液水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过按照体积比为1:12:2.5:3的甲苯、乙酸乙酯、甲酸和水的混合溶剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以三氯化铝溶液；

S3，在紫外光灯(365nm)下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取淫羊藿苷1mg，添加甲醇1ml使其溶解，制得对照组试剂；

测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片4.7g，除去薄膜衣，将其研细，添加30mL甲醇，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理20min，并过滤，蒸干，制得测定组

残渣；

S3，将测定组残渣加水20mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，乙醚液弃去，水液加乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，加5％碳酸氢钠20mL洗涤1次，乙酸乙酯液水浴蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，制得测定组试剂；

薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂各5μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过按照体积比为1.3:1:1的乙酸丁酯、甲酸和水的混合溶剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以三氯化铝溶液；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

通过针对生精片中各药物成分的特性，再基于枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴定特定，提供相适应的提取制备工艺，从而能够从生精片的诸多有效药物成分中分离提取待测定成分完成薄层鉴别测定。解决了生精片中各成分重量较多，且柚皮苷含有挥发油，枸杞子显色困难，样品处理脱色困难，淫羊藿苷存在样品处理提取脱脂困难，因此现有常规的薄层鉴别测定法较难从生精片中提取待测定药物的问题。

实施例3

为了确保本发明的效果，申请人对制剂中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的鉴别方法进行了相应的试验研究与论证，具体如下：

枸杞子薄层鉴别测定方法

(1)试剂与试药

生精片由贵州联盛药业有限公司提供；枸杞子对照药材由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板，试剂：甲醇、乙醚和乙酸乙酯为分析纯。

三批样品含量测定结果

(2)专属性

取生精片、缺枸杞子阴性样品，同实施例2方法制得测定组试剂和对照组试剂，再通过现有技术制备阴性测定组试剂(不含待检测成分试剂)，分别取测定组试剂、阴性测定组试剂、对照组试剂点样、展开、显色，日光下检视，在测定组试剂色谱中，与对照组试剂色谱相应的位置上显相同的主斑点，斑点分离较好，且阴性无干扰。

(3)耐用性

取通过上述3批样品制得测定组试剂、阴性测定组试剂和对照组试剂分别点于硅胶G预制板，展开、显色后，结果斑点分离好，无干扰。

按照实施例2中提供的技术方案测定后得以下内容：

图1中载体为硅胶G板，展开剂为按照体积比为10:0.2的三氯甲烷和甲醇的混合溶剂，显色为氨蒸汽，紫外灯光(365nm)下检视。

从左至右依次为1、2、3、4、5，其中标号1对应140110批号样品测定组试剂，2对应170202批号样品测定组试剂，3对应170303批号样品测定组试剂，4对应阴性样品，5对应枸杞子对照组试剂。

图2中载体为硅胶G板，展开剂为按照体积比为10:0.2的三氯甲烷和甲醇的混合溶剂，显色为氨蒸汽，紫外灯光(365nm)下检视。

从左至右依次为1、2、3、4、5，其中标号1对应140110批号样品测定组试剂，2对应170202批号样品测定组试剂，3对应170303批号样品测定组试剂，4对应阴性样品，5对应枸杞子对照组试剂。

柚皮苷薄层鉴别测定方法

(1)试剂与试药

生精片由贵州联盛药业有限公司提供；柚皮苷对照药材由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板；试剂：甲醇、乙醚、甲苯、甲酸和乙酸乙酯为分析纯。

三批样品含量测定结果

(2)专属性

取生精片、缺柚皮苷阴性样品，同实施例2方法制得测定组试剂和对照组试剂，再通过现有技术制备阴性测定组试剂(不含待检测成分试剂)，分别取测定组试剂、阴性测定组试剂、对照组试剂点样、展开、显色，日光下检视，在测定组试剂色谱中，与对照组试剂色谱相应的位置上显相同的主斑点，斑点分离较好，且阴性无干扰。

(3)耐用性

取通过上述3批样品制得测定组试剂、阴性测定组试剂和对照组试剂分别点于硅胶G预制板，展开、显色后，结果斑点分离好，无干扰。

按照实施例2中提供的技术方案测定后得以下内容：

图5中载体为硅胶G板，展开剂均为按照体积比为1:12:2.5:3的甲苯、乙酸乙酯、甲酸和水的混合溶剂，显色为喷以三氯化铝，紫外灯光(365nm)下检视。

从左至右依次为1、2、3、4、5，其中标号1对应140110批号样品测定组试剂，2对应170202批号样品测定组试剂，3对应170303批号样品测定组试剂，4对应阴性样品，5对应枸杞子对照组试剂。

图6中载体为硅胶G板，展开剂均为按照体积比为1:12:2.5:3的甲苯、乙酸乙酯、甲酸和水的混合溶剂，显色为喷以三氯化铝，紫外灯光(365nm)下检视。

从左至右依次为1、2、3、4、5，其中标号1对应140110批号样品测定组试剂，2对应170202批号样品测定组试剂，3对应170303批号样品测定组试剂，4对应阴性样品，5对应枸杞子对照组试剂。

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法

(1)试剂与试药

生精片由贵州联盛药业有限公司提供；淫羊藿苷由中国药品生物制品检定所提供；硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂生产的硅胶G薄层板及自制硅胶G薄层板；试剂：甲醇、乙酸乙酯、甲酸和乙酸丁酯均为分析纯。

三批样品含量测定结果

(2)专属性

取生精片、缺淫羊藿苷阴性样品，同实施例2方法制得测定组试剂和对照组试剂，再通过现有技术制备阴性测定组试剂(不含待检测成分试剂)，分别取测定组试剂、阴性测定组试剂、对照组试剂点样、展开、显色，日光下检视，在测定组试剂色谱中，与对照组试剂色谱相应的位置上显相同的主斑点，斑点分离较好，且阴性无干扰。

(3)耐用性

取通过上述3批样品制得测定组试剂、阴性测定组试剂和对照组试剂分别点于硅胶G预制板，展开、显色后，结果斑点分离好，无干扰。

按照实施例2中提供的技术方案测定后得以下内容：

图3中载体为硅胶G板，展开剂均为在10℃的环境下按照体积比为1.3:1:1的乙酸丁酯、甲酸和水的混合溶剂，显色为喷以三氯化铝溶液，紫外灯光(365nm)下检视。

从左至右依次为1、2、3、4、5，其中标号1对应140110批号样品测定组试剂，2对应170202批号样品测定组试剂，3对应170303批号样品测定组试剂，4对应阴性样品，5对应枸杞子对照组试剂。

图4中载体为硅胶G板，展开剂均为在10℃的环境下按照体积比为1.3:1:1的乙酸丁酯、甲酸和水的混合溶剂，显色为喷以三氯化铝溶液，紫外灯光(365nm)下检视。

从左至右依次为1、2、3、4、5，其中标号1对应140110批号样品测定组试剂，2对应170202批号样品测定组试剂，3对应170303批号样品测定组试剂，4对应阴性样品，5对应枸杞子对照组试剂。

Claims (10)

1.生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：包括枸杞子薄层鉴别测定方法、柚皮苷薄层鉴别测定方法和淫羊藿苷薄层鉴别测定方法。

2.根据权利要求1所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：所述枸杞子薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，所述对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取枸杞子，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液过滤，滤液即为对照组试剂；

所述测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，将其研细，加水煮沸后，静置至室温，通过离心机进行离心，制得离心液；

S2，取离心液的上清液，通过提取试剂进行提取，浓缩，制得测定组试剂；

所述薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并放置入熏蒸室进行熏蒸；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

3.根据权利要求2所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：枸杞子薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇；

枸杞子薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S2中提取试剂为乙醚和乙酸乙酯；

枸杞子薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1中展开剂为按照体积比为10:0.2的三氯甲烷和甲醇的混合溶剂，S2中熏蒸室内为氨蒸汽。

4.根据权利要求3所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：枸杞子薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中枸杞子取1g，添加提取试剂为10mL，S2中先将提取后溶液在50℃水浴中浸泡30分钟后过滤；

枸杞子薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中生精片取4.7g，加水35ml，加热煮沸15min，放冷，通过离心机离心10min，S2取得离心液的上清液后，用乙醚15mL提取一次，乙醚液弃去得水液，水液用乙酸乙酯提取两次，每次15mL，合并乙酸乙酯液，浓缩至1mL，制得测定组试剂；

枸杞子薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1取对照组试剂和测定组试剂各5μL。

5.根据权利要求1所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：所述柚皮苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，所述对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取柚皮苷，添加溶剂试剂，制得对照组试剂；

所述测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，除去薄膜衣，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水进行溶解，并通过提取试剂进行提取，制得测定组试剂；

所述薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以显影试剂；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

6.根据权利要求5所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：柚皮苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇；

柚皮苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇，S3中提取试剂为乙醚、乙酸乙酯和甲醇；

柚皮苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1展开剂为按照体积比为1:12:2.5:3的甲苯、乙酸乙酯、甲酸和水的混合溶剂，S2显影试剂为三氯化铝溶液。

7.根据权利要求6所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：柚皮苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中柚皮苷取1mg，添加提取试剂为1mL；

柚皮苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中生精片取4.7g，添加提取试剂为30mL，S2中超声波处理20min，S3中在测定组残渣加水20mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，乙醚液弃去制得水液，在水液加乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，加5％碳酸氢钠20mL洗涤1次，乙酸乙酯液水浴蒸干，制得二次残渣，二次残渣加甲醇1mL使其溶解，制得测定组试剂；

柚皮苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1取对照组试剂和测定组试剂各5μL。

8.根据权利要求1所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：所述淫羊藿苷薄层鉴别测定方法包括对照组试剂制备、测定组试剂制备和薄层鉴别测定，所述对照组试剂制备包括以下步骤：

S1，取淫羊藿苷，添加溶剂试剂，制得对照组试剂；

所述测定组试剂制备包括以下步骤：

S1，取生精片，除去薄膜衣，将其研细，添加提取试剂，进行提取；

S2，将S1提取后溶液进行超声波处理，并过滤，蒸干，制得测定组残渣；

S3，将测定组残渣加水进行溶解，并通过提取试剂进行提取，制得测定组试剂；

所述薄层鉴别测定包括以下步骤：

S1，取对照组试剂和测定组试剂，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，并通过展开剂进行展开；

S2，将展开后的硅胶G薄层板取出，晾干，并喷以显影试剂；

S3，在紫外光灯下进行检视，在对照组试剂色谱和测定组试剂色谱相应的位置上，得到显示相同的颜色的荧光斑点。

9.根据权利要求8所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：淫羊藿苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇；

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中提取试剂为甲醇，S3中提取试剂为乙醚、乙酸乙酯和甲醇；

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1展开剂为在10℃的环境下按照体积比为1.3:1:1的乙酸丁酯、甲酸和水的混合溶剂，S2显影试剂为三氯化铝溶液。

10.根据权利要求9所述的生精片中枸杞子、柚皮苷和淫羊藿苷的薄层鉴别测定法，其特征在于：淫羊藿苷薄层鉴别测定方法对照组试剂制备步骤中，S1中淫羊藿苷取1mg，添加提取试剂为1mL；

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法测定组试剂制备步骤中，S1中生精片取4.7g，添加提取试剂为30mL，S2中超声波处理20min，S3中在测定组残渣加水20mL溶解，用乙醚提取3次，每次20mL，乙醚液弃去制得水液，在水液加乙酸乙酯提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，加5％碳酸氢钠20mL洗涤1次，乙酸乙酯液水浴蒸干，制得二次残渣，二次残渣加甲醇1mL使其溶解，制得测定组试剂；

淫羊藿苷薄层鉴别测定方法薄层鉴别测定步骤中，S1取对照组试剂和测定组试剂各5μL。