CN104306500A - 一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法 - Google Patents
一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种治疗肠易激综合征的药物口服制剂的检测方法,所述药物主要由柴胡炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草以及辅料制备而成,所述检测方法包括对口服制剂中炒白术、炒陈皮、炒枳实、乌梅和炙甘草的薄层色谱鉴别以及芍药苷盐酸小檗碱含量测定。所述检测方法准确,灵敏度高,重复性好,检测结果稳定,可有效检测治疗肠易激综合征的药物口服制剂的质量,各检测项标准能保证药物疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法,属于药品技术的领域。
背景技术
肠易激综合征(IBS)是一组持续或间歇发作,以腹痛、腹胀、排便习惯和(或)大便性状改变为临床表现的功能性肠胃病。致病原因有如下几个:1.胃肠道动力紊乱。2.内脏感觉异常。3.精神因素。4.肠道感染。 5.其他,部分IBS患者的症状与食物有关,肠道菌群的紊乱可能也是产生症状的原因之一。
肠易激综合征的临床表现有如下几种:根据主要症状分为:腹泻主导型;便秘主导型;腹泻便秘交替型。腹痛是IBS的主要症状,伴有大便次数或形状的异常,腹痛多于排便后缓解,部分病人应在进食后出现,腹痛可发生于腹部任何部位,局限性或弥漫性,疼痛性质多样。持续性或间歇性腹泻,粪量少,呈糊状,含大量黏液,禁食72小时后症状消失;夜间不出现,有别于器质性疾患;部分患者可因进食诱发;患者可有腹泻与便秘交替现象。便秘,排便困难,大便干结,量少,可带较多黏液,便秘可间断或与腹泻相交替,常伴排便不尽感。腹胀,白天较重,尤其在午后,夜间睡眠后减轻。近半数患者有胃灼热、恶心、呕吐等上胃肠道症状,背痛、头痛、心悸、尿频、尿急、性功能障碍等胃肠外表现较器质性肠病显著多见,部分病人尚有不同程度的心理精神异常表现,如焦虑、抑郁、紧张等。体征通常无阳性发现,部分患者有多汗,脉快,血压高等自主神经失调表现,有时可于腹部触及乙状结肠曲或痛性肠襻。
目前 IBS 发病机制尚不清楚,由于发病机制复杂,现代医学尚无有效的治疗方法,现今临床多以对症治疗为主,而药物治疗方面至今没有任何单一的药物可以有效地治疗。以柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草制成的治疗肠易激综合征的药物具有疏肝解郁,健脾益气的功效,能有效治疗肠易激综合征。为了更好地控制该产品的质量,确保临床药效,本发明提供了这种药物的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法;所述检测方法准确,灵敏度高,重复性好,结果可靠,能有效控制该产品的质量,确保药物的临床药效。
为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案实现:
一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述药物由柴胡250-400份、炒白芍250-400份、炒白术180-350份、防风100-300份、炒枳实100-300份、炒陈皮100-300份、乌梅100-300份、黄连100-160份和炙甘草100-160份及辅料制备而成。
具体地说,所述治疗肠易激综合征的药物,按照重量组份计算,由柴胡333份、炒白芍333份、炒白术267份、防风200份、炒枳实200份、炒陈皮200份、乌梅200份、黄连133份和炙甘草133份及辅料制备而成。
其制备方法为:根据配方称取各药物,用水煎煮提取,滤过,滤液浓缩至稠膏,干燥,粉碎,再加入辅料按照常规工艺制备成常规口服制剂;
具体地说,其制备方法为:颗粒剂这样制备:按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草,乌梅单独加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮2次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥完成后粉碎成细粉备用;其余8味药材加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮3次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合,过80目筛,加入制成量50%糊精和0.2%阿斯巴甜,混合均匀,以70%乙醇制粒,干燥,制成颗粒,即得。
胶囊剂这样制备:按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草,乌梅单独加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮2次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥完成后粉碎成细粉备用;其余8味药材加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮3次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合,过80目筛,加入制成量25%的混合辅料混匀,混合辅料由微晶纤维素和玉米淀粉以1:1的比例混合制成,用90%乙醇为润湿剂制颗粒,制成颗粒后于60℃干燥,再过12目筛1次,并用60目筛分出细粉,填装胶囊,即得。
片剂这样制备:按比例称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草,乌梅单独加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮2次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥完成后粉碎成细粉备用;其余8味药材加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮3次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥后粉碎成细粉与乌梅的细粉混合,过80目筛,加入制成量25%的混合辅料混匀,混合辅料由微晶纤维素和玉米淀粉以1:1的比例混合制成,用90%乙醇为润湿剂制颗粒,压片,即得。
所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法;所述鉴别方法包括对炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和/或炙甘草的薄层鉴别检测;所述含量测定方法包括对芍药苷和/或盐酸小檗碱的含量测定。
前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述炒白术的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加入30~60℃的石油醚20mL,超声20min,过滤,挥干,加入30~60℃石油醚1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取白术对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述防风的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加丙酮20mL,超声20min,过滤,挥干,加甲醇1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取防风对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述炒陈皮和炒枳实的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇20mL,加热回流20min,过滤,浓缩至1mL作为供试品溶液;另取陈皮对照药材5g,同法制成陈皮对照药材溶液;取枳实对照药材5g,加甲醇20min,超声20min,滤过,待滤液挥干,加甲醇1mL使溶解,作为枳实对照药材溶液;取柚皮苷,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂,展至约3cm,取出,晾干,再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂,展至约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点,与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
前所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述乌梅的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加乙醚振摇提取两次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用30~60℃的石油醚浸泡两次,每次15mL,每次浸泡2min,倾去石油醚,残渣加无水乙醇1mL,作为供试品溶液;取乌梅对照药材5g,同法制成对照药材溶液;取熊果酸,加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以环己烷:三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置白光下检视,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述炙甘草的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加乙醚40mL,加热回流1h,过滤弃去乙醚液,药渣加甲醇30mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水40mL使溶解,用正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液;甘草对照药材5g,同法制成对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上,以苯:乙酸乙酯︰冰醋酸=20︰7︰0.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
前所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述芍药苷的含量检测方法为:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相,检测波长为230nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于2000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品,加甲醇定容成50μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述盐酸小檗碱的含量检测方法为:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相,所述溶液A为取0.1%磷酸,再按每100mL的0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得,检测波长为345nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于5000;
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品,加甲醇定容成24μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
前述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,所述药物这样检测:
性状:颗粒剂为棕褐色的颗粒、胶囊内容物为棕褐色,片剂为棕褐色,气香,味酸苦;
鉴别:(1)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加入30~60℃的石油醚20mL,超声20min,过滤,挥干,加入30~60℃石油醚1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取白术对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点;
(2)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加丙酮20mL,超声20min,过滤,挥干,加甲醇1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取防风对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点;
(3)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇20mL,加热回流20min,过滤,浓缩至1mL作为供试品溶液;另取陈皮对照药材5g,同法制成陈皮对照药材溶液;取枳实对照药材5g,加甲醇20min,超声20min,滤过,待滤液挥干,加甲醇1mL使溶解,作为枳实对照药材溶液;取柚皮苷,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂,展至约3cm,取出,晾干,再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂,展至约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点,与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点;
(4)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加乙醚振摇提取两次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用30~60℃的石油醚浸泡两次,每次15mL,每次浸泡2min,倾去石油醚,残渣加无水乙醇1mL,作为供试品溶液;取乌梅对照药材5g,同法制成对照药材溶液;取熊果酸,加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以环己烷:三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置白光下检视,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点;
(5)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加乙醚40mL,加热回流1h,过滤弃去乙醚液,药渣加甲醇30mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水40mL使溶解,用正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液;甘草对照药材5g,同法制成对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上,以苯:乙酸乙酯︰冰醋酸 =20︰7︰0.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点;
检查:应符合(《中国药典》颗粒剂/片剂/胶囊剂项下有关的各项规定;
含量测定:(1)芍药苷:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相,检测波长为230nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于2000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇定容成50μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
(2)盐酸小檗碱:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相,所述溶液A为取0.1%磷酸,再按每100mL0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得,检测波长为345 nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于5000;
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品,加甲醇定容成24μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
发明人进行了大量的实验,以下是本发明所述检测方法的研究
实验例:检测方法研究
(一)样品及对照品来源
1、样品:陈皮,柴胡,白术(麸炒),黄连,甘草(炙),防风,枳实(麸炒),乌梅,炒白芍,大黄试药均购自贵州同济堂制药有限公司。
颗粒剂:按照本发明所述颗粒剂制备方法进行制备,批号为:20121001、20121002、20121003。
2、对照品:枳实对照药材(批号:963-9202),陈皮对照药材(批号:120969-201109),乌梅对照药材(批号:121208-101),甘草对照药材(批号:120904-200914),白术对照药材(批号:120913-200708),柴胡对照药材(批号:0992-200102),柴胡对照药材(批号:0992-200102),白芍对照药材(批号:0905-200106),防风对照药材(批号:120947-201108),熊果酸(110742-200415),柚皮苷(110722-201111)。
(二)鉴别。
1、白术的薄层鉴别:
(1)取颗粒剂5g,研细,加石油醚(30~60℃)20mL,超声20min,过滤,挥干,加石油醚(30~60℃)1mL溶解残渣,作为供试品溶液。另取白术对照药材5g,同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以石油醚:丙酮(10︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
(2)专属性实验取缺白术的阴性样品约5g,同供试品法操作制成阴性供试品溶剂,展开后在对照药材处无相应斑点,说明阴性样品对本实验无干扰。见图1。
2、防风的薄层鉴别:
(1)取颗粒剂5g,研细,加丙酮20mL, 超声20min,过滤,挥干,加甲醇1mL溶解残渣,作为供试品溶液。取防风对照药材5g,同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以氯仿:甲醇 (3︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
(2)专属性实验取缺防风的阴性样品约5g,同供试品法操作制成阴性供试品溶剂,展开后在对照药材处无相应斑点,说明阴性样品对本实验无干扰。见图2。
3、陈皮、枳实的薄层鉴别:
(1)取颗粒剂5g,研细,加甲醇20mL,加热回流20min,过滤,浓缩至1mL作为供试品溶液。取陈皮对照药材5g,同法制成陈皮对照药材溶液。取枳实对照药材5g,加甲醇20min,超声处理20min,滤过,滤液挥干,加甲醇1mL使溶解,作为枳实对照药材溶液。取柚皮苷适量,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以乙酸乙酯︰甲醇︰水 (100︰17︰13)为展开剂,展至约3cm,取出,晾干,再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水(20︰10︰1︰1)的上层溶液我展开剂,展至约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点。与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
(2)专属性实验取缺陈皮、枳实的阴性样品约5g,同供试品法操作制成阴性供试品溶剂,展开后在对照药材处无相应斑点,说明阴性样品对本实验无干扰。见图3。
4、乌梅的薄层鉴别:
(1)取颗粒剂5g,研细,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加乙醚振摇提取两次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用石油醚(30~60℃)浸泡两次,每次15mL,(2min)倾去石油醚,残渣加无水乙醇1mL,作为供试品溶液。取乌梅对照药材5g,同法制成对照药材溶液。取熊果酸适量,加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以环己烷:三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸 (20︰5︰8︰0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置白光下检视,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
(2)专属性实验取缺乌梅的阴性样品约5g,同供试品法操作制成阴性供试品溶剂,
展开后在对照药材处无相应斑点,说明阴性样品对本实验无干扰。见图4。
5、炙甘草的薄层鉴别:
(1)取颗粒剂5g,研细,加乙醚40mL,加热回流1h,过滤弃去乙醚液,药渣加甲醇30mL,加热回流1g,滤过,滤液蒸干,残渣加水40mL使溶解,用正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液。甘草对照药材5g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录VI B)试验,吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(200mm×100mm),以苯:乙酸乙酯︰冰醋酸 (20︰7︰0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
(2)专属性实验取缺甘草的阴性样品约5g,同供试品法操作制成阴性供试品溶剂,展开后在对照药材处无相应斑点,说明阴性样品对本实验无干扰。见图5。
(三)含量测定:
芍药苷
1方法:(1)仪器与试剂:LC-2010C HT高效液相色谱仪(日本岛津),甲醇、磷酸、乙腈为色谱纯,水为娃哈哈纯净水,其余为分析纯。供试品(柴芍肠宁颗粒剂)批号:20121001、20121002、20121003。
(2)色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1 %磷酸(28:72),流速:1.0 mL·min-1,柱温:25 ℃,检测波长:230 nm。理论塔板数按芍药苷计算不低于2000。
(3)对照品溶液的配制:精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇定容成50 μg·mL-1,即得。
(4)供试品溶液的配制:取颗粒剂,研细,取约1g,精密称定,置具筛锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得。
2提取条件的选择:
(1)提取方法的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL锥形瓶中,以甲醇30mL作为溶剂分别用超声与回流的方法处理30 min,放冷后,补重,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品,测定结果见表1。
结果表明,超声与回流对于芍药苷提取的影响不大,考虑到提取方便等因素,选用超声提取处理。
(2)提取溶剂的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL的锥形瓶中,以甲醇(30mL)与乙醇(30mL)作为溶剂采用超声法处理30min,放冷后,补重,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品,测定结果见表2。
结果表明,溶剂对于芍药苷提取影响较大,本实验选用甲醇提取。
(3)提取时间的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL 的锥形瓶中,加甲醇(30mL),超声处理不同时间(15min,30min,45min),放冷后,补重,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品,测定结果见表3。
结果表明,提取时间对于芍药苷提取的影响不大,故本实验采用提取时间为15min。
(4)溶剂用量的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL的锥形瓶中,加不同量的甲醇(10mL、20mL、30mL),超声提取15min,放冷后,补重,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品,测定结果见表4。
结果表明,统计用量对于芍药苷的提取影响不大,选用溶剂为供试品的10倍以上方可完全将芍药苷提出。
综上所述,供试品溶液的制备方法为:称取颗粒剂约1g,精密称定,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得。
3 阴性试验:
取缺白芍的阴性样品约2g,照样品含量测定项下提取,按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上,无明显其他峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。见图6。
4 线性关系考察:
分别精密量取浓度为50 μg·mL-1的芍药苷对照品溶液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL于5 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得到不同浓度的芍药苷对照品溶液。分别取20 μL进样,测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标,浓度(C)为横坐标进行线性回归,得到回归方程:A= 33854C + 15385,r=0.9999,表明芍药苷在2.5 μg·mL-1~50 μg·mL-1范围内线性关系良好。见图7。
5 精密度实验
精密吸取芍药苷对照品溶液(50 μg·mL-1)10 μL,连续进样6次,按上述色谱条件测定峰面积,结果峰面积值基本稳定,芍药苷的RSD= 0.11%,说明精密度良好。结果见表5,附图8。
6 稳定性实验
在0,2,4,6,8,10 ,12h分别对同一样品进样10 μL,测定芍药苷峰面积,结果RSD= 0.33 %,表明样品在12 h稳定性良好。结果见表6,见图9。
7 重复性实验
精密称取样品6份,按上述供试液方法制备和色谱条件测定峰面积,计算芍药苷含量,结果芍药苷平均含量为0.3684%,RSD= 1.43%,表明重复性良好。结果见表7,见图10。
8 加样回收实验
精密称取已知含量的样品6份0.1g,分别加入等量芍药苷对照品溶液,按供试品项下方法制备和色谱条件测定峰面积,计算回收率。结果平均回收率=99.70 %,RSD=2.01%。结果见表8,见图11。
9 耐用性
供试品溶液的制备
取颗粒剂,研细,取约1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得。
对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇定容成50 μg·mL-1,即得。
(1)检测波长的考察
色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1 %磷酸(28:72),流速:1.0 mL·min-1,柱温:25 ℃。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表9-1不同波长下测定芍药苷含量,结果见表9。
结果表明,含量测定在吸收波长230nm上下浮动,在吸收波长224~236nm范围内,RDS=2.8%,无显著影响,分离度符合要求,说明芍药苷的测定在波长224~236nm之间都能较精准测定。
(2)柱温考察
色谱条件:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1 %磷酸(28:72),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:230 nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表9-2不同柱温下测定芍药苷含量,结果见表10。
结果表明,含量测定在柱温25℃上下浮动,在柱温15~35℃范围内,RDS=2.48%,无显著影响,分离度基本符合要求,说明芍药苷的测定在柱温15~35℃之间都能较精准测定。
(3)流速考察
色谱条件:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.1 %磷酸(28:72),柱温:25 ℃,检测波长:230 nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表9-3不同流速下测定芍药苷含量,结果见表11。
结果表明,含量测定在流速1.0 mL·min-1上下浮动,流速0.8~1.2 mL·min-1范围内RSD=0.87%,无显著影响,分离度符合要求,说明芍药苷的测定在流0.8~1.2mL·min-1之间都能较精准测定。
(4)流动相组成比例考察
色谱条件:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流速:1.0 mL·min-1,柱温:25 ℃,检测波长:230 nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表9-4不同流动相组成比例下测定芍药苷含量,结果见表12。
注:流动相:甲醇-0.1 %磷酸:1.(32:68),2.(30:70)3.(28:72)4.(26:74)5.(24:76)。
结果表明,含量测定在甲醇-0.1 %磷酸(28:72)上下浮动,比例(32:68)~(24:76)范围内,RDS=3.48%。主要是在比例(32:68)时偏差较大。比例(30:70)~(24:76)范围内,RSD=3.00%,分离度符合要求,说明芍药苷的测定在比例(30:70)~(24:76)范围内都能精准测定。
(5)色谱柱考察
色谱条件:流动相:甲醇-0.1 %磷酸(28:72),柱温25℃,流速:1.0 mL·min-1,检测波长230nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,采用表9-5不同厂家色谱柱进样测定芍药苷含量,结果见表13。
注:1、DIKMA Diamonsil C18,2、Agilent ZORBAX SB-C18,3、Welch Materials Welchrom C18,4、GL Sciences WondaSil C18。
结果表明,不同厂牌的同类型色谱柱对芍药苷的含量测定,除了安捷伦外,没有显著影响,均能准确对芍药苷含量进行测定。
10 原料药材含量测定
取白芍药材约0.1g,按照《中国药典》(2010版)白芍项下的供试品处理方法,制成供试品溶液,吸取10 μL,注入液相色谱仪。结果见表14。
结果分析:药典中规定炒白芍药材中芍药苷含量不低于1.2%。测定结果符合2010版一部〔白芍〕项下含量规定。
11 样品含量测定
精密称取不同批次的柴芍肠宁颗粒,按2.7.1项下方法制备,注入高效液相色谱仪10μL,按以上条件测定其芍药苷含量,结果见表15。
从3批柴芍肠宁颗粒样品测定结果可知,各批次的制剂中芍药苷转移率在35%左右,以《中国药典》2010版炒白芍药材中芍药苷限度计算,每袋制剂中芍药苷含量限度计算如下:芍药苷含量限度=(制剂含芍药苷药材(g)×炒白芍药材含芍药苷限度×提取率/制备量(g)) ×5=(333×1.2%×35%/1000) ×5=6.71mg/袋,考虑到药材的品种、产地、加工、炮制、制剂、生产等一系列过程中产生的影响,暂定颗粒剂每袋含芍药苷含量,不得少于6.50mg。
盐酸小檗碱
1方法:(1)仪器与试剂:LC-2010C HT高效液相色谱仪(日本岛津),甲醇、磷酸、乙腈为色谱纯,水为娃哈哈纯净水,其余为分析纯。供试品(柴芍肠宁颗粒剂)批号:20121001、20121002、20121003。
(2)色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)(50:50),流速:1.0 mL·min-1,柱温:25 ℃,检测波长:345 nm。理论塔板数按芍药苷计算不低于5000。
(3)对照品溶液的配制:精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇定容成24 μg·mL-1,即得。
(4)供试品溶液的配制:称取颗粒剂约1g,精密称定,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得。
2提取条件的选择:
(1)提取方法的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL锥形瓶中,以1%盐酸甲醇(30mL)作为溶剂分别用超声与回流的方法处理30 min,放冷后,补重,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品,测定结果见表16。
结果表明,超声与回流对于盐酸小檗碱提取的影响不大,考虑到提取方便等因素,选用超声提取处理。
(2)提取溶剂的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL的锥形瓶中,以1%盐酸甲醇(30mL)与1%盐酸乙醇(30mL)作为溶剂采用超声法处理30min,放冷后,补重,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品,测定结果见表17。
结果表明,溶剂对于盐酸小檗碱提取影响较大,1%盐酸甲醇提取出的盐酸小檗碱大于1%盐酸乙醇,故本实验选用1%盐酸甲醇提取。
(3)提取时间的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL 的锥形瓶中,加1%盐酸甲醇(30mL),超声处理不同时间(15min,30min,45min),放冷后,补重,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品,测定结果见表18。
结果表明,提取时间对于盐酸小檗碱提取的影响不大,考虑成本等因素,故本实验采用提取时间为15min。
(4)溶剂用量的选择
精密称取颗粒剂2g,置于50mL的锥形瓶中,加不同量的甲醇(10mL、20mL、30mL),超声提取15min,放冷后,补重,摇匀,过滤,取续滤液作为供试品,测定结果见表19。
结果表明,统计用量对于盐酸小檗碱的提取影响不大,选用溶剂为供试品的10倍以上方可完全将盐酸小檗碱提出。
综上所述,供试品溶液的制备方法为:称取颗粒剂约1g,精密称定,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得。
3 阴性试验:
取缺黄连的阴性样品约2g,照样品含量测定项下提取,按上述色谱条件分析。与对照品相应的位置上,无明显其他峰出现。结果证明阴性样品对该试验无干扰。见图12。
4 线性关系考察
分别精密量取浓度为24 μg·mL-1的盐酸小檗碱对照品溶液0.5,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 mL于5 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,得到不同浓度的盐酸小檗碱对照品溶液。分别取20 μL进样,测定峰面积。以峰面积(A)为纵坐标,浓度(C)为横坐标进行线性回归,得到回归方程:A= 96066C+ 179.34,r = 1,表明芍药苷在2.4 μg·mL-1~24 μg·mL-1范围内线性关系良好。见图13。
5 精密度实验
精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液(24 μg·mL-1)10 μL,连续进样6次,按上述色谱条件测定峰面积,结果峰面积值基本稳定,盐酸小檗碱的RSD= 0.11%,说明精密度良好。结果见表20,见图14。
6 稳定性实验
在0,2,4,6,8,10 ,12h分别对同一样品进样10 μL,测定盐酸小檗碱峰面积,结果RSD= 0.27 %,表明样品在12 h稳定性良好。结果见表21,见图15。
7 重复性实验
精密量取样品6份,按上述供试液方法制备供方法和色谱条件测定峰面积,计算盐酸小檗碱含量,结果芍药苷平均含量为0.082%,RSD= 0.45%,表明重复性良好。结果见表22,见图16。
8 加样回收实验
精密称取已知含量的样品6份0.1g,分别加入等量盐酸小檗碱对照品溶液,按供试品项下方法制备和色谱条件测定峰面积,计算回收率。结果平均回收率=100.63 %,RSD=1.95%。结果见表23,见图17。
9耐用性
对照品溶液的制备
取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇定容成34 μg·mL-1,即得。
供试品溶液的制备
取颗粒剂,研细,取约1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得。
(1)检测波长的考察
色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)(50:50),流速:1.0 mL·min-1,柱温:25 ℃。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表10-1不同波长下测定盐酸小檗碱含量,结果见表24。
结果表明,含量测定在吸收波长345m上下浮动,在吸收波长339~351nm范围内,RDS=0.80%,无显著影响,分离度符合要求,说明盐酸小檗碱的测定在波长224~236nm之间都能较精准测定。
(2)柱温考察
色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)(50:50),流速:1.0 mL·min-1,检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表10-2不同柱温下测定盐酸小檗碱含量,结果见表25。
结果表明,含量测定在柱温25℃上下浮动,在柱温15~35℃范围内,RDS=1.80%,无显著影响,分离度符合要求,说明盐酸小檗碱的测定在柱温15~35℃之间都能较精准测定。
(3)流速考察
色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)(50:50),柱温25℃,检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表10-3不同流速下测定盐酸小檗碱含量,结果见表26。
结果表明,含量测定在流速1.0 mL·min-1上下浮动,流速0.8~1.2 mL·min-1范围内RSD=0.13%,无显著影响,分离度符合要求,说明盐酸小檗碱的测定在流0.8~1.2mL·min-1之间都能较精准测定。
(4)流动相组成比例考察
色谱条件:色谱柱:DIKMA ODS-C18柱(250×4.6mm,5μm),柱温25℃,流速:1.0 mL·min-1,检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,按表10-4不同流动相组成比例下测定盐酸小檗碱含量,结果见表27。
注:乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g):1.(46:54),2.(48:52)3.(50:50)4.(52:48)5.(54:46)。
结果表明,含量测定在乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g):(50:50)上下浮动,比例(46:54)~(54:46)范围内,RDS=2.30%。分离度符合要求,说明盐酸小檗碱的测定在比例(46:54)~54:46)范围内都能精准测定。
(5)色谱柱考察
色谱条件:流动相:乙腈-0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)(50:50),柱温25℃,流速:1.0 mL·min-1,检测波长345nm。精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μL,分别进样,采用表10-5不同厂家色谱柱进样测定盐酸小檗碱苷含量,结果见表28。
注:1、DIKMA Diamonsil C18,2、Agilent ZORBAX SB-C18,3、Welch Materials Welchrom C18,4、GL Sciences WondaSil C18。
结果表明,不同厂牌的同类型色谱柱对芍药苷的含量测定,没有显著影响,均能准确对芍药苷含量进行测定。
10 原料药材含量测定
取黄连药材约0.2g,按照《中国药典》 (2010版)黄连项下的供试品处理方法,制成供试品溶液,吸取10 μL,注入液相色谱仪。结果见表29。
结果分析:药典中规定黄连药材中盐酸小檗碱含量不低于5.5%。测定结果符合2010版一部〔黄连〕项下含量规定。
11 样品含量测定
精密称取不同批次的柴芍肠宁颗粒,按2.7.2项下方法制备,注入高效液相色谱仪10μL,按以上条件测定其盐酸小檗碱含量,结果见表30。
从3批柴芍肠宁颗粒样品测定结果可知,各批次的制剂中盐酸小檗碱转移率在10%左右,以《中国药典》2010版黄连药材中盐酸小檗碱限度计算,每袋制剂中盐酸小檗碱含量限度计算如下:每袋盐酸小檗碱含量限度=(制剂含盐酸小檗碱药材(g)×黄连药材含盐酸小檗碱限度×提取率/制备量(g)) ×5=(133×5.5%×10%/1000)×5=3.66mg/袋,考虑到药材的品种、产地、加工、炮制、制剂、生产等一系列过程中产生的影响,暂定颗粒剂每袋含盐酸小檗碱含量,不得少于3.50mg。
(四)对比结果、结论本制剂三批产品,按质量标准进行检测,结果表明都符合规定要求,无显著性差异。
本发明的有益效果在于:本发明提供了一种治疗肠易激综合征的药物固体制剂的检测方法,包括以有效成分芍药苷和盐酸小檗碱为指标,采用高效液相色谱法测定芍药苷和盐酸小檗碱的含量;以及药物中炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和炙甘草的薄层色谱(TLC)鉴别方法;所述检测方法准确,灵敏度高,重复性好,检测结果稳定,可有效控制治疗肠易激综合征的药物固体制剂的质量,既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测,也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
附图说明
图1是本发明颗粒剂白术TLC 鉴别图,其中,1、2、3-颗粒3批样品,4-阴性样品,5-白术对照药材。
图2是本发明颗粒剂防风TLC 鉴别图,其中,1、2、3-颗粒3批样品,4-阴性样品,5-防风对照药材。
图3是本发明颗粒剂陈皮和枳实TLC 鉴别图,其中,1、2、3-颗粒3批样品,4-阴性样品,5-陈皮对照药材,6-枳实对照药材,7-柚皮苷对照品。
图4是本发明颗粒剂乌梅TLC白光鉴别图,其中,1-熊果酸对照品,2-乌梅对照药材 3、4、5-颗粒3批,6-阴性样。
图5是本发明颗粒剂甘草TLC 鉴别图,其中,1、2、3-颗粒3批样品,4-阴性样品,5-甘草照药材。
图6是芍药苷方法学专属性图谱,其中,1-阴性样品,2-颗粒样品,3-芍药苷对照品。
图7是芍药苷含量线性图谱。
图8是芍药苷方法学精密度图谱。
图9是芍药苷方法学稳定性图谱。
图10是芍药苷方法学重复性图谱。
图11是芍药苷方法学加样回收图。
图12是盐酸小檗碱方法学专属性图谱1-颗粒样品,2-盐酸小檗碱对照品,3-阴性样品。
图13是盐酸小檗碱含量线性图谱。
图14是盐酸小檗碱方法学精密度图谱。
图15是盐酸小檗碱方法学稳定性图谱。
图16是盐酸小檗碱方法学重复性图谱。
图17是盐酸小檗碱方法学加样回收图谱。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
具体实施方式
实施例1:颗粒剂的检测方法为
颗粒剂配方:柴胡250g、炒白芍300g、炒白术280g、防风300g、炒枳实200g、炒陈皮200g、乌梅200g、黄连133g、炙甘草133g
工艺:按处方称取柴胡、炒白芍、炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、黄连、炙甘草加2倍的水浸泡1h后,加10倍量水,煎煮3次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥后粉碎成细粉备用;乌梅单独加10倍量水,煎煮2次,每次1h,过滤,合并滤液,浓缩至80℃相对密度为1.15~1.25的浸膏,在60℃,0.07Mpa~0.08 Mpa环境下干燥,干燥完成后粉碎成细粉与其余8味中药的细粉混合,过80目筛,加入制得量50%糊精和0.1%阿斯巴甜,混合均匀,以70%乙醇制粒,干燥,制成颗粒,制成颗粒后于60℃干燥,再过12目筛1次,并用60目筛分出细粉,即得颗粒剂。
检测方法:
性状:药物为棕褐色的颗粒,气香,味酸苦;
鉴别:(1)取颗粒剂5g,研细,加石油醚(30~60℃)20mL,超声20min,过滤,挥干,加石油醚(30~60℃)1mL溶解残渣,作为供试品溶液。另取白术对照药材5g,同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以石油醚:丙酮(10︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
(2)取颗粒剂5g,研细,加丙酮20mL, 超声20min,过滤,挥干,加甲醇1mL溶解残渣,作为供试品溶液。取防风对照药材5g,同法制得对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以氯仿:甲醇 (3︰1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
(3)取颗粒剂5g,研细,加甲醇20mL,加热回流20min,过滤,浓缩至1mL作为供试品溶液。取陈皮对照药材5g,同法制成陈皮对照药材溶液。取枳实对照药材5g,加甲醇20min,超声处理20min,滤过,滤液挥干,加甲醇1mL使溶解,作为枳实对照药材溶液。取柚皮苷适量,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以乙酸乙酯︰甲醇︰水 (100︰17︰13)为展开剂,展至约3cm,取出,晾干,再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水(20︰10︰1︰1)的上层溶液为展开剂,展至约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点。与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
(4)取颗粒剂5g,研细,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加乙醚振摇提取两次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用石油醚(30~60℃)浸泡两次,每次15mL,(2min)倾去石油醚,残渣加无水乙醇1mL,作为供试品溶液。取乌梅对照药材5g,同法制成对照药材溶液。取熊果酸适量,加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附VIB)试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(100mm×100mm),以环己烷:三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸 (20︰5︰8︰0.1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置白光下检视,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
(5)取颗粒剂5g,研细,加乙醚40mL,加热回流1h,过滤弃去乙醚液,药渣加甲醇30mL,加热回流1g,滤过,滤液蒸干,残渣加水40mL使溶解,用正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液。甘草对照药材5g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录VI B)试验,吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一硅胶G薄层板上(200mm×100mm),以苯:乙酸乙酯︰冰醋酸 (20︰7︰0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,,置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
应符合(《中国药典》2010年版一部附录 I C)颗粒剂项下有关的各项规定。
含量测定:(1)芍药苷:照《中国药典》2010版一部(附录VI D)高效液相色谱法测定:色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇︰0.1 %磷酸(28︰72)为流动相,检测波长为230 nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于2000;对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇定容成50 μg·mL-1,即得;供试品溶液的制备:取颗粒剂,研细,取约1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;本制剂每袋含白芍以芍药苷计,不得低于6.50mg。
(2)盐酸小檗碱:照《中国药典》2010版一部(附录VI D)高效液相色谱法测定。色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈︰0.1 %磷酸(每100 mL加十二烷基磺酸钠0.1 g)(50︰50)为流动相,检测波长为345 nm。理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于5000;对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇定容成24 μg·mL-1,即得;供试品溶液的制备:取颗粒剂,研细,取约1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;颗粒剂每袋含黄连以盐酸小檗碱计,不得低于3.50mg。
Claims (9)
1.一种治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述药物由柴胡250-400份、炒白芍250-400份、炒白术180-350份、防风100-300份、炒枳实100-300份、炒陈皮100-300份、乌梅100-300份、黄连100-160份和炙甘草100-160份及辅料按照下述方法制备而成:根据配方称取各药物,用水煎煮提取,滤过,滤液浓缩至稠膏,干燥,粉碎,再加入辅料按照常规工艺制备成常规口服制剂;所述检测方法包括鉴别方法和含量测定方法;所述鉴别方法包括对炒白术、防风、炒枳实、炒陈皮、乌梅、黄连和/或炙甘草的薄层鉴别检测;所述含量测定方法包括对芍药苷和/或盐酸小檗碱的含量测定。
2.如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述炒白术的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加入30~60℃的石油醚20mL,超声20min,过滤,挥干,加入30~60℃石油醚1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取白术对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
3.如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述防风的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加丙酮20mL,超声20min,过滤,挥干,加甲醇1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取防风对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
4.如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述炒陈皮和炒枳实的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇20mL,加热回流20min,过滤,浓缩至1mL作为供试品溶液;另取陈皮对照药材5g,同法制成陈皮对照药材溶液;取枳实对照药材5g,加甲醇20min,超声20min,滤过,待滤液挥干,加甲醇1mL使溶解,作为枳实对照药材溶液;取柚皮苷,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂,展至约3cm,取出,晾干,再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂,展至约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点,与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
5.如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述乌梅的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加乙醚振摇提取两次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用30~60℃的石油醚浸泡两次,每次15mL,每次浸泡2min,倾去石油醚,残渣加无水乙醇1mL,作为供试品溶液;取乌梅对照药材5g,同法制成对照药材溶液;取熊果酸,加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以环己烷:三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置白光下检视,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
6.如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述炙甘草的鉴别方法为:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加乙醚40mL,加热回流1h,过滤弃去乙醚液,药渣加甲醇30mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水40mL使溶解,用正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液;甘草对照药材5g,同法制成对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上,以苯:乙酸乙酯︰冰醋酸=20︰7︰0.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点。
7.如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述芍药苷的含量检测方法为:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相,检测波长为230nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于2000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品,加甲醇定容成50μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
8. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述盐酸小檗碱的含量检测方法为:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相,所述溶液A为取0.1%磷酸,再按每100mL的0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得,检测波长为345nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于5000;
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品,加甲醇定容成24μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
9. 如权利要求1所述治疗肠易激综合征的药物的检测方法,其特征在于:所述药物这样检测:
性状:颗粒剂为棕褐色的颗粒、胶囊内容物为棕褐色,片剂为棕褐色,气香,味酸苦;
鉴别:(1)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加入30~60℃的石油醚20mL,超声20min,过滤,挥干,加入30~60℃石油醚1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取白术对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以石油醚︰丙酮=10︰1为展开剂展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点;
(2)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加丙酮20mL,超声20min,过滤,挥干,加甲醇1mL溶解残渣,作为供试品溶液;另取防风对照药材5g,同法制得对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述2种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以氯仿︰甲醇= 3︰1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点;
(3)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇20mL,加热回流20min,过滤,浓缩至1mL作为供试品溶液;另取陈皮对照药材5g,同法制成陈皮对照药材溶液;取枳实对照药材5g,加甲醇20min,超声20min,滤过,待滤液挥干,加甲醇1mL使溶解,作为枳实对照药材溶液;取柚皮苷,加甲醇制成饱和溶液,作为对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯︰甲醇︰水=100︰17︰13为展开剂,展至约3cm,取出,晾干,再以甲苯︰乙酸乙酯︰甲酸︰水=20︰10︰1︰1的上层溶液为展开剂,展至约8cm,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,置于365nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的两个斑点,与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点;
(4)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水20mL使溶解,加乙醚振摇提取两次,每次20mL,合并乙醚液,蒸干,残渣用30~60℃的石油醚浸泡两次,每次15mL,每次浸泡2min,倾去石油醚,残渣加无水乙醇1mL,作为供试品溶液;取乌梅对照药材5g,同法制成对照药材溶液;取熊果酸,加无水乙醇制成每1mL含0.6mg的对照品溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述4种溶液各10μl分别点于同一100mm×100mm的硅胶G薄层板上,以环己烷:三氯甲烷︰乙酸乙酯︰甲酸=20︰5︰8︰0.1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置白光下检视,供试品色谱中,在与对照药材、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点;
(5)取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物5g,研细,加乙醚40mL,加热回流1h,过滤弃去乙醚液,药渣加甲醇30mL,加热回流1h,滤过,滤液蒸干,残渣加水40mL使溶解,用正丁醇提取3次,每次20mL,合并正丁醇液,用水洗涤3次,弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇1mL溶解,作为供试品溶液;甘草对照药材5g,同法制成对照药材溶液;照中国药典薄层色谱试验,吸取上述3种溶液各10μl分别点于同一200mm×100mm的硅胶G薄层板上,以苯:乙酸乙酯︰冰醋酸 =20︰7︰0.5为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇,105℃加热至斑点清晰,置254nm紫外光灯下检视,供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色斑点;
检查:应符合(《中国药典》颗粒剂/片剂/胶囊剂项下有关的各项规定;
含量测定:(1)芍药苷:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇︰0.1 %磷酸=28︰72为流动相,检测波长为230nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于2000;
对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇定容成50μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得;
(2)盐酸小檗碱:照中国药典附录高效液相色谱法试验:
色谱条件与系统适用性试验:以十八垸基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈︰溶液A=50︰50为流动相,所述溶液A为取0.1%磷酸,再按每100mL0.1 %磷酸加入0.1 g十二烷基磺酸钠后配置而得,检测波长为345 nm;理论塔板数按芍药苷峰计算,应不低于5000;
对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品,加甲醇定容成24μg·mL-1,即得;
供试品溶液的制备:取颗粒剂/片剂/胶囊剂内容物,研细,取1g,精密称定,置于锥形瓶中,精密加入1%盐酸甲醇20mL,称定重量,超声15min,冷却至室温,用1%盐酸甲醇补足损失的重量,过0.45μm的微孔滤膜,即得;
测定法:分别吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。
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