CN108267536B - 一种鉴别上清丸中防风的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中防风的方法，其中薄层色谱法为：吸取供试品溶液5～10μl，对照药材溶液5～10μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3～3.5:1的三氯甲烷‑甲醇混合溶液为展开剂，在20～30℃的温度下展开2～5cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以显色剂，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本方法操作简便，分离效果快速、准确，重现性良好，专属性强，为上清丸的进一步质量控制提供依据。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂检测技术领域，具体涉及一种鉴别上清丸中防风的方法。
背景技术
上清丸收载于《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》中，原质量标准较低，仅有性状和显微鉴别，目前尚无该制剂中防风鉴别的研究。
在2015年版《中国药典》一部中，防风药材的鉴别项下，采用薄层色谱法，以体积比为4:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯(254nm)下检视。在上清丸制剂中，如采用上述鉴别方法，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，找不到相同颜色的斑点(如附图1所示)。在优选展开体系过程中发现防风药材特征斑点被制剂中其他药材的斑点覆盖，且很难达到理想分离效果。
发明内容
本发明提供了一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中防风的方法。上清丸制剂中，防风药材生粉入药但在处方中用量较少且粉蜜比达到1:1.7～1.8，其在上清丸制剂中含量不足2％。虽然其量小，但增加防风鉴别可为上清丸制剂的进一步质量控制提供依据。然而采用现有技术中的防风药材或其它含防风的中成药中的防风鉴别方法都无法得到较好的鉴别效果。
本发明技术方案如下：
一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中防风的方法，包括如下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品5～15g，剪碎，加丙酮30-50ml，超声20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材0.5～1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品5～15g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，各等量吸取5～10μl，分别点于薄层板上，以体积比为3～3.5:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在20～30℃的温度下展开2～5cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开7.5～8.5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
本发明所述鉴别上清丸中防风的方法优选为：
(1)供试品溶液的制备：
取本品10g，剪碎，加丙酮30ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品10g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于薄层板上，以体积比为3～3.5:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在20～30℃的温度下展开4cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
进一步的，所述薄层板为高效薄层板。
进一步的，所述展开剂三氯甲烷-甲醇混合溶液的体积比为3:1。
进一步的，所述方法的步骤(4)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取5μl，分别点于薄层板上。
本发明所述鉴别上清丸制剂中防风的方法中所述上清丸制剂为大蜜丸。
本发明中“10％硫酸乙醇溶液”可以用如下方法配制：10％硫酸乙醇溶液的配制：量取5.7ml硫酸，缓缓加入100ml乙醇中，并不断搅拌，放冷，即得10％硫酸乙醇溶液。
本发明的有益效果：
(1)防风在处方中含量较低，薄层鉴别成份复杂，且不稳定，因而在薄层鉴别时易造成分离不完全或出现杂质成分干扰；本方法采用点样体积5～10μl，展开方法选用“以体积比为3～3.5:1的三氯甲烷：甲醇混合溶液为展开剂，在20～30℃的温度下展开2～5cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm”，使防风药材特征斑点得到有效分离；
(2)选用10％硫酸乙醇溶液作为显色剂，使得防风药材特征斑点在紫外光灯(365nm)下能够清晰的辨认；
(3)本方法操作简便，分离效果快速、准确，重现性良好，专属性强，为上清丸制剂的进一步质量控制提供依据。
附图说明
图1是药典方法防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-防风对照药材样品；3～5-供试品溶液样品。
图2是实施例1的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品(10μl)；2-防风对照药材样品(10μl)；3-供试品溶液样品(10μl)；4-供试品溶液样品(5μl)；5-供试品溶液样品(10μl)；6-供试品溶液样品(15μl)。
图3是实施例2的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-供试品溶液样品；3-防风对照药材样品；4-供试品溶液样品；5-供试品溶液样品。
图4是实施例3的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-防风对照药材样品；3～5-供试品溶液样品。
图5是实施例4的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-防风对照药材样品；3～5-供试品溶液样品。
图6是对比例1的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品(10μl)；2-防风对照药材样品(10μl)；3-供试品溶液样品(5μl)；4-供试品溶液样品(5μl)；5-供试品溶液样品(10μl)；6-供试品溶液样品(15μl)。
图7是对比例2的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-防风对照药材样品；3～5-供试品溶液样品。
图8是对比例4的防风薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-防风对照药材样品；3～5-供试品溶液样品。
具体实施方式
以下实施例和对比例中上清丸制剂以上清丸(大蜜丸)为例，所用上清丸为《卫生部药品标准中药成方制剂第十册》收载的上清丸。其中每个实施例或对比例中均设置一个阴性对照样品(按上清丸项下【处方】称取缺防风的其他药材，制成缺防风的阴性对照样品，按每个实施例或对比例中供试品溶液制备方法同法制成缺防风的阴性样品溶液，与供试品溶液、对照药材溶液等体积量点于高效薄层板上进行薄层鉴别)。通过阴性对照样的薄层鉴别结果，可表明本发明方法阴性无干扰，专属性强。
实施例1
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品10g，剪碎，加丙酮30ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品10g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液5～15μl、对照药材溶液10μl、阴性样品溶液10μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在20～25℃温度下展开4cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例2
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，步骤(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取10μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在25～30℃温度下展开3cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例3
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
(1)取本品10g，剪碎，加丙酮50ml，超声40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品10g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取10μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在25～30℃温度下展开2cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例4
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，步骤(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取5μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3.5:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在20～25℃温度下展开4cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
对比例1
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液5～15μl、对照药材溶液10μl、阴性样品溶液10μl分别点于高效薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在25～30℃温度下展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，其中3-对比例1供试品溶液样品(5μl)；4-对比例1供试品溶液样品(5μl)显相同颜色的荧光斑点，但分离效果不理想，其他供试品溶液样品斑点均被覆盖。
对比例2
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取10μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为4:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂在25～30℃温度下展开3cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，但分离效果不理想。
对比例3
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
1)供试品溶液的制备：
取本品10g，剪碎，加无水乙醇50ml，加热回流2小时，取出，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品10g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取5μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，阴性样品有干扰。
对比例4
一种鉴别上清丸制剂中防风的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取5μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在35～40℃温度下展开4cm，取出，晾干，再在同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，但有明显边缘效应，分离效果不理想。
Claims (5)
1.一种采用薄层色谱法鉴别上清丸中防风的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品5～15g，剪碎，加丙酮30-50ml，超声20-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1～2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材0.5～1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品5～15g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液，各等量吸取5～10μl，分别点于高效薄层板上，以体积比为3～3.5:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在20～30℃的温度下展开2～5cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开7.5～8.5cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品10g，剪碎，加丙酮30ml，超声30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取防风对照药材1.0g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)阴性样品溶液的制备：
取缺防风的阴性样品10g，同步骤(1)方法制成阴性样品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5～10μl，分别点于薄层板上，以体积比为3～3.5:1的三氯甲烷-甲醇混合溶液为展开剂，在20～30℃的温度下展开4cm，取出，晾干，再置同一展开缸中展开8cm，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述展开剂三氯甲烷-甲醇混合溶液的体积比为3：1。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各吸取5μl，分别点于薄层板上。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述上清丸制剂为大蜜丸。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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