CN107505427B - 一种中药材掌叶大黄的薄层色谱检测方法 - Google Patents

一种中药材掌叶大黄的薄层色谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种中药材掌叶大黄的检测方法，它是采用薄层色谱法检测，步骤如下：(1)制备供试品溶液：取供试药材粉末，加乙醇提取，过滤，浓缩，加水溶解，加入有机溶剂提取，浓缩，甲醇定容，作为供试品溶液；(2)薄层色谱检测：将供试品溶液在薄层板上点样，以石油醚30℃～60℃‑正己烷‑乙酸乙酯‑甲酸为展开剂展开，显色，检视，对比即可。本发明薄层色谱检测方法，其在Rf值0.13～0.17范围内有紫色特征斑点，该斑点为掌叶大黄独有，清晰易于分辨，能够有效地从掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄中鉴别出掌叶大黄。

Description

一种中药材掌叶大黄的薄层色谱检测方法
技术领域
本发明涉及一种中药材掌叶大黄特性鉴别的薄层色谱检测方法。
背景技术
薄层色谱法是将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。其利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在溶剂流过吸附剂的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而使供试品所含成分分离。薄层色谱法具有设备简单、操作简便、分离速度快、灵敏度和分辨率较高等优点，被许多国家药典用于药物中杂质的检查、药物分析等方面，且是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术(尹丽,宗兰兰,蒲晓辉,等.薄层色谱法在药物分析中的应用.河南大学学报(医学版),2016,35(2):77-80.)。
大黄作为我国的一种传统中药，早在《神农本草经》已有记载，本品具有泻热通肠、凉血解毒、逐淤通经等功效，临床常用于治疗实热便秘、积滞腹痛、泻痢不爽、湿热黄疸诸症，运用广泛。随着临床用药增加，而药材资源有限，市售商品大黄质量参差不齐，甚至出现伪品冒充正品大黄药用的现象。《中国药典2015版》一部收载正品大黄有三个基源，为寥科植物掌叶大黄、唐古特大黄或药用大黄的干燥根和根茎。但在实际中药制剂过程中为更好地控制药品质量，需要对原料药饮片的来源加以控制，若某制剂的原料药投料仅为掌叶大黄时，则要求对掌叶大黄进行特性鉴别，以免与其它两种基源混淆。
目前国内外并没有报道一种有效的方法可鉴别出掌叶大黄和唐古特大黄、药用大黄。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种中药材掌叶大黄的薄层色谱检测方法。
本发明提供了一种中药材掌叶大黄的检测方法，它是采用薄层色谱法检测，步骤如下：
(1)制备供试品溶液：取供试药材粉末，加乙醇提取，过滤，浓缩，加水溶解，加入有机溶剂提取，浓缩，甲醇定容，作为供试品溶液；
(2)薄层色谱检测：将供试品溶液在薄层板上点样，以石油醚30℃～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，显色，检视，对比即可。
其中，步骤(1)中，所述乙醇与供试药材粉末的体积质量比为40:3ml/g；和/或，所述水与供试药材粉末的体积质量比为40:3ml/g；和/或，所述有机溶剂与供试药材粉末的体积质量比为20:1ml/g；和/或，所述甲醇与供试药材粉末的体积质量比为4:3ml/g。
其中，步骤(1)中，所述乙醇提取是用乙醇提取2次，每次15min；和/或，所述有机溶剂提取是有机溶剂振摇提取2～5次；和/或，所述乙醇为85％乙醇、95％乙醇或无水乙醇；和/或，所述乙醇提取为超声提取。
优选的，所述有机溶剂振摇提取次数为2次。
优选的，所述乙醇为85％乙醇。
其中，步骤(1)中，所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯；优选的，所述有机溶剂为二氯甲烷。
其中，步骤(2)中，所述薄层板为以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H板，和/或，步骤(2)中，所述点样的点样量为2～5μl。
其中，步骤(2)中，所述展开剂石油醚30～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸的体积比为3～7:11～12:5～8:0.2；优选的，所述展开剂石油醚30～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸的体积比为4～5:12:6～8:0.2；更优选的，所述展开剂石油醚30～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸的体积比为4:12:6:0.2。
其中，步骤(2)中，所述展开的展开距离为7～9cm；优选的，所述展开的展开距离为8cm。
其中，步骤(2)中，所述显色为氨蒸汽显色法；所述薄层色谱检测，其在Rf值0.13～0.17范围内有紫色特征斑点。
本发明的有益效果：本发明提供了一种中药材掌叶大黄的薄层色谱检测方法，展开效果好，特征斑点为掌叶大黄独有，清晰易于分辨，能够有效地从掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄中鉴别出掌叶大黄。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为本发明鉴别掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的薄层色谱图，1-2为掌叶大黄对照药材，3-4为唐古特大黄对照药材，5-6为药用大黄对照药材，7-8为空白溶剂；
图2是展开系统为丙酮-甲醇-正己烷-二氯甲烷(1:1:1:1)的薄层色谱图；
图3是展开系统为乙酸乙酯-无水乙醇-正己烷-二氯甲烷(1:1:1:1)的薄层色谱图；
图4是展开系统为正己烷-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸(20:25:5:2)的薄层色谱图；
图5是展开系统为石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:12:6:0.2)的薄层色谱图；。
图6是展开系统为正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(9:2:0.6)的薄层色谱图；
图7为考察点样量的薄层色谱图，1-2为掌叶大黄对照药材1μl，3-4为掌叶大黄对照药材2μl，5-6为掌叶大黄对照药材3μl，7-8为掌叶大黄对照药材5μl；
图8为展开距离为7cm的薄层色谱图；
图9为展开距离为8cm的薄层色谱图；
图10为展开距离为9cm的薄层色谱图。
具体实施方式
1、仪器
薄层玻璃板：100×200mm；
超声仪：天津奥特赛恩斯仪器；
水浴锅：上海精宏实验设备；
电子天平：上海精科天美科学仪器；
紫外仪：上海市安亭电子仪器；
长颈漏斗、分液漏斗、蒸发皿、200×100mm层析缸(竖式)。
2、试剂
硅胶H板：青岛海洋化工厂20160721；
丙酮、甲醇、正己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、无水乙醇、环己烷、石油醚(30～60℃)、正己烷、甲酸乙酯、甲酸、冰醋酸：均为分析纯，购于成都科龙化工制剂厂。
3、试药
掌叶大黄对照药材(121249-201304)；唐古特大黄对照药材(120902-201311)；药用大黄对照药材(120984-201202)；对照药材均购于中国食品药品检定研究院。
实施例1本发明检测方法
(1)药材溶液的制备
取待检大黄粉末0.75g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加85％乙醇10ml，超声处理2次，每次15分钟，滤过，合并滤液，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用二氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
(2)薄层色谱检测
吸取上述供试品溶液3μl，以甲醇作空白溶剂，点于硅胶板上，以石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:12:6:0.2)为展开剂展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，于日光下检视。
(3)结果判断
若在Rf值0.13～0.17范围内有紫色特征斑点，则判定为掌叶大黄，若在Rf值0.13～0.17范围内无紫色特征斑点，则判定为其他大黄。
以下用实验例来说明本发明的有益效果。
实验例1鉴别掌叶大黄
(1)药材溶液的制备
分别取掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄粉末0.75g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加85％乙醇10ml，超声处理2次，每次15分钟，滤过，合并滤液，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，用二氯甲烷振摇提取2次，每次15ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
(2)薄层色谱检测
吸取上述供试品溶液各3μl，以甲醇作空白溶剂，点于硅胶板上，以石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:12:6:0.2)为展开剂展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，于日光下检视，薄层色谱图见图1，其中，图中序号1～2为掌叶大黄，3～4为唐古特大黄，5～6为药用大黄，7～8为甲醇。
(3)实验结果
结果表明：掌叶大黄药材色谱图Rf值0.13～0.17内显紫色特征斑点，唐古特大黄和药用大黄药材在与掌叶大黄药材相应位置上不显示此特征斑点。
可以看出目标斑点清晰，与其它斑点分离度良好，且无拖尾现象。
实验结果证明，本发明方法可以有效将掌叶大黄与其余大黄区分开来，可以用于掌叶大黄的鉴别。
实验例2本发明检测方法展开剂的选择
(1)对照药材溶液的制备
分别取掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄粉末0.75g，按实施例1的方法制备对照品溶液。
(2)薄层色谱检测
吸取上述溶液3μl点于以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，分别以下列展开系统展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，于日光下检视，薄层色谱图见图2～6，其中，图中序号1～2为掌叶大黄，3～4为唐古特大黄，5～6为药用大黄。
展开系统I：丙酮-甲醇-正己烷-二氯甲烷(1:1:1:1)；
展开系统II：乙酸乙酯-无水乙醇-正己烷-二氯甲烷(1:1:1:1)；
展开系统III：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸(20:25:5:2)；
展开系统IV：石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:12:6:0.2)；
展开系统V：正己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(9:2:0.6)。
(3)实验结果
结果表明：系统I展开效果差，各斑点汇聚于溶剂前沿，拖尾严重，无法看到特征斑点。体系II特征斑点未与点样原点分离。系统III和系统V可以看到掌叶大黄的紫色特征斑点，但均有不同程度的拖尾。系统IV掌叶大黄紫色特征斑点清晰、圆整，与其它斑点分离度好，无拖尾现象。因此选择系统IV作为掌叶大黄特性鉴别的展开溶剂。
由展开系统I～V薄层色谱检测的实验结果可知：只有选用特定展开剂石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸进行展开，才能实现掌叶大黄具有紫色特征斑点，且斑点清晰、圆整，与其它斑点分离度好，无拖尾现象，能够与其它大黄明显区分开来的目的。
实验例3点样量的确定
(1)药材溶液的制备
取掌叶大黄粉末，按实施例1的方法制成对照溶液。
(2)薄层色谱检测
分别吸取上述溶液1μl、2μl、3μl、5μl点于同一硅胶板上，以石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:12:6:0.2)为展开剂展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，于日光下检视，薄层色谱图见图7，其中，图中序号1～2为掌叶大黄对照溶液1μl，3～4为掌叶大黄对照溶液2μl，5～6为掌叶大黄对照溶液3μl，7～8为掌叶大黄对照溶液5μl。
(3)实验结果
结果表明：点样量在2μl～5μl范围内斑点清晰，无拖尾。
实验例4展开距离的确定
(1)药材溶液的制备
取掌叶大黄粉末，按实施例1的方法制成对照溶液。
(2)薄层色谱检测
吸取上述溶液3μl点于硅胶板上，以石油醚(30℃～60℃)-正己烷-乙酸乙酯-甲酸(4:12:6:0.2)为展开剂分别展开7cm、8cm、9cm，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，于日光下检视，薄层色谱图见图8～10。
(3)实验结果
结果表明：当展开距离为8cm时边缘效应小，各斑点分离度好，且斑点清晰。
综上，本发明样品提取方法利用超声提取，减少了样品制备时间，简化了操作步骤，提取过程中未添加酸水解，用二氯甲烷代替三氯甲烷振摇萃取，优化了萃取溶剂；本发明的掌叶大黄的薄层色谱检测方法，在Rf值0.13～0.17范围内有紫色特征斑点，展开效果好，特征斑点为掌叶大黄独有，清晰易于分辨，能够有效地从掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄中鉴别出掌叶大黄。

Claims (12)

1.一种中药材掌叶大黄的检测方法，其特征在于：它是采用薄层色谱法检测，步骤如下：
（1）制备供试品溶液：取供试药材粉末，加乙醇提取，过滤，浓缩，加水溶解，加入有机溶剂提取，浓缩，甲醇定容，作为供试品溶液；所述有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯；
（2）薄层色谱检测：将供试品溶液在硅胶H板上点样，以石油醚30℃～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸为展开剂展开，显色，检视，对比即可；所述展开剂石油醚30～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸的体积比为3～7:11～12:5～8:0.2。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述乙醇与供试药材粉末的体积质量比为40:3ml/g；和/或，所述水与供试药材粉末的体积质量比为40:3ml/g；和/或，所述有机溶剂与供试药材粉末的体积质量比为20:1ml/g；和/或，所述甲醇与供试药材粉末的体积质量比为4:3ml/g。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述乙醇提取是用乙醇提取2次，每次15min；和/或，所述有机溶剂提取是有机溶剂振摇提取2～5次；和/或，所述乙醇为85%乙醇、95%乙醇或无水乙醇；和/或，所述乙醇提取为超声提取。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述有机溶剂振摇提取次数为2次；和/或，所述乙醇为85%乙醇。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（1）中，所述有机溶剂为二氯甲烷。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述硅胶H板是以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶H板；和/或，步骤（2）中，所述点样的点样量为2～5μl。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述展开剂石油醚30～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸的体积比为4～5:12:6～8:0.2。
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述展开剂石油醚30～60℃-正己烷-乙酸乙酯-甲酸的体积比为4:12:6:0.2。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述展开的展开距离为7~9cm。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述展开的展开距离为8cm。
11.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述显色为氨蒸汽显色法。
12.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤（2）中，所述薄层色谱检测，其在Rf值0.13~0.17范围内有紫色特征斑点。
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