CN104398580B - 一种火麻仁对照提取物的制备方法与用途 - Google Patents

Abstract

一种火麻仁对照提取物的制备方法，包括：步骤1、乙醚脱脂：取火麻仁药材粉末200g，过二号筛，加乙醚1500ml，水浴加热回流1小时，水浴温度为50℃，减压过滤，药渣再加乙醚500ml洗涤，弃去乙醚液；步骤2、甲醇提取得浸膏：所述药渣加甲醇1500 ml，水浴加热回流1小时提取1次，水浴温度为70℃，减压过滤，蒸干甲醇得浸膏，称重；步骤3、拌硅胶后减压干燥：所述浸膏用100 ml甲醇复溶，加入与浸膏等量的柱层析硅胶，混匀，减压蒸干甲醇，过九号筛，即得火麻仁对照提取物。本发明还提供一种火麻仁对照提取物的用途，所述火麻仁对照提取物替代火麻仁对照药材，作为薄层色谱鉴别用对照物使用。

Description

一种火麻仁对照提取物的制备方法与用途

技术领域

本发明涉及中药技术领域，尤其涉及一种火麻仁对照提取物的制备方法与用途。

背景技术

中药对照品是确认中药药品质量必不可少的标准参照物，按照化学性质分类分为化学对照品、对照药材、对照提取物。其中，对照提取物是2005版《中国药典》首次将其作为中药标准物质收载，以它作为对照品对于控制中药的质量具有许多优点：与化学对照品比较，分离难度小容易获得，且价格低廉，某种程度上相当于同时采用多个化学对照品进行鉴别，提高了鉴别的专属性；与对照药材相比较，对照药材要求在规定的贮藏期间，应不发生性状及内在成分的改变，并且供药材及中成药薄层鉴别检验的对照药材一般为未经炮炙或未经化学提取的原生药材，而对照提取物具有良好的均匀性与稳定性，并且是经化学提取后得到的一类非单体成分，能直接溶于溶剂配制成供检测用的标准物质，而在制剂和提取物标准中，对照提取物的优势则更为明显，制剂和提取物大多都经过一步的提取和纯化，在进行薄层鉴别时其色谱行为可能与对照药材不一致，在这种情况下采用对照提取物更为合理，因此对照提取物更能准确、稳定地表征其质量特征并保证不同批次产品质量的相对稳定性。

目前，对照提取物在中药各领域的质量控制中主要用于成方制剂和单味制剂，以及用于植物油脂和提取物，而药材与饮片的质量标准中使用较少。对照提取物在中药质量标准评价项目中主要用于定性鉴别，一般为薄层色谱鉴别，提取对照物一般都是直接溶于有机溶剂，与对照药材提取过程繁琐耗时相比，这更有利于药品检测的简便快捷，提高了检测效率。目前现版《中国药典》中未见对照提取物应用于药材与饮片的薄层色谱鉴别中，对照提取物是中药的“标准”提取物，需依照国家药典委员会制订的《国家药品标准物质研制技术要求》的相关规定提供对照提取物的来源、原料的科名、拉丁学名、药用部位及有关的制备工艺，并详细描述颜色、气味、溶解度、稳定性等。

火麻仁，为桑科植物大麻（Cannabis sativa L.）的干燥成熟果实，是我国传统的亦药亦食的润下药，临床上用于治疗血虚津亏，肠燥便秘。2010版中国药典中以火麻仁对照药材作为火麻仁薄层鉴别用参照物，但由于火麻仁中含有大量的脂肪油，在贮藏过程中易发生复杂的化学变化，产生游离脂肪酸、过氧化物和低分子醛、酮类等分解产物，严重影响对照药材的稳定性和内在质量；此外，薄层鉴别时，尚需要将火麻仁对照药材经过回流脱脂、过滤、回流提取等流程，方能得到对照提取物，过程繁琐。因而亟需开发一种更稳定、更方便的火麻仁薄层鉴别用对照物质。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种火麻仁对照提取物的制备方法与用途，采用该制备方法得到的火麻仁对照提取物可替代火麻仁对照药材，用于处方中含有火麻仁的中药薄层色谱鉴别。

为实现本发明的上述目的，本发明提供一种火麻仁对照提取物的制备方法，包括以下步骤。

步骤1、乙醚脱脂：取火麻仁药材粉末200g，过二号筛，加乙醚1500ml，水浴（50℃）加热回流1小时，减压过滤，药渣再加乙醚500ml洗涤，弃去乙醚液。

步骤2、甲醇提取得浸膏：所述药渣加甲醇1500 ml，水浴（70℃）加热回流1小时提取1次，减压过滤，蒸干甲醇得浸膏，称重。

步骤3、拌硅胶后减压干燥：所述浸膏用100 ml甲醇复溶，加入与浸膏等重量的柱层析硅胶（200-300目），混匀，减压蒸干甲醇，过九号筛，即得火麻仁对照提取物。

所述火麻仁对照提取物为黄绿色至绿色粉末状固体，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在甲醇或乙醇中易溶，所述对照提取物在60℃条件下比较稳定，在相对湿度75%±5%的条件下吸湿比较严重。

本发明还提供一种火麻仁对照提取物的用途，所述火麻仁对照提取物替代火麻仁对照药材，作为薄层色谱鉴别用对照物使用。

与现有技术相比本发明的有益效果。

本发明提供一种火麻仁对照提取物的制备方法，与常规提取物一般为经溶剂提取制成的干燥浸膏的传统方法不同，本发明中火麻仁对照提取物直接干燥后得到的浸膏吸湿现象非常严重，暴露在空气中约1分钟即会吸湿成液态，不符合对照提取物研制要求中的稳定性要求，无制备意义。由此本制备方法首次采用了硅胶拌样的方法，使火麻仁对照提取物均匀吸附于硅胶上，降低了火麻仁对照提取物的吸湿性，大大增强了其均匀性和稳定性，最终得到了符合《国家药品标准物质研制技术要求》的粉末状对照提取物。本发明还提供了火麻仁对照提取物的用途，该对照提取物用于处方中含有火麻仁的中药薄层色谱鉴别，与现有薄层鉴别用对照药材相比，本发明中火麻仁对照提取物具有配制方便、性质稳定、均匀性良好、便于称量、贮存等特点，完全可以代替现有的火麻仁对照药材，作为薄层鉴别用对照物使用。

附图说明

图1为本发明火麻仁对照提取物的制备方法流程图。

图2为本发明火麻仁薄层色谱鉴别用对照提取物。

图3为火麻仁对照药材及本发明3批不同产地火麻仁药材制成的对照提取物的薄层色谱图。

图4为3批火麻仁药材的对照提取物影响因素试验5天稳定性考察TLC图。

图5为3批火麻仁药材的对照提取物影响因素试验10天稳定性考察TLC图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。

实施例1。

1．对照提取物的制备。

1.1仪器与试剂：电子分析天平（SHIMADZU AY220型，0.1mg，日本岛津）；高速万能粉碎机（FW-100型，北京市永光明医疗仪器厂）；紫外可见分光光度计（UVmini-1240型，日本岛津）；旋转蒸发仪（RE52CS型，上海亚荣生化仪器厂）；数显恒温水浴锅（HH-4，国华电器有限公司）；超声清洗器（KQ2200型，昆山市超声仪器有限公司）；电热鼓风干燥箱（101型，北京市永光明医疗仪器厂）；真空干燥箱（DZF-6021型，苏州江东精密仪器有限公司 ）；PQX智能人工气候箱（PQX-330A-12H，宁波莱福科技有限公司）；火麻仁对照药材（购自中国食品药品检定研究院，批号为：121097-201104）；3批次火麻仁药材分别产自河北、广西、贵州。

1.2方法与结果。

1.2.1提取方法考察。

1.2.1.1粉碎粒度的考察。

对粉碎粒度进行单因素考察，以提取物的过筛率和浸膏得率做为指标，结果如表1，表1为粉碎粒度和过筛率考察。其中，浸膏得率（%）=浸膏重量/药材粉末重量。

表1：粉碎粒度和过筛率考察。

粉碎粒度	过筛率（%）	浸膏得率（%）
			24目	>95	4.61
50目	75	5.80
			65目	60	6.77

由表1可知，药材的粉碎粒度越细，浸膏得率越高；但我们同时还发现，随着筛板目数的增加，药材的过筛率急剧下降。其主要原因在于，火麻仁药材的含油量特别高（可达30％），如果长时间过度粉碎，则油脂会大量析出，形成稠膏状固体，难以过筛；因此粉碎时间和强度都不宜过高，故而药材粒度较大，只能在24目筛时有较高的过筛率。

1.2.1.2提取条件的考察。

采用甲醇与乙醇作为考察溶剂，以提取物的浸膏得率做为指标，进行提取溶剂考察，结果如表2，表2为提取溶剂考察。

表2：提取溶剂考察。

提取溶剂	浸膏得率（%）
		甲醇	4.61
乙醇	3.89

由表2可知，甲醇提取率较高，优于乙醇提取率，故选用甲醇作为提取溶剂。

在确定甲醇为提取溶剂的基础上，进行药材与甲醇的料液比考察，以提取物的浸膏得率做为指标，结果见表3，表3为料液比考察。

表3：料液比（药材：甲醇）考察。

料液比（g/mL）	浸膏得率（%）
		1:5	3.82
1:7.5	4.61
		1:10	4.82
1:15	5.00

由表3可知，料液比（药材：甲醇）为1:7.5时，提取率较高。继续增加提取溶剂量，提取率上升不明显。本着节约的原则，选择料液比（药材：甲醇）为1:7.5。

在上述考察的基础上，进行提取次数的考察，以提取物的浸膏得率做为指标，结果见表4，表4为提取次数考察。

表4：提取次数考察。

提取次数	浸膏得率（%）
		1	4.61
2	4.87
		3	5.01
4	5.06

由表4可知，提取1次即可较充分提取。继续增加提取次数，提取率上升不明显。本着节约的原则，选择提取1次。

在上述考察的基础上，进行提取时间的考察，以提取物的浸膏得率做为指标，结果见表5，表5为提取时间考察。

表5：提取时间考察。

提取时间（h）	浸膏得率（%）
		0.5	3.69
1	4.61
		1.5	5.08
2	5.26

由表5可知，提取1h可较充分提取。继续增加提取时间，提取率有所上升。但提取时间超过1h时，会有较多胶质成分被提取出来，造成提取物难以溶解，且不易干燥，因此选择提取时间为1h。

脱脂后的火麻仁经甲醇提取，所得浸膏呈粘稠状胶质物。经真空干燥不能得到固体粉末，经冷冻干燥虽能成粉末，但极易吸湿，暴露在空气中，1分钟内即由粉末团聚成黏胶状物质，无法保存。所得胶状浸膏经甲醇/乙醇反复醇沉数次，可得到胶质较少的粉末状提取物，但得率太低（低于0.2%），无制备意义。

基于上述情况，我们最终选择了以硅胶吸附拌样的方式制备提取物粉末。我们选用了柱层析硅胶（200-300目，青岛海洋化工厂），考察了提取物浸膏与硅胶用量比（m/m），结果见表6，表6为硅胶加入量考察，其中，溶出率＝可溶解在甲醇中的提取物质量/吸附于硅胶上的提取物质量。

表6：硅胶加入量考察。

提取物浸膏与硅胶用量比（m/m）	是否成粉末	溶出率（%）
			2:1	否	-
1:1	是	57.9
			1:2	是	40.1

由表6可知，硅胶用量太少（提取物浸膏与硅胶用量比为2:1）时，吸附不完全，提取物不能成粉末状，仍未粘稠胶状物；硅胶用量太大（提取物浸膏与硅胶用量比为1:2）时，使吸附在硅胶上的物质太多，造成提取物溶出率降低。综合上述结果，我们认为提取物浸膏与硅胶用量比为1:1是比较合适的，此时提取物能完全吸附于硅胶颗粒上，且加甲醇溶解时，溶出率也较高。

1.2.2 最终制备方法，请参阅图1，为本发明火麻仁对照提取物的制备方法流程图。

步骤1、乙醚脱脂：取火麻仁药材粉末200g，过二号筛（24目），加乙醚1500ml，水浴加热回流1小时，水浴温度为50℃，减压过滤，药渣再加乙醚500ml洗涤，弃去乙醚液。

步骤2、甲醇提取得浸膏：所述药渣加甲醇1500ml（即药材：甲醇为1:7.5），水浴加热回流1小时提取1次，水浴温度70℃，减压过滤，蒸干甲醇，得浸膏，称重，应为9-10g。

步骤3、拌硅胶后减压干燥：所述浸膏用100ml甲醇复溶，加入与浸膏等重量的柱层析硅胶（200-300目）（即提取物浸膏与硅胶用量比为1:1），混匀，减压蒸干甲醇，过九号筛，即得火麻仁对照提取物。得率应为7％-9％。

2．对照提取物性状。

请参阅图2，为本发明火麻仁薄层色谱鉴别用对照提取物。所述对照提取物为黄绿色至绿色粉末；气微香；具吸湿性。

3．对照提取物的溶解性。

取所述对照提取物0.2g（吸附于硅胶上的提取物应为0.1g），加甲醇1ml，超声处理2分钟使溶解，3000rpm离心，取上清液80℃干燥3h，残留物即为可溶解在甲醇中的提取物，称重，计算溶出率。溶出率＝可溶解在甲醇中的提取物质量/吸附于硅胶上的提取物质量。表7为不同溶剂溶出率考察，采用其他溶剂时的溶出率计算方法参照采用甲醇溶剂时的溶出率计算方法。

表7：不同溶剂溶出率考察。

溶剂种类	溶出率（%）
		甲醇	58.0
乙醇	51.1
		水	19.6
石油醚	< 1
		乙醚	< 1

由表7可知，本发明火麻仁薄层色谱鉴别用对照提取物（除硅胶部分）在甲醇或乙醇中易溶，部分溶于水，在乙醚或石油醚中几乎不溶。

4．对照提取物替代对照药材的可行性验证。

取所述对照提取物粉末0.2g，加甲醇1ml，超声处理2分钟，离心，上清液作为供试品溶液。另取火麻仁对照药材2g，加乙醚50ml，加热回流1小时，滤过，药渣再加乙醚20ml洗涤，弃去乙醚液，药渣加甲醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5-10 l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:1:0.3，v/v/v）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％香草醛乙醇溶液-硫酸（1:1，v/v）混合溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3，为火麻仁对照药材及本发明3批不同产地火麻仁药材制成的对照提取物的薄层色谱（Thin LayerChromatography，TLC）图，其中从左至右依次为对照药材和3个不同产地（河北、广西、贵州）火麻仁对照提取物。

该结果表明，本发明对照提取物可代替火麻仁对照药材作为处方中含有火麻仁的中药薄层鉴别用对照物质。

5.对照提取物稳定性测试。

5.1方法与结果。

取三个不同产地（河北、广西、贵州）火麻仁对照提取物，按照国家药典委员会制订的“国家药品标准物质研制技术要求”的相关规定，考察指标包括性状、溶解性、鉴别等。

5.1.1影响因素试验。

5.1.1.1高温度试验。

供试品开口置适宜的洁净容器中，60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目进行检测。

性状与高温试验前无明显变化。薄层色谱图与高温试验前无明显变化，具体见图4和图5，图4为3批火麻仁药材对照提取物影响因素试验TLC图（5天稳定性考察），其中R：对照药材；标号1-4：火麻仁（河北）提取物试验前及高温、高湿度、光照试验后；标号5-8：火麻仁（广西）提取物试验前及高温、高湿度、光照试验后；标号9-12：火麻仁（贵州）提取物试验前及高温、高湿度、光照试验后。图5为3批火麻仁药材对照提取物影响因素试验TLC图（10天稳定性考察），其中R：对照药材；标号1-4：火麻仁（河北）对照提取物及高温、高湿度、光照考察结果；标号5-8：火麻仁（广西）对照提取物及高温、高湿度、光照考察结果；标号9-12：火麻仁（贵州）对照提取物及高温、高湿度、光照考察结果。具体的，高温为60℃，高湿度为相对湿度75%±5%，强光为4500xl±500xl。

溶出率无明显变化，具体见表8。

表8：高温度试验对对照提取物溶解性的影响。

产地	试验前溶出率（%）	第5天溶出率（%）	第10天溶出率（%）
				河北	58.0	58.4	56.8
广西	53.6	52.8	57.6
				贵州	50.6	54.6	53.8

5.2.1.2 高湿度试验。

按照《国家药品标准物质研制技术要求》的相关规定，供试品开口置恒湿密闭容器中，在25℃于相对湿度90%±5%条下放置10天，要求吸湿增重不得超过5%，否则应考察相对湿度75%下的稳定性。

结果在相对湿度90%条件下，样品吸湿高达30%-40%，因此我们将再样品置于相对湿度75%±5%条件下考察稳定性。样品在25℃于相对湿度75%±5%条下放置10天，于第5天和第10天分别取样，按稳定性重点考察项目要求检测，同时准确称量试验前后供试品的重量，以考察供试品的吸湿潮解性能。

性状与高湿度试验前有所变化，粉末颜色无明显变化，稍有结块现象。

薄层色谱图与高湿试验前无明显变化，具体见图4和图5。

在高湿度环境下（相对湿度75%±5%），粉末吸湿较明显，结果如表9。

溶解性无明显变化，具体见表10。

表9：高湿度试验对对照提取物吸湿性的影响。

产地	第5天吸湿增重（%）	第10天吸湿增重（%）
			河北	9.82	11.34
广西	10.64	11.10
			贵州	15.26	16.35

表10：高湿度试验对对照提取物溶解性的影响。

产地	试验前溶出率（%）	第5天溶出率（%）	第10天溶出率（%）
				河北	58.0	61.2	64.8
广西	53.6	62.8	60.2
				贵州	50.6	51.4	56.8

5.3稳定性试验结论。

稳定性影响因素实验结果表明，火麻仁对照提取物在高温（60℃）和强光（4500xl±500xl）条件下比较稳定，而在高湿度（相对湿度75%±5%）条件下吸湿比较严重，因此建议，本品应密闭，置干燥处保存。

综上所述，本发明提供的火麻仁对照提取物的制备方法，首次采用了硅胶拌样的方法，使火麻仁对照提取物均匀吸附于硅胶上，降低了火麻仁对照提取物的吸湿性，大大增强了其均匀性和稳定性，最终得到了符合《国家药品标准物质研制技术要求》的粉末状对照提取物。本发明还提供了火麻仁对照提取物的用途，该对照提取物具有配制方便、性质稳定、均匀性良好、便于称量、贮存等特点，完全可以替代现有的火麻仁对照药材，用于处方中含有火麻仁的中药薄层色谱鉴别。

Claims (4)

1.一种火麻仁对照提取物的制备方法，包括：

步骤1、乙醚脱脂：取火麻仁药材粉末，过二号筛，加乙醚，加热回流，滤过，药渣再加乙醚洗涤，弃去乙醚液；

步骤2、甲醇提取得浸膏：所述药渣加甲醇，加热回流提取，滤过，减压蒸干甲醇，得浸膏，称重；

步骤3、拌硅胶后减压干燥：所述浸膏用甲醇复溶，加入硅胶混匀，减压蒸干甲醇，过九号筛，即得火麻仁对照提取物。

2.如权利要求1所述的火麻仁对照提取物的制备方法，其特征在于：

步骤1、乙醚脱脂：取火麻仁药材粉末200g，过二号筛，加乙醚1500ml，温度为50℃的水浴加热回流1小时，减压过滤，药渣再加乙醚500ml洗涤，弃去乙醚液；

步骤2、甲醇提取得浸膏：所述药渣加甲醇1500 ml，温度为70℃的水浴加热回流1小时提取1次，减压过滤，蒸干甲醇得浸膏，称重；

步骤3、拌硅胶后减压干燥：所述浸膏用100 ml甲醇复溶，加入与浸膏等量的柱层析硅胶，硅胶的粒径为200-300目，混匀，减压蒸干甲醇，过九号筛，即得火麻仁对照提取物。

3.如权利要求1或2所述的火麻仁对照提取物的制备方法，其特征在于：所述火麻仁对照提取物为黄绿色至绿色粉末状固体，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，在甲醇或乙醇中易溶。

4.一种火麻仁对照提取物的用途，所述火麻仁对照提取物采用权利要求1的制备方法制成，其特征在于：所述火麻仁对照提取物替代火麻仁对照药材，作为薄层色谱鉴别用对照物使用。