CN111077242A - 一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物分析领域，一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法。所述方法为：(1)供试品的制备：精密取大承气汤，以无水乙醇稀释并定容，摇匀，离心，取上清液，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定。本发明能同时测定大承气汤中10种药效主要成分，操作便利，且为指纹图谱的建立提供了依据。本发明适用于由不同大黄炮制品制备的大承气汤的有效成分的测定，适用性范围广。

Description

一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法

技术领域

本发明涉及药物分析领域，一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法。

背景技术

大承气汤出自汉代张仲景的《伤寒论》，由大黄、枳实、厚朴和芒硝组成，是泻法的代表方剂，具有峻下热结的药效，主治阳明腑实证、热结旁流和里热实证等。中药大黄的主要活性成分是蒽醌类化合物，以游离型与结合型两种形式存在。大黄蒽醌类成分是中药大黄的泻下活性成分之一，厚朴中的厚朴酚类具有抗病原微生物和调整胃肠运动等作用，枳实中的黄酮类具有对胃肠道平滑肌、抗炎和利尿等药理作用。以上这些活性成分是大承气汤药理作用的主要物质基础，也是质量控制常用的指标物。

文献1(篇名：大承气汤的质量控制研究，作者：历淑芬等)中公开了一种大承气汤的HPLC分析方法，具体方法为：采用AgilentZorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，甲醇-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱，流速1.0mL·min^-1，进样量10μL，柱温25℃，双波长检测，芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的检测波长为280nm，芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚的检测波长为254nm。但该方法中并未能测定大承气汤中的大黄素甲醚的成分。

文献2(篇名“大承气汤”颗粒质量标准的研究，作者：魏俊峰)中公开了一种大承气汤中的大黄素甲醚的成分的高效液相分析方法，但该方法测定种类较小，只能测定大黄素、大黄酚、大黄酸、大黄素甲醚等4种成分。

目前尚未发现一种同时测定由不同炮制品大黄组成的大承气汤中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等10种成分的报道。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明提供一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)供试品的制备：精密取大承气汤，以无水乙醇稀释并定容，摇匀，离心，取上清液，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定；其中，步骤(2)中，色谱条件如下：采用C18键合硅胶色谱柱；柱温为30℃，以乙腈为流动相A，0.1％(V/V)的磷酸水溶液为流动相B，流动相的流速为1mL/min；

梯度洗脱：

0～16min，流动相A的体积百分比由2％变化至11％，流动相B的体积百分比由98％变化至89％，检测波长为280nm；

16～37min，流动相A的体积百分比由11％变化至19％，流动相B的体积百分比由89％变化至81％，检测波长为280nm；

37～46min，流动相A的体积百分比由19％变化至24％，流动相B的体积百分比由81％变化至76％，检测波长为280nm；

46～50min，流动相A的体积百分比由24％变化至30％，流动相B的体积百分比由76％变化至70％，检测波长为254nm；

50～58min，流动相A的体积百分比由30％变化至46％，流动相B的体积百分比由70％变化至54％，检测波长为254nm；

58～74min，流动相A的体积百分比由46％变化至55％，流动相B的体积百分比由54％变化至45％，检测波长为254nm；

74～100min，流动相A的体积百分比由55％变化至62％，流动相B的体积百分比由45％变化至38％，检测波长为254nm。

优选地，所述色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18，尺寸为：5μm，4.6mm ×250mm。

本发明还提供一种中药方剂大承气汤的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述建立方法应用了所述高效液相色谱分析方法。

与现有技术比较，本发明的方法具有以下优点：

1.本发明能同时测定大承气汤中10种药效主要成分，操作便利，且为指纹图谱的建立提供了依据。

2.本发明适用于由不同大黄炮制品制备的大承气汤的有效成分的测定，适用性范围广。

附图说明

图1为生大黄示意图。

图2为清蒸大黄示意图。

图3为熟大黄示意图。

图4为酒大黄示意图。

图5为醋大黄示意图。

图6为大黄炭示意图。

图7为混合对照品的色谱图。

图8为75％乙醇空白对照色谱图。

图9为生DCQT样品色谱图。

图10为清蒸DCQT样品色谱图。

图11为熟DCQT样品色谱图。

图12为酒DCQT样品色谱图。

图13为醋DCQT样品色谱图。

图14为炭DCQT样品色谱图。

图15为炭DCQT样品色谱图(放大倍数图)。

其中图7～图15中，图标1～11分别为11个成分的保留时间位置，具体地， 1为柚皮苷，2为橙皮苷，3为新橙皮苷，4为芦荟大黄素，5为大黄酸，6为和厚朴酚，7为厚朴酚，8为大黄素，9为大黄酚，10为大黄素甲醚，11为未知杂质。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1同时测定大黄不同炮制品大承气汤中10个活性成分含量

一、实验材料

1.1仪器

2695型高效液相色谱仪，包括2489UV，四元泵、真空脱气泵、自动进样器、柱温箱和Empower3液相工作站(美国Waters公司)； KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；电子分析天平 (上海申生科技有限公司，D1810C)；DHG-9203A型电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)；TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；

Simplicity纯水系统；(法国，密理博)；HWS-26电热恒温水浴锅(上海齐欣科学仪器有限公司)；WND-200万能粉碎机(天津太斯特仪器有限公司)；SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；尼龙 66(Nylon)-22μm微孔滤膜(天津津腾试验设备有限公司)；纯水仪(密理博中国有限公司)。

1.2试剂及药材

中药饮片大黄(产地：四川，批号160307001)、枳实(产地：江西，批号160101771)、姜厚朴(产地：陕西，批号160507021)和芒硝(产地：青海，批号160307611)。生大黄、枳实、厚朴及芒硝购于广东康美药业有限公司，经广西中医药大学药用植物教研室李斌副教授鉴定，中药大黄为蓼科植物药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根和根茎，枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果，厚朴为木兰科植物厚朴 Magnoliaofficinalis Rehd.et Wils.或凹叶厚朴Magnolia offi14cinalis Rehd. etWils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮，以上三味中药粉碎过10目筛。芒硝，中药名，经鉴定为硫酸盐类矿物芒硝族芒硝，为结晶体，主要含十水硫酸钠(Na2SO4·10H2O)；所用炮制品都是使用上述生大黄按照《全国中药饮片炮制规范》和2015年版《中国药典》的炮制方法炮制。芦荟大黄素(批号:160520，纯度>98％)；大黄素(批号:170224，纯度>98％)；大黄素甲醚(批号:160602，纯度>98％)；大黄酚(批号:20160124，纯度>98％)；大黄酸(批号:170219，纯度>98％)；柚皮苷(批号:161223，纯度>98％)；橙皮苷(批号:170213，纯度>98％)；新橙皮苷(批号:161226，纯度>98％)；厚朴酚(批号:161107，纯度>98％)；和厚朴酚(批号:161129，纯度>98％)均购自上海融禾医药科技发展有限公司；色谱甲醇和色谱乙腈均为美国Fisher公司提供，甲醇、乙醇和磷酸为分析纯，试验用水为超纯水。

二、实验方法

2.1大黄炮制品的制备

生大黄：取大黄原药材除去杂质，大小分档，清洗干净，用清水浸泡约六成湿，捞出，焖润到内外湿度一致时，切成片，晾干或烘干，筛去碎屑即可。见图1。

清蒸大黄：取洗净生大黄片放入蒸制容器内，置水锅上，加热蒸约4h，表而显微黑棕色，取出，晒干或烘干。见图2。

熟大黄：将大小分档的洗净大黄片用黄酒拌匀，大黄：黄酒＝100：20～30 (质量比)，焖润至黄酒全部被吸尽，放入蒸制容器内密闭，置水锅上武火加热蒸4-6h(注意随时加水，避免干锅)至大黄内外均呈黑褐色时取出，晒至七八成干，再与蒸液拌匀吸尽后，晒干或烘干。见图3。

酒大黄(酒炙大黄)：取洗净生大黄片置于容器内，加入定量黄酒喷洒拌匀，生大黄：黄酒＝10:1(质量比)，焖润至黄酒全部被吸尽，置炒药锅内，用文火加热(文火炒干)，翻炒至表而显深黄色，色泽加深，微带焦斑时取出，摊开晾干，筛去碎屑即可。见图4。

醋大黄：取洗净生大黄片，置于大烧杯之内，加入适量米醋喷洒拌匀，焖润约3.5h(米醋全部被吸尽)，置中药炒锅内，用文火慢慢加热，翻炒至表面色泽加深，略带焦斑时取出(表面深棕色，断面浅棕色，有醋香气时取出)，取出晾凉即可(大黄与米醋的比例为100：15)。见图5。

大黄炭：将大小分档的洗净生大黄片，置炒药锅内，先用文火加温，渐至武火，武火加热炒到外表呈焦黑色，断面焦褐色，翻炒到出现浓烟见火星，表面显黑色，内部显深棕色，略有焦香味，随即均匀喷洒清水后，灭净火星，取出凉干。见图6。

2.2大黄承气汤提取液的制备

精密称取厚朴药材粉末2.4g，枳实1.2g，大黄炮制品1.2g，芒硝0.9g，分别精密称定，厚朴与枳实加纯水50ml，药材浸泡30min，加热煮沸后保持微沸30min，500目滤布滤过，药渣再加纯水50ml，浸泡30min后，加热煮沸后保持微沸30min，滤过，合并两次滤液并加入大黄粉末，浸泡 20min，加热煮沸后保持微沸20min，用500目滤布滤过，药渣再加纯水30ml，加热煮沸后保持微沸20min,滤过，合并滤液，趁热加入芒硝，搅拌使溶解，将滤液转移至100ml量瓶中，加纯水稀释至刻度，摇匀，得大承气汤全方水提液，标记为DCQT。每种炮制品的大承气汤制备6份，分别编号为生DCQT1-6，清蒸DCQT1-6，熟DCQT1-6，酒DCQT1-6，醋DCQT1-6，炭DCQT1-6。

2.3供试品溶液的制备

精确量取“2.2”项提取液各5ml，分别置于20ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取适量13000r/min离心10min，取上清液适量，22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得大承气汤供试品溶液。

2.4混合对照品溶液的制备

分别取柚皮苷10.80mg、橙皮苷10.70mg、新橙皮苷12.50mg、芦荟大黄素10.50mg、大黄酸11.20mg、和厚朴酚11.00mg、厚朴酚10.80mg、大黄素11.50mg、大黄酚11.00mg及大黄素甲醚10.80mg，精密称定，分别置于10个10ml的容量瓶中，加甲醇使之溶解定容至刻度，摇匀，即得各对照品储备液。分别精密吸取各对照品储备液适量，置于同一个10ml 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混合均匀，即得混合对照品溶液。

2.5色谱条件

色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(5μm，4.6mmX250mm)，流动相为乙腈(A)-0.1％(V/V)磷酸水溶液(B)，梯度洗脱：洗脱程序见表1，流速1ml/min，柱温为30℃，进样量10μl，设定柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷检测波长为280nm，芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚检测波长为254nm。

梯度洗脱程序：

0～16min，流动相A的体积百分比由2％变化至11％，流动相B的体积百分比由98％变化至89％，检测波长为280nm；

16～37min，流动相A的体积百分比由11％变化至19％，流动相B的体积百分比由89％变化至81％，检测波长为280nm；

37～46min，流动相A的体积百分比由19％变化至24％，流动相B的体积百分比由81％变化至76％，检测波长为280nm；

46～50min，流动相A的体积百分比由24％变化至30％，流动相B的体积百分比由76％变化至70％，检测波长为254nm；

50～58min，流动相A的体积百分比由30％变化至46％，流动相B的体积百分比由70％变化至54％，检测波长为254nm；

58～74min，流动相A的体积百分比由46％变化至55％，流动相B的体积百分比由54％变化至45％，检测波长为254nm；

74～100min，流动相A的体积百分比由55％变化至62％，流动相B的体积百分比由45％变化至38％，检测波长为254nm；

2.6测定结果

理论塔板数以橙皮苷峰计算应不低于3000，以柚皮苷峰计算不低于 4000，以大黄素计算应不低于3 000。大承气汤中的10个活性成分都能达到较好分离，样品中其它成分对测定成分无干扰。测定结果见图7～图15及表1。如图7～图15所示，其中标记1为柚皮苷；标记2为橙皮苷；标记3为新橙皮苷；标记4为芦荟大黄素；标记5为大黄酸；标记6为厚朴酚；标记7为厚朴酚；标记8为大黄素；标记9为大黄酚；标记10为大黄素甲醚；标记11 为未知峰(杂质)。

实施例2阴性对照实验

按照实施例1的“2.2项”下方法制备样品，分别制备不含大黄炮制品、厚朴、枳实和芒硝的大承气汤阴性样品，然后按实施例1的“2.3项”下方法制备供试品阴性对照液，离心，0.45μm微孔滤膜滤过保存备用。供试品溶液、混合对照品溶液和阴性对照液分别进样10μl，测定其含量，柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的保留时间分别约为：42.7、44.1、45.9、62.3、64.9、 72.1、73.5、79.1、83.7、90.8min。经过实验色谱图比较，表明阴性对照无干扰。

实施例3色谱条件的考察

一、流动相的选择

考察比较了甲醇-水、甲醇-0.1％冰醋酸、甲醇-0.3％冰醋酸、甲醇-0.2％磷酸、甲醇-0.1％磷酸、甲醇-0.05％磷酸、乙腈-水、乙腈-0.1％磷酸和乙腈-0.2％磷酸等洗脱系统对出峰时间、分离度和基线的影响，结果发现，使用乙腈-0.1％磷酸系统，对色谱峰分离度的较好，基线较平稳，适当的调整梯度洗脱程序，都能使各峰达到良好的分离，且基线较平衡，因此釆用乙腈-0.1％磷酸系统进行梯度洗脱。

二、洗脱条件的选择

考察不同柱温、流速对分离度、出峰时间以及基线是否平稳的影响。考察20℃，25℃，30℃和35℃对分离度、出峰时间以及基线是否平稳的影响，试验结果表明，柱温对其的影响较小，因此柱温采用30℃；还考察3种不同流速1.2ml/min、1.0ml/min、0.8ml/min对分离度的影响，试验结果的色谱图显示1.0ml/min时分离度较好，基线也较平衡，故采用的流速为1.0ml/min。

实施例4标准曲线的制作

分别精密吸取上述实施例1中的对照品溶液，置棕色容量瓶中混合，然后甲醇定容至刻度，配制成7个不同浓度的大承气汤混合对照品溶液，进样量为10μl，分别进样，液相色谱仪检测，测定峰面积，以浓度(μg/ml) 为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程，回归方程见表2-表3。

将混合对照品溶液逐步稀释，得一系列混合对照品溶液，按实施例1 的条件分别进样，测定其信号(以峰高计)与噪声比值，将S/N＝3时的浓度定为检测限(LOD)，将S/N＝10时的浓度定为定量限(LOQ)。各组分在各自含量范围内线性关系良好，结果见表2-表3。

实施例5精密度试验

取同一生DCQT供试品溶液，连续进样6次，按照“2.6项”下的方法进行测定各活性成分的峰面积，结果测得生DCQT中的柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的峰面积的RSD分别为1.59％、2.69％、2.07％、2.44％、2.51％、2.34％、2.48％、2.43％、2.93％和2.50％，结果RSD均小于3.00％，说明仪器精密度良好。结果见表4。

实施例6稳定性实验

精密吸取同一DCQT供试品溶液，按实施例1的方法制备成供试品溶液，分别于供试品溶液制备后在0h，2h，4h，8h，12h，24h进样测定，按照实施例1的方法进行测定各DCQT供试品中10种成分的峰面积，结果计算得DCQT供试品中的柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积的RSD。其结果RSD都小于3.0％，表明供试品溶液在24h内稳定。试验结果见表 5-表10。

实施例7重复性实验

精密量取生DCQT、清蒸DCQT、熟DCQT、酒DCQT、醋DCQT 和炭DCQT的样品各6份，按实施例1下的方法制备成供试品溶液，并按照实施例1下的色谱条件分别检测分析，测定各供试品的峰面积，计算各DCQT提取液中的柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的平均质量浓度和对应成分的质量浓度的RSD，试验结果见表11-表16，表明重复性良好。

实施例8加样回收实验

减半精密量取生DCQT、清蒸DCQT、熟DCQT、酒DCQT、醋 DCQT和炭DCQT的样品各6份，分别加入对照品溶液适量(柚皮苷 1.08mg/ml、橙皮苷1.07mg/ml、新橙皮苷1.25mg/ml、芦荟大黄素 1.05mg/ml、大黄酸1.12mg/ml、和厚朴酚1.10mg/ml、厚朴酚1.08mg/ml、大黄素1.15mg/ml、大黄酚1.10mg/ml和大黄素甲醚1.08mg/ml)，按照供试品溶液的制备方法制备，续滤液以13000r/min高速离心10min，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，按照实施例1下的色谱条件测定，计算各DCQT提取液中的柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、芦荟大黄素、大黄酸、和厚朴酚、厚朴酚、大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的平均回收率和对应的 RSD值。结果见表17～表22，表明该方法准确性良好。

表1 DCQT样品测定结果(质量浓度μg/ml)(n＝6)

成分/样品	生DCQT	清蒸DCQT	熟DCQT	酒DCQT	醋DCQT	炭DCQT
							柚皮苷	893.39	851.11	850.72	868.14	894.24	890.44
橙皮苷	18.98	20.61	21.98	23.16	22.86	24.20
							新橙皮苷	499.05	459.09	487.42	483.89	504.48	498.73
芦荟大黄素	12.26	6.54	7.05	6.93	7.83	/
							大黄酸	41.10	24.02	26.93	27.95	34.15	2.13
和厚朴酚	27.65	20.32	20.10	19.62	20.34	19.24
							厚朴酚	74.15	75.28	73.11	74.06	74.85	73.60
大黄素	17.06	14.68	12.51	13.88	13.96	6.63
							大黄酚	40.65	38.12	38.03	38.84	39.07	6.93
大黄素甲醚	18.74	14.02	13.92	14.16	13.94	/

表2线性回归方程

表3炭DCQT的线性回归方程

表4生DCQT精密度试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4557850	1.59％
橙皮苷	107272	2.69％
			新橙皮苷	2611803	2.07％
芦荟大黄素	169362	2.44％
			大黄酸	413332	2.51％
和厚朴酚	202294	2.34％
			厚朴酚	208876	2.48％
大黄素	168455	2.43％
			大黄酚	305485	2.93％
大黄素甲醚	73114	2.50％

表5生DCQT稳定性试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4557290	1.78％
橙皮苷	109951	2.62％
			新橙皮苷	2639250	1.88％
芦荟大黄素	177742	2.98％
			大黄酸	434559	1.95％
和厚朴酚	210784	2.36％
			厚朴酚	205083	1.95％
大黄素	162507	2.65％
			大黄酚	304304	2.11％
大黄素甲醚	70402	1.88％

表6清蒸DCQT稳定性试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4223025	2.51％
橙皮苷	112196	2.90％
			新橙皮苷	2398105	1.89％
芦荟大黄素	110740	2.21％
			大黄酸	2634744	2.57％
和厚朴酚	1546024	2.97％
			厚朴酚	2075704	2.36％
大黄素	150240	1.94％
			大黄酚	3035274	2.55％
大黄素甲醚	58284	2.34％

表7熟DCQT稳定性试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4492387	1.97％
橙皮苷	126961	2.83％
			新橙皮苷	2528694	1.48％
芦荟大黄素	128023	2.25％
			大黄酸	307839	2.73％
和厚朴酚	128192	2.02％
			厚朴酚	196796	1.47％
大黄素	107407	2.48％
			大黄酚	297279	1.54％
大黄素甲醚	59416	2.51％

表8酒DCQT稳定性试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4532668	1.93％
橙皮苷	121090	1.61％
			新橙皮苷	2514260	1.64％
芦荟大黄素	125170	2.82％
			大黄酸	314740	2.15％
和厚朴酚	216435	2.37％
			厚朴酚	124073	2.19％
大黄素	156851	2.92％
			大黄酚	307575	2.63％
大黄素甲醚	69947	2.31％

表9醋DCQT稳定性试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4605525	2.01％
橙皮苷	129126	2.54％
			新橙皮苷	2630820	2.37％
芦荟大黄素	158008	2.98％
			大黄酸	376518	1.48％
和厚朴酚	163925	2.53％
			厚朴酚	212418	2.15％
大黄素	143143	2.69％
			大黄酚	308514	2.06％
大黄素甲醚	59523	2.83％

表10炭DCQT稳定性试验结果(n＝6)

成分	平均峰面积(A)	RSD(％)
			柚皮苷	4583855	1.09％
橙皮苷	122732	2.36％
			新橙皮苷	2681252	1.63％
芦荟大黄素	--	--
			大黄酸	29313	3.12％
和厚朴酚	141533	2.45％
			厚朴酚	208704	2.36％
大黄素	59105	2.17％
			大黄酚	51553	2.83％
大黄素甲醚	--	--

表11生DCQT重复性试验结果(n＝6)

成分	平均质量浓度(μg/ml)	RSD(％)
			柚皮苷	893.57	2.40％
橙皮苷	18.76	3.28％
			新橙皮苷	502.19	1.49％
芦荟大黄素	11.73	3.74％
			大黄酸	40.28	3.66％
和厚朴酚	27.67	1.96％
			厚朴酚	75.14	2.81％
大黄素	17.17	3.11％
			大黄酚	40.42	2.40％
大黄素甲醚	18.40	3.83％

表12清蒸DCQT重复性试验结果(n＝6)

成分	平均质量浓度(μg/ml)	RSD(％)
			柚皮苷	843.68	1.49％
橙皮苷	18.96	1.94％
			新橙皮苷	453.71	1.42％
芦荟大黄素	5.89	3.34％
			大黄酸	23.52	2.97％
和厚朴酚	20.50	3.09％
			厚朴酚	73.78	3.19％
大黄素	14.27	3.55％
			大黄酚	37.51	2.24％
大黄素甲醚	13.49	1.87％

表13熟DCQT重复性试验结果(n＝6)

成分	平均质量浓度(μg/ml)	RSD(％)
			柚皮苷	856.16	1.63％
橙皮苷	21.13	2.58％
			新橙皮苷	483.27	1.57％
芦荟大黄素	6.37	2.73％
			大黄酸	27.01	2.91％
和厚朴酚	19.77	2.01％
			厚朴酚	72.14	2.32％
大黄素	12.25	1.95％
			大黄酚	37.79	2.68％
大黄素甲醚	13.34	3.38％

表14酒DCQT重复性试验结果(n＝6)

成分	平均质量浓度(μg/ml)	RSD(％)
			柚皮苷	864.56	2.03％
橙皮苷	21.83	2.72％
			新橙皮苷	481.81	2.99％
芦荟大黄素	6.19	2.61％
			大黄酸	2.86％	2.86％
和厚朴酚	20.07	2.03％
			厚朴酚	73.25	2.57％
大黄素	13.81	3.04％
			大黄酚	38.60	2.84％
大黄素甲醚	14.20	3.67％

表15醋DCQT重复性试验结果(n＝6)

成分	平均质量浓度(μg/ml)	RSD(％)
			柚皮苷	903.70	1.02％
橙皮苷	22.07	3.22％
			新橙皮苷	502.08	1.96％
芦荟大黄素	6.84	3.05％
			大黄酸	33.85	2.49％
和厚朴酚	20.64	2.58％
			厚朴酚	74.05	3.07％
大黄素	14.27	2.91％
			大黄酚	39.13	2.28％
黄素甲醚	13.59	2.92％

表16炭DCQT重复性试验结果(n＝6)

成分	平均质量浓度(μg/ml)	RSD(％)
			柚皮苷	876.71	1.04％
橙皮苷	22.67	3.07％
			新橙皮苷	495.87	2.28％
芦荟大黄素	--	--
			大黄酸	2.03	2.75％
和厚朴酚	19.07	1.98％
			厚朴酚	71.95	2.47％
大黄素	5.72	3.58％
			大黄酚	6.91	2.67％
大黄素甲醚	--	--

表17生DCQT加样回收试验结果(n＝6)

成分	平均回收率(％)	RSD(％)
			柚皮苷	98.60％	2.67％
橙皮苷	101.01％	3.08％
			新橙皮苷	99.23％	2.79％
芦荟大黄素	100.09％	2.99％
			大黄酸	99.64％	3.06％
和厚朴酚	100.22％	3.01％
			厚朴酚	100.26％	2.28％
大黄素	99.65％	2.38％
			大黄酚	99.53％	2.69％
大黄素甲醚	100.07％	2.47％

表18清蒸DCQT加样回收率试验结果(n＝6)

成分	平均回收率(％)	RSD(％)
			柚皮苷	99.08％	2.51％
橙皮苷	98.65％	2.52％
			新橙皮苷	98.57％	3.24％
芦荟大黄素	99.81％	2.76％
			大黄酸	99.50％	2.07％
和厚朴酚	99.60％	3.22％
			厚朴酚	100.82％	3.13％
大黄素	99.65％	3.31％
			大黄酚	99.43％	2.91％
大黄素甲醚	100.52％	3.86％

表19熟DCQT加样回收率试验结果(n＝6)

成分	平均回收率(％)	RSD(％)
			柚皮苷	98.94％	2.65％
橙皮苷	100.87％	3.03％
			新橙皮苷	99.15％	2.48％
芦荟大黄素	100.29％	2.83％
			大黄酸	100.86％	2.84％
和厚朴酚	99.77％	3.39％
			厚朴酚	98.50％	2.55％
大黄素	98.54％	3.53％
			大黄酚	98.81％	2.17％
大黄素甲醚	98.80％	2.95％

表20酒DCQT加样回收率试验结果(n＝6)

成分	平均回收率(％)	RSD(％)
			柚皮苷	100.34％	3.15％
橙皮苷	99.15％	4.05％
			新橙皮苷	98.61％	2.37％
芦荟大黄素	99.93％	3.13％
			大黄酸	99.73％	2.72％
和厚朴酚	99.22％	2.95％
			厚朴酚	99.87％	2.41％
大黄素	99.67％	3.19％
			大黄酚	98.90％	2.39％
大黄素甲醚	99.35％	3.24％

表21醋DCQT加样回收率试验结果(n＝6)

成分	平均回收率(％)	RSD(％)
			柚皮苷	98.57％	2.45％
橙皮苷	100.22％	3.63％
			新橙皮苷	98.39％	2.24％
芦荟大黄素	101.29％	3.68％
			大黄酸	98.71％	2.67％
和厚朴酚	98.88％	2.55％
			厚朴酚	99.38％	3.01％
大黄素	98.65％	2.77％
			大黄酚	100.38％	2.81％
大黄素甲醚	98.99％	3.73％

表22炭DCQT加样回收率试验结果(n＝6)

成分	平均回收率(％)	RSD(％)
			柚皮苷	99.15％	2.67％
橙皮苷	98.39％	3.38％
			新橙皮苷	98.84％	2.32％
芦荟大黄素	--	--
			大黄酸	99.22％	4.12％
和厚朴酚	98.33％	3.31％
			厚朴酚	98.82％	2.15％
大黄素	100.13％	3.57％
			大黄酚	99.81％	4.35％
大黄素甲醚	--	--

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (3)

1.一种中药方剂大承气汤的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)供试品的制备：精密取大承气汤，以无水乙醇稀释并定容，摇匀，离心，取上清液，过滤，取续滤液，即得供试品溶液；

(2)高效液相色谱测定：精密吸取供试品溶液，注入高效液相色谱仪测定；其中，步骤(2)中，色谱条件如下：采用C18键合硅胶色谱柱；柱温为30℃，以乙腈为流动相A，0.1％(V/V)的磷酸水溶液为流动相B，流动相的流速为1mL/min；

梯度洗脱：

0～16min，流动相A的体积百分比由2％变化至11％，流动相B的体积百分比由98％变化至89％，检测波长为280nm；

16～37min，流动相A的体积百分比由11％变化至19％，流动相B的体积百分比由89％变化至81％，检测波长为280nm；

37～46min，流动相A的体积百分比由19％变化至24％，流动相B的体积百分比由81％变化至76％，检测波长为280nm；

46～50min，流动相A的体积百分比由24％变化至30％，流动相B的体积百分比由76％变化至70％，检测波长为254nm；

50～58min，流动相A的体积百分比由30％变化至46％，流动相B的体积百分比由70％变化至54％，检测波长为254nm；

58～74min，流动相A的体积百分比由46％变化至55％，流动相B的体积百分比由54％变化至45％，检测波长为254nm；

74～100min，流动相A的体积百分比由55％变化至62％，流动相B的体积百分比由45％变化至38％，检测波长为254nm。

2.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，所述色谱柱为AgilentZorbax SB-C18，尺寸为：5μm，4.6mm×250mm。

3.一种中药方剂大承气汤的指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述建立方法应用了权利要求1或2所述的高效液相色谱分析方法。

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