CN101408531A - 一种四季三黄丸的质量检测方法 - Google Patents
一种四季三黄丸的质量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101408531A CN101408531A CNA200810137718XA CN200810137718A CN101408531A CN 101408531 A CN101408531 A CN 101408531A CN A200810137718X A CNA200810137718X A CN A200810137718XA CN 200810137718 A CN200810137718 A CN 200810137718A CN 101408531 A CN101408531 A CN 101408531A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- reference substance
- medicinal material
- methyl alcohol
- chromatogram
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明属于中药技术领域，具体说是涉及一种四季三黄丸的质量检测方法，本发明通过显微鉴别大黄、黄柏、黄芩、栀子；采用薄层色谱法鉴别大黄、黄柏、黄芩、栀子；采用高效液相法测定大黄素、大黄酚的总量，通过建立明确专属性强的鉴别方法，能够更好的从药材、投料控制药物的质量，进一步完善原有质量检验方法及标准。保证了患者服用的有效性，安全性，克服现有技术的弊端，提高产品的质量、疗效、生物利用度，更好地满足医疗的需要。
Description
技术领域：
本发明属于中药技术领域，具体说是涉及一种四季三黄丸的质量检测方法。
背景技术：
四季三黄丸为中华人民共和国卫生部药品标准第二册76页收载的品种，本品是由大黄、黄柏、黄芩、栀子等4味药材经粉碎成细粉，用水泛丸制成的水丸。原部颁标准中缺少理化鉴别及含量检测方法，无法从根本上控制药品的质量，故在本品仿制研究中，根据本品处方组成，剂型及工艺，结合方中主要组成药物所含化学成分及其理化性质，在原部颁标准的基础上，增加了方中主要组成药物大黄、黄柏、黄芩、栀子的薄层鉴别，并增加了本品的显微特征鉴别；以高效液相色谱法，对方中主要成份大黄所含的大黄酚和大黄素进行了含量测定，建立和制定了含量测定检控指标，并对本品进行了重金属及砷盐的限量考察。从而大幅度的提升和完善了本品的内在质量标准。
发明内容：
本发明的目的是提供一种四季三黄丸的质量检测方法，解决了技术难题，改进原质量标准，增加了四季三黄丸中大黄、黄柏、黄芩、栀子的薄层鉴别；提高了质量标准，加强了该药的质量可控性，保证了患者服用的有效性，克服现有技术的弊端，提高产品的质量、疗效、生物利用度，更好地满足医疗的需要。
本发明的目的是由以下技术方案实现的：
一种四季三黄丸的质量检测方法，其特点在于：该方法中的鉴别方法是以下的一种或几种：
a、鉴别：
(1)四季三黄丸的显微鉴别：取四季三黄丸，研细，置显微镜下观察，可见其中药材的特征结构。
(2)取四季三黄丸1～5g，研细，加甲醇5～50ml，加热回流20～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～30ml，盐酸0.5～5ml，加热回流10～60分钟，立即冷却，加乙醚10～50ml提取，分取乙醚层，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～5ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1～5g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(5～40∶2～10∶0.5～5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
(3)取四季三黄丸1～5g，研细，加甲醇5～50ml，置水浴中加热回流10～30分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩使成0.5～3ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.2～2g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各1～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(2～20∶1～6∶0.5～5∶0.5～5∶0.2～2)为展开剂，置用氨蒸气预饱和5～30分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取四季三黄丸2～10g，研细，加甲醇10～50ml，加热回流0.5～1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～30ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次5～30ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇0.5～2ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5～3g，同法制得对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各1～10μl，对照品溶液5～20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(2～10∶1～8∶0.5～5∶0.5～5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取四季三黄丸5～50g，研细，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)加热回流0.5～1.5小时，弃去石油醚液，再加三氯甲烷加热回流提取0.5～2小时，弃去三氯甲烷液，再加乙醇回流提取0.5～2小时，乙醇提取液蒸干，残渣加乙醇2～10ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2～20μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5～20∶3～15∶1～5∶0.2～2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
b含量测定：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸溶液(85∶15)为流动相；检测波长254nm。理论板数按大黄素峰和大黄酚峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄酚对照品，精密称定，加乙腈制成每1ml含大黄素20～100μg、大黄酚50～200μg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：取四季三黄丸，研细，取约0.5～5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加乙醇10～50ml，密塞，称定重量，置水浴回流10～60分钟，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5～40ml，置锥形瓶中，挥去乙醇，加20％硫酸溶液5～20ml，超声处理(功率160W，频率40kHz)2～10分钟，再加三氯甲烷10～50ml，置水浴中加热回流水解30～100分钟，立即冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次5～50ml，合并三氯甲烷液，加入无水硫酸钠1～10g，脱水，滤过，用少量三氯甲烷洗涤残渣，合并，回收三氯甲烷溶剂至干，残渣加乙腈溶解，并转移至5～50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～50μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每克含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)总量计，不得少于2.2mg。
该方法中的a鉴别方法和b含量测定是以下方法的一种或几种：
a鉴别：
(1)取四季三黄丸置显微镜下观察：纤维鲜黄色，直径16～38μm，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚。石细胞鲜黄色，类圆形，直径35～128μm，有的成分枝状，枝端锐尖，壁厚，层纹明显；有的可见大型纤维状的石细胞，长可达900μm。果皮石细胞类长方形；果皮纤维细长，梭形，直径10μm，长约至110μm，常交错、斜向镶嵌状排列；含晶石细胞类圆形或多角形，直径17～31μm，壁厚，胞腔内含草酸钙方晶，直径约8μm。
(2)取四季三黄丸2g，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，加乙醚20ml提取，分取乙醚层，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。另取大黄对照药材2g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色。
(3)取四季三黄丸2g，研细，加甲醇15ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩使成1ml，作为供试品溶液。另取黄柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，置用氨蒸气预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
(4)取四季三黄丸3g，研细，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1g，同法制得对照药材溶液。再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl，对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)取四季三黄丸10g，研细，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)加热回流1小时，弃去石油醚液，再加三氯甲烷加热回流提取1小时，弃去三氯甲烷液，再加乙醇回流提取1小时，乙醇提取液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各8μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶7∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
b含量测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸溶液(85∶15)为流动相；检测波长254nm。理论板数按大黄素峰和大黄酚峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄酚对照品，精密称定，加乙腈制成每1ml含大黄素50μg、大黄酚100μg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备：取四季三黄丸，研细，取约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加乙醇20ml，密塞，称定重量，置水浴回流30分钟，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液10ml，置锥形瓶中，挥去乙醇，加20％硫酸溶液10ml，超声处理(功率160W，频率40kHz)5分钟，再加三氯甲烷20ml，置水浴中加热回流水解60分钟，立即冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，加入无水硫酸钠2.5g，脱水，滤过，用少量三氯甲烷洗涤残渣，合并，回收三氯甲烷溶剂至干，残渣加乙腈溶解，并转移至10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每克含大黄以大黄素(C15H10O5)和大黄酚(C15H10O4)总量计，不得少于2.2mg。
本发明的有益效果：
本发明通过显微鉴别大黄、黄柏、黄芩、栀子；采用薄层色谱法鉴别大黄、黄柏、黄芩、栀子；采用高效液相法测定大黄素、大黄酚的总量，通过建立明确专属性强的鉴别方法，能够更好的从药材、投料控制药物的质量，进一步完善原有质量检验方法及标准。保证了患者服用的有效性，安全性，克服现有技术的弊端，提高产品的质量、疗效、生物利用度，更好地满足医疗的需要。
附图说明：
图1是本发明大黄的薄层鉴别；
图2是本发明栀子的薄层鉴别；
图3是本发明黄柏的薄层鉴别；
图4是本发明黄芩的薄层鉴别；
图5是本发明大黄酚对照品溶液紫外扫描；
图6是本发明大黄素和大黄酚对照品高效液相图；
图7是本发明样品溶液高效液相图；
图8是本发明阴性对照溶液高效液图；
图9大黄素标准曲线；
图10大黄酚标准曲线；
具体实施方法：
鉴别：
1四季三黄丸的显微鉴别：
(1)取四季三黄丸置显微镜下观察：纤维鲜黄色，直径16～38μm，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；含晶细胞壁木化增厚。石细胞鲜黄色，类圆形，直径35～128μm，有的成分枝状，枝端锐尖，壁厚，层纹明显；有的可见大型纤维状的石细胞，长可达900μm。果皮石细胞类长方形；果皮纤维细长，梭形，直径10μm，长约至110μm，常交错、斜向镶嵌状排列；含晶石细胞类圆形或多角形，直径17～31μm，壁厚，胞腔内含草酸钙方晶，直径约8μm。
2大黄的薄层鉴别：
供试品的制备：取四季三黄丸2g，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，加乙醚20ml提取，分取乙醚层，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：另取大黄对照药材2g，同法制成对照药材溶液。
对照品溶液的制备：再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性样品溶液的制备：取相同工艺制备的缺大黄阴性供试品同法制备阴性供试品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述四种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，阴性对照无对应斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，见图1。
3栀子的薄层鉴别：
供试品的制备：取四季三黄丸10g，研细，置索氏提取器中，加石油醚(60～90℃)加热回流1小时，弃去石油醚液，再加三氯甲烷加热回流提取1小时，弃去三氯甲烷液，再加乙醇回流提取1小时，乙醇提取液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性样品溶液的制备：取相同工艺制备的缺栀子阴性供试品同法制备阴性供试品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各8μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(10∶7∶2∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性液无对应斑点，见图2。
4黄柏的薄层鉴别：
供试品的制备：取本品2g，研细，加甲醇15ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩使成1ml，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：另取黄柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。
对照品溶液的制备：再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性样品溶液的制备：取相同工艺制备的缺黄柏阴性供试品同法制备阴性供试品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，置用氨蒸气预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无对应斑点，见图3。
5黄芩的薄层鉴别：
供试品的制备：取四季三黄丸3g，研细，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液的制备：另取黄芩对照药材1g，同法制得对照药材溶液。
对照品溶液的制备：再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性样品溶液的制备：取相同工艺制备的缺黄芩阴性供试品同法制备阴性供试品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl，对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性液无对应斑点，见图4。
含量测定：
仪器高效液相色谱仪(北京温分化学仪器P98)，紫外检测器；紫外分光光度计TU-1800(北京普析通用仪器有限公司)。
试药乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。大黄素(批号：110756-200110)，大黄酚(批号：110796-200309，中国药品生物制品检定所)，供试品为本公司自制。
测定波长的选择取大黄酚对照品溶液，在200nm-600nm波长范围内进行光谱扫描，在254nm处有最大吸收。参照药典中大黄素和大黄酚的含量测定方法，选择254nm作为大黄素和大黄酚的测定波长。紫外扫描见图5。
色谱条件参照文献【1】的测定条件确定本品的色谱条件，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸溶液(85∶15)为流动相；检测波长为254nm。
专属性试验取大黄素和大黄酚对照品适量，加乙腈制得大黄素为53μg/ml、大黄酚103.9μg/ml的混合溶液。取本品1g(批号：20050201)，按文献【1】的提取方法制得供试品溶液。按处方配比，除去大黄，同供试品溶液处理方法制得本品的阴性样品溶液。分别精密吸取上述三种溶液各10μl注入液相色谱仪。液相色谱图显示，大黄素峰和大黄酚峰与其他的相邻峰已达到有效的分离，并根据测得的理论板数，规定本品理论板数以大黄素峰和大黄酚峰计算应不低于2000。谱图见图6～8。
经试验确定了本品以下的高效液相测定方法：
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.2％磷酸溶液(85∶15)为流动相；检测波长254nm。理论板数按大黄素峰和大黄酚峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备取大黄素对照品、大黄酚对照品适量，精密称定，加乙腈制成每1ml含大黄素50μg、大黄酚100μg的混合溶液，即得。
供试品溶液的制备取四季三黄丸适量，研细，取约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加乙醇20ml，密塞，称定重量，置水浴回流30分钟，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过。精密量取续滤液10ml，置锥形瓶中，挥去乙醇，加20％硫酸溶液10ml，超声处理(功率160W，频率40kHz)5分钟，再加三氯甲烷20ml，置水浴中加热回流水解60分钟，立即冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，加入无水硫酸钠2.5g，脱水，滤过，用少量三氯甲烷洗涤残渣，合并，回收三氯甲烷溶剂至干，残渣加乙腈溶解，并转移至10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
方法学试验：
1、线性关系考察取大黄素和大黄酚对照品适量，加乙腈制得大黄素为53μg/ml、大黄酚103.9μg/ml的混合对照品溶液。分别精密吸取上述浓度的对照品溶液6μl、8μl、10μl、12μl、14μl进样，按上述色谱条件测定。以峰面积对绝对进样量回归，得回归方程为：
大黄素：y＝1.6689×106C-2.505×104 r＝0.9999
大黄酚：y＝1.9226×106C-4.245×104 r＝0.9998
结果表明：大黄素进样量在0.318～0.742μg，大黄酚在0.6234～1.4546μg范围内呈良好的线性关系。
测定结果见表5。
表5大黄素和大黄酚线性关系测定结果表
2、精密度试验 精密吸取上述浓度的大黄素和大黄酚对照品混合溶液10μl，连续重复进样5次，测定大黄素和大黄酚峰面积，结果见表6。
表6精密度试验结果
以上结果表明本试验精密度的RSD＜3％，符合考察要求。
3、重复性试验 按上述的含量测定方法，取同一批号(批号：20050202)样品5份，每份1g，精密称定，按供试品溶液方法处理，制得供试品溶液，分别进行测定，测定结果见表7。
表7重复性试验结果
结果表明，本试验重复性良好，其RSD％＜3％，符合考察要求。
4、稳定性试验 取四季三黄丸，研细，精密称取1.0g，按供试品溶液处理方法，制得稳定性试验的供试品溶液，取此供试品溶液10μl，在室温下，每隔一定时间进样，测定其大黄素峰和大黄酚峰面积，结果见表8。
表8稳定性试验结果
测定结果表明，本品在8小时内测定结果稳定。
5、加样回收试验 取同一批四季三黄丸，研细，称取5份，每份1g，精密称定，制成供试品溶液。取大黄素和大黄酚对照品适量，加乙醇制得含大黄素为53μg/ml、大黄酚103.9μg/ml的混合对照品溶液。取各份样品2ml分别精密加入上述对照品溶液2ml，制得加样回收的供试品溶液。分别精密吸取各供试品溶液10μl注入液相色谱仪，按含量测定色谱条件，测得大黄素和大黄酚含量，计算加样回收率，结果见表9。
表9加样回收试验结果
结果表明，回收率均在95％～105％以内，符合方法学考察要求。
6、样品的含量测定 取三个批号四季三黄丸，分别研细，各精密称取1g，按供试品溶液配制方法配制，制得供试品溶液。取大黄素、大黄酚对照品适量，加乙腈制得每1ml含大黄素50μg、大黄酚100μg的对照品溶液。吸取上述两种溶液各10μl，注入液相色谱仪，按含量测定法测定，结果见表10。HPLC色谱图见图9～12。
表10样品中大黄素、大黄酚含量测定结果
根据以上样品含量测定结果，并根据生产实际所用的生药材中所含大黄素、大黄酚的含量，我们规定每克含大黄以大黄素、大黄酚之总量计不得少于2.2mg。
参考文献：
【1】应文婷，许闰娟，刘金友.四季三黄丸质量标准研究[J].中医药导报，2005，11(7)：81-83。
Claims (2)
1一种四季三黄丸的质量检测方法，其特征在于：该方法中的a鉴别方法b含量测定是以下方法的一种或几种：
a鉴别：
(1)取四季三黄丸，研细，置显微镜下观察，可见各药材的特征结构；
(2)取四季三黄丸1～5g，研细，加甲醇5～50ml，加热回流20～60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～30ml，盐酸0.5～5ml，加热回流10～60分钟，立即冷却，加乙醚10～50ml提取，分取乙醚层，蒸干，残渣加三氯甲烷0.5～5ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄对照药材1～5g，同法制成对照药材溶液，再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～3mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各2～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚60～90℃-甲酸乙酯-甲酸5～40∶2～10∶0.5～5的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；
(3)取四季三黄丸1～5g，研细，加甲醇5～50ml，置水浴中加热回流10～30分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩使成0.5～3ml，作为供试品溶液，另取黄柏对照药材0.2～2g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～3mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各1～5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水2～20∶1～6∶0.5～5∶0.5～5∶0.2～2为展开剂，置用氨蒸气预饱和5～30分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)取四季三黄丸2～10g，研细，加甲醇10～50ml，加热回流0.5～1.5小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水5～30ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次5～30ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇0.5～2ml使溶解，作为供试品溶液，另取黄芩对照药材0.5～3g，同法制得对照药材溶液，再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各1～10μl，对照品溶液5～20μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水2～10∶1～8∶0.5～5∶0.5～5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取四季三黄丸5～50g，研细，置索氏提取器中，加石油醚60～90℃加热回流0.5～1.5小时，弃去石油醚液，再加三氯甲烷加热回流提取0.5～2小时，弃去三氯甲烷液，再加乙醇回流提取0.5～2小时，乙醇提取液蒸干，残渣加乙醇2～10ml使溶解，作为供试品溶液，另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5～2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各2～20μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5～20∶3～15∶1～5∶0.2～2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b含量测定：
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.2％磷酸溶液85∶15为流动相，检测波长254nm，理论板数按大黄素峰和大黄酚峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄酚对照品，精密称定，加乙腈制成每1ml含大黄素20～100μg、大黄酚50～200μg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：取四季三黄丸研细，取约0.5～5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加乙醇10～50ml，密塞，称定重量，置水浴回流10～60分钟，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液5～40ml，置锥形瓶中，挥去乙醇，加20％硫酸溶液5～20ml，超声处理功率160W，频率40kHz2～10分钟，再加三氯甲烷10～50ml，置水浴中加热回流水解30～100分钟，立即冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次5～50ml，合并三氯甲烷液，加入无水硫酸钠1～10g，脱水，滤过，用少量三氯甲烷洗涤残渣，合并，回收三氯甲烷溶剂至干，残渣加乙腈溶解，并转移至5～50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～50μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
每克含大黄以大黄素和大黄酚总量计，不得少于2.2mg。
2、根据权利要求1所述一种四季三黄丸的质量检测方法，其特征在于：该方法中的a鉴别方法和b含量测定是以下方法的一种或几种：
a鉴别：
(1)取四季三黄丸置显微镜下观察：纤维鲜黄色，直径16～38μm，常成束，周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维，含晶细胞壁木化增厚，石细胞鲜黄色，类圆形，直径35～128μm，有的成分枝状，枝端锐尖，壁厚，层纹明显，有的可见大型纤维状的石细胞，长可达900μm，果皮石细胞类长方形，果皮纤维细长，梭形，直径10μm，长约至110μm，常交错、斜向镶嵌状排列，含晶石细胞类圆形或多角形，直径17～31μm，壁厚，胞腔内含草酸钙方晶，直径约8μm；
(2)取四季三黄丸2g，研细，加甲醇15ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml，盐酸1ml，加热回流30分钟，立即冷却，加乙醚20ml提取，分取乙醚层，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液，另取大黄对照药材2g，同法制成对照药材溶液，再取大黄素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚60～90℃-甲酸乙酯-甲酸15∶5∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，置氨蒸气中熏后，斑点变为红色；
(3)取四季三黄丸2g，研细，加甲醇15ml，置水浴中加热回流15分钟，滤过，滤液置水浴上浓缩使成1ml，作为供试品溶液，另取黄柏对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液，再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-氨水6∶3∶1.5∶1.5∶0.5为展开剂，置用氨蒸气预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)取四季三黄丸3g，研细，加甲醇20ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml使溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次10ml，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取黄芩对照药材1g，同法制得对照药材溶液，再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取供试品溶液及对照药材溶液各5μl，对照品溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水5∶3∶1∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％三氯化铁乙醇溶液，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(5)取四季三黄丸10g，研细，置索氏提取器中，加石油醚60～90℃加热回流1小时，弃去石油醚液，再加三氯甲烷加热回流提取1小时，弃去三氯甲烷液，再加乙醇回流提取1小时，乙醇提取液蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，作为供试品溶液，另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法中国药典2005年版一部附录VI B试验，吸取上述两种溶液各8μl分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水10∶7∶2∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
b含量测定：
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.2％磷酸溶液85∶15为流动相，检测波长254nm，理论板数按大黄素峰和大黄酚峰计算应不低于2000；
对照品溶液的制备：取大黄素对照品、大黄酚对照品，精密称定，加乙腈制成每1ml含大黄素50μg、大黄酚100μg的混合溶液，即得；
供试品溶液的制备：取四季三黄丸，研细，取约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加乙醇20ml，密塞，称定重量，置水浴回流30分钟，放冷，用乙醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液10ml，置锥形瓶中，挥去乙醇，加20％硫酸溶液10ml，超声处理功率160W，频率40kHz5分钟，再加三氯甲烷20ml，置水浴中加热回流水解60分钟，立即冷却，移置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液用三氯甲烷提取3次，每次10ml，合并三氯甲烷液，加入无水硫酸钠2.5g，脱水，滤过，用少量三氯甲烷洗涤残渣，合并，回收三氯甲烷溶剂至干，残渣加乙腈溶解，并转移至10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
每克含大黄以大黄素和大黄酚总量计，不得少于2.2mg。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA200810137718XA CN101408531A (zh) | 2008-07-11 | 2008-07-11 | 一种四季三黄丸的质量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CNA200810137718XA CN101408531A (zh) | 2008-07-11 | 2008-07-11 | 一种四季三黄丸的质量检测方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101408531A true CN101408531A (zh) | 2009-04-15 |
Family
ID=40571630
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CNA200810137718XA Pending CN101408531A (zh) | 2008-07-11 | 2008-07-11 | 一种四季三黄丸的质量检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101408531A (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101603953B (zh) * | 2009-07-20 | 2011-09-28 | 韩桂茹 | 大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法 |
| CN102038785B (zh) * | 2009-10-26 | 2012-02-29 | 天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂 | 中药制剂小儿明目丸的检测方法 |
| CN106248842A (zh) * | 2016-08-30 | 2016-12-21 | 天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂 | 一种四季三黄片的含量测定方法 |
| CN110441433A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-12 | 山东省兽药质量检验所（山东省畜产品质量检测中心） | 一种十黑散的uplc-pda检测方法 |
| CN110646537A (zh) * | 2019-09-29 | 2020-01-03 | 陕西起源农业科技有限责任公司 | 一种基于hplc波长切换技术同时测定三黄片中多种成分含量的方法 |
| CN112415157A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-02-26 | 内蒙古祈蒙药业股份有限公司 | 一种安消六味颗粒的质量控制方法 |
| CN113984915A (zh) * | 2021-09-28 | 2022-01-28 | 河北省药品医疗器械检验研究院(河北省化妆品检验研究中心) | 一种四季三黄丸特征图谱的检测方法 |
| CN114720622A (zh) * | 2022-04-06 | 2022-07-08 | 贵州良济药业有限公司 | 一种消肿痛醋膏的检测方法 |
-
2008
- 2008-07-11 CN CNA200810137718XA patent/CN101408531A/zh active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101603953B (zh) * | 2009-07-20 | 2011-09-28 | 韩桂茹 | 大黄及其复方制剂中多型体的大黄酚与大黄素定量测定方法 |
| CN102038785B (zh) * | 2009-10-26 | 2012-02-29 | 天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂 | 中药制剂小儿明目丸的检测方法 |
| CN106248842A (zh) * | 2016-08-30 | 2016-12-21 | 天津中新药业集团股份有限公司乐仁堂制药厂 | 一种四季三黄片的含量测定方法 |
| CN110441433A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-12 | 山东省兽药质量检验所（山东省畜产品质量检测中心） | 一种十黑散的uplc-pda检测方法 |
| CN110646537A (zh) * | 2019-09-29 | 2020-01-03 | 陕西起源农业科技有限责任公司 | 一种基于hplc波长切换技术同时测定三黄片中多种成分含量的方法 |
| CN112415157A (zh) * | 2020-11-24 | 2021-02-26 | 内蒙古祈蒙药业股份有限公司 | 一种安消六味颗粒的质量控制方法 |
| CN113984915A (zh) * | 2021-09-28 | 2022-01-28 | 河北省药品医疗器械检验研究院(河北省化妆品检验研究中心) | 一种四季三黄丸特征图谱的检测方法 |
| CN114720622A (zh) * | 2022-04-06 | 2022-07-08 | 贵州良济药业有限公司 | 一种消肿痛醋膏的检测方法 |
| CN114720622B (zh) * | 2022-04-06 | 2023-10-17 | 贵州良济药业有限公司 | 一种消肿痛醋膏的检测方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101408531A (zh) | 一种四季三黄丸的质量检测方法 | |
| CN102854281B (zh) | 一种无糖型强力枇杷露的检测方法 | |
| CN101766771A (zh) | 一种治疗妇科疾病药物的质量控制方法 | |
| CN101703611B (zh) | 当归益血口服液的质量检测方法 | |
| CN101444589A (zh) | 一种分清五淋丸的质量标准及其检验方法 | |
| CN102269751A (zh) | 六味能消制剂的检测方法 | |
| CN102068600B (zh) | 中药制剂通脉养心丸的检测方法 | |
| CN102274401A (zh) | 一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法 | |
| CN102552496A (zh) | 复方胃痛胶囊的质量检测方法 | |
| CN101306082B (zh) | 一种喉康散的检测方法 | |
| CN101204434A (zh) | 一种消栓滴丸质量标准及检验方法 | |
| CN101700262A (zh) | 穿心莲滴丸的质量控制方法 | |
| CN109406682A (zh) | 生姜药材的uplc特征图谱构建方法和检测方法 | |
| CN102068627A (zh) | 一种中药制剂心脑静片的质量控制方法 | |
| CN102068549B (zh) | 中药制剂清热凉血丸的检测方法 | |
| CN102645493A (zh) | 五味甘露制剂的检测方法 | |
| CN102590431A (zh) | 一种治疗咳嗽的中药药物组合物质量标准检测方法 | |
| CN100369614C (zh) | 复方胆通固体制剂的质量控制方法 | |
| CN102293827A (zh) | 一种樟树根及含有樟树根的制剂的质量检测方法 | |
| CN102028760B (zh) | 一种杠板归药材的质量检测方法 | |
| CN102166264B (zh) | 一种肾石通的检验方法 | |
| CN103316102A (zh) | 治疗痔疮外用中药制剂的检测方法 | |
| CN103983735A (zh) | 一种制备宫炎平胶囊的检测方法 | |
| CN101411836A (zh) | 一种治疗感冒后咳嗽的中药制剂质量标准及其检验方法 | |
| CN100432670C (zh) | 一种中药制剂金嗓开音丸的质量检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20090415 |