CN102274401A - 一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法，它是用下述重量份的药材制成的：雪胆40-44份、金荞麦30-34份、大血藤30-34份、紫珠20-22份、麻布袋30-34份、延胡索30-34份、仙鹤草30-34份、白及60-66份、凤凰衣40-44份、土木香30-34份和核桃仁38-42份。本发明采用土木香替代双金胃疡胶囊中的青木香后制成的中药制剂同样具有舒肝理气、健胃止痛、收敛止血的功效，其药效更加显著。而且，方中去除了青木香的毒副作用，大大增强了药品的安全性；制备时将药材粉碎成微粉，使得成品溶出度和生物利用度高，可充分发挥药效；重新制定的检测方法精密度高，稳定性好，测量结果准确，可有效控制产品质量，从而确保其临床疗效。

Description

一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法

技术领域

本发明涉及一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法，属于中药制药技术领域。

背景技术

胃病，实际上是多种病症的统称；它们有相似的症状，如上腹部不适或疼痛、恶心、呕吐、腹泻、食欲不振，胃及十二指肠溃疡的症状则为上腹部烧灼痛，严重者可有柏油便、黑便或血便等等。临床上常见的胃病有急性胃炎、慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃十二指肠复合溃疡、胃息肉、胃结石、胃的良恶性肿瘤，还有胃粘膜脱垂症、急性胃扩张、幽门梗阻等。国内外已有多种西药或中药或其他治疗方法用于胃病的治疗，但治疗过程大多较为漫长，药物蓄积所产生的毒副作用屡见报道，患者承受了较高的安全风险和不便。

双金胃疡胶囊是一种疗效较好的治疗胃病的苗药，收载于国家药品标准，用于肝胃气滞血瘀所致的胃脘刺痛、呕吐吞酸、脘腹胀痛、胃及十二指肠溃疡等。但该方中青木香含有马兜铃酸，具有较强的肾毒性，国家食品药品监督管理局已取消青木香药用标准；且该药品为原粉制剂，工艺较为简单，未考察处方中各药味粒径与药效之间的关系，仅仅使用统一的粒径对方中各药味进行简单粉碎，使得成品溶出度低，生物利用度差，未能充分发挥药物作用，影响了药物疗效，服用量较大。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种治疗胃病的中药制剂及其制备方法和检测方法。本发明针对现有双金胃疡胶囊所存在的不足，对其组方、制备工艺和检测方法均进行了改进，改进之后的中药制剂不含肾毒性成分马兜铃酸，毒副作用小，溶出度和生物利用度高，服用量较小，疗效更加显著。

本发明采用的技术方案：一种治疗胃病的中药制剂，是用下述重量份的药材制成的：雪胆40-44份、金荞麦30-34份、大血藤30-34份、紫珠20-22份、麻布袋30-34份、延胡索30-34份、仙鹤草30-34份、白及60-66份、凤凰衣40-44份、土木香30-34份和核桃仁38-42份。

前述中药制剂中各药材的重量份优选为：雪胆42份、金荞麦32份、大血藤32份、紫珠21份、麻布袋32份、延胡索32份、仙鹤草32份、白及63份、凤凰衣42份、土木香32份、核桃仁40份。

前述中药制剂优选为微粉胶囊剂。

本发明所述治疗胃病的中药制剂的制备方法为：按比例称取雪胆、金荞麦、大血藤、紫珠、麻布袋、延胡索、仙鹤草、白及、凤凰衣、土木香和核桃仁，分别粉碎成0.1～180μm的微粉，混匀，按常规方法制成各种口服制剂。

前述方法中，各药材的粉碎细度如下：雪胆20～40μm；金荞麦60～80μm；大血藤60～80μm；紫珠100～125μm；麻布袋20～40μm；延胡索40～60μm；仙鹤草100～125μm；白及60～80μm；凤凰衣150～180μm；土木香125～150μm；核桃仁150～180μm。

本发明所述治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法：包括性状、鉴别、检查和含量测定项目，其中鉴别是对制剂中延胡索和土木香的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法分别测定制剂中延胡索所含延胡索乙素、盐酸巴马汀的含量；土木香的鉴别方法是以土木香对照药材和异土木香内酯对照品为对照、以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂的薄层色谱法；盐酸巴马汀的含量测定方法是以盐酸巴马汀对照品为对照、以乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺＝10∶4.5∶84.5为流动相的高效液相色谱法。

前述检测方法中，延胡索的鉴别方法是以延胡索乙素对照品为对照、以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺＝10∶6∶1∶0.1为展开剂的薄层色谱法；延胡索乙素的含量测定方法是以延胡索乙素对照品为对照、以甲醇-水-磷酸盐缓冲液＝58∶42∶1.8为流动相的高效液相色谱法。

前述检测方法中，土木香的具体鉴别方法为：取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml，超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液；另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

前述检测方法中，盐酸巴马汀的含量测定方法具体为：

照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺(用磷酸调节pH至3)＝10∶4.5∶84.5为流动相；检测波长345nm；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不低于4000；

对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含盐酸巴马汀4μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以盐酸巴马汀C₂₁H₂₂NO₄·HCl计，不得少于7.5μg。

前述检测方法具体包括以下项目：

性状：本制剂为胶囊剂，其内容物为深黄色至棕褐色的粉末；气微，味苦；

鉴别：(1)取本制剂内容物5g，加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加浓氨试液调节至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺＝10∶6∶1∶0.1为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml，超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液；另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

检查：应符合中国药典附录胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)延胡索乙素照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-磷酸盐缓冲液＝58∶42∶1.8为流动相，检测波长为283nm；理论板数按延胡索乙素峰计算不低于4000；所述磷酸盐缓冲液是用磷酸氢二钠2.24g和磷酸二氢钠0.98g加水至100ml配制而成的；

对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂内容物，混匀，取2g，精密称定，置100ml称量瓶中，加浓氨试液5ml，浸润20分钟，加乙醚50ml，超声处理1小时，加乙醚稀释至刻度，摇匀，分取乙醚液，滤过，精密量取续滤液50ml，低温挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以延胡索乙素C₂₁H₂₅NO₄计，不得少于16μg；

(2)盐酸巴马汀照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺(用磷酸调节pH至3)＝10∶4.5∶84.5为流动相；检测波长345nm；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不低于4000；

对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含盐酸巴马汀4μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以盐酸巴马汀C₂₁H₂₂NO₄·HCl计，不得少于7.5μg。

自从报道马兜铃酸具有严重的肾毒性和致癌性后，有关马兜铃酸以及含有马兜铃酸的药用植物的研究就没有停止过，积极寻求其替代药材已成为刻不容缓的任务。国家食品药品监督管理局在2005年版及2010年版中国药典也取消了青木香的药用标准。但目前对青木香药材的替换、更改主要是基于古代文献记载以及专家建议，并没有系统的实验依据。已有相关人士对土木香和青木香进行了系统的毒理学评价，结果表明土木香与青木香相比的确具有安全用药的可行性。但仅以毒理学实验并不能作为临床应用的依据，还需要将药效、植物学、化学等各方面联系起来，进行全面、系统的试验研究、证实。

另外，广州中医药大学的高卫东、李卫民、高英等专门对土木香能否代替青木香用药进行了探讨：通过文献调研，比较土木香和青木香在植物来源、功能主治、化学成分、药理作用和临床应用等方面的不同。所得到的结论是：青木香是马兜铃科植物的根，而土木香是菊科植物的根，因此，如下三点有待商讨：(1)根据植物分类系统与化学成分的关系可知，每种植物在不同的环境条件下，具有制造一定的化学成分的特性，而这种特性是植物的生理、生化特征、亲缘关系相近的植物种类，往往具有相似的生理、生化特性。土木香和青木香的植物来源不同，亲缘关系也不近，也少有相似的生理生化特性；(2)作为药物物质基础的化学成分决定药理作用。而青木香与土木香比较，二者的化学成分和药理作用也相差很大；(3)中药性能指导临床应用。土木香和青木香的中药性能相差较远，临床应用也少见相同。综上所述，土木香的植物来源、亲缘关系、功效主治、化学成分、药理作用和临床应用等都与青木香有很大的差异。因此，土木香不应简单代替青木香，如要代替尚需经大量的药理临床试验证实。

因此，本发明人为完成双金胃疡胶囊中青木香药材的有效替代，进行了一系列的实验研究，以下是其主要试验内容：

一、药材替换后的组方筛选试验

根据中国药典2000年版一部中青木香、土木香、川木香的用法用量，这三种药材的用量均为3～9g，另根据双金胃疡胶囊中青木香的用量，按每粒胶囊中所含药材折算后用量均为0.032g，并根据这三种药材的功能主治及地方习惯用法，着重考察土木香不同剂量对不同模型药理作用的差异，实验如下：

1.材料与方法

1.1动物昆明种小鼠，体重18～23g；SD大鼠，雌雄各半，体重160～180g。

1.2双金胃疡胶囊含土木香同剂量样品(含土木香0.032g/粒)、双金胃疡胶囊含土木香高剂量样品(含土木香0.064g/粒)、双金胃疡胶囊含川木香同剂量样品(含川木香0.032g/粒)及双金胃疡胶囊(含青木香0.032g/粒)样品，均由贵州三仁堂药业有限公司提供。

1.3仪器7520型分光光度计(上海分析仪器厂)，离心机。

2.实验方法与结果

2.1不同处方双金胃疡胶囊对应激性溃疡模型大鼠的影响

将大鼠随机分为5组，分别为模型对照组、双金胃疡胶囊土木香同剂量组(以下简称土木香同剂量组)、双金胃疡胶囊土木香高剂量组(以下简称土木香高剂量组)、双金胃疡胶囊川木香同剂量组(以下简称川木香同剂量组)以及双金胃疡胶囊青木香对照组(以下简称青木香组)，每组各10只。各组分别按1.2g/kg剂量(用水稀释)灌胃，模型组给予等容量蒸馏水，连续给药10d，末次给药后禁食不禁水24h，20℃水浸20h后处死，结扎幽门和贲门后将胃取出，由幽门向胃内注入1％甲醛溶液10ml，并将全胃置于1％甲醛溶液中固定10min，沿胃大弯剖开，检查胃粘膜病变。溃疡的程度以溃疡指数表示，并计算溃疡的抑制率。结果见表1。

表1对应激性溃疡模型大鼠的影响

组别	土木香含量(g/粒)	溃疡指数	溃疡抑制率(％)
				模型对照组	-	31.52±6.17	-
土木香高剂量	2.4	16.06±5.24**	55.39
				土木香同剂量	1.2	17.97±6.03*	42.99
川木香同剂量	1.2	46.41±5.48*	47.94
				青木香组	0	13.29±4.66**	57.84

与模型组比较，**P＜0.05，**P＜0.01；n＝10。

结果表明：各组与模型组相比，溃疡指数显著降低，各组均有一定的抑制胃粘膜溃疡病变的作用，其中2个土木香组及青木香组较为显著，溃疡指数相近。

2.2不同处方双金胃疡胶囊对大鼠胃液分泌的影响

分组及给药同上，末次给药后均禁食水24h，用乙醚麻醉，结扎幽门，再由十二指肠加强给药1次，缝合腹壁切口，6h后拆线开腹结扎贲门，摘除全胃，沿胃大弯剪开胃壁，用5ml蒸馏水浸洗胃黏膜3次，收集洗液，离心10min，吸取上清液1ml测定胃蛋白酶活性及胃液的酸度，结果见表2。

表2对大鼠胃液分泌的影响

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n＝10。

结果表明：各剂量组及青木香组均能降低胃液的总酸度及胃蛋白酶活性，与模型组相比有显著差异，2个土木香组及青木香组作用相似，与川木香组相比作用较强。

2.3不同处方双金胃疡胶囊对慢性乙酸溃疡模型大鼠的影响

大鼠禁食24h，自由饮水，乙醚麻醉，开腹，于腺胃部前壁窦体交界处注入30％乙酸0.03ml于浆膜下。用生理盐水冲洗创面，缝合。术后常规喂养，术后第二天随机选择50只大鼠，分为5组，各组给药14d后，各组均禁食24h，然后分别用过量乙醚麻醉大鼠致死，剖腹，结扎贲门，由幽门注入1％甲醛溶液10ml，结扎幽门，1％甲醛固定10min。沿胃大弯剪开胃壁，洗胃，平铺于玻板上，观察并测量溃疡面积，结果见表3。

表3对慢性乙酸溃疡模型大鼠的影响

组别	土木香含量(g/粒)	溃疡面积
			模型对照组	-	5.84±1.13
土木香高剂量	2.4	3.22±1.04**
			土木香同剂量	1.2	3.76±1.03*
川木香同剂量	1.2	4.14±1.27*
			青木香组	0	3.01±1.06**

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n＝10。

结果表明：各组对乙酸所致大鼠慢性溃疡均具有明显治疗作用，能显著减少溃疡面积，与模型组相比有显著差异，2个土木香组及青木香组作用相似，与川木香组相比溃疡面积更少。

根据以上实验结果，表明用土木香替换双金胃疡胶囊中的青木香后，其药理作用相近，具有显著抑制胃粘膜溃疡病变、降低胃液的总酸度及胃蛋白酶活性及显著减少溃疡面积的作用；且用土木香替换青木香后，高剂量组与同剂量组药理作用差异不大，为减少大剂量药物易引起的不良反应，以同剂量土木香用量替换青木香为宜，即双金胃疡胶囊用土木香更换青木香后，每粒含土木香为0.032g。

二、制备工艺的改进(即各原料药材的粉碎细度选择试验)

细度选择用浸出物筛选优化，采用中国药典2010年版一部附录X A水溶性浸出物测定法中冷浸法测定，实验结果如下：

根据以上实验结果，并结合生产实际，优选了前述各药材粉末的细度(见表格中加粗字体数据)。

三、本发明微粉胶囊抗实验性胃溃疡的药理对比研究

为对比双金胃疡胶囊与本发明微粉胶囊的药理作用，本实验进行了对大鼠急性胃粘膜损伤模型的影响、对小鼠利血平型急性胃溃疡的影响、对大鼠醋酸慢性胃溃疡的影响的药理对比研究，结果如下：

1、材料

1.1动物SD系大鼠，NIH小鼠。

1.2药物与试剂双金胃疡胶囊、本发明微粉胶囊(申请人自制，规格0.4g/粒)，使用时用水和吐温-80配成所需浓度溶液；西米替丁胶囊、西米替丁注射剂、利血平注射剂、乙醇、吐温-80。

1.3仪器三用电热恒温水浴箱。

2、实验方法和结果

2.1对大鼠急性胃粘膜损伤模型的影响

取SD大鼠20只，禁食24h，随机分为本发明微粉组、双金原粉组和对照组，灌胃给药，对照组灌胃等容积蒸馏水，50min后每只大鼠灌服盐酸-乙醇溶液1.5ml，再过50min脱颈椎处死大鼠，剖腹取出大鼠胃，用夹子夹住食管，由幽门每胃灌入1％甲醛溶液5ml，并将全胃置于1％甲醛中固定10min。然后沿胃大垂剪开大鼠胃，观察胃黏膜损伤的情况，以损伤长度(若损伤长度大于1mm则加倍)总和的毫米数作为溃疡指数，进行统计学处理，计算溃疡抑制百分率，分析药物作用。结果见表4：

表4对大鼠急性胃黏膜损伤的影响

注：**与对照组比较有非常显著性差异(P＜0.01)；*与对照组比较有显著性差异(P＜0.05)。下表相同。

2.2对小鼠利血平型急性胃溃疡的影响

动物模型与给药：按Adami等的方法，复制动物模型。取动物40只，分组和给药剂量同前，每只灌胃3天，每天灌胃2次，最后一次灌胃后，腹腔注射利血平5mg/Kg，18小时后，解剖动物，观察溃疡形成的情况。溃疡指数和抑制率的测定方法同上。结果见表5：

表5对小鼠利血平型胃溃疡的影响

2.3对大鼠醋酸慢性胃溃疡的影响

取动物数40只，组同前，在无菌条件下，暴露胃，在腺胃部窦体交界处的浆膜表上，用直径6mm圆形滤纸浸于冰乙酸中后，贴于浆膜面上，1小时后取下，又再用新的浸有乙酸的滤纸贴上，30秒钟后取出，关腹。并注射10万单位的青霉素，每天2次，连续2天以抗感染。

术后24小时，开始灌液，灌药剂量同前，每天2次，每次1ml。连续8天，第9天后，处死动物，用溃疡的最长径与最短径的均值表示溃疡指数，进行统计学处理，计算溃疡愈合百分率，评定药物对溃疡愈合的促进作用。结果见表6：

S＝π×(d₁/2)×(d₂/2)

S：溃疡面积；π：圆周率；d₁：溃疡最长径；d₂：溃疡最短径

表6对大鼠醋酸损伤型胃溃疡的影响(x±s)

实验结果表明，本发明微粉胶囊与双金胃疡原粉胶囊的药理作用相比，其对小鼠利血平型胃溃疡、大鼠急性胃黏膜损伤、大鼠醋酸损伤型胃溃疡具有更加明显的抑制作用。

四、本发明微粉胶囊制剂的检测方法研究、论证

(一)性状：根据土木香替换青木香后样品的实际性状，将性状项修订为：本制剂为胶囊剂，其内容物为深黄色至棕褐色的粉末；气微，味苦。

(二)鉴别：更改处方后鉴别(1)延胡索的鉴别方法如下：

取本制剂内容物5g，加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加浓氨试液调节至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺(10∶6∶1∶0.1)为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，置碘蒸气熏至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

验证方法：本处方中的延胡索主含延胡索乙素。按原双金胃疡胶囊质量标准的方法进行试验，薄层色谱中样品与延胡索乙素对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点，而缺延胡索的阴性溶液无干扰，表明该方法可行。

鉴别(2)改为土木香的薄层鉴别方法，方法如下：

取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱(直径1cm，10g，干法装柱)，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液。另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(38∶2∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

验证方法如下：

试验方法：A

供试品溶液的制备：取本制剂内容物10g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：另取土木香对照药材1g，同法制成对照药材溶液。

对照品溶液的制备：另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：取缺土木香的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

展开系统：

层析板：以0.25％硝酸银溶液为黏合剂的硅胶G薄层板

点样量：5～10μl

展距：约8cm

展开剂：石油醚(60～90)-甲苯-乙酸乙酯(5∶1∶1)

显色：喷以5％香草醛硫酸溶液，80℃加热至斑点显色清晰。

试验方法：B

供试品溶液的制备：取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱(直径1cm，10g，干法装柱)，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液。

对照药材溶液的制备：另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。

对照品溶液的制备：另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照溶液的制备：取缺土木香的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

展开系统：

层析板：以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板

点样量：5～10μl

展距：约8cm

展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(38∶2∶0.1)

显色：喷以2％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

结果表明：方法B斑点清晰，重现性好，阴性无干扰，故将其作为本发明制剂中土木香的薄层色谱鉴别方法。

(三)含量测定：(1)延胡索乙素含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠2.24g和磷酸二氢钠0.98g，加水至100ml)(58∶42∶1.8)为流动相；检测波长为283nm。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于4000。

对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物，混匀，取2g，精密称定，置100ml量瓶中，加浓氨试液5ml，浸润20分钟，加乙醚50ml，超声处理1小时，加乙醚稀释至刻度，摇匀，分取乙醚液，滤过，精密量取续滤液50ml，低温挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本制剂每粒含延胡索以延胡索乙素(C₂₁H₂₅NO₄)计，不得少于16μg。

试验验证：

1.实验材料与条件

(1)仪器与试剂试药：岛津LC-5A高效液相色谱仪(日本)，SPD-2AM检测器，C-R2A(X)数据处理机。色谱柱YWG-C₁₈ 4.6×250cm 5um(大连化学物理研究所)。

含量测定用延胡索乙素对照品(中国药品生物制品检定所)，其余所用的试剂均为分析纯。

(2)色谱条件：流动相：甲醇-水-磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠2.24g和磷酸二氢钠0.98g加水至100ml)(58∶42∶1.8)，检测波长为283nm，柱温25℃，流速1.0ml/min。

2.实验方法学考察与结果

(1)对照品溶液的制备：

精密称取延胡索乙素对照品17.5mg置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

(2)系统适用性试验：在参考文献的基础上，采用YWG-C₁₈ 250×4.6mm色谱柱，经实验以甲醇-水-磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠2.24g和磷酸二氢钠0.98g加水至100ml)(58∶42∶1.8)为流动相，分离效果最佳。理论塔板数以延胡索乙素计算为4059，故定为不低于4000。

(3)线性关系的考察：

分别精密吸取上述对照品溶液1、2、3、4、5ml置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在前述色谱条件下进行测定，分别进样10μl，测定峰面积，峰面积与进样量见表7，以峰面积对进样量回归得回归方程为Y＝-9374.2x+6354.43，相关系数r＝0.9995，即延胡索乙素在0.35-1.75μg的范围内线性关系良好。

表7进样量与峰面积

延胡索乙素(μg)	0.35	0.70	1.05	1.40	1.75
						峰面积	11710	35735	58319	80837	100589

(4)精密度试验：

精密吸取对照品溶液，重复进样5次，每次20μl，延胡索乙素峰面积的变异系数RSD＝0.47％。结果见表8：

表8精密度试验结果

次数	1	2	3	4	5	RSD
							峰面积	285883	283797	282897	285876	283960	0.47％

(5)样品提取条件的确定：

同一批样品，曾采用甲醇为提取溶媒，超声提取，过滤，低温挥干，用浓氨试液调节PH至10。分别用氯仿萃取及乙醚萃取3次，结果氯仿萃取为0.00385％，乙醚萃取为0.022％，依文献报道采用乙醚超声提取比较了不同的提取时间0.5h、1h、1.5h；不同量的提取溶媒40ml、50ml、80ml。结果提取0.5h为0.0124％，1h为0.0269％，1.5h为0.0268％；40ml为0.0416％，50ml为0.045％，80ml为0.031％。乙醚提取后，低温蒸干，可溶于CHCl₃、甲醇等溶剂中，而用甲醇溶解可除去部分脂溶性杂质，且CHCl₃溶解为0.038％、甲醇溶解为0.0452％。故采用乙醚50ml，超声提取1h，残渣用甲醇溶解、定容的提取方法。

(6)供试品溶液的制备：

取本制剂内容物，混合均匀，称取2g，精密称定，置100ml具塞三角烧瓶中，精密加入5ml浓氨试液浸润20min，精密加入50ml乙醚，称重，超声处理1h后(保持水温在室温)，加乙醚补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液30ml，置水浴上，低温蒸干，残渣加甲醇溶解，定容于5ml容量瓶中，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

(7)稳定性试验：

取同批供试品溶液分别在1、2、3、4、5小时测定峰面积积分值，样品在5小时内基本稳定。结果见表9：

表9稳定性试验

时间	1	2	3	4	5	RSD
							峰面积	56136	57701	57486	56527	58918	1.90％

(8)重复性试验：

取同一批的样品，分别取样5份，照供试品溶液制备项下方法操作，依前述色谱条件，进样20μl，分别测定供试品峰面积积分值，计算含量，即得。结果见表10：

表10重复性试验结果

(9)加样回收率试验：

取已知含量的样品5份，每份约2g，精密称定，置100ml具塞三角锥瓶中，分别精密加入对照品溶液1ml(C_对＝0.35mg/ml)。同供试品溶液制备方法，制备样品溶液。照“含量测定”项下的方法测定，计算回收率，即得。结果见表11：

表11回收率试验结果

(10)含量测定：

本测定法采用法定外标法(《中国药典》2000年版一部附录VI D高效液相色谱法)计算含量，其公式如下：

含量(％)＝(C_标×A_样)/(f×A_标×W_样)

C_标为标准品重量，A_标为标准品的峰面积，A_样为样品的峰面积，W_样为样品重量，f为稀释倍数。

表12延胡索乙素的含量测定结果

批号	延胡索乙素含量(％)	平均含量(％)
			020311	0.0268，0.0271	0.0270
020312	0.0182，0.0177	0.018
			020313	0.022，0.020	0.021
020314	0.0199，0.0201	0.020
			020315	0.0276，0.0268	0.0272
020316	0.0204，0.0186	0.0195
			020317	0.0170，0.0159	0.0165
020318	0.0231，0.0215	0.0223
			020319	0.0291，0.0296	0.0294
020321	0.0271，0.0276	0.0274

10批样品平均含量为0.0228％，考虑到不同来源药材延胡索乙素含量差异较大以及实测结果，且标准中原药材按中国药典(2010年版)一部延胡索含量100％转移率计算，按处方延胡索乙素含量折算为0.004％，故暂按药材中延胡索乙素100％转移率确定其含量限度为应不低于0.004％，即每100g药物中延胡索乙素含量应不低于4mg(即每粒含延胡索乙素16μg)。

含量测定：(2)盐酸巴马汀含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺(用磷酸调节pH至3)(10∶4.5∶84.5)为流动相；检测波长345nm；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不应低于4000。

对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含盐酸巴马汀4μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本制剂每粒含延胡索以盐酸巴马汀(C₂₁H₂₂NO₄·HCl)计，不得少于7.5μg。

试验验证：

1.仪器与试药

高效液相色谱仪：岛津LC-10A_TVP，SPD-6A_VP紫外可见检测器，CLASS-_VP(ver6.12)色谱工作站；CTO-10AS_VP色谱柱恒温箱；

岛津UV-1700型紫外可见分光光度计；

岛津AY120型(分度值0.1mg)电子天平，岛津AUW220型(分度值0.01mg)电子天平；

CH-250型超声波清洗器(北京创新德超声电子研究所)；800型台式离心机(上海手术器械厂)；电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)。

盐酸巴马汀对照品(供含量测定用)：购于中国药品生物制品检定所，批号为0732-200005。

甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水。

其余试剂为分析纯。

2.对照品溶液的制备

精密称取盐酸巴马汀对照品12.58mg，置25ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得盐酸巴马汀对照品储备液(每1ml含盐酸巴马汀0.5032mg)。

精密吸取上述储备液2ml，置50ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得盐酸巴马汀对照品溶液(每1ml含盐酸巴马汀20.128μg)。再精密吸取2ml，置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得盐酸巴马汀对照品溶液(每1ml含盐酸巴马汀4.0256μg)。

3.色谱条件的选择

(1)色谱柱：Hypersil C(ODS2)柱，5μm，250×4.6mm，柱号：2108265(大连依利特科学仪器公司)

(2)检测波长：取对照品溶液10ml于25ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，以甲醇为空白，进行扫描，结果在348.0nm处有一吸收峰，参照相关资料，确定检测波长为345nm。

(3)柱温：30℃

(4)流速：1.0ml/min

(5)预试用供试品溶液的制备：取本制剂内容物1.0625g，置50ml具塞锥形瓶中，加甲醇25ml，称定重量，置水浴上加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

取上述对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入色谱仪，试验。

(6)流动相的选择，参照《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版“延胡索”、“金果榄”含量测定项下的色谱条件进行试验，结果如下：

结果表明，流动相选定为乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺(用磷酸调节pH至3)(10∶4.5∶84.5)。

(7)系统适应性

①理论塔板数：按下式计算理论塔板数

参照《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版第439页延胡索含量测定项下的条件，本试验的理论塔板数按盐酸巴马汀峰计应不低于4000。

②分离度：按下式计算盐酸巴马汀峰与其它成分峰的分离度。

结果表明，在该色谱条件中，盐酸巴马汀峰和其他成分峰均能完全分离，分离度大于1.5，符合要求。

4.供试品溶液的制备

参照《中国药典》等资料，对供试品的制备方法进行了研究，结果如下：

试验结果表明，方法6制备的供试品含量较高，主峰与杂质峰分离较为理想，故选用方法6制备供试品。即供试品溶液的制备方法为：

取本制剂内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

5.阴性对照及溶剂峰的测定

精密称取缺延胡索的阴性对照样品2.0013g，按以上确定的供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

分别吸取阴性样品溶液、对照品溶液、供试品溶液及溶剂(甲醇)各10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，结果如下：

结果表明(参见附图1-图4)，缺延胡索阴性对照和溶剂(甲醇)与对照品溶液和供试品溶液色谱比较，在盐酸巴马汀峰相应的保留时间(约12.1min)处无色谱峰，表明阴性和溶剂对供试品的测定无干扰。

6.线性关系考察试验

分别用对照品储备液制备不同浓度的对照品溶液，精密吸取各溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，结果如下：

以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，见附图5。

结果表明，盐酸巴马汀在进样量为10.064～120.768μg范围内具有良好的线性关系(r＝0.9999)。

7.灵敏度的确定

取66μl对照品溶液(每1ml含盐酸巴马汀4.0256μg)于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得每1ml含盐酸巴马汀26.57ng的对照品溶液。取该溶液10μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，按下式计算定量限：

结果如下：

	信号线(mm)	噪音线(mm)	灵敏度(ng/ml)
				盐酸巴马汀	100	23	18.33

即本试验中盐酸巴马汀的定量限为18.33ng/ml。

8.精密度试验

取盐酸巴马汀对照品溶液(浓度：4.0256μg/ml)10μl注入液相色谱仪进行试验，重复5次，结果如下：

结果表明，盐酸巴马汀的峰面积相对偏差小于2％，说明本试验精密度良好。

9.稳定性试验

称取样品内容物2.0001g，按前述4中方法制备供试品溶液，将供试品溶液置室温下分别放置0、1、2、4、6、8、10小时，吸取10μl进样测定，结果如下：

结果表明，盐酸巴马汀的峰面积相对偏差小于2％，说明室温下10小时内具有良好的稳定性。

10.重复性试验

分别精密称取样品内容物5份，每份0.4g，按前述4中方法制备供试品溶液，并进行试验，结果如下：

结果表明，盐酸巴马汀含量的相对偏差为0.48％，小于2％，表明重复性良好。

11.回收率试验

采用加样回收法：精密称取已知含量的样品内容物(盐酸巴马汀含量：0.005075％)6份，每份1g，分别加入盐酸巴马汀对照品溶液(浓度：4.0256μg/ml)适量，再加入甲醇适量，至溶液体积为50ml，从“称定重量，加热回流2小时，”起按前述4中供试品制备方法制备供试品溶液，并按前述3中色谱条件试验，按下式计算回收率：

结果如下：

结果表明，盐酸巴马汀的平均回收率为99.95％，回收率相对标准偏差为1.40％，小于2％，说明本法测定盐酸巴马汀具有良好的回收率。

12.样品测定

按本发明所选定的方法和条件测试6批样品(其中20040401、20040402、20040403为将处方中青木香替换成土木香的样品)，按下式计算出样品中盐酸巴马汀的含量：

结果如下：

根据《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版第439页延胡索的含量测定项下的含量的规定，延胡索中盐酸巴马汀含量不少于0.030％；由于本制剂采用药材粉碎后直接入药工艺，按处方量计算，本制剂每1粒含延胡索以盐酸巴马汀计应不少于9.6μg。为了保证产品质量，规定本制剂每1粒含延胡索以盐酸巴马汀(C₂₁H₂₂NO₄·HCl)计，应不少于7.5μg。

综上可知，本发明采用土木香替代双金胃疡胶囊中的青木香药材后制成的中药制剂同样具有舒肝理气、健胃止痛、收敛止血的功效，可用于肝胃气滞血瘀所致的胃脘刺痛、呕吐吞酸、脘腹胀痛、胃及十二指肠溃疡等，其药效更加显著。而且，方中去除了青木香(含有肾毒性和致癌性成分马兜铃酸)的毒副作用，大大增强了药品的安全性；制备时将药材粉碎成微粉，使得成品溶出度和生物利用度高，可充分发挥药效；重新制定的检测方法精密度高，稳定性好，测量结果准确，可有效控制产品质量，从而确保其临床疗效。

附图说明

图1是盐酸巴马汀对照品溶液图谱；

图2是盐酸巴马汀含量测定中的供试品溶液图谱；

图3是缺延胡索的阴性样品溶液图谱；

图4是溶剂(甲醇)图谱；

图5是盐酸巴马汀标准曲线图。

具体实施方式

实施例1：治疗胃病的微粉胶囊剂的制备：

称取雪胆42g、金荞麦32g、大血藤32g、紫珠21g、麻布袋32g、延胡索32g、仙鹤草32g、白及63g、凤凰衣42g、土木香32g和核桃仁40g，分别粉碎成下述细度的微粉：雪胆20～40μm、金荞麦60～80μm、大血藤60～80μm、紫珠100～125μm、麻布袋20～40μm、延胡索40～60μm、仙鹤草100～125μm、白及60～80μm、凤凰衣150～180μm、土木香125～150μm、核桃仁150～180μm；将前述各微粉混匀，装入胶囊，即得微粉胶囊剂。该制剂口服，每次3粒，每日3次。

实施例2：治疗胃病的颗粒剂的制备：

称取雪胆40g、金荞麦30g、大血藤30g、紫珠20g、麻布袋30g、延胡索30g、仙鹤草30g、白及60g、凤凰衣40g、土木香30g和核桃仁38g，分别粉碎成下述细度的微粉：雪胆20～40μm、金荞麦60～80μm、大血藤60～80μm、紫珠100～125μm、麻布袋20～40μm、延胡索40～60μm、仙鹤草100～125μm、白及60～80μm、凤凰衣150～180μm、土木香125～150μm、核桃仁150～180μm；将前述各微粉加入适量辅料混匀，制成含糖颗粒或无糖颗粒，干燥，整粒，包装，即得颗粒剂。该制剂口服，每次服用含药粉1.2g的颗粒，每日3次。

实施例3：治疗胃病的中药口服制剂的制备：

称取雪胆44g、金荞麦34g、大血藤34g、紫珠22g、麻布袋34g、延胡索34g、仙鹤草34g、白及66g、凤凰衣44g、土木香34g和核桃仁42g，分别粉碎成20～180μm的微粉，混匀，按常规方法制成各种口服剂型。

实施例4：治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法，包括以下项目：

性状：本制剂为胶囊剂，其内容物为深黄色至棕褐色的粉末；气微，味苦；

鉴别：(1)取本制剂内容物5g，加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加浓氨试液调节至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺＝10∶6∶1∶0.1为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml，超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱(直径1cm，10g，干法装柱)，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液；另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

检查：应符合中国药典附录胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：(1)延胡索乙素照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-磷酸盐缓冲液＝58∶42∶1.8为流动相，检测波长为283nm；理论板数按延胡索乙素峰计算不低于4000；所述磷酸盐缓冲液是用磷酸氢二钠2.24g和磷酸二氢钠0.98g加水至100ml配制而成的；

对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂内容物，混匀，取2g，精密称定，置100ml称量瓶中，加浓氨试液5ml，浸润20分钟，加乙醚50ml，超声处理1小时，加乙醚稀释至刻度，摇匀，分取乙醚液，滤过，精密量取续滤液50ml，低温挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以延胡索乙素(C₂₁H₂₅NO₄)计，不得少于16μg。

(2)盐酸巴马汀照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺(用磷酸调节pH至3)(10∶4.5∶84.5)为流动相；检测波长345nm；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不应低于4000。

对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含盐酸巴马汀4μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。

本制剂每粒含延胡索以盐酸巴马汀(C₂₁H₂₂NO₄·HCl)计，不得少于7.5μg。

Claims (10)

1.一种治疗胃病的中药制剂，其特征在于：它是用下述重量份的药材制成的：雪胆40-44份、金荞麦30-34份、大血藤30-34份、紫珠20-22份、麻布袋30-34份、延胡索30-34份、仙鹤草30-34份、白及60-66份、凤凰衣40-44份、土木香30-34份和核桃仁38-42份。

2.根据权利要求1所述治疗胃病的中药制剂，其特征在于：它由下述重量份的药材制成：雪胆42份、金荞麦32份、大血藤32份、紫珠21份、麻布袋32份、延胡索32份、仙鹤草32份、白及63份、凤凰衣42份、土木香32份和核桃仁40份。

3.根据权利要求1或2所述治疗胃病的中药制剂，其特征在于：所述制剂为微粉胶囊剂。

4.如权利要求1或2所述治疗胃病的中药制剂的制备方法，其特征在于：按比例称取雪胆、金荞麦、大血藤、紫珠、麻布袋、延胡索、仙鹤草、白及、凤凰衣、土木香和核桃仁，分别粉碎成0.1～180μm的微粉，混匀，按常规方法制成各种口服制剂。

5.根据权利要求4所述治疗胃病的中药制剂的制备方法，其特征在于：各药材的粉碎细度如下：雪胆20～40μm；金荞麦60～80μm；大血藤60～80μm；紫珠100～125μm；麻布袋20～40μm；延胡索40～60μm；仙鹤草100～125μm；白及60～80μm；凤凰衣150～180μm；土木香125～150μm；核桃仁150～180μm。

6.如权利要求3所述治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括性状、鉴别、检查和含量测定项目，其中鉴别是对制剂中延胡索和土木香的薄层色谱鉴别；含量测定是用高效液相色谱法分别测定制剂中延胡索所含延胡索乙素、盐酸巴马汀的含量；土木香的鉴别方法是以土木香对照药材和异土木香内酯对照品为对照、以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂的薄层色谱法；盐酸巴马汀的含量测定方法是以盐酸巴马汀对照品为对照、以乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺＝10∶4.5∶84.5为流动相的高效液相色谱法。

7.根据权利要求6所述治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法，其特征在于：延胡索的鉴别方法是以延胡索乙素对照品为对照、以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺＝10∶6∶1∶0.1为展开剂的薄层色谱法；延胡索乙素的含量测定方法是以延胡索乙素对照品为对照、以甲醇-水-磷酸盐缓冲液＝58∶42∶1.8为流动相的高效液相色谱法。

8.根据权利要求6所述治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法，其特征在于：土木香的具体鉴别方法为：取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml，超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液；另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。

9.根据权利要求6所述治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法，其特征在于：盐酸巴马汀的含量测定方法具体为：

照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺＝10∶4.5∶84.5为流动相；检测波长345nm；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不低于4000；

对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含盐酸巴马汀4μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以盐酸巴马汀C₂₁H₂₂NO₄·HCl计，不得少于7.5μg。

10.根据权利要求6-9中任一项所述治疗胃病的微粉胶囊剂的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下项目：

性状：本制剂为胶囊剂，其内容物为深黄色至棕褐色的粉末；气微，味苦；

鉴别：(1)取本制剂内容物5g，加甲醇30ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，加浓氨试液调节至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-氯仿-甲醇-二乙胺＝10∶6∶1∶0.1为展开剂，置以展开剂预饱和的展开缸内，展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在空气中挥尽板上吸附的碘后，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；

(2)取本制剂内容物10g，加无水乙醇50ml，超声处理40分钟，滤过，滤液过中性氧化铝柱，收集洗脱液，水浴挥至约1ml，作为供试品溶液；另取土木香对照药材1g，加无水乙醇20ml，超声处理40分钟，滤过，滤液挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照药材溶液；另取异土木香内酯对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸＝38∶2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；

检查：应符合中国药典附录胶囊剂项下有关的各项规定；

含量测定：

(1)延胡索乙素照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水-磷酸盐缓冲液＝58∶42∶1.8为流动相，检测波长为283nm；理论板数按延胡索乙素峰计算不低于4000；所述磷酸盐缓冲液是用磷酸氢二钠2.24g和磷酸二氢钠0.98g加水至100ml配制而成的；

对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂内容物，混匀，取2g，精密称定，置100ml称量瓶中，加浓氨试液5ml，浸润20分钟，加乙醚50ml，超声处理1小时，加乙醚稀释至刻度，摇匀，分取乙醚液，滤过，精密量取续滤液50ml，低温挥干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以延胡索乙素C₂₁H₂₅NO₄计，不得少于16μg；

(2)盐酸巴马汀照中国药典2000年版一部附录VI D高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈-四氢呋喃-0.7％三乙胺＝10∶4.5∶84.5为流动相；检测波长345nm；柱温为30℃；理论塔板数按盐酸巴马汀峰计算不低于4000；

对照品溶液的制备取盐酸巴马汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含盐酸巴马汀4μg的溶液，即得；

供试品溶液的制备取本制剂装量差异项下的内容物2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，称定重量，加热回流2小时，取出，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液20ml置蒸发皿中蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

测定法分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得；

本制剂每粒含延胡索以盐酸巴马汀C₂₁H₂₂NO₄·HCl计，不得少于7.5μg。

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